应用猴抗食蟹猴疟原虫抗体检测间日疟抗原

检测疟原虫抗原是最近发展起来的一种免疫学技术,已被应用于恶性疟和间日疟的研究。我们也曾应用P.v.病人的混合抗体成功地进行P.v.抗原的检测,获得较满意的结果。为解决抗体来源的问题,本实验应用熊猴抗食蟹猴疟原虫抗体(简称抗P.c.抗体)取代病人混合抗体检测P.v.抗原,并     

应用体外培养的红内期食蟹猴疟原虫可溶性抗原ELISA检测间日疟抗体

应用体外培养的红内期食蟹猴疟原虫(Pc)与感染猴体的Pc制备的抗原,用ELISA测定间日疟抗体的效果进行了比较。两种抗原对发病19～90d的64例间日疟病人的阳性率均为96.9％,抗体滴度的分布也基本一致。用体外培养的Pc制备可溶性抗原具有容易获得成熟疟原虫的优点,且可根据需要随时培养和制备新鲜抗原,解决了Pc抗原长期贮存活性易受影响的问题,并证实了PVC薄膜作载体和HRP无毒新底物TMBS用于ELJSA检测间日疟抗体是可行的。     

红内期食蟹猴疟原虫的连续体外培养

用Trager-Jensen的方法,略加改进,用脱纤维蛋白猴血及其血清培养一株来自越南的食蟹猴疟原虫128天以上。多数疟原虫大滋养体的阿米巴状明显,寄生的红细胞也显著胀大。经过培养80天的疟原虫在液氮中保存11天后又复苏培养,原虫生长良好。培养100天的疟原虫对恒河猴仍有感染力。经过长期培养的原虫已陆续保存于液氮内。     

间日疟原虫与异种疟原虫之间的红内期交叉反应抗原分析

本文用1％NP－40分别提取间日疟原虫、恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、伯氏疟原虫及约氏疟原虫红内期可溶性抗原，用间日疟病人血清及两株抗间日疟红内期原虫单克隆抗体6H7和2C3对上述抗原进行免疫印迹分析。结果表明，间日疟原虫与异种疟原虫之间有一系列交叉反应抗原，其中食蟹猴疟原虫有14条蛋白带可被间日疟病人血清识别，多于另外三种疟原虫。五种疟原虫共有的79kD蛋白均可被间日疫病人血清识别。此外，间日疟病人血清还识别正常人红细胞膜抗原中的160kD、67kD蛋白带。McAb6H7识别不同疟原虫中相应的交叉反应抗原区带分别为：恶性疟原虫186kD、175kD；食蟹猴疟原虫133kD；伯氏疟原虫186kD、175kD及约氏疟原虫164kD，另外，McAb6H7还识别正常人红细胞膜中的184kD、170kD蛋白。McAb2C3识别四种疟原虫共有的60kD蛋白，该蛋白可能为疟原虫的种间共同抗原。     

间日型食蟹猴疟原虫的体外培养

食蟹猴疟原虫P.cynomolgi与人体间日疟原虫相似,常直接用于间日疟原虫的研究。本文作者报告了食蟹猴疟原虫在体外的连续培养获得了成功,使有可能对间日型疟原虫进行长期的体外研究。     

用食蟹猴疟原虫子孢子感染豢养的食蟹猴

在生活史的许多方面与人间日疟原虫相似的食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)已广泛用于抗疟药及红外期的研究。能感染该虫的灵长类虽有多种,但一般均用猕猴作试验。近因来源短缺且幼猴价昂,已影响研究工作的进行。为解决供根治药试验的猴模型。作者用捕获的食蟹猴(Macaca fascicularis)繁衍的后代进行了感染试验。接种子孢子量及切脾对原虫血症的影响:共用18只食蟹猴(♂11,♀7)进行试验。4只为小剂量组(接种子孢子0.8～1.7×10~6个),8只为大剂量组(3～10×10~6个),另     

间日疟原虫与异种疟原虫之间的红内期交叉反应原分析

本文用１％ＮＰ－４０分别提取间日疟原虫、恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、伯氏疟原虫及约氏疟原虫中溶性抗原，用间日疟病血清及两株抗间疟红细胞内原虫单克隆抗体６Ｈ７和２Ｃ３对上述抗原进行免疫印迹分析。结果表明，间日疟原虫与异种疟原虫之间有一系列交叉反应原，其中食触猴疟原虫有１４条蛋白带可被间日疟病人血清识别，多于另外三种疟原虫。五的虫共有的７９ｋＤ蛋白均可被间日疟病人血清识别。此外，间日疟病人血清还识别正常     

固相放射免疫分析检测食蟹猴疟原虫抗原

自Mackey 1980年报道用固相放射免疫分析检测疟疾抗原以来.Avraham H等(1981)、Khus-mith S等(1986)和Lahiri VL等(1986)也先后进行了这方面的研究,结果表明该法检测疟疾抗原诊断疟疾有希望取代传统的直接镜检法。本文国内首次报道了该法用于食蟹猴疟原虫抗原的检测结果。     

关于间日疟原虫红内期的体外培养

作者报道了间日疟原虫红内期体外培养43天的结果。从曾旅居于巴西6个月的27岁年轻人采得间日疟原虫虫株,原虫密度为2.5%(大滋养体及裂殖体),用Tragcr烛缸平皿法,培养液由RPMI 1640,葡萄糖及Rh阳性的O型血清组成,不同点主要是在培养液的pH方面。在培养的头6天pH较酸,每天更换3次培养液,每2天添加红细胞1次。间日疟原虫连续培养27天,然后将其冻存于液氮中;为测定原虫活力,再将冻存的原虫进行复苏培养。到43天时中止培养再冻存于液氮。在培养过程中可见到大滋养体,未成熟裂殖体,在39天时还见到幼小滋养体及环状体。在中止培养时,原虫密度为0.25‰。     

蛋白转染用于免疫血清对食蟹猴疟原虫的抗原分析

制备疟疾疫苗首先要进行抗原分析。但人间日疟原虫(P.V)来源困难,常用食蟹猴疟原虫(P.C)代替,故弄清P.C的抗原特征,具有重大意义。本研究用蛋白转染(Western Blotting)技术,分析了各种免疫血清和单克隆抗体对P.C抗原的作用特征。 材料和方法 一、血清标本:P.V病人血清采自云南疟疾流行区,正常人对照血清采自山东长岛非疟区;兔抗P.C免疫血清由本室按常规法制备,抗食蟹猴疟原虫单克隆抗体由本室制备。二、抗原制备:     

单克隆抗体-ELISA技术检测间日疟红内期抗原的初步研究

<正> 单克隆抗体酶标技术几年来国内外已有许多研究,我们用改进的多抗-双单抗ELISA 夹心法在闽北疟区检测间日疟现症病人,得到较满意的结果,现报告如下。     

构建间日疟原虫红内期全长cDNA文库

采集未经治疗的间日疟患者血样,滤去白细胞后浓集含虫红细胞,提取总RNA,用SMARTcDNA文库构建试剂盒构建间日疟原虫红内期全长cDNA文库。测定cDNA文库库容,蓝白斑筛选,计算重组率。随机挑选48个菌落,用M13+/-引物进行PCR鉴定插入片段大小。构建的间日疟原虫红内期全长cDNA文库原始库容为1.14×106,重组率为97.2%,重组子插入cDNA片段大小为900～2500bp。     

用单克隆抗体分析约氏疟原虫抗原的研究 Ⅰ.约氏疟原虫红内期与人疟原虫的共同抗原

用粗提的约氏疟裂殖子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp 2/0瘤细胞融合,获得13株分泌抗约氏疟红内期单克隆抗体的杂交瘤。这些McAb分别属于小鼠:IgG_1,IgG_(2a),IgG_(2b)及IgG_3亚类。据免疫荧光观察,13株McAb可分为4类:1.与红内期各发育阶段的原虫能出现荧光反应;2.针对晚期滋养体及裂殖体;3.抗裂殖体及裂殖子;4.单纯抗裂殖子。有5株McAb与人疟原虫发生荧光反应,其中4株只与恶性疟原虫交叉,M_(26-32)则不仅与恶性疟原虫且与间日疟原虫均有强的交叉反应,,表明约氏疟与人的两种疟原虫间有共同抗原,并提示恶性疟原虫与间日疟原虫间也有共同抗原。共同抗原在不同种间的分布和含量不尽相同。用未经固定的感染红细胞加McAb作间接荧光试验,在感染红细胞表面未观察到荧光反应。     

食蟹猴疟原虫复燃的实验观察

复燃和复发都是间日疟治疗中常遇到的问题,复发机理的研究已受到广泛重视。尽管复燃是间日疟治疗的重要问题之一,但很少有关复燃问题的研究报告。     

用诺氏疟原虫及食蟹猴疟原虫抗原作免疫荧光法检测人类疟疾抗体的比较

用人类疟原虫株制备疟疾抗原存在着困难,极需寻找一种与间日疟有交叉反应的替代抗原。到目前,已比较了用诺氏疟原虫和食蟹猴疟原虫制备的抗原的效价。用原虫血症大于50％的诺氏疟原虫和原虫血症为     

供体内研究用的恶性疟原虫和间日疟原虫红内期的冰冻保存法

曾经报道不用保护剂或用甘油或二甲基亚砜作保护剂冰冻保存恶性疟原虫红内期。本文报道用含7.5%甘油的Alsevers溶液低温保存恶性疟原虫和间日疟原虫红内期的结果。这种新的保护剂含有9份Alsevers液和1份甘油。以1.5ml分装于一种特制的小管内,高压消毒后,贮存5℃备用。冰冻时每管加入0.5ml抗凝含虫猴血,混匀,先置于含酒精的干冰中速冻,而后将小管贮存于-70℃冷冻箱,以供体内研究用。复苏时,用自来水冲洗解冻。用这种方法冰冻保存5株恶性疟原虫和2株间日疟原虫红内期均获成功。其中恶性疟原虫越南Oak Knoll株和间日疟原虫溪桑     

用单克隆抗体对约氏疟原虫抗原的分析 Ⅰ.约氏疟原虫红内期与人疟原虫具有共同抗原

用粗提的约氏疟原虫裂殖子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与S_p2/0瘤细胞融合,获得13株分泌抗约氏疟红内期的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤。这些McAb分别属于小鼠IgG_1,IgG_(2a),IgG_(2b),及IgG_3亚类。根据免疫荧光观察,13株McAb可以分为4类:(1)抗红内期各发育阶段的原虫;(2)抗晚期滋养体及裂殖体;(3)抗裂殖体及裂殖子;(4)单纯抗裂殖子。有5     

体外培养的食蟹猴疟原虫用于间日疟的间接荧光抗体实验

培养的恶性疟原虫作为抗原用于间接荧光抗体实验(IFA)检出感染恶性疟患者的血清疟疾抗体灵敏度较高,但检出感染间日疟后血清中的抗体则灵敏度低或不理想。早巳证实与间日疟原虫相对应的食蟹猴疟原虫可用于IFA测试感染间日疟后的血清抗体,本文报道了用培养的食蟹猴疟原虫作抗原用于IFA测试间日疟病人血清中的抗体。 抗原片的制作:液氮保存已培养70天的食蟹猴疟原虫(PcC)复苏后再培养28天,按照Sulzer等的方法制成抗原片。将培养原虫去上清液后,用     

双氢青蒿素阻断食蟹猴疟原虫孢子增殖期发育研究

用双氢青蒿素在食猴疟原虫－大劣按蚊猴疟模型中的试验结果提示，给感染猴一次性口服４０ｍｇ／ｋｇ双氢青蒿素之后，５ｈ内疟原虫总数变化不明显，配子体数量仍继续增加，各期原虫形态观察无改变，但用药后１．５ｈ吸血感染蚊胃内平均卵囊感染数开始明显下降，５ｈ蚊胃未发现卵囊，结果提示，双氢青蒿素不仅具有速效杀灭疟原无性体，复燃率低，剂量少的特点，而且用药后能快速降低食蟹猴疟原虫传疟按蚊蚊胃卵囊感染数，用药５ｈ后可     

双氢青蒿素阻断食蟹猴疟原虫孢子增殖期发育研究

用双氢青蒿素在食蟹猴疟原虫－大劣按蚊猴疟模型中的试验结果显示：给感染猴一次性口服４０ｍｇ／ｋｇ双氢青蒿素之后，５ｈ内疟原虫总数变化不明显，配子体数量仍继续增加，各期原虫形态观察无改变。但用药后１．５ｈ吸血感染蚊胃内平均卵囊感染数开始明显下降，５ｈ后蚊胃未发现卵囊。结果提示：双氢青蒿素不仅具有速效杀灭疟原虫无性体、复燃率低、剂量少的特点，而且用药后能快速降低食蟹猴疟原虫传疟按蚊蚊胃卵囊感染数，用药５ｈ后可阻断吸血蚊疟原虫孢子增殖期的发育。