血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3联合AFP—L3％诊断原发性肝癌价值

目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican3,GPC3）联合甲胎蛋白异质体（alpha{etoproteinvariants,AFP-L3）占甲胎蛋白（alphafetoprotein,AFP）的百分比（AFP—L3％）在原发性肝癌诊断中的价值。方法原发性肝癌患者43例为肝癌组,慢性肝炎患者43例为肝炎组,肝硬化患者43例为肝硬化组,体检健康者43例为对照组,分别采用ELISA法和亲和吸附法检测4组GPC3和AFP—L3水平,计算AFP—L3％,并比较分析。结果血清GPC3和AFP—L3％从高到低依次为肝癌组（（10．94士0．58）μg／L和（15．85±2．74）％）、肝硬化组（（5．56±0．49）μg／L和（10．72±2．65）％）、肝炎组（（2．73±0．46）μg／L和（9．57土2．59）％）、对照组（（1．15±0．42）μg／L和（9．08±2．55）％）,肝炎组与对照组AFP-L3％比较差异无统计学意义（P〉0．05）,其他各组间上述指标比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;与组织病理结果进行对照,AFP—L3％联合GPC3诊断原发性肝癌的符合率（81．40％）明显高于二者单独检测（48．84％、25．58％）（P〈0．01）。结论血清GPC3与AFP-L3％联合检测可提高原发性肝癌早期诊断准确率。     

血清GPC3对原发性肝细胞癌的诊断价值

目的 研究血清磷脂酰肌醇硫酸类肝素蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)对原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值.方法 检测46例肝硬化患者和44例HCC患者的血清GPC3和AFP水平,血清GPC3测定采用酶联免疫吸附法(ELISA),血清AFP测定采用微粒子酶免疫分析法(MEIA),统计分析GPC3和AFP单独使用及联合检测对HCC患者诊断的灵敏度和特异度.结果 HCC组的血清GPC3和AFP浓度分别为611.09 ng/L和958.37 ng/ml,均明显高于肝硬化组(190.53 ng/L和55.12 ng/ml)(P<0.05).GPC3和AFP的浓度之间无相关关系.AFP阴性的HCC患者15例中GPC3阳性者6例,GPC3阴性的HCC组患者17例中AFP阳性者8例.AFP联合GPC3检测用于HCC诊断的灵敏度(79.54%)优于AFP(65.91%)及GPC3单独使用(61.36%).GPC3浓度与HCC病灶大小、PVI浸润和HBV感染均无相关关系(P>0.05).结论 GPC3对于HCC具有与AFP相似的诊断价值,GPC3可以协同AFP的诊断作用,二者联合检测能明显提高HCC诊断率.     

血清AFP、GP73和GPC3联合检测在原发性肝癌诊断中的应用

目的探讨甲胎蛋白(AFP)、高尔基体蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)联合检测在原发性肝癌(PHC)诊断中的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测148例PHC患者、73例肝硬化(LC)患者、57例慢性乙型肝炎(CHB)患者及85名健康人(正常对照组)血清GP73、GPC3含量,同时采用免疫化学发光法检测血清AFP含量,并对检测结果进行比较。结果 PHC组GP73、GPC3、AFP血清水平分别为346.9±208.7、143.1±66.9和(690.3±402.5)μg/L,与LC组、CHB组和正常对照组血清水平比较差异具有统计学意义(P均0.01);血清AFP、GP73、GPC3联合检测诊断PHC的敏感性为95.9%,准确性为89.2%。结论血清AFP、GP73、GPC3联合应用能弥补单项肿瘤标志物临床应用的不足,对提高PHC的阳性检出率及鉴别诊断具有重要的临床意义。     

血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨

原发性肝癌早期诊断是改善预后的关键。AFP联合肝脏超声筛查和随访是早期诊断的主要途径，但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难。AFP≥200μg／L作为诊断肝癌临界值（cut-off值），敏感度仅为20％～45％ AFP异质体（AFP-13）检测等对肝癌有很好的特异度，但是敏感度也低H0。磷脂酰肌醇硫酸类肝素蛋白聚糖3（glypican-3，GPC3）是通过磷脂酰肌醇（GPI）锚定于细胞膜表面脂质的硫酸类肝素蛋白聚糖，参与调节胚胎生长发育。国外研究显示，GPC3在80％～90％肝癌组织中表达水平显著上调，[第一段]     

Glypican-3和AFP联合检测对原发性肝细胞癌的诊断意义

目的通过检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC3)和甲胎蛋白(AFP)在原发性肝细胞癌(HCC)患者中的表达情况,探讨其联合检测对于HCC的诊断意义。方法采用ELISA和免疫组化的方法检测了89例肝细胞癌患者和30例健康人群血清和组织中的GPC3和AFP蛋白的表达情况,并进一步分析了GPC3的表达与HCC患者临床病理特征的相关性。结果 GPC3和AFP联合检测对HCC的诊断敏感性和特异性分别为91.0%和93.3%,显著高于GPC3或AFP单独检测的敏感性和特异性(P<0.05);且对AFP阴性的HCC患者,GPC3表达的阳性率亦较高。GPC3蛋白的表达与HBsAg以及是否转移无关,而与Edmondson病例分级及肿瘤大小相关。结论联合检测GPC3和AFP可有效提高临床对于HCC的诊断水平。     

高尔基体糖蛋白73、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、甲胎蛋白异质体百分比联合检测在原发性肝癌诊断中的应用

目的 探讨高尔基体糖蛋白73(GP-73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、甲胎蛋白异质体百分比(AFP-L3%)联合检测在原发性肝癌诊断中的应用。方法 选择肝癌患者154例(肝癌组),肝硬化患者78例(肝硬化组),健康对照者56例(对照组),用酶联免疫法分别测出GP-73、GPC3、AFP-L3的浓度。然后分别按照检测项目统计分析。结果 肝癌组中GP-73、GPC3、AFP-L3%的水平明显高于肝硬化组和对照组(P<0.05);肝癌组中GP-73、GPC3、AFP-L3%的阳性率分别为66.2%、72.1%、53.2%。三项联合检测的阳性率可达到97.9%。高于任何单项和联合检测的敏感度和准确度。肝癌组中GP-73、AFP-L3%在AFP不同水平内比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GP-73、GPC3、AFP-L3%三者联合检测提高原发性肝癌诊断的敏感度和准确度,对鉴别诊断早期肝癌有参考意义。     

AFP-L3与GPC-3联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的：探讨甲胎蛋白异质体3（AFP-L3）和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC-3）联合检测对原发性肝癌（PHC）的诊断价值。方法采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测原发性肝癌（PHC组34例）、肝硬化（LC组25例）和病毒性肝炎（VH组27例）患者肝组织和血清AFP-L3和GPC-3的表达水平,同期选择30例门诊正常体检者作为对照组。观察各组肝组织和血清AFP-L3和GPC-3的表达水平,并比较AFP-L3和GPC-3单一和联合检测PHC的阳性率。结果 PHC组肝组织及血清AFP-L3和GPC-3表达水平均明显高于其他各组（P＜0.05）,AFP-L3和GPC-3单项检测PHC的阳性率分别为70.6%、79.4%,两种指标联合检测PHC的阳性率可至85.3%。结论 AFP-L3和GPC-3联合检测可提高PHC阳性率,对早期PHC诊断具有重要的临床意义。     

超声造影结合血清甲胎蛋白、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3对早期肝硬化结节状小肝癌的诊断价值研究

目的：探讨超声造影(CEUS)结合血清甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)对早期肝硬化结节状小肝癌的诊断价值研究。方法：回顾性分析本院收治的78例早期发现肝硬化合并小结节样病灶患者的临床资料,根据病理结果分为小肝癌组(46例)和良性病变组(32例)。所有患者术前均行超声造影、血清AFP、GPC3水平检测,并比较两组之间各参数的差异,分析三者单独或联合诊断小肝癌的价值。结果：小肝癌组的超声造影特征与良性病变组显著不同(P<0.05),小肝癌组大多呈“快进快出”表现,而良性病变组大多呈“慢进慢出”表现。小肝癌组患者血清AFP、GPC3水平显著高于良性病变组(P<0.05)。超声造影结合血清AFP、GPC3水平联合诊断HCC的准确性、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值最高(P<0.05)。结论：超声造影结合血清AFP、GPC3有助于提高对早期肝硬化结节状小肝癌的鉴别诊断价值,对临床治疗方案的选择有一定指导意义。     

血清酸性同工铁蛋白ELISA检测法的建立及在肝癌诊断中的初步应用

应用两株抗人胎盘酸性同工铁蛋白（AIF）单克隆抗体建立了测定人血清AIF的夹心ELISA，并初步测定了104例健康献血员，30例良性肝病患者和60例原发性肝癌（PHC）患者。结果显示本法标准曲线工作范围为10～250μg／L，平均回收率为96．8％，批内和批间变异系数分别为8％和7．1％。正常对照组、良性肝病和PHC患者血清AIF分别为36．3±18．3、52．1±33．8和158．9±74．5μg／L，PHC血清AIF水平显著升高。该法灵敏、准确、特异、简便，基本符合临床应用要求，可用于PHC的辅助诊断。     

抗GPC3/CD3双特异性重链抗体的制备及其抗肝癌作用评价

目的:设计并制备抗GPC3/CD3双特异性重链抗体(BiHcAb),分析其与双特异性T细胞衔接子(BiTE)在体内外抗肿瘤活性的差异.方法:通过全基因合成抗GPC3和抗CD3单域抗体(sdAb)序列,克隆至携带IgG4 Fc段的表达载体中,同时利用KIH技术形成稳定的双特异性重链抗体.2种质粒共转染HEK-293F细胞...     

ELISA联合检测方法的建立及应用

目的在微孔板平台上建立多指标联合检测的方法,为急诊、门诊及基层等多种医疗机构提供1种新的血清学检测手段。方法本研究根据酶联免疫吸附法(ELISA法)原理,以卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、生长激素(GH)为检测靶标,在自行设计的聚苯乙烯板孔上完成反应体系的优化,包括FSH、PRL、LH、GH包被抗体浓度及酶标抗体浓度,建立1种并行分析样品中多种指标的方法。结果成功确定4种垂体激素联合检测的条件,包括4种激素抗体包被浓度、酶标抗体浓度等,并成功应用于临床样本的检测。结论本研究首次建立了1种简单、特异性高、成本低、并行分析4种垂体激素的联合检测方法,提高了常规ELISA法的检测效率。     

人组织激肽释放酶6双抗夹心ELISA方法的建立及临床初步应用

目的通过制备的人组织型激肽释放酶6(hK6)单克隆抗体(mAb),建立双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,并用于胃癌诊断。方法采用该实验室保存的hK6重组蛋白,免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术制备特异性的mAb,经鉴定纯化、酶标记后,建立双抗夹心ELISA方法,检测胃癌患者血清中hK6水平,并联合检测血清中的癌胚抗原(CEA)水平,探讨hK6作为胃癌生物标记的可行性。结果成功建立了检测血清中hK6的双抗夹心ELISA方法,并确定该方法包被抗体的最适浓度为5μg/mL,酶标记抗体的最佳稀释比例为1∶2 000。该方法检测各组血清中的hK6水平,与胃溃疡组hK6水平[(3.59±1.02)ng/mL]和健康体检组hK6水平[(3.35±0.67)ng/mL]比较,胃癌组hK6水平[(5.78±1.66)ng/mL]明显高于其他两组,差异有统计学意义(P0.05);而胃溃疡组与健康体检组hK6水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。胃癌患者hK6和CEA检测的阳性率分别为69.70%和45.46%,两者联合检测的阳性率为78.79%。结论成功建立了hK6双抗夹心ELISA检测方法;hK6是较好的胃癌血清肿瘤标记物,同时检测hK6与CEA可提高胃癌的检出率,减少漏诊的发生,有助于胃癌的诊断。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检验方法的建立及临床应用

目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12～6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%～72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的最低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .     

血清白喉和破伤风抗体检测方法的建立及应用

目的建立定量检测抗白喉抗体、抗破伤风抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别用纯化的白喉类毒素、破伤风类毒素作为包被抗原,白喉、破伤风人源血清抗体标准品作为标准品,对供试品和标准品的剂量反应曲线进行拟合,以平行线法建立定量检测抗白喉抗体(Anti-DT)、抗破伤风抗体(Anti-TT)的ELISA方法。并进行方法学验证和应用研究。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。定量检测Anti-DT的ELISA方法的定量限为0.084 mU/mL,回收率为97.6%,批内变异系数(CV)≤3.40%,批间CV≤5.05%;检测Anti-TT方法的定量限为0.175mU/mL,回收率为97.5%,批内CV≤2.42%,批间CV≤5.58%。应用上述两种ELISA方法,对白喉破伤风疫苗用于婴儿基础免疫后的免疫原性进行了检测分析和评价。结论所建立的白喉、破伤风血清抗体ELISA检测方法,准确度高,重复性好,适合于一般实验室开展工作,可用于白喉破伤风疫苗免疫接种后的血清学效果评价和白喉破伤风疾病的流行病学研究。     

抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖ELISA的建立及其临床应用

目的提取纯化结核分枝杆菌（MTB）脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）,建立抗LAM抗体（LAM-[gG）检测的酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法MTB菌体彻底破碎后,去除蛋白、脂质、核酸,得到粗制的脂多糖。经Sephacyl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。以该LAM作为间接ELISA的包被抗原来检测血清中的LAM抗体。,结果所得LAM经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）银染,与对照标准品大小一致,为37000。115例肺结核患者LAM抗体阳性率71．3％;92例非结核肺部疾病患者假阳性率11．9％;188名健康体检者假阳性率3．2％。敏感性71．3％,特异性93．9％。结论本研究成功提取到LAM抗原,此抗原可作为间接ELISA的包被抗原用于结核抗体的检测。     

ELISA检测血清抗磷脂酶A_2受体抗体在膜性肾病中的应用探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)滴度在膜性肾病中的应用价值为疾病诊断及病情判断提供更特异的血清学指标。方法选取该院肾内科就诊行肾组织活检并确诊的膜性肾病患者34例,该院住院自身免疫性疾病及肾病综合征、肾功能不全患者32例,健康体检者12例,收集血清检测抗PLA2R抗体并结合血清总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、IgG、IgA、IgM、C3、C4指标,分析其对膜性肾病的诊断性能。结果抗PLA2R抗体滴度在膜性肾病组、疾病对照组、健康对照组中位数依次为22.1、2.0、2.0RU/mL,膜性肾病组与其他两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。抗PLA2R抗体在膜性肾病组阳性17例(阳性率50%),阴性17例,疾病对照组及健康对照组均为阴性,其特异度与阳性预测值为100%。膜性肾病组TP、ALB、IgG与疾病对照组、健康对照组比较差异有统计学意义(P0.05);抗PLA2R抗体与血清TP、ALB、IgG、IgA、IgM、C3、C4的相关系数依次为-0.382、-0.344、-0.502、-0.295、0.062、0.005、0.241,与TP、ALB、IgG、IgA呈负相关(P0.01),与C4呈正相关(P0.05),与IgM、C3无相关性(P0.05)。结论抗PLA2R抗体在膜性肾病诊断中具有较高的特异性,可作为无法行肾活检患者的必要和特异性血清学检测指标,定量检测有助于病情判断。     

抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。     

竞争酶联免疫吸附试验检测人血管抑素的方法建立及其应用研究

目的　研究建立竞争酶联免疫吸附试验 (竞争ELISA)检测血管抑素的方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　以重组人血管抑素作为抗原免疫家兔 ,制备抗人血管抑素多克隆抗体 ,建立竞争ELISA法 ,并检测 6 1例肿瘤患者和 2 0名正常献血员血浆中血管抑素含量。结果　竞争ELISA法的灵敏度为 5mg/L ,批内和批间变异分别为 2 7%～ 3 2 %和 4 9%～ 5 1% ,平均回收率为10 0 4 %。血浆血管抑素含量在 2 0名献血员中为 2 7 2 2± 7 4 4mg/L ,2 8例胃癌患者为 5 7 15±2 9 90mg/L ,6例乳腺癌为 6 7 5 1± 2 0 88mg/L ,6例肝癌为 92 0 3± 18 72mg/L ,11例急性淋巴细胞性白血病为 4 1 72± 9 99mg/L ,10例其他肿瘤 (2例胆囊癌 ,3例结肠癌 ,2例前列腺癌 ,3例卵巢癌 )为 78 78± 2 0 4 4mg/L ,均显著高于正常人 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　建立的竞争ELISA为临床提供了一种简单、灵敏和特异地检测人血管抑素的方法 ,并可作为肿瘤诊断的一种新检测指标。     

血清粗纤维调节素ELISA的建立及初步应用

以提纯的人胎盘粗纤维调节素 (Un)及兔抗人Un IgG ,建立血清Un的竞争抑制ELISA标准曲线 ,并检测了 6 0名正常人和 12 4例肝病患者。结果采用棋盘试验确定包被Un及其抗体的浓度 ,表明该法灵敏度为 5 μg/L ,回收率为 96 6 %～10 8 3% ,批内 CV为 7 5 % ,批间CV 为 7 9%。 6 0名正常成人血清Un含量为 71 14± 2 9 6 0 μg/L ,参考值范围为 11～ 130μg/L,慢性肝病患者Un含量显著高于正常人。提示此法稳定、可靠、特异 ,基本符合临床使用要求 ,可用于慢性肝病的诊断。