骨髓间质干细胞降低大鼠移植物抗宿主反应的实验研究

目的 探讨MSCs对GVHD的作用及其机制.方法 建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSCs,观察受鼠的生存时间,同时利用RT-PCR法研究Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,用ELISA法检测移植后体内IL-4细胞因子的浓度.结果 GVHD组的平均生存时间为(17.30±2.33)天,实验组的平均生存时间为(24.10±2.36)天 , 与单独移植HSCs相比,MSCs与HSCs共移植明显延长的受鼠的生存时间.同时,GVHD组Th1/Th 2 细胞比值为1.29±0.06,IL-4因子的浓度平均为(14.84±2.59) pg/mL,实验组Th1/Th 2细胞比值为(0.77±0.14),IL-4因子的浓度平均为(40.09±13.99) pg/mL.MSCs与 HSCs 共移植降低了体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,提高了体内IL-4细胞因子的浓度.结论 MSCs与HSCs共移植能有效抑制HSCs移植后致死性GVHD的发生,延长生存时间,同时MSCs 可能通过作用于体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,促进体内IL-4细胞因子的分泌从而间接发挥了抑制GVHD的作用.     

异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病临床疗效分析

目的总结162例异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）[包括：同胞allo-HSCT125例．非血缘关系allo-HSCT30例和非清髓异基因外周血造血干细胞移植（allo-PBSCT）7例1治疗恶性血液病疗效和生存状况。方法慢性粒细胞白血病（CML）患者62例，急性髓系白血病（AML）患者58例，急性淋巴细胞白血病（ALL）患者28例．骨髓增生异常综合征（MDS）6例，多发性骨髓瘤（MM）3例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）3例，慢性粒单细胞性白血病（CMML）1例．霍奇金淋巴瘤（HD）1例。经预处理，进行人类白细胞抗原（HLA）相合的同胞异基因骨髓移植（allo-BMT）27例．allo-PBSCT98例和非血缘关系allo-BMT4例，非血缘关系aUo-PBSCT26例．HLA相合的同胞非清髓allo-PBSCT7例。非血缘关系allo-HSCT患者采用长程加强的移植物抗宿主病（GVHD）的预防方案（将环孢菌素A提前至预处理开始时使用，同时加用霉酚酸酯）。结果移植后中位随访38（2-259）个月。allo-HSCT患者长期DFS为54、9％（89／162），CML至今DFS为61-3％（38／62），AML至今DFS为56，9％（33／58），ALL至今DFS为39-3％（11／28）．MDS至今DFS为83-3％（5／6），3例NHL存活1例，1例CMML存活．3例MM均死亡．霍奇金淋巴瘤（HD）1例死亡。移植后100d内移植相关死亡率（TRM）19．8％（32／162），死亡原因分别为急性GVHD、播散性感染、复发和植入失败；移植后100d至2年内TRM为24、7％（40／162）．死亡原因分别为慢性GVHD、CMV感染和疾病复发，1例于移植后1413d死亡．其余移植超过2年均存活，死亡原因是慢性GVHD合并感染，最长生存已11年。结论allo-HSCT可使相当部分白血病患者获得长期无病存活．治疗MDS效果良好．治疗MM效果很差。该组患者移植后100d内死亡原因主要是急性GVHD：移植后100d至2年内死亡的主要原因是慢性GVHD和CMV感染、疾病复发；故除正确处理移植相关并发症?     

Distribution of mesenchymal stem cells in the area of tissue inflammation after transplantation of the cell material via different routes

In experiments on male Wistar—Kyoto rats we studied the distribution of mesenchymal stem cells in intact body and in the presence of a focus of acute tissue inflammation. In healthy animals mesenchymal stem cells were transplanted intravenously. In the second case we used various routes of transplantation of mesenchymal stem cells: intravenous, into tissue adjacent to the inflammation focus, and into intact lobe of the damaged organ (prostate gland). Three weeks after transplantation, mesenchymal stem cells labeled with a fluorescent dye were detected in the bone marrow and intestine of intact animals. In case of inflammation focus, mesenchymal stem cells after transplantation migrated into the bone marrow, intestine, and prostate gland. After injection into the adjacent zone, these cells formed a compact agglomerate at the site of injection. After transplantation into the intact lobe of the prostate gland the cells migrated towards the inflammation focus. Thus, transplantation of mesenchymal stem cells into the venous blood is less traumatic and led to more uniform distribution of cells in the damaged tissue. __________ Translated from Kletochnye Tehnologii v Biologii i Medicine, No. 1, pp. 34–37, January, 2007     

移植途径对人脐带间充质干细胞治疗小鼠糖尿病效果的影响

目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对小鼠糖尿病的治疗效果。方法:利用增强绿色荧光蛋白和萤光素酶报告系统(EGFP/Luc)标记hUCMSCs,通过胰腺包膜下途径或尾静脉途径将携带萤光标记的hUCMSCs移植到链脲霉素诱导的糖尿病模型小鼠体内。移植后利用萤光素酶报告基因追踪hUCMSCs在活体内的迁移和定位;组织学检测小鼠胰岛形态变化;功能学实验动态检测小鼠血糖、血清胰岛素水平和糖耐量。结果:活体生物发光成像显示胰腺包膜下途径移植的hUCMSCs主要定位于胰腺,尾静脉途径移植的hUCMSCs主要定位于肺,仅少量细胞向胰腺部位迁移。组织学检测发现,胰腺包膜下途径移植的小鼠胰岛边界清晰,无炎症细胞浸润;而尾静脉途径移植的小鼠胰腺组织有少量炎症细胞浸润和纤维化形成。功能学检测发现胰腺包膜下移植较尾静脉移植降低小鼠血糖作用显著,血糖可降至接近正常水平,且血清胰岛素水平明显升高,葡萄糖的调节能力显著增强。结论:移植途径对hUCMSCs治疗糖尿病的效果有影响。胰腺包膜下移植在降低小鼠血糖、升高胰岛素水平及改善胰岛功能方面均优于尾静脉移植。     

间充质干细胞移植中的旁分泌作用

间充质干细胞是细胞移植和组织工程中理想的种子细胞,然而在移植中发挥治疗作用的具体机制仍然不明确。间充质干细胞可以分泌多种细胞因子和生长因子,促进周围细胞的存活,发挥旁分泌作用。间充质干细胞可以通过调节免疫,促进周围细胞的增殖,抑制凋亡以及促血管生成作用发挥其在细胞移植治疗中的作用。     

骨髓间充质干细胞复合异体骨修复松质骨缺损

背景：有研究表明骨髓间充质干细胞及异体骨可促进骨缺损的修复,但骨髓间充质干细胞复合异体骨对于松质骨缺损的修复效果至今少有报道。 目的：观察骨髓间充质干细胞复合异体骨修复兔松质骨缺损效果。 方法：在新西兰大白兔双侧股骨外侧髁造成0.6 cm×1.2 cm 的松质骨缺损,一侧设为模型组,骨缺损处植入复合骨髓间充质干细胞的异体骨,另一侧设为对照组,单纯植入异体骨。 结果与结论：植入后4,8,12周,大体观察、X射线检查和苏木精-伊红染色观察结果显示,模型组在新骨成长方面,缺损区修复方面均优于对照组。植入后12周,模型组骨缺损区可见大量骨小梁形成及成熟的板层骨组织,骨缺损基本修复。对照组骨缺损区仅可见大量编织骨形成,骨缺损尚未得到有效修复。模型组Lane-Sandhu法X射线结合组织学观察评分高于对照组(P < 0.05)。生物力学检测结果显示,植入后12周,模型组股骨髁最大压力载荷、载荷/应变比值均高于对照组(P < 0.05),最大应变位移较对照组低(P < 0.05)。结果证实,骨髓间充质干细胞复合异体骨可有效修复兔股骨髁松质骨缺损,且修复效果明显优于单纯异体骨移植。     

人脐带源间充质干细胞静脉移植治疗大鼠肝纤维化

背景：近来国内外研究证明,来自其他组织的干细胞能够归巢到肝脏,并可能参与肝组织的再生,这为发展干细胞治疗肝脏疾病提供了新的希望。 目的：探究人脐带源间充质干细胞的分离、培养方法,观察脐带间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化模型的修复作用,为脐带间充质干细胞的临床应用提供可靠的理论依据。 方法：自然贴壁法分离、纯化人脐带间充质干细胞并进行体外培养和扩增,用皮下多点注射CCl₄制备肝纤维化大鼠模型。将22只模型大鼠随机分为模型损伤组(n=11)和细胞移植组(n=11)。细胞移植组在模型制备成功后的第1,2,3周经尾静脉给予1×10⁶脐带间充质干细胞治疗,4周后将大鼠处死,收集各组大鼠血液检测肝功能;摘取肝脏行苏木精-伊红染色,观察病理变化;免疫组化法观察库普弗细胞的数量及分布;免疫组化法观察治疗组脐带间充质干细胞的定位情况。 结果与结论：脐带间充质干细胞经尾静脉移植入肝硬化大鼠后,大鼠的肝功能均明显改善,与对照组比较,差异有显著性意义(P < 0.05);肝组织苏木精-伊红染色提示,肝纤维化程度明显改善;免疫组化法观察库普弗细胞的数量提示,库普弗细胞数量明显减少;免疫组化方法利用抗BrdU抗体在治疗组大鼠肝脏观察到BrdU标记的脐带间充质干细胞。说明脐带间充质干细胞移植可以改善大鼠外周血液的血生化特性和肝的组织学结构。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

The immunomodulatory activity of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells in vitro

Bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-MSC) are currently being investigated in preclinical and clinical settings because of their self-renewal and multipotent differentiative capacity or their immunosuppressive function. However, BM may be detrimental because of the highly invasive donation procedure and BM-MSC decline with age. Therefore, MSC derived from other sources have been considered as an alternative. However, there is only limited knowledge on their immunomodulatory properties. Human umbilical cord blood (UCB) cells are good substitutes for BM-MSC because of the immaturity of newborn cells. In this study, we successfully isolated MSC from UCB. The morphological phenotypes, cell cycle status, surface markers and differentiation potential of these clonally expanded cells are consistent with BM-MSC. Furthermore, UCB-MSC expanded in vitro retain low immunogenicity and an immunomodulatory effect. Flow cytometry analysis showed that UCB-MSC did not express CD40, CD40 ligand, CD80, CD86 and major histocompatibility complex class II molecules. We have demonstrated that UCB-MSC are incapable of inducing allogeneic peripheral blood mononuclear cell (PBMC) proliferation and have a dose-dependent inhibition of PBMC immune responses in mixed lymphocyte reactions (MLR) and phytohaemagglutinin activation assays, even after interferon-gamma treatment. Additionally, we have found that UCB-MSC can suppress the function of mature dendritic cells. Using transwell systems, we have demonstrated an inhibition mechanism that depends on both cell contact and soluble factors. Based on the findings we conclude that banked UCB could serve as a potential alternative source of MSC for allogeneic application in the future.     

不同保存介质对脐带间充质干细胞活性的影响

背景：脐带间充质干细胞的临床应用面临移植前保存的问题,而临床保存介质对移植前细胞活性的影响直接关乎移植后疗效,目前却缺乏对临床介质保存效果的系统性研究。 目的：评价临床常用保存介质对脐带间充质干细胞活性的影响。 方法：在4 ℃与室温(25 ℃)条件下,将脐带间充质干细胞在临床常用保存液(0.9%氯化钠注射液,5%葡萄糖注射液和1%人血白蛋白溶液)中保存2,4,6 h,观察上述保存介质对脐带间充质干细胞活性、凋亡/死亡率、多向分化能力及DNA损伤的影响。 结果与结论：无论在4 ℃还是室温条件下,细胞在临床常用保存介质中的活性均在短期内呈时间依赖性下降。此外,不同保存介质引起细胞死亡而非凋亡,且死亡率呈时间依赖性增加;经不同介质保存后,细胞出现DNA损伤,但其增殖与多向分化能力未受明显影响,提示细胞核DNA损伤为细胞活性下降的关键因素。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

糖尿病与正常大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的比较

背景：目前国内外在干细胞移植治疗心肌梗死的研究中,大多采用正常或者年轻的骨髓间充质干细胞作为移植细胞来源。 目的：比较糖尿病和正常大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的疗效差别。 方法：无菌条件下获取正常大鼠及糖尿病大鼠的骨髓间充质干细胞,建立大鼠心肌梗死模型并随机分为3组,分别于心肌梗死病灶区注射100 μL含有105-106个F2代正常大鼠或糖尿病大鼠来源骨髓间充质干细胞的细胞混悬液,空白对照组注射100 μL含体积分数20%胎牛血清的DMEM。移植后1个月行苏木精-伊红染色检测各组梗死区域心肌组织形态的变化;通过免疫组化方法检测Bcl-2的表达。 结果与结论：通过对细胞形态观察及流式细胞术鉴定,大鼠股骨骨髓贴壁培养可获取纯度较高的骨髓间充质干细胞,绘制细胞生长曲线结果显示正常大鼠骨髓间充质干细胞较糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞生长快。移植后1个月,正常大鼠干细胞移植组梗死区域心肌组织形态较糖尿病大鼠干细胞移植组及空白对照组明显改善,梗死区域心肌组织Bcl-2的表达也高于其他2组。证实正常大鼠来源骨髓间充质干细胞较糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞生长明显加快,且糖尿病使骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的疗效降低。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。     

间充质干细胞线粒体转移治疗修复组织损伤的作用

文题释义： 间充质干细胞：为长梭形、贴壁生长的多能干细胞,具有多向分化潜能和自我更新能力,可调节免疫功能、促进血管再生、改善微环境与分泌功能及促进再生修复等,除来源于骨髓外,也可从羊膜、胎盘、牙髓、脐带、脂肪、骨骼肌等多种组织中分离获得,间充质干细胞制剂已开始应用于脑卒中、心肌梗死、急性肾功能衰竭等临床治疗。 线粒体转移：正常细胞的线粒体可通过多种途径转移到线粒体形态和功能障碍的细胞,恢复细胞有氧呼吸及正常线粒体DNA功能等,改善受损组织细胞的能量供应,具有疾病治疗作用。 背景：间充质干细胞因其众多优点被应用于多种疾病治疗,线粒体转移是间充质干细胞疗法的重要机制之一。 目的：综述间充质干细胞通过线粒体转移在各类组织损伤中发挥的作用。 方法：由第一作者以“stem cells,mitochondrial transfer,cell communication,rescue and repair,tissue injury”为英文关键词,以“干细胞,线粒体转移,细胞通讯,修复,组织损伤”为中文关键词,检索2008至2019年期间收录在PubMed、中国知网、万方数据库中的文献,纳入间充质干细胞的线粒体转移作用和机制及治疗组织损伤相关的文献,排除重复与相关性弱的文献,对64篇文献进行总结分析。 结果与结论：间充质干细胞被应用于如脑卒中、心肌梗死、急性肾功能衰竭等多种疾病治疗,线粒体转移作为干细胞治疗的一种新机制被人们广泛关注,已被认为是组织损伤的潜在疗法;线粒体转移已发现由隧道管形成、间隙连接、微囊泡、细胞融合和分离等不同模式介导,但线粒体转移在组织损伤中的具体机制还未完全阐明,其在组织损伤修复中的具体作用也有待进一步了解。 ORCID: 0000-0003-0918-6182(王张玲) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

同种异体移植骨髓间质干细胞治疗大鼠心梗后心室重构

目的： 观察骨髓间质干细胞（MSCs）移植对大鼠心梗后心室重构和心功能的影响，比较成年大鼠MSCs与乳鼠MSCs移植疗效，初步探讨同种异体移植的可行性。方法: 分别取大鼠和乳鼠的骨髓，体外分离、扩增培养MSCs，Brdu标记。在结扎冠脉后1-2 h 分别将大鼠MSCs和乳鼠MSCs分点注射到异体大鼠心脏梗死边缘区，6周后，采用超声心动图和解剖直测法获得大鼠心功能、心室重构和病理学资料。结果: 细胞移植组左室舒张末期内径和收缩末期内径短于、室壁厚于对照组，重量指数和心室腔都明显小于对照组。组织病理表现细胞移植组心梗区心肌数目多于、血管密度大于对照组，细胞外基质胶原的形成和血管周围胶原沉积均明显少于对照组，心梗区可见Brdu阳性细胞。但大鼠MSCs移植组和乳鼠MSCs移植组间无明显差异。结论: 同种异体骨髓间质干细胞可以在心梗区定植，减少胶原形成，促进心肌和血管生成，从而延缓心梗后心室重构，提高左室收缩和舒张功能。成年鼠干细胞移植与乳鼠干细胞移植具有相似的效果。     

中药干预对创伤性应激障碍大鼠海马区移植间充质干细胞的保护作用

背景：骨髓间充质干细胞移植修复损伤海马具有较高的研究潜力,但是目前移植后干细胞的成活率较低这一问题尚未得到有效解决。 目的：综述中药干预对创伤性应激障碍大鼠海马区移植间充质干细胞的保护作用。 方法：应用计算机检索2000年1月至2012年1月PubMed数据库相关文章,检索词为“mesenchymal stem cells,transplantation,survival,post-traumatic stress disorder (PTSD),hippocampus”,并限定文章语言种类为English,同时检索2000年1月至2012年1月CNKI数据库相关文章,检索词为“间充质干细胞,移植,存活率,创伤后应激障碍,海马”,并限定文章语言种类为中文;共检索文献109篇。最终纳入符合标准的文献23篇。 结果与结论：创伤后应激障碍作为一种由生物、心理、社会等多种因素作用的复杂疾病,治疗是亟待解决的问题,中医药在此领域具有独特的优势。创伤后应激障碍所造成的海马损伤可以通过骨髓间充质干细胞移植进行修复,运用调肝方药逍遥散干预,预期可有效提高移植干细胞的存活率。     

Engraftment potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells after in utero transplantation in rats

BACKGROUND: Human placental mesenchymal stem cells (hPMCs) are thought tobe multipotent, but their fate after in utero transplantationis not known. METHODS: hPMCs isolated from term placenta were assessed for their phenotypemarkers, mutilineage capacity, and immunomodulatory properties.Their engraftment potential was analyzed in a pregnant rat modelafter in utero transplantation at embryonic day 17. Immunohistochemistry,tracing of labeled cells, fluorescence in situ hybridizationand real-time PCR were used to assess post-transplant chimerism. RESULTS: In vitro, lineage-negative, CD34-negative hPMCs differentiatedinto osteocytes, adipocytes, hepatocytes and endothelial cellswith tube formation, and actively suppressed the rat lymphocyteproliferative response to allogeneic lymphocyte stimulation(P < 0.0001). After in utero transplantation into pregnantrats, a low level of engraftment was achieved in various fetaltissues. Engraftment occurred in more than 60% of the fetalrats. Cells persisted for at least 12 weeks after delivery andevidence was obtained to suggest differentiation into specificlineages, including hepatocytes and hematopoietic cells. However,a greater number of hPMCs migrated to the placenta than to thefetus, thus limiting the degree of cell engraftment in fetalorgans. CONCLUSIONS: We conclude that hPMCs are mutipotent cells that can be engraftedlong-term in immunocompetent rats after in utero transplantation.     

不同月龄人脐带间充质干细胞移植梗死心肌的血运重建

背景：干细胞移植有利于心肌梗死后的心肌血运重建及改善心功能,HLA-G分子在免疫耐受状态的形成及维持中具有重要作用。 目的：观察不同月龄有HLA-G表达差异的人脐带间充质干细胞移植后对急性心肌梗死兔血运重建的影响。 方法：健康新西兰大白兔30只,随机数字表法分为小月龄细胞移植组、足月龄细胞移植组及对照组。建立兔心肌梗死模型后2周,将小月龄人脐带间充质干细胞和足月人脐带间充质干细胞分别标记BrdU,多点注射心肌梗死的交界区和中心区,对照组注射无血清培养基。 结果与结论：移植后4周,小月龄和足月龄细胞移植组在心肌梗死区均发现有BrdU示踪细胞,且两组梗死区心肌纤维化程度、心肌梗死面积均少于对照组(P < 0.01),两移植组间差异也有显著性意义(P < 0.05)。Ⅷ因子染色见小月龄细胞移植组毛细血管密度高于足月龄细胞移植组(P < 0.01),且两移植组与对照组比较差异也有显著性意义(P < 0.05)。提示HLA-G表达量较高的小月龄脐带间充质干细胞能更好促进梗死区血管新生,改善血运重建,有潜力成为心肌细胞移植的更理想来源。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Bone marrow-derived mesenchymal stem cells decrease acute graft-versus-host disease after allogeneic hematopoietic stem cells transplantation

Graft-versus-host disease is a major complication of allogeneic hematopoietic stem cells transplantation, leading to serious morbidity and mortality. Mesenchymal stem cells(MSC)from bone marrow cause immunoregulation in vitro and in vivo. They also have the potential to protect from lethal GVHD after both autologous and allogeneic Hematopoietic Stem Cells Transplantation (HSCT). In this study, we investigated the mechanisms responsible for GVHD in the allo-HSCT co-transplantation with MSC condition. The model of acute GVHD in Rats was established using allogeneic HSC with donor-derived T cells transplantation, with or without additional donor-derived MSC co-transplantation. The degrees of GVHD were compared, the differentiation of CD4⁺, CD8⁺, Th1/Th2 and CD4⁺CD25⁺ T cells in vivo were assessed by flow cytometry and RT-PCR analyses. We found that MSC inhibited lethal GVHD after allo-HSCT. The value of CD8⁺ and CD4⁺ T cells and the ratio of Th1/Th2 T cell subsets decreased, at the same time the proportion of CD4⁺CD25⁺ T cells increased both in spleen lymphocytes and thymocytes in vivo after allo-HSCT with MSC co-transplantation compared with conventional allo-HSCT. Our results strongly suggested that BM-derived MSC has the function of preventing lethal GVHD after allo-HSCT by means of homeostasis of T subsets in vivo.     

脐带间充质干细胞在不同培养体系条件下的生物学特性

背景：体外培养的脐带间充质干细胞在不同培养体系下生长状态差异显著,因此选取一种更适合的培养基相当必要。 目的：对比观察人脐带间充质干细胞在3种培养基中的生长增殖情况,并检测细胞免疫表型以及间充质干细胞的诱导分化能力。 方法：在无菌条件下用贴块法收获人脐带间充质干细胞,用T75培养瓶培养传代后,取第3代脐带间充质干细胞分别种入到含体积分数为5%胎牛血清的DMEM/F12培养基、含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和Mesen PRO RSTM培养基中,培养第1,3,5,7天进行细胞计数,绘制细胞生长曲线。采用流式细胞仪分析第3代脐带间充质干细胞免疫表型,并检测其成骨及成脂肪诱导分化能力。 结果与结论：培养出的第3代人脐带间充质干细胞高表达CD44、CD73、CD90、CD105,不表达CD29、CD31、CD34、HLA-DR。经成脂诱导后,油红O染色可见胞浆中有大量红色小脂滴;成骨诱导后,茜素红染色后镜下可见成骨样细胞团,说明脐带间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能。在倒置显微镜下观察可见含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中的细胞集落密集,形态均匀,而其他2种培养基中的细胞集落密集程度和形态都不如前者好。在培养传代细胞时,可优先选择含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

皮下移植骨髓间充质干细胞修复大鼠糖尿病足溃疡

背景：糖尿病足溃疡严重威胁患者的健康甚至生命,目前缺乏良好的治疗手段,而干细胞疗法在组织再生和创面修复方面展现出独特的优势及潜力。 目的：评价骨髓间充质干细胞经创缘皮下移植对大鼠糖尿病足溃疡的治疗效果。 方法：全骨髓贴壁法体外培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞至第3代,经DAPI标记。36只雄性Wistar大鼠随机分成骨髓间充质干细胞移植组、正常足溃疡对照组、糖尿病足溃疡对照组,大鼠糖尿病经腹腔注射链脲佐菌素诱导,所有大鼠在双后足背上切取一3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成足溃疡模型。于骨髓间充质干细胞移植后第2,5,8,11天评估各组大鼠创面愈合情况及相关蛋白和基因水平的表达情况。 结果与结论：正常足溃疡对照组的创面愈合率大于骨髓间充质干细胞移植组和糖尿病足溃疡对照组,但后2组之间无差异。冰冻切片发现骨髓间充质干细胞移植组荧光强度和区域在第5天达到高峰。苏木精-伊红染色显示第5天正常足溃疡对照组肉芽组织最厚,骨髓间充质干细胞移植组比糖尿病足溃疡对照组厚。免疫组化发现骨髓间充质干细胞移植组CD31平均小血管数目在第8天和第11天比糖尿病足溃疡对照组多(P < 0.05);骨髓间充质干细胞移植组平均Ki-67阳性细胞数在各时间点均比糖尿病足溃疡对照组多(P < 0.01)。ELISA和RT-PCR结果均显示,正常足溃疡对照组血管内皮细胞生长因子表达水平较骨髓间充质干细胞移植组、糖尿病足溃疡对照组高。第5天和第8天骨髓间充质干细胞移植组表达水平显著高于糖尿病足溃疡对照组(P < 0.01)。说明骨髓间充质干细胞经创缘皮下移植明显促进大鼠糖尿病足溃疡的愈合,此疗效可能是通过促进创伤中血管内皮细胞生长因子的表达实现的。     

骨髓间充质干细胞对成年大鼠视网膜节细胞再生的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对受损成年大鼠视网膜节细胞(RGCs)轴突再生的影响。方法：切断大鼠视神经,缝接自体坐骨神经(AG)。动物分对照组、AG MSCs组、AG MSCs tPNS(三七总皂苷)组。各组动物存活3、4周,用粒蓝逆行标记再生的RGCs,荧光镜下观察视网膜平铺片中再生RGCs的数量变化。免疫组化检测MSCs在玻璃体内的分化。结果：动物存活3、4周,再生的RGCs数目实验组与对照组有显著性差异。AG MSC组和AG MSCs tPNS组,存活的细胞表达Vimentin、NF和GFAP,Laminin无表达。结论：玻璃体植入MSCs可促进受损伤的视网膜节细胞轴突再生。