原发性肝癌患者血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其诊断意义

目的分析血浆循环游离线粒体DNA(CCF mt DNA)水平与原发性肝癌(HCC)的相关性,探讨其作为HCC标志物的可行性。方法收集HCC患者及体检健康者的血浆标本各60例,提取全基因组DNA;实时荧光定量PCR分析线粒体CoⅡ一段保守且与核基因组无同源的序列;构建含该靶序列的已知浓度的质粒作为标准品,系列稀释后定量检测CCF mt DNA的含量;独立样本t检验分析HCC患者与体检健康者CCF mt DNA水平的差异;ROC曲线分析CCF mt DNA诊断HCC的效能。结果HCC患者CCF mt DNA水平[(0.591±0.014)×106拷贝/m L]显著高于健康对照组[(0.364±0.012)×106拷贝/m L],差异有统计学意义(t=12.27,P0.05);ROC曲线结果显示,以0.470×106拷贝/m L为cut off值,CCF mt DNA诊断HCC的敏感性为83.3%,特异性为88.3%;ROC曲线下面积(AUCROC)=0.916,95%CI:0.864~0.968,P0.05。结论 HCC患者CCF mt DNA水平升高,且诊断HCC的敏感性、特异性较高,可能作为肿瘤标志物用于HCC诊断。     

血CTCs和cfDNA联合检测与传统肿瘤标志物检测在辅助诊断乳腺癌中的应用价值比较

目的比较血循环肿瘤细胞(CTCs)、循环游离DNA(cf DNA)联合检测与传统肿瘤标志物糖蛋白抗原153(CA153)检测在辅助诊断乳腺癌中的应用价值。方法回顾性选择2017年1月到2019年6月在安徽省第二人民医院收治的82例被确诊的乳腺癌患者为乳腺癌组,选取同期收治的50例乳腺良性疾病患者为乳腺良性疾病组,50例于该院体检的健康女性为对照组。采用ROCHE化学发光仪检测血清CA153水平;采用qPCR检测血浆cf DNA基因水平(241 bp hTERT和100 bp hTERT)和完整性(241 bp hTERT/100 bp hTERT);采用Ce1l Search系统检测血CTCs;受试者工作曲线(ROC)分析血CA153、cf DNA与CTCs诊断乳腺癌的诊断价值。结果乳腺癌组患者的血CTCs阳性表达率为37. 80%,明显高于乳腺良性疾病组的16. 00%(P <0. 05),明显高于对照组的12. 00%(P <0. 05);乳腺癌组的血CA153、241 bp hTERT、100 bp hTERT、241 bp hTERT/100 bp hTERT水平均明显高于乳腺良性疾病组(P <0. 05),乳腺良性疾病组的血CA153、241 bp hTERT、100 bp hTERT、241 bp hTERT/100 bp h TERT水平均明显高于对照组(P <0. 05);ROC分析显示,血cf DNA 241 bp hTERT、100 bp hTERT、241 bp hTERT/100 bp hTERT以及三者联合诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)依次为0. 865、0. 725、0. 870和0. 950;血CTCs和CA153诊断乳腺癌的AUC为0. 609和0. 733,明显低于cf DNA诊断的0. 950。结论血cf DNA对乳腺癌具有较高的诊断价值,有望应用于乳腺癌患者的临床辅助诊断。     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排在非霍奇金淋巴瘤患者微小残留病中的应用及临床意义

目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排,并探讨其在监测微小残留病变(MRD)中的临床意义。方法提取63例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法检测IgH(VH FR3-JH)和TCRγ(Vγ-Jγ)克隆性基因重排,与病理组织学检查进行比较。并随访患者以监测和检测MRD。结果 63例中有49例[30例B细胞NHL(B-NHL)和19例T细胞NHL(T-NHL)]初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功。30例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性27例(90%),19例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性14例(74%);其病理活检标本基因重排结果分别为87%和74%(P0.05)。另14例(9例B-NHL,5例T-NHL)临床缓解患者中,仅1例(B-NHL)提取出血浆游离DNA并检测到IgH基因单克隆重排。随访治疗缓解的患者共56例,其中24例患者血浆游离DNA基因重排持续阴性,2年存活率达83%;27例患者血浆游离DNA基因重排缓解时呈阴性随后转阳,5例患者缓解后始终能检测到血浆游离DNA基因重排,其2年存活率分别为26%和20%(P0.05)。结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便,与病理活检标本检测具有相同的临床意义。在MRD的监测中,利用血浆游离DNA检测单克隆性重排具有一定的早期预测复发的作用。     

急性髓系白血病患者血浆循环DNA动态监测及其临床意义

本研究旨在动态监测急性髓系白血病(AML)患者血浆循环DNA的含量,探讨其临床意义。采集66例AML患者不同临床状态的静脉血,以60例体检健康者、20例良性血液病患者、20例实体肿瘤患者为对照,用磁珠法提取血浆标本中循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测。结果表明:AML患者诊断时血浆DNA含量为168.5(73.4-245.1)ng/ml,显著高于各对照组,男性患者血浆DNA含量显著高于女性患者(P=0.019),不同年龄、不同FAB型别的患者间血浆DNA含量无统计学差异。化疗后血浆DNA水平显著低于化疗前,完全缓解、部分缓解组患者血浆DNA水平与健康对照组已无显著差异,但与未缓解组有显著性差异(P<0.05)。缓解后复发的6例患者中有5例(83.3%)复发时血浆DNA水平明显升高,未复发的25例患者中有22例(88.0%)血浆DNA水平保持稳定。结论:血浆DNA定量检测对AML的化疗疗效判断及复发监测具有重要意义。     

荧光定量PCR法检测鼻咽癌患者全血和血浆标本EB病毒DNA的比较研究

目的 研究全血和血浆标本对荧光定量PCR方法检测鼻咽癌患者EB病毒DNA的差异.方法 收集40例鼻咽癌患者的全血和血浆标本,用荧光定量PCR方法检测其EB病毒DNA含量,并对结果进行比较分析.结果 全血和血浆标本的EBV-DNA阳性率(含弱阳性)分别为85.0%和72.5%,差异无统计学意义(χ2=3.20,P>0.05),但不含弱阳性则阳性率分别为62.5%和32.5%,差异有统计学显著性意义(χ2=10.08,P<0.01);全血和血浆标本EB病毒DNA浓度几何平均浓度分别为3.58±1.42和4.72±1.53logcopies/ml,差异有统计学显著性意义(t=10.48,P<0.001);全血和血浆标本EB病毒DNA浓度有一定相关性(r2=0.787),但97.5%的患者全血载量高于血浆载量.结论 荧光定量PCR法检测EB病毒DNA全血标本好于血浆标本,更适合在临床实验室应用.     

血浆游离DNA甲基化靶向测序在结直肠癌中的应用价值

目的 检测结直肠癌(CRC)患者血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)的甲基化水平,并分析其临床应用价值.方法 收集38例大连大学附属新华医院就诊的CRC患者(Ⅰ～Ⅲ期)及38例体检健康者的血液标本,采用化学发光法检测血清癌胚抗原(CEA)水平;提取CRC组及体检健康者血浆cfDNA,行高通量甲基化靶...     

非小细胞肺癌患者血浆游离DNA含量和完整性检测的临床意义

目的评估血浆游离DNA含量和完整性(DNA integrity)在非小细胞肺癌(NSCLC)诊疗中的应用价值。方法收集102例NSCLC患者、30例肺良性疾病患者及30例体检健康者的外周血标本,并对其中44例NSCLC手术患者进行随访。提取血浆游离DNA,用SYBR Green染料实时荧光定量PCR检测血浆游离DNA中长度分别为100 bp及241 bp的人端粒酶逆转录酶(h TERT)目的基因的含量,计算血浆游离DNA完整性,并分析其与临床病理参数的关系。结果 100 bp、241 bp血浆游离DNA含量及DNA完整性在NSCLC、肺良性疾病组及健康对照组中差异有统计学意义(H分别为21.947、52.825、27.110,P均0.01),NSCLC患者手术前后100 bp、241 bp血浆游离DNA含量和术前游离DNA完整性差异有统计学意义(H分别为3.259,5.149,2.609,P均0.01)。血浆游离DNA完整性与NSCLC患者的年龄、性别、吸烟状况、临床分期、病理类型、肿瘤细胞分化程度、有无转移及肿瘤大小均无明显相关性。结论血浆游离DNA含量和完整性检测在NSCLC诊疗中有一定的临床价值,可成为NSCLC早期诊断及预后监测的指标。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

血浆DNA定量用于重症肝炎患者肝细胞损伤评估

目的定量重症肝炎患者血浆DNA的水平,与ALT比较,评估鉴别重症肝炎的临床应用价值。方法收集30例重症肝炎患者外周血标本6ml,以急性肝炎(20例)、慢性乙肝(90例)、肝硬化(45例)和健康体检者(100例)作为对照。用磁珠法提取血浆DNA,双重实时荧光定量PCR测定血浆DNA。结果乙型肝炎患者的血浆DNA水平(中位数)显著高于健康对照(104.2ng/mlvs.23.4ng/ml,P=0.0000)。血浆DNA水平在重症肝炎患者和急性肝炎、慢性乙肝及肝硬化患者之间都具有显著性差异(P=0.0018、0.0000和0.0000)。乙型肝炎患者的血清ALT水平(中位数)显著高于健康对照(107.5U/Lvs.24.1U/L,P=0.0000)。重症肝炎患者的血清ALT水平与急性肝炎之间有显著差异(P=0.0024),但与慢性乙肝和肝硬化之间没有差异(P=0.0600和1.0000)。ROC曲线分析显示,在鉴别重症肝炎和肝硬化以及慢性乙肝时,血浆DNA的鉴别能力显著优于血清ALT(AUC,0.95vs.0.51,P=0.0000;0.86vs.0.34,P=0.0000)。结论用双重荧光定量PCR检测血浆DNA...     

实时荧光定量PCR在EB病毒DNA检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术在检测患者外周血单个核细胞(PBMC)中EB病毒(EBV)DNA定量的临床应用,比较实时荧光定量PCR在检测血浆和PBMC中EBV DNA含量的差别,并研究EBV阳性患者的病种分布特点。方法应用罗氏Light Cycler荧光定量PCR仪检测375例患者PBMC中EBV DNA含量,所有阳性患者均用血浆进行复查,比较其差别,并回顾性分析患者临床特点。结果检测PBMC中EB阳性标本35例,阳性率为9.3%。阳性患者中鼻炎13例,鼻咽癌4例,鼻息肉4例,肺炎7例,急性淋巴细胞性白血病1例,传染性单核细胞增多症6例。取阳性标本检测其血浆游离EB DNA,33例阳性,其拷贝数低于相应标本中PBMC中的拷贝数。结论实时荧光定量PCR技术检测PBMC和血浆中EB DNA准确,快速,在确诊EBV感染相关性疾病中具有重要的作用,且检测PBMC中EB DNA可能更优于检测血浆中EB DNA。     

原发性肝癌患者病毒标志物检测及介入治疗对HBV DNA的影响

目的研究乙型肝炎病毒DNA和血清标志物与原发性肝癌的关系以及介入治疗前后HBV DNA和肝功能的变化。方法对151例肝癌患者做HBV-m,HBV DNA和AFP测定,对14例肝癌病人介入前后测HBV DNA和肝功能。结果肝癌患者HBV总感染率为96.68%,以HBsAg、抗HBe、抗HBc3c项同时阳性模式(俗称小三阳)最多见,占53.64%(81/151),其次为HBsAg、HBeAg、抗HBc 3项同时阳性(俗称大三阳)占20.52%(31/151)。小三阳中HBV DNA阳性占74.07%(60/81);AFP阳性率63.6%(91/143),介入治疗引起肝功能损害加重,HBV DNA水平升高,前者有显著性差异,后者无显著性差异。结论HBV感染与肝癌发生密切相关,而且以HBsAg、抗HBe、抗HBc 3项同时阳性模式最多见,该模式中大部分患者HBV DNA处于复制活跃状态;介入治疗引起肝功能损害加重,对HBV DNA水平的影响应引起重视。     

肝局灶性结节增生患者血浆miR-21的表达及鉴别诊断价值

目的:探讨血浆miR-21的表达及对肝脏局灶性结节增生(focal nodular hyperplasia,FNH)、肝腺瘤(hepatocellular adenoma,HCA)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)阴性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的鉴别诊断...     

A locked nucleic acid clamp-mediated PCR assay for detection of a p53 codon 249 hotspot mutation in urine

Hepatocellular carcinoma (HCC) has a 5-year survival rate of <10% because it is difficult to diagnose early. Mutations in the TP53 gene are associated with approximately 50% of human cancers. A hotspot mutation, a G:C to T:A transversion at codon 249 (249T), may be a potential DNA marker for HCC screening because of its exclusive presence in HCC and its detection in the circulation of some patients with HCC. A locked nucleic acid clamp-mediated PCR assay, followed by melting curve analysis (using the SimpleProbe), was developed to detect the TP53 249T mutation. In this assay, the locked nucleic acid clamp suppressed 10(7) copies of wild-type templates and permitted detection of 249T-mutated template, with a sensitivity of 0.1% (1:1000) of the mutant/wild-type ratio, assessed by a reconstituted standard within 2 hours. With an amplicon size of 41 bp, it detects target DNA sequences in short fragmented DNA templates. The detected mutations were validated by DNA sequencing analysis. We then tested DNA isolated from urine samples of patients with HCC for p53 mutations and identified positive TP53 mutations in 9 of 17 samples. The possibility of using this novel TP53 249T assay to develop a urine or blood test for HCC screening is discussed.     

胆汁中端粒酶逆转录酶和Bcl-2基因的表达及意义

目的研究端粒酶逆转录酶(hTERT)和Bcl-2基因在胆管癌患者胆汁中的表达及相互关系;探讨检测胆汁中hTERT和Bcl-2基因对胆管癌的诊断价值。方法将胆总管结石患者胆汁标本20份为对照组,胆管癌患者胆汁标本20份为试验组。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测标本中hTERT和Bcl-2基因。结果试验组中hTERT基因表达阳性14例,对照组中hTERT基因无表达,2组间差异统计学意义;试验组中Bcl-2基因表达阳性11例,对照组中Bcl-2基因的阳性1例,2组间差异统计学意义;试验组中hTERT和Bcl-2基因表达无相关性。结论胆管癌患者胆汁hTERT基因与Bcl-2基因的表达均明显高于胆总管结石者。端粒酶和Bcl-2在胆管癌胆汁中的表达无相关性。用RT-PCR方法检测胆汁中hTERT和Bcl-2基因的表达对胆管癌的诊断有参考意义。     

血浆蛋白酶体测定在肝细胞癌诊断中的意义

目的探讨血浆蛋白酶体测定在肝细胞癌（HCC）诊断中的意义。方法血浆中20s蛋白酶体的水平采用ELISA试剂盒检测。结合血清甲胎蛋白（AFP）的测定结果,比较蛋白酶体水平在HCC确诊患者、非肿瘤肝病患者和健康人群之间的差异,并评价其在HCC诊断中的敏感性和特异性。结果 HCC患者的血浆蛋白酶体水平显著高于非HCC患者（158.4±59.1vs 23.0±18.9,P〈0.01）。与血清AFP测定的结果相比,血浆蛋白酶体的敏感性（100%）显著提高,但特异性（58.1%）显著降低。然而,适当上调截止值后的敏感性和特异性均优于血清AFP。结论血浆蛋白酶体检测可作为HCC实验室诊断的敏感手段之一。     

血浆Dickkopf同源物1检测对肝细胞癌的诊断价值

目的 探讨检测血浆Dickkopf同源物1(DKK1)对肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法 选取2014年11月～2015年12月南通市第三人民医院已确诊的HCC患者48例,肝硬化(LC)20例,慢性乙型肝炎(CHB)20例,选择排除其他慢性疾病的健康体检者(HC)20例,采用ELISA方法定量检测血浆中DKK1浓度,同时采用美国雅培i2000微粒子化学发光免疫分析仪检测其AFP。同时比较分析其ROC曲线及相关性。结果 HCC组DKK1水平均显著高于LC组、CHB组和HC组(Z=-4.132～-5.828,P均<0.001)。DKK1对HCC诊断价值的ROC曲线下面积为0.889,95%置信区间为0.831～0.947,DKK1诊断HCC最佳cutoff值为565 ng/L,其诊断灵敏度为93.8%,特异度为70%,AFP的ROC曲线下面积为0.759,95%置信区间为0.667～0.850。DKK1的AUC显著>AFP(Z=2.28,P=0.022)。DKK1和AFP两指标间无相关性(r=0.148,P=0.316),其中有21例AFP<20 μg/L而其DKK1>565 ng/L的诊断临界值。结论 检测血浆中DKK1可以作为AFP诊断HCC的有效补充,尤其是DKK1对AFP阴性HCC患者的早期诊断价值值得关注。