纤维连接蛋白在胚胎着床前后子宫内膜组织中的动态表达

为了探讨纤维连接蛋白(FN)在胚胎着床中的作用,本研究应用蛋白印迹和免疫印迹法检测小鼠孕3、5、7、15天子宫内膜及未妊娠小鼠子宫内膜组织中FN蛋白表达量,对免疫印迹法结果进行VDS扫描半定量分析后发现:与未妊娠小鼠相比,妊娠各期小鼠子宫内膜组织中FN蛋白表达量明显升高,其高峰在着床后的孕7天,直至孕15天.这一结果说明,在着床前,小鼠子宫内膜细胞外基质已发生变化,FN表达增高以利胚胎着床,而着床这一过程又加剧细胞外基质的变化,使FN在着床后表达到高峰,着床完成后,细胞外基质趋于稳定,FN又有所下降.本研究还用以上方法测定了人早孕胚囊平均直径在7～25mm(相当于孕35～49天)时的蜕膜组织中FN的表达,发现孕35～49天各期蜕膜组织中的FN表达量无差异,但均明显较未孕组高,说明人胚胎着床后,FN表达也明显增多,并到一定程度后趋于稳定.FN在着床前后的活跃变化说明它与着床有密切关系.     

骨形态发生蛋白-7(BMP-7)促进小鼠子宫内膜蜕膜化研究

目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法:①采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5～8日小鼠子宫中的表达情况;②原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮(P4)、E2和cAMP诱导蜕膜化的同时分别加入1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlBMP-7重组腺病毒,Westernblotting检测催乳素(PRL)的表达。结果:①BMP-7mRNA在妊娠第5～8日小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织(P<0.01),且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强(P<0.05)。BMP-7蛋白在妊娠第5日、第6日分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带,第7日、第8日时主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。②在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组的催乳素蛋白表达均显著增加(P<0.01),其中10ng/ml组增加最明显(P<0.01)。结论:BMP-7蛋白具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。     

不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素α_v和Le~y寡糖的表达

目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素av和Ley寡糖的表达及对着床窗开放的影响。方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组。对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎。各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素av。结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化。②整合素av在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达。对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P <0.05)。结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素av的表达高峰无明显差异。③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异。在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律。结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素av的表达与子宫内膜着床窗的开放一致。②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素av的表达,延迟着床窗的开放;孕     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

锌指转录因子Slug在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:初步探讨锌指转录因子Slug在早孕小鼠胚胎植入过程中的作用。方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测未孕及妊娠1-7d小鼠子宫内膜Slug在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:RT-PCR半定量结果显示,早孕小鼠子宫内膜组织Slug的表达高于未孕小鼠子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增加的趋势,到妊娠4d达最高。进一步通过免疫组化也显示小鼠子宫内膜有Slug蛋白表达,且其表达规律与RT-PCR结果基本一致。结论:Slug在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡植入过程。     

Meis1在子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜中的表达研究

目的:初步探索HOXA10的辅因子(Meis1)与子宫内膜异位症(EMs)患者不孕和发病的相关性。方法:采用免疫组织化学方法进行组织学定位并进行半定量分析,采用Westernblot-ting方法在蛋白水平上进行定量分析,检测EMs不孕患者异位和在位子宫内膜中Meis1的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1在异位内膜和在位内膜中仅有弱表达,而在正常同期内膜中呈较明显的阳性表达,差异显著(P<0.01);比较Meis1在分泌中期在位内膜与正常内膜中的表达,差异亦有显著性(P<0.01)。Westernblotting显示,Meis1在分泌中期在位内膜中仅有弱表达,而在同期正常内膜中呈高表达(P<0.001)。结论:Meis1在EMs患者分泌中期在位内膜中低表达,可能是影响子宫内膜容受性的建立,从而影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一。同时,Meis1在异位内膜中的低表达说明异位内膜可能对体内雌、孕激素正常调控具有抵抗性,异位内膜细胞具备了对抗凋亡的能力,提示Meis1可能参与了EMs的发生与发展。     

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。     

Asoprisnil抗小鼠孕卵着床效果及对子宫内膜容受性的影响

目的:探讨Asoprisnil抗小鼠孕卵着床的效果及其对小鼠着床窗期子宫内膜容受性的影响。方法:将孕第1日小鼠随机分成4组,分别为Asoprisnil低(5μg/g)、中(10μg/g)、高(20μg/g)剂量组和对照组,每组22只,于孕第1~3日每日灌胃给药1次,对照组以体积分数1%羧甲基纤维素钠替代,第5日每组处死孕鼠5只取子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态学改变,免疫组织化学S-P法检测子宫内膜PCNA表达。第8日处死余下的孕鼠,计数着床点数。结果:①Asoprisnil高、中和低剂量组的妊娠率分别为11.76%、35.29%和76.47%,与对照组(94.12%)比较差异有统计意义(P<0.001)。②Asoprisnil高、中、低剂量组着床胚泡数第50百分位数(P50)分别为13(10.5~14)、10(0.5~11)和0(0~12),与对照组0(0~0)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。③对照组围着床期子宫内膜腺体弯曲折叠,为复层高柱状上皮细胞;基质细胞蜕膜变,细胞大且排列疏松,胞质丰富透亮;内膜中腺体和血管丰富。Asoprisnil组子宫内膜腺体为单层或者复层上皮细胞;内膜基质细胞蜕膜变不明显,基质细胞较小,排列致密;腺体和血管增生不明显。④围着床期小鼠子宫内膜腺体和基质中均有PCNA表达。内膜腺体中Asoprisnil高、中、低剂量组PCNA表达强度(AIOD)分别为0.15±0.01、0.16±0.03和0.14±0.02,与对照组(0.21±0.03)比较差异有统计学意义(P<0.001)。Asoprisnil高、中、低剂量组内膜基质细胞中PCNA表达强度(AIOD)分别为0.17±0.01、0.18±0.03和0.17±0.02,与对照组(0.15±0.02)比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Asoprisnil能显著抑制着床窗期子宫内膜腺体增殖,促进子宫内膜基质细胞增殖,但阻止基质细胞蜕膜化,降低子宫内膜容受性而发挥抗小鼠胚胎着床效应,显示出潜在的子宫内膜靶向避孕前景。     

HOXA10的辅因子Meis1、Pbx1在人子宫内膜中的表达

目的:探讨HOXA10的两个辅因子Pbx1和Meis1在人正常子宫内膜中的表达及其变化规律。方法:采用原位杂交进行组织学定位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行半定量,在mRNA水平上检测人正常月经周期子宫内膜中Pbx1和Meis1的表达水平。结果:Meis1在子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞均有表达,其中腺上皮细胞的表达高于基质细胞;增生期Meis1仅有弱表达,分泌期显著增加(P<0.05),以分泌中期表达最强(P<0.05)。在整个月经周期中并未检测到Pbx1的表达。结论:Meis1作为HOXA10的辅因子,在人正常子宫内膜中规律性的表达,可能对HOXA10介导的胚胎着床发挥着重要作用。     

肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠早孕子宫内膜中的表达

目的:初步探讨p16INK4A在胚胎着床过程中的作用。方法:采用实时FQ-PCR和免疫组织化学技术分别检测未孕(d0)及孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜p16INK4AmRNA及其蛋白的表达。结果:实时FQ-PCR显示妊娠子宫内膜组织p16INK4A的mRNA表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,到孕d5达到最高。免疫组化显示p16INK4A蛋白在子宫内膜的表达及规律与实时FQ-PCR的结果一致。结论:小鼠胚胎着床过程中p16INK4A诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎着床的重要机制之一。     

米非司酮对围植入期小鼠子宫内膜中STAT3表达的影响

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠胚泡植入过程中的生物学作用。方法:将孕鼠随机分为米非司酮组、溶剂组和空白对照组,用免疫组织化学技术和图像分析方法检测各组小鼠孕3～8 d子宫内膜中STAT3的动态表达,并对其进行半定量分析。结果:溶剂组和对照组小鼠子宫内膜中STAT3的表达在孕3 d明显增强,孕4 d达到峰值,且溶剂组和对照组间在孕3～8 d各时间点的表达差异无统计学意义;米非司酮组STAT3的表达较2个对照组显著降低(P<0.01),在孕4 d亦无表达高峰。结论:STAT3是介导胚泡植入的重要因子之一,米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调STAT3的表达,影响子宫内膜容受性的建立,阻碍胚泡顺利植入。     

PTEN与bcl-2、FasL在异位子宫内膜的表达及临床意义

目的:研究PTEN与bcl-2、FasL的表达与异位子宫内膜的关系。方法:用免疫组化法检测PTEN与bcl-2、FasL在正常子宫内膜,异位内膜及在位内膜的表达。结果:(1)正常子宫内膜组:bcl-2在增生期的表达显著高于分泌期(P0.05),FasL及PTEN在增生期的表达显著低于分泌期(P0.05),即三者在正常子宫内膜细胞的表达均有明显周期性;(2)异位内膜组(OEM及AM):bcl-2、FasL及PTEN的表达在增生期和分泌期的表达均无统计学差异(P0.05)。即在异位子宫内膜中的bcl-2、FasL及PTEN呈持续表达且失去周期性;(3)在位内膜组(OEM及AM):与正常子宫内膜组相似,三者在增生期和分泌期的表达均有差异,其中,FasL与PTEN在分泌期的表达高于增生期,bcl-2在增生期的表达则高于分泌期,差异均有统计学意义(P0.05);(4)3组内膜中的表达比较:FasL及bcl-2在异位内膜组的表达均高于在位内膜组及正常子宫内膜(P0.05),PTEN在异位内膜组的表达均低于在位内膜组及正常子宫内膜(P0.05);FasL、bcl-2及PTEN在正常内膜组的表达与在位内膜组无统计学差异(P0.05)。结论:bcl-2、FasL及PTEN的表达变化在子宫内膜异位症的发生发展过程中起着重要作用。     

CCR4及CCR8在子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶的表达

目的:检测CCR4及CCR8两种趋化因子受体在子宫内膜异位症患者在位内膜及异位灶组织中的表达特征。方法:以正常子宫内膜为对照,采用免疫组化技术检测内异症患者在位内膜及异位灶组织CCR4及CCR8的表达情况,并比较其差异。结果:正常子宫内膜CCR4及CCR8的表达明显低于内异症患者在位内膜(P<0.05);内异症患者异位灶组织CCR4及CCR8表达明显高于在位内膜(P<0.05)。结论:这些结果提示CCR4及CCR8可能参与内异症的发生及进展。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

趋化因子受体6在子宫内膜异位症在位内膜及异位灶中的表达

目的分析趋化因子受体6(chemokine receptor,CCR6)在子宫内膜异位症(内异症)患者的在位内膜及异位内膜中的表达水平,以探讨其在发病中的作用。方法采用免疫组化技术检测内异症患者在位内膜及异位灶CCR6的表达。结果对照组子宫内膜中CCR6的表达分泌期明显强于增殖期(P0.05);内异症患者在位子宫内膜间质和腺体CCR6的表达比较,差异无统计学意义(P0.05),但其表达强度高于对照组(P0.05),异位灶CCR6的表达明显高于对照组(P0.05),略高于在位子宫内膜,但无统计学意义(P0.05)。结论CCR6的表达具有周期特异性,可能受雌/孕激素调节,参与子宫内膜异位症的发生和进展。     

Modulation of syndecans in the uterus throughout the menstrual cycle: comparison between endometrium and myometrium

Immunohistochemistry and semiquantitative analysis were used to examine and compare the expression of syndecans 1-4 in the endometrium and myometrium throughout the menstrual cycle. Syndecans molecules show different temporal and spatial expression during the menstrual cycle, and the modulation of syn-2 expression is statistically significantly correlated to morphologic and functional changes of the endometrium, particularly in the periovulatory period.     

雌/孕激素对围着床期小鼠子宫内膜明胶酶表达的影响

目的 :了解雌、孕激素对围着床期小鼠子宫内膜明胶酶表达的影响。方法 :应用酶谱法检测经雌 /孕激素处理的早孕期及去卵巢后小鼠子宫内膜明胶酶的表达。结果 :明胶酶-B的表达总量在早孕 d 1～ 4明显下降 ,但 d 5 (植入开始 )骤然上升 ,同时活性型明胶酶 -A也相对增多。去卵巢后明胶酶表达明显减弱 ,且未能测出明胶酶 -A活性 ;明胶酶 B表达在雌激素组增强 ,孕激素组及雌 /孕激素处理组均减弱 ,经雌 /孕激素处理后仍未测出明胶酶 -A的活性。结论 :明胶酶的表达受雌激素上调、孕激素下调 ,雌孕激素联合处理仍以孕激素作用为主     

来曲唑和克罗米酚对小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:探讨来曲唑和克罗米酚对小鼠着床期胞饮泡和白血病抑制因子(LIF)表达的影响。方法:将30只小鼠随机分为3组:来曲唑(LE)组(n=10)、克罗米酚(CC)组(n=10)及对照组(n=10)。促排卵后妊娠d4．5取小鼠子宫,采用扫描电镜观察3组子宫内膜胞饮突的变化以及免疫组化技术检测子宫内膜LIF的表达强弱。结果:在3组妊娠天数一致的情况下,LE组中无论是子宫内膜胞饮突,还是LIF的表达,均与对照组相似。而CC组的表达显著弱于前二组。结论:与CC促排卵相比,LE不影响小鼠着床期子宫内膜超微结构和相关基因LIF的表达,然而CC组子宫的容受性呈现一定的抑制性。