鲍曼不动杆菌OXA-51样碳青霉烯酶基因分型与耐药性研究

目的 研究鲍曼不动杆菌中OXA-51样碳青霉烯酶基因分型及与抗菌药物耐药的相关性.方法 纸片扩散法检测174株鲍曼不动杆菌对头孢他啶、头孢曲松、阿米卡星、环丙沙星的耐药性,琼脂稀释法检测亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC值);PCR扩增碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58相关基因;对ONA-51阳性菌株进行测序和基因分型.结果 所有菌株均未检出OXA-24、OXA-58、IMP及VIM基因;15.5%(27/174)的菌株OXA-23阳性,72.4%(126/174)的菌株OXA-51阳性,其中15.5%(27/174)菌株同时产OXA-51样酶和OXA-23酶,126株OXA-51样酶阳性菌株中,82.5%(104/126)为OXA-66型,非OXA-66基因型占17.5%(22/126),本次研究发现的8个新基因型;OXA-66型的耐药性明显高于其他基因型.结论 OXA-66为本地区分离鲍曼不动杆菌产生的OXA-51样碳青霉烯酶的主要基因型;OXA-66与碳青霉烯抗生素的低水平耐药有关,且可能与其他抗菌药物的耐药性相关,临床分离鲍曼不动杆菌中发现新的OXA-51样碳青霉烯酶基因.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶基因型研究

目的了解安徽省铜陵市人民医院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药特性及产碳青霉烯酶基因型。方法用纸片扩散法检测该院2008年1～12月临床分离的31株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对19种常用抗菌药物的敏感性。结果用WHONET5.3软件进行数据统计;应用聚合酶链反应(PCR)检测IMP、VIM-1、VIM-2、SIM-1、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58等碳青霉烯酶基因型。结果 31株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有23株分离自重症监护病房;对19种临床常用抗菌药物除米诺环素耐药率为9.7%、头孢哌酮/舒巴坦为51.6%外,其余都在90.0%以上;碳青霉烯酶基因型检测除1株单产OXA-23型外,其余30株均同时产OXA-23型和OXA-66型碳青霉烯酶。结论该院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌在重症监护病房有小范围暴发流行的可能;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药率极高;同时产OXA-23、OXA-66型碳青霉烯酶可能是其对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。     

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,     

OXA-51样D类碳青霉烯酶在鲍曼不动杆菌中广泛分布

目的 研究全国7家教学医院临床分离的美罗培南敏感与非敏感鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶类型及其分布特点。方法 收集2005年北京协和医院、北京朝阳医院、解放军第三0四医院和大连、浙江、南京医院临床分离存活的非重复的美罗培南非敏感不动杆菌126株，并分别从北京协和医院、北京医院、浙江、大连、南京5家医院选取美罗培南敏感的19株菌作为对照，采用琼脂稀释法测定这些菌株对美罗培南、亚胺培南等抗菌药物的MIC；用多重PCR、测序等方法分析鲍曼不动杆菌中OXA-23-like、OXA-24-like和OXA-58-like及OXA-51-like 4个亚组的碳青霉烯酶分布特点。结果 收集145株临床非重复的鲍曼不动杆菌，采用多重PCR方法检测出blaOXA-like基因127株（87．6％），美罗培南非敏感126株菌中，blaOXA-23-like基因8株，blaoOXA-23-like与blaOXA-51-like基因同时存在的65株（51．6％）blaOXA-24-like基因1株、blaoOXA-58-like基因3株。以不同医院为单位，依据药敏谱型挑选4种酶型阳性代表株，分别进行全长引物测定，序列分析blaOXA-24-like确定为OXA-72；3株blaOXA-58-like确定为OXA-58；15株blaOXA-23-like确定为OXA-23；13株blaOXA-51-like测序结果12株为OXA-51等位基因OXA-66，1株为OXA-68。结论 研究结果表明OXAM6／OXA-51样碳青霉烯酶以最普遍存在的方式广泛分布于鲍曼不动杆菌中。     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的基因检测与临床意义

目的了解我院耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药特点、临床分布、基因类型、耐药机制,为临床治疗和控制医院内感染以及流行病学调查提供依据。方法用Microscan-Autoscan-4微生物分析系统和K-B法进行细菌鉴定及药敏试验。用2-巯基丙酸抑制试验检测金属酶。用针对碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行PCR扩增和确定基因型。对扩增的DNA测序并通过网上比对以确定其编码酶基因的类型。结果耐亚胺培南的9株鲍曼不动杆菌金属酶表型筛选均为阴性,IMP、VIM、OXA-24基因引物PER扩增也均为阴性;4株携带OXA-23基因,经测序和网上比对与OXA-23标准株完全相同。结论携带OXA-23基因是我院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类药物的主要因素。产OXA-23型酶比非产OXA-23型酶的菌株多重耐药性更严重,治疗更棘手。     

乌鲁木齐地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及同源性分析

目的 探讨乌鲁木齐地区临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶型.方法 收集42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法测定亚胺培南耐药菌对18种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因型包括OXA-23,OXA-24,OXA-58,IMP和VIM型.采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析同源性.结果 42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率最低(28.5%),左氧氟沙星、庆大霉素、头孢他啶耐药率均为53.6%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率为39.3%,其余抗菌药物耐药率均大于80.0%;RAPD分型发现42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌属于6个型,其中以A型(8株)、D型(20株)和F型(6株)3个型为主.42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌有33株携带 OXA-23组基因,未检测到金属酶基因.结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药现象非常严重,临床应根据药敏结果合理选用抗生素,克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式,OXA-23型是最主要的碳青霉烯酶基因型.     

碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

CarbAcineto NP快速检测耐碳青霉烯酶的鲍曼不动杆菌的方法学评价

目的快速检测产碳青霉烯酶的鲍曼不动杆菌的方法学评价。方法选择邢台市第三医院2015年1月至2016年1月在临床标本中连续收集的80株鲍曼不动杆菌,采用全自动细菌鉴定仪对鲍曼不动杆菌进行药敏试验,应用普通PCR方法对所有菌株进行OXA-23型碳青霉烯酶基因检测,同时应用CarbAcineto NP方法检测菌株的碳青霉烯酶。结果 80株鲍曼不动杆菌中,49株耐亚胺培南和美罗培南,其中47株菌检测出OXA-23基因,43株菌CarbAcineto NP为阳性;31株菌对亚胺培南和美罗培南敏感,其中29株菌OXA-23阴性,30株菌CarbAcineto NP为阴性。CarbAcineto NP方法的敏感性为87.8%,特异性为96.7%。结论与普通PCR方法比较,CarbAcineto NP方法的试剂成本较低,易于操作,时间短,能快速有效检测鲍曼不动杆菌的OXA-23型碳青霉烯酶。     

西安地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶及同源性研究

目的 调查西安地区耐亚胺堵南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究其同源性及分子耐药机制.方法 收集西安地区6所三级甲等医院1年间临床分离的非重复鲍曼不动杆菌株146株,采用K-B法进行药敏试验,E试验检测金属酶(MBL),PCR扩增OXA-23,-24,-58,-51 like型及IMP-1型和VIM-2型碳青霉烯酶基因,其阳性产物经测序分析,应用肠杆菌科基因组内重复序列(ERIC)-PCR对菌株进行DNA分型和同源性分析.结果 筛选出对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)非重复株1 5株,其中1株经E试验检测产金属酶,但扩增blaTMP-1,blaVIM-2均阴性,另外14株扩增blaOXA-66均阳性,11株blaUXA-23阳性,1株blaXA 58阳性;ERIC-PCR将15株IRAB分为A型和B型,其中部分菌株的亲缘关系很近,同源性达90%以上.结论 产OXA型碳青霉烯酶是西安地区该菌对亚胺培南耐药的主要原因.其中OXA-23型普遍存在,OXA-58型和OXA-66型基因在国内尚属新型碳青霉烯酶基因型;15株IRAB为2种克隆型,可能存在局部暴发流行.