人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的评价与应用

目的对研制的人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的重复性、稳定性进行评价,并了解其实际应用效果。方法选取中、晚期肝硬化患者50例和健康体检者50例分别作为肝病组和正常对照组,以鼠抗人CD35单克隆抗体、兔抗人sCR1多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG为包被抗体、夹心抗体和检测抗体,以纯化后的重组人sCR1蛋白为标准品,建立人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒,进行试剂盒重复性和稳定性检验,并应用该试剂盒检测两组血清sCR1蛋白水平。结果双抗体夹心ELISA法检测人血清微量sCR1蛋白的线性范围是15.60~250.00ng/mL;血清sCR1蛋白水平对吸光度值的回归方程为Y=112.10 X2+18.21 X+1.694(r2=0.998);重复性检测中,高、低水平标准品检测值的批内相对标准偏差(RSD)分别为6.20%、7.40%,批间RSD分别为6.70%和7.90%;试剂盒稳定性检测中,RSD均不大于0.01;肝病组血清sCR1表达水平显著高于正常对照组(P0.01)。结论人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒线性范围广、重复性好、易于保存,适合于临床和科研检测工作。     

电化学发光法检测抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用评价

目的 比较增强化学发光酶联免疫分析（ECLIA）法和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体的相关性,评价ECLIA定量检测试剂盒的性能.方法 将87例类风湿关节炎（RA）患者作为RA组;另选择强直性脊柱炎患者35例,干燥综合征患者5例,骨性关节炎患者25例,系统性红斑狼疮患者3例,痛风患者12例作为疾病对照组;正常对照组为健康体检人群.将疾病对照组和正常对照组儿童的血清合为对照组,分别采用ELISA检测试剂盒及ECLIA检测215份血清标本的抗CCP抗体.结果 ECLIA法试剂盒的敏感度为71.26%,特异97.66%;ELISA法试剂盒敏感度为68.97%,特异性96.88%.分两种方法测定215份血清标本,2种方法检测均为阳性的患者有61例,均为阴性的有147例.二者检测结果的总体符合率为96.74%.2种方法间有显著相关性（P〈0.005）.结论 ECLIA法检测抗CCP抗体试剂盒与ELISA法试剂盒检测结果的相关性良好.     

抗-HIV(1/2)ELISA一步法检测时应注意钩状效应

目的　认识抗 HIV(1/ 2 )双抗原夹心ELISA一步法试剂盒在检测某些高滴度HIV抗体强阳性标本时可能存在的钩状效应。方法　用 5种不同厂家的抗 HIV(1/ 2 )双抗原夹心ELISA试剂盒 (包括一步法和二步法 )检测 4 32 5 6份血标本 ,将检测出来 4份高滴度HIV抗体强阳性标本用蛋白印迹法确认结果 ,同时将 4份强阳性标本稀释 10 0倍后用 5种不同厂家的抗 HIV(1/ 2 )双抗原夹心ELISA试剂盒重复检测。结果　某些厂家抗 HIV(1/ 2 )双抗原夹心ELISA一步法试剂盒在测定原倍和稀释后高滴度HIV抗体强阳性标本时其结果OD值存在着显著性差异。结论　在使用抗 HIV(1/ 2 )双抗原夹心ELISA一步法试剂盒进行检测时应注意因严重钩状效应而影响结果正确的可能性。提示应选择高灵敏和高特异性试剂 ,确保血液质量安全     

免疫印迹法在抗dsDNA抗体检测中的应用

目的 评价免疫印迹法检测抗dsDNA抗体的敏感性和特异性.方法 用免疫印迹法分别与酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测样本进行比对,来验证免疫印迹检测抗dsDNA抗体的敏感性和特异性.选用抗dsDNA抗体阳性样本30 份,抗核抗体(ANA-IIF)阳性样本30份,阴性样本76份,对检测结果进行统计学分析.结果 用免疫印迹法检测抗dsDNA抗体,结果与ELISA 法和IIF法符合率高,敏感度达96.7%特异度达98.7 %.结论 用免疫印迹法检测抗dsDNA抗体 可获得很好的敏感度和特异度,且试剂盒操作简单方便,结果判读容易,适合基层检验人员操作,值得在临床推广,作为常规初筛实验.     

用兔抗人分化抑制因子3抗体建立双抗体夹心ELISA法及初步临床应用

目的 制备兔抗人分化抑制因子3（Id3）多克隆抗体,建立检测血清Id3的双抗体夹心ELISA技术。 方法 用纯化的Id3重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗Id3多克隆抗体,通过多肽亲和层析柱去除非特异性成分,免疫细胞化学染色、免疫双向扩散及间接ELISA法检测抗体特异性和效价。制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗Id3,以纯化Id3重组蛋白为标准抗原制备标准曲线,建立定量检测人Id3的双抗体夹心ELISA法。 结果 免疫细胞化学染色显示,制备的兔抗血清能与人Id3蛋白特异性结合,所得兔抗血清效价分别为1 ∶ 8（琼脂双向扩散）和1 ∶ 8 000（ELISA）。ELISA法的包被抗体和酶标记抗体的工作浓度分别为5 μg/ml和1 ∶ 4 000,标准曲线为Y= 0.079 3+0.018 8X,r=0.997。检测线性范围为2～64 U/ml,平均回收率为98.2%, 批内平均变异系数（CV）为4.4%, 批间平均CV为7.2%。该方法可用于人血清Id3含量的检测。 结论 兔抗人Id3多克隆抗体的制备及夹心ELISA法的建立为今后研究Id3蛋白的功能及其在临床和基础医学中的应用奠定了基础。     

ELISA法与免疫膜条法检测抗MDA5抗体、抗TIF1γ抗体的比对分析

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫膜条法检测抗黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)抗体和抗转录中介因子1γ(TIF1γ)抗体结果的差异性。方法选取日本MBL公司生产的抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体试剂盒(ELISA法)与德国欧蒙公司抗肌炎抗体谱IgG检测试剂盒(免疫膜条法),同时检测180例皮肌炎血清样本中的抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体,比较这两种方法的差异性。结果两种方法检测到的两种抗体阳性率,差异均无统计学意义(P0.05)。两种方法检测结果的一致性有统计学意义(P0.001),但一致性一般(抗MDA5抗体:Kappa值=0.660;抗TIF1γ抗体:Kappa值=0.642)。结论 ELISA法和免疫膜条法检测抗MDA5抗体和抗TIF1γ抗体的一致性程度一般。免疫膜条法有待进一步改善,以提高检测的准确性。     

精子肽的固相合成及其在免疫性不孕诊断中的应用研究

目的合成特异性精子肽，井对其抗原性进行初步评价，从而探讨检测抗精子抗体的ELISA试剂盒制备。方法应用固相多肽合成技术，以Fmoc基团保护的氨基酸为原料，合成特异性精子肽。以高效液相色谱（HPLC）技术鉴定纯化，并用ELISA检测其抗原性。结果成功合成了所需肽段，HPLC结果显示纯度达95％以上。该合成肽包被的ELISA试剂盒检测抗精子抗体的结果，与商品化试剂盒相比较符合率达90．6％。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度特异性的精子肽，且所合成肽段具有良好的抗原活性，包板建立的ELISA方法可以用于免疫性不孕中抗精子抗体的检测。     

TRIM34分子B细胞抗原表位的生物信息学筛选及抗体制备

通过生物信息学软件预测TRIM34蛋白的B细胞抗原表位,制备兔源性抗TRIM34多肽抗体并验证其特异性。音先运用VectorNTI11.5和Lasergene7.1软件,分析TRIM34蛋白的氨基酸序列,筛选出B细胞抗原表位序列。人工合成TRIM34多肽抗原,并在多肽氨基端与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联。免疫新西兰大白兔,制备抗TRIM34多肽抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗TRIM34多肽抗体的效价,并通过蛋白印迹法和激光共聚焦法检测抗体对TRIM34蛋白的特异性识别能力。经ELISA检测,抗TRIM34多肽抗体的效价为1:8000。经蛋白印迹检测,抗TRIM34多肽抗体能特异性识别外源性和内源性TRIM34蛋白,同时该抗TRIM34多肽抗体不能识别TRIM 34旁系同源分子TRIM6、TRIM5和TRIM22。经间接免疫荧光染色并通过激光共聚焦检测,发现抗TRIM34多肽抗体可以用来显示TRIM34蛋白的亚细胞定位情况。本研究利用生物信息学分析,筛选并合成TRIM34蛋白抗原多肽,成功制备特异识别TRIM34蛋白的兔源多肽抗体。     

兔抗人KiSS-1抗体的制备与鉴定

目的 制备兔抗人KiSS-1多克隆抗体.方法 聚合酶链反应（PCR）法扩增出KiSS-1基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）.采用异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白的表达,采用镍离子螯合琼脂糖凝胶（Ni^2＋-NTA）亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）、Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果 成功构建了KiSS-1原核表达载体pET28/ KiSS-1,高效表达并纯化KiSS-1蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1：6 400.Western blot鉴定制备的抗体与KiSS-1蛋白能特异性结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人卵巢癌组织中的天然KiSS-1.结论 成功制备了效价高、特异性较强的兔抗人KiSS-1抗体,为进一步探讨KiSS-1在卵巢癌的发生、发展过程中的作用奠定了基础.     

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测抗dsDNA抗体的检出情况及符合率.方法 用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法同时检测286份临床疑为系统性红斑狼疮(SLE)的病人血清.结果 286份样本中ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性,255例抗dsDNA抗体阴性,而在ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性中IIF法检测仅有13例阳性,阳性符合率仅为41.94%.ELISA法检出的255例抗dsDNA抗体阴性标本中IIF法检测有255例阴性,阴性符合率100%.ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率有显著性差异.结论 ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率差异有统计学显著性意义(P＜0.05),ELISA法检测抗dsDNA抗体简便、快速、设备要求不高,可以用于大批量的抗dsDNA筛查,但因为特异性不高,假阳性较多,因此有条件的实验室最好采用IIF法对阳性结果进行复检确认.     

支气管哮喘患者血清IL-25、ECP的表达及意义

[目的]监测支气管哮喘患者血清白细胞介素-25（IL-25）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）的表达水平,探讨其水平变化及其在哮喘发病中的作用.[方法]收集支气管哮喘急性发作期患者30例（发作期组）、哮喘缓解期患者30例（缓解期组）、同期健康体检者30例（对照组）的静脉血标本,用双抗体夹心ELISA法检测并比较血清IL-25、ECP的水平.[结果]发作期组血清IL-25水平（51.91±9.05）ng/L显著高于缓解期组（28.09±6.96）ng/L及对照组（26.24±5.12）ng/L,其差异有统计学意义（P〈0.05）,缓解期组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;哮喘急性发作期组血清ECP水平（18.95±8.97）μg/L,显著高于缓解期组（4.47±2.01） μg/L及对照组（2.01±1.47） μg/L,其差异有统计学意义（P〈0.05）,缓解期组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;发作期组患者血清IL-25水平与ECP之间呈正相关（r=0.682,P〈0.01）.[结论]哮喘成人血清IL-25及ECP水平能反应哮喘气道炎症活动情况及严重程度,且两者在哮喘急性发作期存在正相关性.     

血清ECP水平与药物洗脱支架晚期支架内再狭窄的相关性

目的:探讨嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophil cationic protein, ECP)与药物洗脱支架(drug eluting stent, DES)晚期支架内再狭窄(in-stent restenosis, ISR)的相关性。方法:选取2014年12月至2016年7月在复旦大学附属中山医院植入DES并超过1年后返院复查造影患者202例,根据复查造影结果分为ISR组(100例)和无ISR组(102例),应用夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清ECP水平并比较其在2组间差异。在ISR组和无ISR组,根据支架载药涂层,进一步分为永久涂层-DES组(DP-DES亚组)及可降解涂层-DES组(BP-DES亚组),分析血清ECP水平与载药涂层的关系。结果:ISR组血清ECP水平明显高于无ISR组(P=0.003)。手术年龄和ECP水平是晚期ISR形成的独立危险因素。ISR组DP-DES亚组血清ECP水平高于无ISR组DP-DES亚组(P=0.002)。结论:血清ECP水平在晚期ISR患者中显著升高,可能与支架药物涂层有关。     

An enzyme-linked immunosorbent assay and reference ranges for bisphosphoglycerate mutase in human erythrocytes

We established an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system for the determination of human bisphosphoglycerate mutase (BPGM) protein content in human erythrocytes using a polyclonal anti-BPGM antibody, we determined reference ranges for BPGM protein content, synthase activity, and specific activity in human erythrocytes. We produced a recombinant human BPGM (rBPGM) by gene manipulation using E. coli and then obtained the polyclonal antibody by immunizing rabbits with purified rBPGM. The reproducibility of the ELISA was in an acceptable range with a coefficient of variation under 1.5%. The ELISA was reliable in the range of 0.1 to 10 ng/mL. The polyclonal anti-rBPGM antibody did not show any cross-reaction with recombinant human B type phosphoglycerate mutase, which is highly homologous to rBPGM. The ELISA was found to be practical for the determination of BPGM protein content in human erythrocytes. The mean BPGM protein content was 56.3 ± 9.7 μg/mL in whole blood (mean ± SD, n = 50). The ELISA can be used to examine various hematologic disorders with abnormal red cell size and cell counts, and to detect BPGM enzymopathy in human erythrocytes. J. Clin. Lab. Anal. 12:263–267, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.     

重组蛋白与合成肽抗原对戊型肝炎的诊断价值比较

目的　比较重组蛋白与合成肽抗原建立的酶联免疫吸附试验 (ELISA)在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。方法　选择戊型肝炎病毒第二开放读码框架 (ORF2 ) ,分别采用重组蛋白及合成肽抗原 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,同时检测 97份戊型肝炎急性期患者 ,4 7份甲、乙、丙、丁、庚型肝炎患者及 12 0份健康献血者的血清抗 HEV。结果　重组蛋白ELISA、合成肽ELISA与Genelabs重组抗原ELISA试剂盒检测结果的总符合率分别为 96 .9%和 92 % ;重组蛋白ELISA与合成肽ELISA的一致率为 91% ;合成肽ELISA对重组蛋白ELISA的灵敏度为 90 % ,特异度为 10 0 %。结论　戊型肝炎病毒相同表位的重组蛋白和合成肽抗原用于抗 HEVELISA检测有较好的一致性。     

Signs of neutrophil and eosinophil activation in adult respiratory distress syndrome

Circulating levels of lactoferrin, a specific granule protein of neutrophilic leukocytes, and eosinophil cationic protein (ECP), a specific granule protein of eosinophilic leukocytes, were serially measured in 19 patients at risk for adult respiratory distress syndrome (ARDS). Those patients who developed ARDS had significantly higher concentrations of both proteins than the patients without signs of ARDS. High ECP levels were observed in spite of peripheral eosinopenia. The lactoferrin levels were also increased in relation to circulating numbers of neutrophils. These findings are consistent with an enhanced turnover and/or activity of eosinophils and neutrophils in ARDS and thereby support other clinical and experimental observations suggesting a central pathophysiologic role for granulocytes in ARDS. No relation was found between ARDS or serum concentrations of lactoferrin or ECP and degree of complement consumption, suggesting that other mechanisms besides complement activation may underlie granulocyte activation in ARDS.     

GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备

本研究探讨GST-CML28融合蛋白的表达及抗体制备。CML28-pGEX-3X重组质粒转化BL21大肠杆菌,提取细菌蛋白后用GSTrap FF纯化柱进行纯化。将纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备CML28抗血清;免疫血清用CNBr-activated Sepharose 4B层析柱进行纯化,获得多克隆抗体。结果表明,获得的抗体能够满足针对CML28的ELISA、Western blot、免疫组织化学和量子点荧光检测的实验要求。结论:成功制备了高特异性,高效价的抗人CML28多克隆抗体,为今后深入研究其生物学功能提供了有用的实验工具。     

瓜氨酸合成蛋白抗体等三种抗体联合检测对类风湿关节炎的诊断意义

目的:探讨检测瓜氨酸合成蛋白抗体(CPA)及其联合抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)和抗角蛋白抗体(AKA)的检测,在类风湿关节炎(RA)的诊断意义。方法:采用酶联免疫固相吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法测定65例RA患者血清中的CPA、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)和抗角蛋白抗体(AKA)水平。并以99例非RA患者以及173例健康者的CPA检测作为对照。结果:以6.25 U/ml为临界值,CPA对RA诊断的敏感性为64.6%,特异性为94.9%,阳性、阴性预测值分别为76.4%、91.3%,试验诊断准确度达88.7%。RA患者血清CPA水平与抗CCP之间无线性相关关系,抗CCP、AKA阳性率分别为67.6%、75.4%,CPA与抗CCP、AKA联合检测可提高RA阳性诊断率。骨关节侵蚀患者组与未出现骨损伤组间CPA水平没有明显差异。结论:CPA是协助诊断RA的一个新的特异性血清学指标,同时结合抗CCP抗体和AKA的检测可以提高RA阳性诊断率,适合在小规模实验室推广使用。     

Lower alloimmunization rates in pediatric sickle cell patients on chronic erythrocytapheresis compared to chronic simple transfusions

BACKGROUND: Erythrocytapheresis (ECP), automated red blood cell exchange, is increasingly being used for chronic transfusion therapy in sickle cell disease (SCD) as it is an isovolumetric transfusion, is more effective in lowering hemoglobin (Hb)S, and can limit iron overload. Because ECP requires increased blood exposure compared to simple transfusions there is concern for increased transfusion complications, including alloimmunization. We compared alloimmunization rates between patients receiving simple or exchange chronic transfusions. STUDY DESIGN AND METHODS: Data were retrospectively collected for 45 SCD patients (n = 23 simple, n = 22 ECP) on a chronic transfusion program as of December 2010 to determine the rate of antibody formation (antibodies formed per 100 units transfused). RESULTS: The 45 patients received 10,949 units and formed six new alloantibodies during the study period (1994‐2010); therefore, the overall alloimmunization rate was 0.055 alloantibodies per 100 U. There were three antibodies formed in three patients on ECP, one allo (anti‐rh_i) and two autoantibodies. There were six antibodies in four patients on a simple transfusion program, five allo (anti‐Le^a, M, D, C, and Kp^a) and one autoantibody. The ECP group received significantly more blood (338.5 units/patient vs. 152.2 units/patient, p = 0.001). The rate of antibody formation (auto plus allo) was 0.040 antibodies per 100 U in the ECP group and 0.171 antibodies per 100 U in the simple transfusion group (p = 0.04). The alloantibodies formed per 100 units was 0.013 in the ECP group and 0.143 in the simple transfusion group (p = 0.03). CONCLUSION: Chronic ECP should be considered in patients requiring optimal management of HbS levels and iron burden. Concerns about increased alloimmunization with ECP may be unjustified.     

重组日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶单克隆抗体在急性血吸虫病临床诊断中的应用

目的研究重组抗原26 ku日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶(SjGST)及其单克隆抗体在血吸虫患者分子诊断中的应用。方法用已纯化的重组SjGST抗原免疫近交系(BALB/c)小鼠,数周后取免疫鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择性培养基筛选出杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化,扩大培养制备针对重组SjGST抗原的单克隆抗体细胞株。亲和层析法纯化单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急性血吸虫病患者和非流行区正常人血清。结果成功获得重组蛋白26 ku SjGST,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带。成功获得能够长期分泌抗重组SjGST单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA与蛋白质印迹试验均显示杂交瘤细胞培养上清中含有重组SjGST抗体。ELISA检测患者血清结果表明,26 ku SjGST用于急性血吸虫病患者血清中抗体检测的阳性率为90.6%,26 ku SjGST抗体用于急性血吸虫病患者血清中循环抗原检测的阳性率为59.4%。结论该重组蛋白用于急性血吸虫病患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,26 ku SjGST抗体对循环抗原的检测可作为抗体检测的有效补充。     

中药方剂回阳救急汤对小鼠免疫力的影响

目的探索中药方剂回阳救急汤对小鼠免疫力的影响。方法用卵核蛋白1：20作为抗原给正常小鼠腹股沟皮下注射作为基础免疫后,中药组当日起每日灌服回阳救急汤药液,对照组当日起每日灌服5％葡萄糖液体,7d后再用卵核蛋白1：100作为抗原进行加强免疫,再7d后用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测相应抗体生成水平。结果中药组小鼠的抗体水平没有显著升高,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论正常小鼠在强抗原刺激下免疫反应增强,而回阳救急汤药液对小鼠免疫应答没有明显的调节作用。