Sox9基因促软骨形成作用机制研究进展

Sox9基因作为一个重要转录因子,在软骨形成中起着极其重要的调控作用,相关研究对软骨缺损修复等组织再生工程发展具有十分重要的意义。软骨形成过程中软骨细胞增殖、分化调控过程复杂,参与的细胞因子较多,目前比较明确的是Sox9结合于软骨细胞特异增强子Col2α1,直接调控其表达。L-Sox5、Sox6与Sox9共同形成蛋白复合物协同作用于Col2α1增强子序列,增强其转录,并通过结合于PTHrP基因的启动子区上调PTHrP基因启动子活性,刺激软骨细胞早期阶段增殖和发育。Sox9与Wnt/β-catenin和TGF-β/Smad信号转导通路相互作用,调控软骨细胞分化。最新研究显示,Sox9基因在软骨形成过程中还与其他物理因子和生物因子如低氧、电磁场等相互影响、相互作用。     

高泳动家族性别决定基因9(Sox9)启动子转染软骨肉瘤细胞的实验研究

[目的]研究观察Sox9启动子在软骨肉瘤细胞中对软骨相关基因的调控与影响。[方法]将合成Sox9启动子表达质粒转染SW1535软骨肉瘤细胞,观察其在人体软骨肉瘤细胞中对Sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因Col2a1蛋白及mRNA表达的影响。[结果]转染Sox9启动子后人体软骨肉瘤细胞中Sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因Col2a1的蛋白表达及mRNA表达均较对照细胞强。[结论]外源性Sox9启动子可以稳定转染SW1535人体软骨肉瘤细胞,转染后可以增加Sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因Col2a1蛋白及mRNA的表达。     

MicroRNA-30a通过Sox9调控骨髓间充质干细胞软骨分化的研究

[目的]筛选在骨髓间充质干细胞(MSC)软骨分化过程中调控Sox9表达的microRNA (miRNA),探讨软骨形成过程的基因干预靶点和手段。[方法]经过鉴定的MSC行软骨分化,监测分化过程中候选miRNAs的表达趋势,研究差异表达miRNA对MSC软骨分化的影响及其与Sox9的相互作用关系。[结果]在筛选的4条具有调控Sox9能力的miRNA中,miRNA-30a和miRNA-195在MSC软骨分化过程中呈递增趋势。其中,miRNA-30a mimic转染MSC后细胞存活率无明显变化,在软骨分化21 d后,转染组甲苯胺蓝染色较对照组减弱。荧光素酶报告基因结果显示野生型Sox9 3'UTR报告质粒荧光释放被miRNA-30a mimic转染显著抑制,而突变体无此效果,同时,Western blot结果显示转染miRNA-30a mimic的MSC中,Sox9表达量较对照组降低。[结论] miRNA-30a在MSC软骨分化过程中表达逐渐上升并通过Sox9完成其负调节作用。此研究表明miRNA-30a作为调控MSC软骨分化的潜在靶点,对于软骨再生和软骨发育相关疾病的应用和防治具有重要意义。     

骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因 mRNA的调节作用

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因 mRNA表达的调控作用.结果在BMP-2浓度为100 μg/L(0.149±0.006,P<0.05)和1 000 μg/L(0.163±0.006,P<0.01)时,其对椎间盘细胞中Sox9基因 mRNA可起到显著的正向调控作用;在此浓度下,它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用.结论 BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达.     

名词解释

一、标准手术与扩大手术?1.标准手术为伴有第一站淋巴结廓清的胰切除术。2.扩大手术为伴有第一站及第二站以上淋巴结廓清的胰切除术,或包括第一站淋巴结廓清和胰腺周围脏器(或组织)的广泛胰切除术。胰腺周围脏器(或组织)是指受癌直接浸润波及的肾、肾上腺、结肠、血管及神经等。二、治愈切除与非治愈切除?1.肉眼上:将切除术分成4个阶段。(1)治愈切除:a.绝对治愈切除,b.相对治愈切     

Sox9基因真核表达载体的构建及其诱导大鼠骨髓基质细胞定向分化为骨骺干细胞

[目的] 从永生化骨骺干细胞中克隆Sox9基因并构建真核表达载体,并探讨Sox9诱导骨髓基质细胞向骨骺干细胞分化的可能性.[方法]以RT-PCR方法获得Sox9全长,插入pGEM-T Easy克隆载体中,测序正确后与pEGFP-IRES2表达载体酶切后连接,复合质粒以脂质体法转染骨髓基质细胞,观察转染效率,Sox9和 FGFR-3的表达.流式细胞术鉴定细胞表型,MTT法检测细胞增殖活性.[结果]成功的完成了Sox9的扩增和表达载体的构建 ,重组载体转染骨髓基质细胞后能检测到Sox9、FGFR-3的表达,增殖活性与骨骺干细胞无异.[结论]成功构建了Sox9真核表达载体,其能诱导骨髓基质细胞分化为骨骺干细胞并具有其特性.     

选择性腹部动脉造影中胰腺动脉显影的分析

目的 分析胰腺动脉在选择性腹部动脉造影中显影的特点及规律,为在临床动脉灌注治疗重症急性胰腺炎等胰腺疾病时动脉的选择提供依据。方法 将我院1981年至1999年8年间203例经腹部动脉造影的资料进行分类、整理,统计出胰腺主要供血动脉的显影率。结果 119例选择性腹腔干造影中,胰十二指肠上动脉（SPD.a）显影的阳性率为32%,胰十二指肠前、后动脉弓显影率为16%,胰背动脉显影率为27.7%,仅有1例胰十二指肠下动脉(IPD.a)显影;55例选择性肠系膜上动脉（SM.a）造影中,胰腺动脉中只有IPD.a显影,显影率为40%;18例腹腔干-SM.a联合造影中,SPD.a、胰十二指肠前、后动脉弓、胰痛动脉、IPD.a的显影率分别为55.6%、27.8%、61.1%、27.8%。结论 根据本组资料,采用动脉联合造影胰腺动脉的显影率比单一动脉造影高。     

骨骺生长板PTHrp-Ihh信号轴及相关因子调节机制研究进展

甲状旁腺素相关肽(PTHrp)-印第安刺猬蛋白(Ihh)信号轴是骨骺生长板中调节软骨和成骨细胞增殖、分化、肥大和矿化的重要负反馈轴.围绕该信号轴有多种生长因子如Sox9、BMP、TGF-β等,参与调控软骨及成骨细胞生长.新近研究表明,PTHrp通过Sox9阻止软骨前体细胞向肥大软骨细胞转化,通过抑制BMP-6阻止软骨细胞成熟,通过抑制BMP-4阻止软骨细胞凋亡;通过下调Ihh、BMP-6表达,TGF-β抑制软骨细胞分化;通过激活FGFR-3,可下调PTHrp、Ihh表达,抑制软骨细胞增殖;Ihh除具有促进软骨细胞增殖的作用外,还促进软骨膜上成骨细胞的分化,从而加速成骨.彻底弄清骨骺生长板中PTHrp-Ihh信号轴及相关因子的调节机制,对于治疗一些遗传性疾病、修复软骨及骨缺损有着重要的临床意义.该文围绕PTHrp-Ihh信号轴及相关因子对软骨细胞调控机制研究进展作一综述.     

Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。     

捆绑式胰肠吻合在胰腺手术中的应用

本科自 1 997年下半年以来 ,应用捆绑式胰肠吻合新方法 ,用于 1 2例胰腺手术患者中 ,无胰瘘发生 ,取得了满意的效果 ,现报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料本组男性 7例 ,女性 5例。年龄 2 8～ 77岁 ,平均年龄 4 9.3岁。1 .2　疾病情况胰头癌 6例 ,壶腹癌 2例 ,胰头囊腺瘤 1例 ,十二指肠乳头区胰腺异位 1例 ,胰头体部断裂伤 2例 ,其中 9例有阻塞性黄疸 ,血总胆红素 6 1～ 5 33u-mol/L。1 .3　手术情况A.择期手术 1 0例 ,急诊手术 2例。胰头壶腹肿瘤 9例和十二指肠乳头区胰腺异位、胰头部断裂伤各 1例 ,共 1 1例 ,均行胰十二指肠切除 (用 …