左归丸粗提取物对骨髓干细胞转化肝细胞的影响

目的 观察左归丸及其拆方的粗提取物对骨髓干细胞转化肝细胞的影响,为进一步探索左归丸的有效成分奠定实验基础.方法 利用透过性支持物(聚酯TranswellR透明嵌套)建立骨髓干细胞-肝组织细胞共培养体系,采用水煮醇沉方法提取制备左归丸及其拆方粗提取物加入共培养体系.骨髓干细胞与肝细胞共培养7、14、21、28、35d时分别取透过性支持物中的骨髓干细胞爬片用PAS法检测糖原,免疫细胞化学方法(ICC法)检测肝细胞标志物(AFP、CK18、Alb).结果 左归丸及其拆方粗提取物浓度高于1.56 mg/ml时,影响骨髓干细胞的存活,而浓度等于1.56 mg/ml时,共培养条件下骨髓干细胞的糖原、AFP、Alb、CK18的表达量,平行对照各组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓干细胞对培养条件比较苛刻,一般的中药租提制剂不适于骨髓干细胞-肝细胞共培养体系的实验.     

骨髓形成肝细胞的基因表达谱分析

目的：观察小鼠骨髓形成肝细胞的基因表达谱的变化规律，研究骨髓形成肝细胞的分子机制。方法：采用交叉性别骨髓移植模型，雌性BABL／C小鼠接受9．0Gy 60^Co源γ射线照射后，经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞，6个月后处死动物，取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片，观察实验小鼠肝组织基因表达谱的变化。结果：实验小鼠在骨髓移植6个月后的肝组织的基因表达谱与正常雌性小鼠比较有显著不同，差异表达基因有865条，已知功能基因有447条，其中上调基因92条、下调基因355条。结论：交叉性别骨髓移植小鼠肝脏的基因表达谱变化规律为进一步研究骨髓形成肝细胞的分子机制奠定了实验基础。     

左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织Wnt信号通路的影响

目的：探讨左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织wnt信号通路的影响。方法：建立同种异性骨髓移植小鼠模型,随机分为补肾组和对照组,每组40只,分别给予左归丸汤剂和生理盐水灌胃,给药6个月后处死小鼠,取小鼠肝组织,采用基因芯片技术检测同种异性骨髓移植小鼠肝组织基因表达谱,采用WesternBlot检测β-catenin蛋白表达。结果：补肾组相对于对照组小鼠肝组织Wnt信号通路中上调表达的基因有Wntl、分泌型Frz相关蛋白（secreted frizzled—related sequence protein,sfrp）1、sfrp5,下调表达的基因有Gsk3b、Wnt10a、Rac1、Mapk9、Prkcc、Frat1、Nfatc4、Csnk2b、Ppard等。补肾组比对照组小鼠肝组织中β—catenin蛋白表达明显增强。结论：左归丸可通过激活Wnt信号通路经典途径,游离β-catenin蛋白积累并进入细胞核激活下游靶基因,这可能是“补肾生髓成肝”调控肝再生的重要分子机制之一。     

骨髓来源肝细胞的初步研究

目的 验证骨髓细胞是否可以转化为肝细胞。方法 通过放射致死剂量照射的BALB/C雌性小鼠接受周龄相配的同系雄性小鼠的全骨髓移植后，分别在移植后1，2，4周和2个月分批处死移植存活的小鼠。分别在游离的肝细胞和肝脏的石蜡切片上用荧光原位杂交法检测Y染色体阳性肝细胞。结果 在移植后2个月的小鼠肝脏游离细胞和石蜡切片上均发现有Y染色体阳性肝细胞，数量极少，但确实存在。结论 在接受放射致死剂量照射但没有导致严重的急性肝脏损伤情况下，骨髓细胞可以转化为成熟的肝细胞。     

大鼠移植骨髓细胞向肝细胞转化的实验研究

目的 探讨体内骨髓细胞向肝细胞转化的可行性。方法 将雌性SD大鼠随机分为3组，每组15只。①R BMT(全身照射 骨髓移植)；②2—AAF R BMT；③2—AAF PH(部分肝切) BMT。进行交叉性别骨髓细胞移植，雄性骨髓植入雄性受体，分别于第5、10、20天处死雌鼠。以雄性性别决定基因sry作为细胞标记，用原位杂交和FISH作为检测方法对骨髓细胞的肝细胞转化进行分析。结果 PCR移植效果初步分析可见，R BMT组11例中有10例PCR阳性；2AAF PH BMT组11例中有7例阳性，2AAF B BMT组10例中有6例阳性。sry原位杂交染色发现，第5天各组雌性受体肝索中均未见sry阳性的肝细胞。第10天R BMT组可见1例sry阳性的细胞位于肝细胞索,FISH染色可见这一细胞白蛋白mRNA阳性。第20天各组PCR阳性各例均可在肝索中检测到sry阳性的细胞。FISH染色可见白蛋白mRNA阳性。经统计学分析第20天各组sry阳性细胞数无明显差异。结论 在B BMT、2—AAF PH BMT和2—AAF R BMT模型中移植的骨髓细胞均可以植入肝脏，并存在于肝细胞索。植入肝索的骨髓细胞最早可见于移植后第10天，并发生转分化，表达白蛋白mRNA。不经过全身照射的2—AAF PH BMT组，移植的骨髓细胞也可以进入肝脏发生转分化，因此全身照射并不一定是移植骨髓细胞活化、植入和转化的必须条件。     

左归丸提取液对2.2.15细胞乙肝病毒标志物的影响

目的:研究左归丸提取液对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、表面抗原(HBsAg)的抑制作用。方法:应用2.2.15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒(HBV)实验模型,通过细胞毒性实验以确定对细胞无毒性作用的最高药物浓度,将此浓度药物直接加到细胞培养液中,分别取第4天、第8天的细胞培养上清液,用固相放射免疫方法测定其HBsAg、HBeAg含量。结果:浓度为25、12.5、6.25、3.125mg/ml的左归丸提取液对HBsAg、HBeAg有明显抑制作用;各浓度间存在量效关系;对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用。结论:左归丸提取液对2.2.15细胞HBV标志物有显著的抑制作用。     

左归丸对痴呆鼠抗氧化作用及尼氏体的影响

目的 探讨左归丸对痴呆大鼠抗氧化作用及尼氏体的影响.方法 将84只Wistar雄性大鼠随机分成6组:A组腹腔注射生理盐水再脑内海马注射生理盐水,B、C、D、E、F组以D-半乳糖腹腔注射合并B淀粉样蛋白1-40注射海马制备老年性痴呆(AD)动物模型,C、D、E、F组同时分别灌胃抗脑衰胶囊、哈伯因和左归丸[5.4和2.7g/(kg·d)].采用生化法检测各组大鼠脑匀浆过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO),尼氏染色观察各组大鼠海马神经元尼氏体及电镜观察各组超微结构变化.结果 灌服后左归丸组均能明显提高AD大鼠脑组织CAT活性、抑制MAO活性(P＜0.05);左归丸治疗组尼氏体溶解明显减少;F组神经纤维结构完好,尼氏体丰富,突触结构尚可.结论 左归丸通过提高抗氧化能力和改善神经元细胞损害对AD大鼠有一定的防治作用.     

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的 观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响.方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞.实验分为正常对照组,模型组,左归组.Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化.结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01).与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡.     

左归丸对去卵巢大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察左归丸对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响,探讨左归丸对OP的防治作用机制。方法SPF级4.5月龄SD雌性大鼠,分为三组:正常组39只;假手术组39只;200只采取双侧背部卵巢切除术进行绝经后OP造模。造模21 d后,将去卵巢大鼠随机分为5组:模型组、尼尔雌醇组、左归丸高剂量组、左归丸中剂量组、左归丸低剂量组,每组40只。然后开始灌胃给药,左归丸高、中、低剂量组分别给予ig6.4,3.2,1.6 g/kg剂量的左归丸混悬液灌胃;尼尔雌醇组灌服尼尔雌醇混悬液灌胃;正常组、假手术组和模型组均灌服蒸馏水。于连续给药60、120、180 d后分3批取材,取大鼠左后肢股骨近端1/3部分,采用RT-PCR方法检测骨组织中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平。结果去卵巢后,与正常组比较,模型组大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平明显降低(P<0.01);和模型组比较,给药60d、120、180 d的左归丸各剂量组,股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达水平的下调可能是绝经后骨质疏松(PMOP)发生的重要机制之一,左归丸能够上调骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达,从而有效防治OP。     

左归丸含药血清对阿尔茨海默病细胞模型雌激素受体表达的影响

目的 左归丸含药血清对阿尔茨海默病(AD)细胞模型对雌激素受体表达的影响.方法 体外培养PC12细胞,以Aβ1～42诱导细胞产生蛋白聚集制作AD细胞模型.MTT法检测不同状态下的细胞的存活情况.Western印迹检测细胞Caspase3、ER1表达情况.结果 与模型组对比,3个干预组均可改善AD细胞模型细胞的损伤;左归...     

Application of interphase cytogenetics to monitor bone marrow transplants

Chromosomal in situ hybridization (ISH) has extended the scope of cytogenetic analysis to nondividing cells by the use of chromosome-specific probes detected by nonisotopic techniques. This provides a rapid and sensitive method for identifying chromosomes in interphase cells, and is useful in gauging engraftment following bone marrow transplantation, particularly when the number of cells obtained is minimal. We have performed ISH using a Y-heterochromatin-specific probe to monitor patients with malignant hematological disease who have received a sex-mismatched transplant. The results have been compared with those obtained from concurrently performed standard cytogenetic analysis. Host cells were detected by interphase cytogenetics in all patients posttransplant, at times varying from 28-1,825 days, whereas routine analysis detected host cells in only 4 patients, 3 of whom were found to be in relapse. The significance of the persistence of host cells is unknown, but it does not appear to indicate impending relapse. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

Persistence of multilineage host haemopoiesis following allogeneic bone marrow transplantation

Summary. The survival of host cells following high-dose cytotoxic therapy and allogeneic marrow transplantation has been established previously, but the identity of these cells has not been elucidated in detail. Four patients who received sex-mismatched marrow have been studied for up to 12 months post-transplant using a simultaneous immuno-phenotyping/fluorescence in situ hybridization technique. The results demonstrate residual host T cells (CD3⁺), B cells (CD22+) and myeloid cells (CDllc+ and CD13+), and additionally cells of progenitor cell phenotype (CD34⁺). The long-term persistence of host haemopoiesis may have major relevance to the post-transplant complications of marrow rejection, graft-versus-host disease, and malignant relapse.     

In situ hybridization for the detection of cytomegalovirus in blood or bone marrow leucocytes after allogeneic bone marrow transplantation

Summary. We report a study of CMV detection by a non-radioactive in situ hybridization (ISH) technique using a biotinylated CMV-DNA probe. The method was applied to blood and bone marrow cells and its results were compared with those of other currently used techniques. First, we analysed peripheral leucocytes on blood donors, and, after comparison with PCR, we obtained 75% sensitivity and 87% specificity rates. We then studied four BMT recipients during the first 105 d post-transplant. A positive signal was detected as a predominantly nuclear staining. The detection of an ISH-positive signal occurred at least 8 d before CMV isolation from viral culture. The number of positive cells was variable according to the patients'clinical evolution, showing a dramatic increase of labelled cells in viraemic patients and then a decrease until complete disappearance of labelled cells when an efficient anti-viral treatment was initiated. This study suggests that the detection of CMV-DNA by ISH performed on peripheral leucocytes is a valuable tool for the early diagnosis of CMV infection and could lead to the initiation of optimal ganciclovir treatment.     

自体骨髓单个核细胞移植对急性肝损伤小鼠组织成瘤性的实验研究

目的观察急性肝损伤小鼠接受自体骨髓单个核细胞(BMMNC)移植后能否导致肿瘤的发生,从而对自体骨髓干细胞(BMSC)移植的安全性进行初步探讨。方法采用CCl4/2-AAF制备小鼠急性肝损伤模型,随机分为6组,A组:BMMNC移植对照组;B组:腹部皮下注射BMMNC0.3ml;C组:经尾静脉注射BMMNC0.3ml;D组:经尾静脉注射BMMNC0.9ml;E组:模型检测组;F组:供体组。BMMNC采用PKH26标记。病理观察小鼠接受BMMNC移植后皮下及肝脏内有无肿瘤形成。结果 C组及D组肝脏内未见肿瘤形成;B组皮下形成一肿物,病理证实为脂肪及淋巴细胞的炎性坏死所形成的包裹。结论理论上自体BMSC移植虽有形成肿瘤的可能性,但在本实验中未见肿瘤形成,自体BMSC移植能否诱发肿瘤还有待进一步探讨。     

自体骨髓干细胞移植治疗肝衰竭的初步观察

目的观察自体骨髓干细胞移植治疗肝衰竭的初步疗效。方法 12例经常规内科综合治疗无明显效果的肝衰竭患者。在无菌条件下采集骨髓100～200ml,通过密度梯度离心分离纯化出骨髓干细胞,通过介入的方法经肝动脉注射入肝内,静脉输注肝细胞生长素1～2周。观察移植后1、2、3和6月患者症状、体征、肝脏生化和凝血酶原时间等的变化。结果 9例肝衰竭患者的症状、体征改善,白蛋白升高、胆红素降低,肝脏功能改善,所有患者未见明显副作用。结论自体骨髓干细胞移植治疗肝衰竭安全有效。     

兔骨髓间充质干细胞自体移植治疗扩张型心肌病的实验研究

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)自体移植于扩张型心肌病后的增殖分化情况和对心功能的保护作用。方法 日本大耳白兔随机分为4组:(1)扩张型心肌病(DCM)细胞移植组(n=12);(2)DCM对照组(n=12);(3)DCM假手术组(n=12);(4)正常对照组(n=10)。分离培养DCM细胞移植组MSCs后,前3组动物用盐酸阿霉素建立兔DCM模型,第4组注射等量生理盐水。模型建立成功后第3周,将5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的MSCs自体移植到细胞移植组心肌内,对照组注射培养基,假手术组只开胸,不做注射。4周后采用超声心动图和血流动力学参数评价各组动物的心脏结构和功能,并取移植区心肌组织行免疫荧光染色以观察移植细胞的增殖分化情况。另选部分心肌组织做HE染色查看心肌组织形态学改变。结果 与正常对照组相比,DCM各组心功能明显受损。细胞移植4周后,可以在移植组心肌内找到BrdU标记的阳性细胞,且一部分表现为心肌特异性肌钙蛋白T染色阳性,一部分Ⅷ因子相关抗原染色阳性并参与形成新生血管,其他组中没有发现。且细胞移植组心功能较对照组和假手术组有明显改善。组织学检查示前3组均有心肌细胞变性坏死。结论 MSCs自体移植到DCM后有可能增殖分化为心肌样细胞和血管内皮样细胞并改善心功能。     

骨髓干细胞治疗慢性肝衰竭的研究进展

肝移植是治疗慢性肝衰竭(chronic liver failure,CLF)的有效手段,但因各种原因,其临床应用逐渐受到限制,探索新的治疗手段迫在眉睫.1996年Alison等诱导人骨髓干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)分化肝细胞获得成功,推动了BMSCs治疗CLF研究的快速发展.     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对急性肝功能衰竭的治疗作用。方法大鼠90%肝脏切除制备急性肝功能衰竭模型,实验组大鼠肝内移植2×106个BMSCs,对照组仅注射生理盐水。观察大鼠的生存情况,RT-PCR检测BMSCs在肝脏的植入,血清检测肝功能确认BMSCs移植对肝脏修复的作用。结果移植BM-SCs的实验组大鼠存活80%,对照组大鼠仅存活20%。RT-PCR显示,BMSCs移植后定植于大鼠肝脏内。肝功能检测显示,实验组大鼠的血清丙氨酸氨基转移酶水平、天冬氨酸氨基转移酶水平显著降低,血清白蛋白水平显著升高。结论 BMSCs移植可以显著提高急性功能衰竭大鼠的生存率,促进其肝功能的恢复,对急性肝功能衰竭的治疗具有积极作用。