线性探针杂交技术在广西百色地区耐药结核病检测中的应用

目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。     

线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中临床应用。方法 分别采用结核菌涂片、罗氏培养法、比例法药敏及线性探针技术对海南省疑似结核病患者痰液标本进行检测,并对检测结核分枝杆菌、耐药性及耐药突变特点进行分析。结果 线性探针技术检测结核分枝杆菌阳性率（58.7%）明显高于结核菌涂片（40.2%）和罗氏培养（53.8%）,线性探针法与两种传统方法比较差异有统计学意义（P<0.05）;以比例法药敏为金标准,线性探针法对结核分枝杆菌耐利福平、异烟肼和耐多药结核分枝杆菌检测的特异性为89.27%、94.95%和91.45%,敏感性为94.38%、75.00%和75.68%,阴性预测值为94.62%、80.34%和5.60%,阳性预测值为85.71%、93.32%和84.85%,符合率为90.05%、85.34%和85.34%,线性探针技术与比例法药敏检测结核分枝杆菌利福平耐药性效果比较差异无统计学意义,且具有较好一致性,检测异烟肼耐药性差异有统计学意义,且两种方法之间一致性一般,检测耐多药结核分枝杆菌两种方法差异无统计学意义,但两种方法之间一致性一般;利福平耐药基因突变类型主要是 rpoB H531L,占57.14%,异烟肼耐药基因突变类型主要是katG S315T1,占91.89%,耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变类型主要为rpoB S531L+KatG S315T1,占56.06%。结论 线性探针技术可快速准确地从海南省疑似肺结核临床标本鉴定出结核分枝杆菌及耐多药结核分枝杆菌,并可直接快速检测临床标本耐药性从而指导临床用药。     

线性探针技术快速检测耐药结核分枝杆菌的 应用评价

目的 评价线性探针技术(Geno-Type?MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的可靠性和及时性.方法 用线性探针技术对240株结核分枝杆菌进行利福平、异烟肼耐药性检测,以比例法药敏试验作为金标准,比较线性探针法与比例法药敏试验耐药结果的符合程度,评价其准确性和应用价值,同时比较二者检测报告时间.结果 与比例法相比较,线性探针技术检测异烟肼敏感性96.8%,特异性95.3%;阳性预测值97.4%,阴性预测值94.3%;检测利福平敏感性95.8%,特异性91.8%;阳性预测值94.4%,阴性预测值93.4%.比例法检出耐多药88例,检出率为36.7%,线性探针法检出耐多药87例,检出率36.3%,一致率为98.9%,检测耐多药的敏感度98.9%,特异性100%;阳性预测值100%,阴性预测值99.3%,两种方法检出率差异无统计学意义(校正x2=0.0000,P=1.0000).结论 线性探针技术检测利福平、异烟肼耐药性与比例法具有高度一致性,有较高的敏感性和特异性,而且操作简便、结果准确,报告时间短,可以作为地市级快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法.     

核酸探针技术及其在诊断中的应用

基因检测技术的发展,使对某些疾病的诊断达到了特异性强、敏感性高及简便快速的目的。近年来各种血清学方法发展很快,但血清学方法主要是测抗体,是间接的证据。另外,同群不同型病原体之间常因共同抗原的出现交叉反应而使诊断发生困难。因此人们早就盼望能直接检测病原体核酸,因为不同     

评价线性探针杂交技术对结核分枝杆菌耐药性检测效果

目的评价线性探针杂交技术(HAIN技术,Geno Type MTBDR plus试剂盒)对结核分枝杆菌耐药的检测效果。方法利用传统药敏试验和HAIN技术同时对邯郸市的297例培阳肺结核病人进行耐多药检测,以传统药敏试验为金标准对HAIN技术耐药检测效能进行评价。收集邯郸市临床肺结核病人痰标本培养物,对比分析传统比例法药敏试验和HAIN技术对异烟肼和利福平的耐药检测效果。结果传统比例法药敏试验检测297份培养物有295份为结核分枝杆菌,其中异烟肼(INH)耐药40例(13.4%)、利福平(RFP)耐药43例(14.5%)、耐多药肺结核18例(6.1%);线性探针技术检测297份标本中295份为结核分枝杆菌,同时检测出异烟肼(INH)耐药41例(13.8%)、利福平(RFP)耐药45例(15.1%)、耐多药肺结核18例(6.1%)。使用分析软件SPSS 13.0进行统计分析,利福平:χ²=0.053,P=0.817,差异无统计学意义(P>0.05)。异烟肼:χ²=0.014,P=0.905,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HA...     

分子信标探针技术检测沙门菌invA基因

目的 研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法 在PCR反应体系中加入分子信标探针，探针的5’端标记6-fluorescine(6-FAM)，3，端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoicacid(DABCYL)，对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果 肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌“H”、伤寒沙门菌和肠侵袋型大肠杆菌的荧光值分别为161.6、104．5、85．9、83．1、94．8、46，1，Ax值(样本荧光值-空白对照荧光值)分别为121．3、64．2、45.6、42．8、54．5、5.8,沙门菌的Ax值均大于21，结果阳性，与琼脂糖电泳分析结果一致。结论 分子信标探针技术可以准确、快速、简便进行沙门菌invA基因检测。     

GeneXpert Mtb/RIF检测技术在临床耐药结核病诊断中的应用价值

目的 评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术在临床耐药结核病诊断中的应用效果。方法 收取240例结核病住院患者的晨痰样本分别进行痰涂片镜检、MGIT960液体培养及GeneXpert Mtb/RIF快速检测,对于MGIT960液体培养与GeneXpert同为阳性的样本进一步进行MGIT960药敏检测。以MGIT960液体法作为金标准,评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术的敏感性和特异性以及Kappa值。结果 224例有效样本中涂片镜检阳性检测率为26.8%,MGIT960液体培养阳性检出率为45.1%,GeneXpert检测阳性检出率为46.9%;以MGIT960液体培养作为金标准,涂片镜检法的敏感度为59.4%,特异度为75.0%,GeneXpert检测法敏感度为91.1%,特异度为92.4%;以MGIT960药敏检测为金标准,GeneXpert检测法与之相比两种方法的一致性为96.7%,敏感度为92.3%,特异度为98.5%。结论 GeneXpert Mtb/RIF检测技术是一个敏感、特异和快速有效方法,有利于结核病的早期诊断。     

PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核菌药敏在耐药结核病检测中的应用价值

  目的   分析PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核分枝杆菌药物敏感性试验在结核分枝杆菌耐药性方面的差异，并探讨其临床应用价值。   方法   收集356例昆明市第三人民医院结核科住院患者的痰和灌洗液标本，分别用2种方法检测异烟肼（H）、利福平（R）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的药物敏感性，结果通过校正卡方检验对比分析。   结果   2种检测方法对单耐药、多耐药、耐多药结核菌检测，在99%的置信区间，校正χ2均是P < 0.01。   结论   可认为2种方法对3种耐药的检测有差异性。结核菌药敏试验耐多药PCR-反向点杂交法优于BD960检测；单耐药、多耐药BD960药敏优于PCR-反向点杂交法。      

结核分支杆菌rpoB基因套式PCR在利福平耐药和结核病辅助诊断中的应用

目的 分析耐利福平的结核分支杆菌(Mtb)rpoB基因突变状况。方法 对38株耐利福平Mtb菌株的rpoB基因突变高频区域进行套式PCR扩增，并进一步全自动测序。结果 38株耐利福平Mtb中有36株存在突变(包含5个密码子11种形式的突变)，突变率94．7％。结论 Mtb xpoB基因的突变与利福平耐药高度关联，rpoB基因套式PCR及测序能快速、正确鉴别耐利福平菌株。     

PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

ELISPOT技术在结核病诊断中的应用

现有的诊断结核感染的方法缺乏足够的敏感性及特异性，易导致结核病的漏诊、误诊。一种新的免疫学检测方法一酶联免疫斑点技术（ELISPOT技术）已被证实能够发现早期结核感染，并且此技术比皮肤结核菌素试验有更好的特异性和敏感性，这种方法有助于对病人进行筛查和监测结核感染，及时发现及诊断潜在结核感染，具有广阔的应用前景。     

分子线性探针杂交法在结核分枝杆菌耐药性快速检测中的应用价值

目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。     

单链探针反向杂交试验技术检测结核分支杆菌链霉素耐药基因

用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌链霉素耐药株的rpsl、rrs基因突变,可用于临床结核分支杆菌链霉素耐药性的辅助诊断手段.     

单链探针反向杂交技术检测结核分支杆菌五种耐药基因方法研究

用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌耐药株的rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变,可作为临床结核分支杆菌耐药性的辅助诊断手段.     

结核分枝杆菌利福平耐药突变基因检测与BD960药敏的对比

目的 分析对比结核分枝杆菌利福平PCR-反向点杂交法耐药基因突变位点检测和BACTEC MGIT960 System表型药敏结果的相关性。方法 同时对220例住院患者的痰或肺泡灌洗液 (BALF) 用PCR-反向点杂交法检测利福平耐药基因突变位点与BACTEC MGIT 960 System检测利福平表型药敏结果进行对比分析。结果 2种方法检测利福平药敏结果符合205例, 特异度93% (205/220) ;2种方法检测利福平都敏感的有172例;基因耐药, 表型耐药的有33例, 其中有3例检出rpo B基因H526位点突变, 突变率9%;基因耐药, 表型敏感的有15例, 其中有11例均检出rpo B基因H526位点突变, 突变率73%。结论 PCR-反向点杂交法检测具有快速高效、特异度高等特点, 对临床诊断、治疗有指导意义。     

INNO-LiPA和直接测序法检测HBV耐药突变的比较

目的比较INNO-LiPA HBV DRv2和直接测序法检测HBV耐药突变的准确性和灵敏性。方法选取41例接受阿德福韦或聚乙二醇干扰素α-2a救援治疗并在治疗过程中(治疗48周和72周时)进行INNO-LiPA HBV DRv2耐药检测的拉米夫定耐药患者,共收集到101份足量的血清,采用直接测序法进行拉米夫定和阿德福韦耐药检测。分析HBV聚合酶第80、173、180、181、204和236位点的耐药突变情况,并与INNO-LiPA耐药检测的结果进行对比。结果 INNO-LiPA HBV DRv2和直接测序法检测204位点耐药结果对比,完全符合率为73.8%(62/84),部分符合率为23.8%(20/84),总体符合率达到97.6%(82/84)。其他位点总体符合率也多在95%以上。另外INNO-LiPA比直接测序法有更高的灵敏度,对混合感染的检出率(46.4%)明显高于直接测序法(23.8%),其总体耐药检出率也高于直接测序法。结论 INNO-LiPA方法在灵敏度和准确性上均优于直接测序法,而且操作简便、快捷,能够提供更多的信息量,在科研和临床上都有很好的应用前景。     

变性高效液相色谱在细菌耐药基因检测中的研究进展

目前在临床上如何能快速准确地筛查出细菌的耐药基因,为临床医师提供合理使用抗生素的依据,已经成为迫切需要解决的问题。变性高效液相色谱作为一种新的筛查耐药基因突变的技术,以其高效、灵敏、准确的特点,在耐药基因检测中异军突起。近年来在细菌耐药性检测方面包括β-内酰胺酶的分型、喹诺酮耐药基因突变等方面已经显示出其广泛的应用前景,开始备受临床实验室关注。