中晚期大肠癌患者外周血单核细胞免疫活性的实验研究

探讨了中晚期大肠癌患者外周血单核细胞分泌、膜受体的表达及信使传递介质的变化及ＰＢＭ对ＮＤＶ修饰的大肠癌细胞株镣伤活性。结果表明：（Ⅰ）正常人单核细胞经诱导后均可释放和表达不同水平的ＴＮＦ和ＩＬ－２Ｒ，有明显的时间效价关系，其中以ＬＰＳ＋ＩＮＦ－γ联合作用效果最是有。（２）ＬＰＳ或ＩＮＦ－γ均不能诱导中晚期大肠者ＰＢＭ释放ＴＮＦ，也不能使其胞内游离Ｃａ＾２＋水平发生改变，同时亦不受Ａ２３１８７的影响     

原代人脐静脉内皮细胞分泌IL-1的研究

为探讨内皮细胞作为抗原提呈细胞（APCs）的功能，培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察了其在某些因素影响下，分泌白细胞介素1（IL-1）的情况。结果表明，细菌脂多糖（LPS）可诱导HUVEC释放IL－1，增加LPS的浓度或延长其诱导时间，可提高IL-1的释放活性。γ干扰素（IFNγ）可协同LPS促进HUVEC释放IL－1。协同诱导的动力学表明：IFNγ对LPS诱导HUVEC释放IL－18h之前无明显效应，24h后，协同促进效应明显提高。     

尖锐湿疣患者皮损中白介素2和白介素6的基因表达

逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测了18例尖锐湿疣（CA）患者皮损组织及10例正常皮肤组织中IL－2和IL－6的mRNA，对其中6例患者切除皮损前，皮损内注射γ－干扰素（IFNγ），在注射IFNγ前后72h均切除皮损检测IL－2mRNA。结果（1）在正常皮肤组织未检测到IL－2mRNA，在18例CA患者中发现有2例皮损IL－2mRNA阳性，6例CA患者注射IFNγ前局部皮损示检测到IL－2mRNA，而在皮损内注射IFNγ后有4例生。（2）在正常皮肤组织中有低水平的IL－6 mRNA表达，在18例CA患者皮损IL－6基因表达较正常皮肤组织明显增高（P＜0．01）。结果表明IFNγ可诱导Th1应答，CA患者局部存在表皮细胞因子网络的失衡。     

地塞米松对狼疮性肾炎患者外周全血培养细胞IL-12,IFN-γ分泌水平的影响

目的：探讨狼疮性肾炎（LN）患者外周循环IL－12，IFN－γ分泌水平的变化，以及肾上腺皮质激素对其分泌的影响。方法：选取16例活动性LN患者和10例正常人，采集静脉血标本分空白组，LPS／PHA刺激组及LPS／PHA＋DXM组作体外全血细胞培养，然后应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清IL－12，IFN－γ分泌水平，经扣除血浆基础细胞因子水平后作为该例标本的IL－12或IFN－γ分泌量。结果：LN患者的全分泌水平，经扣除血浆基础细胞因子水平后作为该例标本的IL－12或IFN－γ分泌量。结果：LN患者的全血培养细胞IL－12及IFN－γ的分泌量明显高于正常人（IL－12：P＜0．005，IFN－γ：P＜0．001）；而且两者均与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDIA）呈不同程度的正相关关系；DXM对IL－12及IFN－γ分泌均有显著的抑制作用（均P＜0．01），而且在LN患者抑制作用更明显。结论：IL－12及IFN－γ分泌上调在LN的发病中起重要作用，抑制IL－12及IFN－γ的产生可能是它治疗LN中的机制之一。     

炎性介质脂多糖、γ干扰素活化星形胶质细胞效应

目的研究炎性介质脂多糖（LPS）、γ干扰素（IFN-γ）刺激离体星形胶质细胞的效应。方法LPS、IFN-γ刺激离体培养纯化的小鼠星形胶质细胞,ELISA检测细胞分泌TNF-γ,Griess法测定NO浓度,激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）检测细胞内游离钙浓度（[Ca2＋]i）。结果LPS（500ng／ml）、IFN-γ（100U／ml）刺激星形胶质细胞24h后,NO和TNF—α的分泌显著升高,联合应用有协同作用;延长IFN-γ作用时间,分泌量升高。CLSM检测LPS、IFN-γ刺激24h后的星形胶质细胞[Ca2＋]i的荧光值,显示荧光相对值比正常细胞明显升高;LPS、IFN—γ急性刺激正常培养细胞发现[Ca2＋]i振荡卜升;而作用于IFN-γ刺激24h后的细胞,[Ca2＋]i上升明显减缓。结论LPS、IFN-γ可以活化星形胶质细胞,表现为[Ca2＋]i升高,TNF—α和NO分泌上调。     

病毒介导多种基因对胆管癌细胞免疫原性的影响

目的 探讨IFN－γ、IL－2或B7－1基因修饰对胆管癌细胞免疫原性的作用。方法 构建携带人IFN－γ或IL－2基因的逆转录病毒表达载体，和含人B7－1基因的腺病毒载体，导入胆管癌细胞系QBC939，运用淋巴细胞杀伤试验、肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤性分析、混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养，研究导入的目的基因对QBC939细胞免疫原性的影响。结果 导入IFN－γ基因的QBC939细胞体外能增强胆管癌病人外周血淋巴细胞杀伤亲本瘤细胞的活性；导入IL－2基因的QBC939细胞在裸鼠体内的成瘤性降低；导入B7－1基因的QBC939细胞能刺激外周血T淋巴细胞的增殖。结论 人IFN－γ、IL－2和B7－1基因修饰能增强胆管癌QBC939细胞的免疫原性。     

成人病毒性社区获得性肺炎患者外周血TLR2／3／9的表达及临床意义

目的：研究TLR2／3／9 mRNA表达与成人病毒性社区获得性肺炎（ community－acquired pneumo－nia，CAP）的关系。方法以成人病毒性CAP患者外周血为实验样本，采用RT－PCR法检测TLR2／3／9 mRNA的表达，以ELISA法检测IL－6、INF－γ含量变化情况，并对实验结果进行相关性分析。结果TLR2／3／9、IFN－γ、IL－6在病毒性CAP组中表达显著增高，表达水平明显高于细菌性CAP组和健康成人组（ P＜0．001），TLR2／3／9与IL－6、INF－γ的表达强度呈正相关（ P＜0．01）。结论 TLR2／3／9参与调节成人社区获得性病毒性肺炎引起的免疫应答。     

内毒素和IFN-γ对巨噬细胞的体外调变作用

目的 探讨内毒素（LPS）和INF－γ对巨噬细胞免疫调节功能的影响。方法 LPS或IFN－γ体外处理小鼠腹腔原代巨噬细胞后，采用混合细胞培养结合^H-TdR掺入法，研究巨噬细胞对ConA介导的脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果 LPS和IFN－γ作为刺激剂在体外实验中，可以明显地增强与巨噬细胞混合培养的脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论 LPS IFN－γ可以体外调变巨噬细胞，影响巨噬细胞的免疫调节功能。     

几种丝裂原对白细胞介素-2、γ-干扰素和肿瘤坏死因子的诱生作用

以葡萄球菌肠毒素A（SEA）、B（SEB）中国商陆皂甙（PES）、刀豆蛋白A（ConA）、植物血凝素（PHA）和法波脂（TPA）等六种丝裂原诱导扁桃腺淋巴细胞产生白细胞介素2（IL－2），γ干扰素（IFN－γ）和肿瘤坏死因子β（TNF－β），结果表明PHA（100μg／ml）的诱生作用广，效价高，在同一份淋巴细胞中，三者效价均）10μg／ml，与白细胞干扰素（Le－IFN）并用诱生效果更佳；诱生IFN－γ以SEA（0．1μg／ml）最适；诱生TNF－γ以SEB（1μg／ml）为宜。动力学研究表明，以PHA／Le－IFN诱生IL－2与IFN－γ在24小时达高峰，而TNF则于72小时始现高峰。实验表明天然淋巴因子制品，实为多种淋巴因子的混合物，在实用上尚需深入研究。     

CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用机制的研究

目的：探讨CD3AK细胞介导细胞因子抗肿瘤作用的机制。方法：将卵巢癌细胞株（A2780)分成两组,实验组采用CD3AK＋A2780,对照组采用LAK＋A2780,分别共育24h并于作用前和作用后每4h收集一次上清液以检测TNF－α和IFN－γ分泌水平。结果：实验组和对照组共育前,后上清液中均有TNF－α和IFN－γ分泌,但共育后TNF－α和IFN－γ分泌水平显著高于共育前（P＜0．01）,且同一效靶比的实验组TNF－α和IFN－γ分泌水平明显高于对照组（P＜0．05）。结论：CD3AK细胞可通过分泌细胞因子TNF－α和IFN－γ杀伤肿瘤细胞。     

中晚期大肠癌患者外周血单核细胞释放TNF的动态观察

用生物活性测定法观察了ＬＰＳ、ＩＦＮ－γ及ＬＰＳ＋ＩＦＮ－γ诱导正常人和中晚期大肠癌患者（ＰＢＭ）释放ＴＶＦ的动态变化．结果；在上述诱生剂诱导下正常人ＰＢＭ均可释放ＴＮＬ并且存在明显的时间效价关系，以ＬＰＳ＋ＩＦＮ－γ所诱生的ＴＮＦ活性最高。在中晚期大肠癌患者中单独应用ＬＰＳ或ＩＦＮ－γ均不能诱导ＰＢＭ释放ＴＮＦ，而ＬＰＳ和ＩＦＮ－γ联合作用ＰＢＭ后可使其分泌较高水平的ＴＮ；但其ＴＮＦ的动态变化与正常人有明显的不同。上述结果提示：中晚期大肠场患者ＰＢＭ释放ＴＮＦ的能力受到抑制或损害，经适当的诱导可在一定程度上改善和提高ＴＮＦ产量。     

切痂植皮对创面脓毒症大鼠炎症介质的影响

目的：观察烫伤大鼠血清内脂多糖（ LPS）、肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）、白细胞介素（ IL）－1、IL－6水平变化,判定切痂植皮对创面脓毒症的治疗效果并探讨其机制。方法以30％总体表面积烧伤大鼠创面涂铜绿假单胞菌制作创面脓毒症模型,于感染后3d切除感染焦痂,对比未处理、抗生素治疗及切痂＋抗生素治疗的3组大鼠血清内LPS、TNF－α、IL－1和IL－6水平的变化。结果切痂植皮治疗可缓解脓毒症大鼠血清内LPS、TNF－α、IL－1和IL－6指标的变化。结论针对创面脓毒症病因大鼠行切痂植皮治疗可获得满意疗效。     

细胞因子在急性移植物抗宿主病发病机制中的作用

目的 探讨细胞因子白介素（IL）－2、IL－4、IL－10、干扰素－γ（IFN－γ）在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病中的作用。方法 用RT－PCR检测21例行异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者IL－2、IL－4、IL－10、IFN－γ的基因表达。结果 所有患者均获得造血重建，9例发生I度移植物抗宿主病（GVHD），3例发生Ⅲ－Ⅳ度GVHD。IL－2、IFN－γ在aGVHD发生组表达阳性率明显高于未发生aGVHD组（P＜0．01），而IL－10在未发生aGVHD组明显上升（P＜0．01），IL－4的表达在两组间无显著差异。结论 细胞因子IL－2、IFN－γ在人类aGBDH的发病中起重要的正向调节作用，IL－10在aGVHD的发生中起负调节作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血Th1和Th2平衡的研究

目的 通过检测系统性红斑狼疮（SLE）患外周血中CD4^ 和CD8^ T淋巴3细胞分泌细胞因子的情况以及γ干扰素（IFN-γ)和白介素－4（IL－4）的水平，探讨T淋巴细胞亚群与SLE发病的关系。方法 采用流式细胞术分析SLE患和正常健康人外周血中淋巴细胞内细胞因子（IFNγ、IL－4）和表面抗原（CD4、CD8），用Dot blot法检测IFN－γ和IL－4mRNA的表达。以ELISA法测定血清中IFN－γ和IL－4的水平。结果 与对照组相比，SLE患外周血中1类辅助T细胞（Th1)、Th1/Th2比率、IFN－γmRNA的表达和IFN－γ水平和IFN－γ／IL－4比值均明显降低（P＜0．01），而Th2细胞、Th0细胞和IL－4 mRNA表达的水平及其外周血中IL－4的水平则无明显改变（P＞0．05）。结论 在SLE患外周血中，Th1细胞的数量及其分泌的细胞因子的水平均明显下调，提示Th1/Th2细胞的失衡在SLE发病中有着重要的作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血T辅助细胞因子的表达

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中T辅助细胞因子Th1和Th2的表达情况。方法：用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了10例正常人和8例活动期SLE患者血清中的白细胞介素2（IL－2）、白细胞介素4（IL－4）、白细胞介素10（IL－10）、γ干扰素（INF－γ）的表达水平。结果：与正常人相比，活动期SLE患者外周血中IL－2的表达水平降低（P＜0．05），IL－10的表达水平增高（P＜0．01），而INF－γ与IL－4则无显著性差异（P＞0．05。结论：活动期SLE患者中Th12细胞因子表达为IL－2的下调，Th2细胞因子表达为IL－10的上调，可能在SLE发病机制中起一定的作用。     

轻度慢性乙肝患者拉米夫定治疗前后细胞因子的临床研究

目的：探讨拉米夫定治疗前后轻度慢性乙肝患者血清白介素－2（IL－2）、γ－干扰素（IFN－γ）、白介素－4（IL－4）、白介素－10（IL－10）水平变化及其临床意义。方法：应用ELISA法检测20例经拉米夫定治疗的轻度慢性乙肝患者血清中的IL－2、IFN－γ、IL-4、IL－10水平，并对治疗前后进行比较。结果：拉米夫定治疗前后患者血清IL－2、IFN－γ、IL－4、IL－10水平差异均无统计学意义（P＞0.05)。中、低拷贝的HBV－DNA与高拷贝的HBV－DNA两组患者血清IL－2、IFN－γ、IL－4、IL－10水平差异均无统计学意义（P＞0.05)。IL－2与IFN－γ水平呈正相关（P＜0.001)。结论：轻度慢性乙肝患者血清IL－2、IFN－γ、IL－4、IL－10水平经拉米夫定治疗前后无明显变化。轻度慢性乙肝患者血清IL－2、IFN－γ、IL－4、IL－10的表达与病毒复制消长无相关关系。     

干扰素对肾癌细胞生长影响的体外研究

目的：了解γ干扰素（interferon-γ IFN-γ)对肾癌细胞生长的影响及其分子生物学机制。方法：采用MTT法检测INF－γ对肾癌细胞株786－0的抑制率，运用流式细胞仪检测IFN－γ对肾癌细胞株786－0凋亡的影响。结果：INF－γ作用于肾癌细胞786－024h后，INF－γ浓度为10U/ml,10^2U/ml时，786－0的抑制率分别为27％，42％，FACS检测IFN－γ对肾癌细胞786－0凋亡的影响发展，同一时间的实验组与对照组的细胞凋亡数量无明显差异；IFN－γ作用于肾癌细胞786－0，其细胞凋亡与时间，INF－γ浓度无明显相关性。结论：IFN－γ对肾癌细胞786－0有明显抑制作用，呈剂量依赖；但凋亡检测发现细胞凋亡与时间，INF－γ浓度无明显相关性，IFN－γ对肿瘤细胞作用机制的深入研究，将为肾癌的免疫治疗提供实验依据。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

当归、刺五加对食管癌肿瘤浸润淋巴细胞体外增殖诱导作用研究

目的 寻找新的高效、低毒的TIL刺激物，探索体外迅速解除TIL的抑制状态及提高其扩增效率的最佳条件。方法 对9例食管癌的TIL时行分离培养；采用扶正中药当归、刺五加水提物，单用或与IL－2联合应用作为刺激物，诱导食管癌TIL体外扩增，并与其他细胞因子联合组（IL－2＋IL－4，IL－2＋TNF-α）相比较；采用放射性同位素检测定量分析其增殖力。结果 当归，刺五加在有IL－2（1000u/ml)存在的情况下，对TIL的激活有促进作用。当归＋IL－2或刺五加＋IL－2，对食管癌TIL体外扩增的促进作用强度与IL－2＋TNF－α相当（P＞0.05)，不及IL－2＋IL－4（P＜0.05)。结论 当归、刺五加对于食管癌TIL的体外增殖有促进作用，能够替代或部分替代IL－4、TNF－α用于食管癌TIL体外培养及提高其杀伤活性。     

鼻窦灌注液冲洗对鼻息肉术后鼻黏膜细胞因子的影响

目的观察鼻窦灌注液冲洗鼻腔对鼻息肉相关的细胞因子水平的影响。方法将39例鼻息肉患者随机分为鼻窦灌注液组18例和生理盐水组21例。全部鼻息肉术后患者在接受术后综合治疗同时,分别采用鼻窦灌注液、9 g／L生理盐水冲洗鼻腔3个月。采用鼻腔鼻窦结局测试－20（SNOT－20）及Lund－Kennedy评分评估疗效,术前及术后3个月分别取鼻腔中鼻道黏膜作标本,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测黏膜中白细胞介素－5（IL－5）、白细胞介素－8（IL－8）、白细胞介素－10（IL－10）、干扰素－γ（IFN－γ）、粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）的表达水平。结果（1）术后2组SNOT－20及Lund－Kennedy评分均较术前降低,差异有统计学意义（P＜0．05）,但术后2组比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。（2）术后3个月,2组黏膜细胞因子IL－5、 IL－8、 IL－10、 IFN－γ、 TNF－α、 GM－CSF表达水平均较术前显著降低（P＜0．05）,且鼻窦灌注液组对细胞因子IL－5、 IL－8、 IL－10、 IFN－γ表达水平的降低作用优于生理盐水组（P＜0．05）,而2组TNF－α、 GM－CSF的表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论术后3个月,2组在改善患者生活质量及鼻腔形态方面疗效相当,而鼻窦灌注液对IL－5、 IL－8、 IL－10、 IFN－γ水平的调节作用优于生理盐水。