MAP-2和巢蛋白在人胚胎舌肌组织发育过程中的表达

目的探讨微管相关蛋白2（MAP-2）和巢蛋白与人胚胎舌肌组织的发育关系。方法应用免疫组织化学PV法检测第2~4
三个月龄段,共16例人胚胎,舌肌组织内MAP-2和巢蛋白的表达规律。结果第2~4个月龄段,MAP-2和巢蛋白在人胚胎舌肌
组织内均呈阳性表达。第2 个月龄段未见明显MAP-2 阳性表达细胞,第3~4 个月MAP-2 在舌肌内阳性表达细胞数依次为
24.14±8.28、15.86±3.89,阳性表达强度依次为109.42±11.62、124.27±8.73。第2~4个月巢蛋白在舌肌组织内阳性细胞数量依次
为12.50±3.17、19.00±7.63、22.80±6.91,阳性细胞表达强度依次为为119.99±24.02、102.20±11.76、98.24±10.66。随着胎龄增大,
MAP-2在肌组织内阳性细胞表达数量呈先增高再降低趋势,阳性细胞表达强度呈逐渐增高趋势;巢蛋白在肌组织内阳性细胞表
达数量呈逐渐增高趋势,阳性细胞表达强度呈逐渐降低趋势。结论MAP-2和巢蛋白参与调节人胚胎舌肌组织的发育过程。
     

微管相关蛋白2和巢蛋白在人胚胎胃组织中的表达

摘要：目的探讨微管相关蛋白2 (MAP-2)和巢蛋白(Nestin) 与人胚胎胃组织的发育关系。方法应用免疫组织化学PV法检测第
2、3、4三个月龄段,人胚胎胃壁、贲门和幽门组织内MAP-2和Nestin的表达规律。结果第2、3、4三个月龄段,MAP-2和Nestin阳
性表达主要集中于人胚胎胃壁、贲门和幽门组织黏膜下神经丛和肌间神经丛,随胎龄的增大,MAP-2和Nestin蛋白在肌间神经
丛内阳性表达细胞数量和强度均呈增高趋势。而MAP-2和Nestin蛋白在胃壁、贲门和幽门组织的黏膜上皮和腺体处均呈阴性
表达。结论MAP-2和Nestin参与调节人胚胎胃组织的生长发育过程。
     

载脂蛋白D在两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达

目的: 通过对载脂蛋白D(ApoD)在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中表达的检测,探讨ApoD等脂代谢相关基因对神经髓鞘生成的调控机制.方法: 用激光共聚焦免疫荧光标记技术检测ApoD在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达情况.结果: 激光共聚焦显微镜检测显示在O-2A谱系来源的成熟2型星形胶质细胞和少突胶质细胞中ApoD标记为阳性,而在T1A谱系来源的成熟1型星形胶质细胞中则未检测到ApoD的表达,从而在蛋白质水平验证本室研究两型星形胶质细胞基因表达谱差异基因芯片结果中ApoD mRNA在T2A中高表达,而在T1A中低表达的现象.结论: ApoD等脂代谢相关基因可能在O-2A谱系发生和分化过程中起重要作用,O-2A谱系与脑内脂质代谢以及神经髓鞘发生内在机制密切相关.     

磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎组织表达的免疫细胞化学研究

目的 研究磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎各组织的表达及规律。方法 制备小鼠胚胎标本，进行石蜡包埋并切片，采用免疫细胞化学方法检测磷脂酶C-γ1的表达。结果 各种胚胎组织中软骨、骨骼肌、心肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑等均有不同程度的表达。结论 磷脂酶C-γ1相关的信号通路对于小鼠胚胎细胞（软骨、骨骼肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑神经元等）的发育可能具有重要的生物学意义。     

阶段性胚胎抗原-1，OCT-4，颗粒酶B在脂肪成体干细胞中的表达

目的：探索脂肪成体干细胞中是否表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB．方法：先将C57小鼠脂肪用I型胶原酶消化,然后采用直接贴壁法,培养获得的细胞．取第3代生长状态稳定、形态均一的细胞进行成脂、成骨诱导分化,同时观察所培养的第3代细胞表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB的情况．结果：通过该培养方法,可以获得稳定的细胞群体,并能成功进行成骨、成脂诱导分化;免疫荧光化学检测显示三种胚胎时期出现的特殊蛋白均有不同程度的表达．结论：脂肪来源的成体干细胞中表达胚胎时期的产物,这种特性可能与干细胞的多向分化特性有关系．     

血清结肠癌特异性抗原-2检测在结直肠癌随访和预后判断中的应用

目的：评估血清结肠癌特异性抗原-2（colon cancer-specific antigen-2,CCSA-2）检测在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）术后随访监测和预后判断中的价值。方法：收集49例CRC住院患者（含结肠癌14例、直肠癌35例）术前3 d、术后7 d的血液样本各3 ml,酶联免疫吸附法测定其中CCSA-2的含量。术后每3~6月检测血清CCSA-2含量1次,观察其含量变化与肿瘤复发转移之间的关系。结果：术后第7天CRC患者血清中CCSA-2的含量明显较术前降低（t=26.53,P<0.001）。肿瘤复发转移后其血清CCSA-2的含量再次升高,高于术后第7天水平（P<0.01）。发生了复发转移者的术前血清CCSA-2含量明显高于未发生复发转移者的术前含量（t=4.94,P<0.001）。结论：血清CCSA-2有望成为CRC患者术后随访的一个有用的监测指标,同时也有望成为判断CRC患者预后的一个血清标志物。     

主要组织相容性复合体-肽四聚体技术及其在定量检测抗原特异性T细胞中的应用

四聚体(tetramer)技术是近来发展的一种可直接检测抗原特异性T细胞(antigen specific Tcells,AST)的新方法,在病毒感染、肿瘤、自身免疫病研究及抗原肽免疫优势表位筛选中有着广阔的应用前景。文章简要介绍主要组织相容性复合体(MHC)-抗原肽与T细胞表面受体作用的分子基础、四聚体分子构建及由此衍生的四聚体方法技术类型,并就该技术应用于临床疾病的AST研究现状进行综述。     

乙型肝炎病毒preS 2蛋白在Hela细胞中的表达

[目的]构建乙型肝炎病毒含3’末端缺失的preS／S基因表达载体并转染细胞，观察所构建载体在体外培养的真核细胞中的表达．[方法]采用基因重组技术构建含有CMV启动子及preS／S基因（adr亚型）开放阅读框的preS／S基因表达载体pcDNA3．1-preS／St，并将其转染至Hela细胞，利用免疫细胞化学方法检测其表达情况．[结果]免疫细胞化学检测发现preS2蛋白可在Hela细胞中表达．     

肿瘤相关抗原17-1A在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的利用Pichia pastoris酵母表达系统表达糖基化的肿瘤相关抗原17-1A,为进一步设计肿瘤蛋白疫苗提供研究基础。方法通过RT-PCR从小鼠肾组织中扩增17-1A的cDNA,将其定向克隆到pPICZαA质粒上,获得重组质粒pPICZαA-17-1A,测序正确后,重组质粒电转化到Pichia pastoris酵母菌株GS115中,在甲醇诱导下,利用其AOX I基因的α信号肽,分泌表达17-1A抗原糖蛋白,并对获得的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果构建了pPICZαA-17-1A重组质粒,通过电转化将目的基因整合人酵母基因组中,重组毕赤酵母表达能够表达17-1A抗原并检测到抗原发生了糖基化。结论能够通过毕赤酵母表达系统稳定表达糖基化的肿瘤相关抗原17-1A。     

新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养

目的在体外培养条件下获取纯度较高的O-2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法根据星形胶质细胞、O-2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同，采用振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液，培养、分离纯化O-2A祖细胞。结果纯化的O-2A祖细胞胞体呈椭圆形，具有典型的双极突起；经免疫细胞化学染色鉴定，细胞的纯度达90％。在有血清的情况下，O-2A祖细胞定向分化为2型星形胶质细胞；在无血清的情况下，定向分化为少突胶质细胞。结论通过振荡法和差速贴壁法，结合1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O-2A祖细胞具有双分化潜能。     

巢蛋白和胰岛素在大鼠胰腺不同发育阶段的表达

目的：探讨巢蛋白(nestin)在胚胎后期、新生期、成年3阶段的mRNA、蛋白水平表达的变化。方法：应用RT-PCR、免疫组化的方法进行半定量、定位分析。结果：在胚胎后期、新生期、成年3阶段Nestin在mRNA、蛋白水平均有表达，Nestin阳性细胞主要分布在胰岛中．腺泡周围的外分泌组织中有少量分布。结论：Nestin随大鼠胰腺的生长发育，核酸、蛋白表达下调，胰岛内Nestin阳性细胞百分数表达也下调。     

化学致癌剂3''''-甲基-4-DAB影响巢蛋白Nestin在SD大鼠肝卵圆细胞中的表达

目的：采用免疫组化方法标记大鼠肝卵圆细胞中巢蛋白Nesin的表达，探讨肝卵圆细胞新的表面标记蛋白。方法：用化学致癌剂3’-甲基4-二甲基氨偶氮苯(3’-Methy-4-dimethylaminoazobenzen，3’-me-DAB)喂养SD大鼠4周，取大鼠肝脏，用免疫组化法标记神经前体细胞的特异性表面标记物巢蛋白Nestin在大鼠肝卵圆细胞中的表达。结果：汇管区靠近界板处卵圆细胞表达Nestin阳性，Nestin阳性细胞成簇状分布或呈双层排列成管状，主要集中在赫令氏管周围并见Nestin阳性细胞向肝小叶内迁移，散在分布于肝细胞索。结论：大鼠肝内存在Nestin表达阳性的卵圆细胞，Nestin可能是肝卵圆细胞新的标记蛋白。     

O-2A祖细胞移植对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的作用

目的 研究O-2A祖细胞移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后运动功能恢复的作用.方法 从新生1～2 d SD大鼠大脑皮质中分离纯化O-2A祖细胞.80只SD成年大鼠,随机分为4组:A组为正常组,与其他3组同期饲养;其他3组均行T9脊髓左半侧离断手术,B组损伤处植入吸附生理盐水的明胶海绵(损伤对照组);C组损伤处移植50%O-2A祖细胞和50%1型星形胶质细胞(T1A)混悬液(O-2A+T1A组);D组损伤处植入含有纯化O-2A祖细胞的细胞悬液(O-2A移植组).移植术后3、7、14、21、28 d分别以CBS及BBB方法 进行大鼠神经功能评定.结果 A组大鼠后肢CBS和BBB得分分别为100和21.O-2A祖细胞移植术后3、7、14、21、28 d,B、C、D组动物后肢神经功能均有不同程度的恢复,左后肢得分均显著低于右侧,差异均有高度统计学意义(均P<0.01),D组运动功能恢复最好.结论 O-2A祖细胞移植可促进大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复.     

大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率。方法采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度。体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达。结果克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞。结论成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础。     

腺苷、白介素-1及茶碱对哮喘患者外周血单核细胞A2腺苷受体mRNA表达的影响

目的通过研究腺苷、白介素(IL)-1、茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)表达A2a及A2b腺苷受体(A2aAR及A2bAR)mRNA的影响,探讨A2aAR及A2bAR在哮喘发病中的作用,为临床使用茶碱提供理论依据。方法11例正常人及哮喘患者PBMCs经Ficoll液分离,分对照组、腺苷组、腺苷+IL-1组及腺苷+茶碱4组,体外培养18小时,收集细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和图象分析半定量法检测A2aAR及A2bARmRNA表达。结果正常人及哮喘患者各组PBMCs表达A2aARmRNA无明显差异(P>0.05)。哮喘患者PBMCsA2bARmRNA表达较正常人增加(P<0.01);腺苷、IL-1促进哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA(P<0.05);茶碱对正常人及哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA均有抑制作用(P<0.01)。腺苷及IL-1对哮喘患者PBMCsA2bARmRNA表达的影响与血清TIgE水平呈正相关(P<0.05),与FEV1%呈负相关P<0.05)。结论哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA增加,腺苷及IL-1促进其表达,且与患者机体过敏状态及气道阻塞程度相关,茶碱能抑制A2bARmRNA表达;腺苷、IL-1及茶碱对PBMCs表达A2aARmRNA无明显影响。     

Th1/Th2细胞与实验性自身免疫性脑脊髓炎

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种免疫细胞介导的以中枢神经系统白质损坏为特征的自身免疫性疾病。发病机制及病情变化过程中,CD4+T细胞起着重要的作用,以分泌INF-γ和IL-2为主的Th1细胞能够促使EAE的发生或病情的加重,以分泌IL-4和IL-10为主的Th2细胞可以抑制或逆转EAE的病情。就近几年对Th1/Th2细胞与EAE关系的研究进行综述。     

P53siRNA对肺腺癌细胞A549中HMGN2表达的影响

目的 探讨P53基因调节人肺腺癌细胞A549中HMGN2蛋白表达情况.方法 采用小分子干扰RNA(P53-siRNA)真核细胞转染人肺腺癌细胞株A549作为实验组P53-si,转染无荧光RNA的A549细胞为空白对照组con-si,未转染任何载体的A549细胞为正常对照组con.Western blot检测HMGN2和P53表达的变化.结果转染P53-siRNA的实验组A549细胞株中HMGN2蛋白表达下调,空白对照组和正常对照组A549细胞中HMGN2的表达均无明显变化;相对于正常对照组,HMGN2的表达率分别为:实验组56％,空白对照组88％(P＜0.01).结论 P53基因能下调人肺腺癌细胞中HMGN2的活性,参与调控HMGN2蛋白的表达,从而为P53基因参与调节HMGN2在小鼠发育过程的机制研究提供实验基础.     

SULT2A1、Bcl-2蛋白在子宫肌瘤组织中的表达及意义

为探讨子宫肌瘤组织中硫酸基转移酶2A1(SULT2A1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达及意义。选取2017年1月至2018年9月保存的子宫肌瘤标本110例(子宫肌瘤组),同时选取正常子宫肌层组织70例(正常子宫肌层组),采用免疫组化染色法检测SULT2A1、Bcl-2蛋白表达。结果显示,子宫肌瘤组SULT2A1阳性表达率明显低于正常子宫肌层组(P＜0.05),Bcl-2蛋白阳性表达率为89.09%,明显高于正常子宫肌层组(P＜0.05);子宫肌瘤组分泌期Bcl-2蛋白阳性表达率明显高于增生期(P＜0.05);SULT2A1和Bcl-2蛋白表达无相关性(rs=-0.008,P＞0.05)。结果提示,SULT2A1和Bcl-2表达与子宫肌瘤发生发展有关。