煤尘抽提物诱发BALB/3T3 A31—1—13细胞系形态学转化的研究

本文用BALB/3T3 A31—1—13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系。但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,如细胞生长迅速、接触抑制消失和停泊不依赖性生长等。本文结果看来支持煤矿工胃癌高发的原因的煤尘假说。     

癌-睾丸抗原SSX-3的HLA-A2/A3限制性CTL广谱表位的预测

目的:预测基于癌-睾丸抗原SSX-3的HLA-A2/A3限制性CTL广谱表位.方法: 采用MULTIPRED在线预测系统分别针对HLA-A2超型和HLA-A3超型对SSX-3序列进行CTL表位预测,其中对两种超型分值均较高的表位被初步认定为广谱表位;然后,运用NetCTL 1.2在线预测系统对初步认定的广谱表位进行蛋白酶体裂解和TAP转运效率预测进一步筛选.结果: 共预测出9个SSX-3抗原的HLA-A2/A3限制性广谱表位.结论: MULTIPRED与NetCTL 1.2在线预测系统相结合可以高效的预测广谱CTL表位;本报道为SSX-3的广谱CTL表位的实验研究提供了重要的理论依据.     

CK2α通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移

背景与目的 肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,而侵袭和转移是导致肿瘤死亡的主要原因之一,蛋白激酶CK2是一种高度保守信使非依赖性丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其在各种肿瘤中高表达.本研究旨在探讨下调CK2α基因表达对肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响以及可能的机制.方法 构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用Transwell和Boyden小室实验检测干扰CK2α表达前后A549细胞的侵袭及迁移的能力.Western blot检测PI3K/Akt信号通路和上皮-间充质转化(mesenchymal-to-epithelial transition,EMT)相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,干扰CK2α表达后肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移能力明显下降,p-PTEN、Akt、p-Akt473、p-Akt308、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3p蛋白明显下调,PTEN蛋白表达水平显著上调.上皮-间充质转化的相关蛋白E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而Vi-mentin、p-catenin、Snail蛋白表达水平显著下调,与侵袭转移相关蛋白的MMP2、MMP9表达水平显著下调.结论 CK2α可能通过PI3K/Akt/GSK-3p/Snail信号通路来调控上皮-间充质转化参与肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移.     

苦瓜蛋白MAP30的HLA-A2/A3限制性CTL表位预测

目的:预测苦瓜蛋白MAP30的HLA - A2/A3限制性CTL表位.方法:应用lasergene 7.0和NetCTL-1.2 Server对MAP30进行HLA - A2 /A3限制性CTL表位预测.结果:MAP30的二级结构含有8个α-螺旋和9个β-折叠股;柔韧性良好氨基酸区域为19-40、99-146、166-273;亲水性指数较高区域为22-45、97-114、117-148、180-198、224-257、265-275;抗原性指数较高区域为19-28、63-71、98-114、118-123、224-246、248-260、262-274;有30个可能CTL表位,综合分析后获得2个HLA - A2和5个HLA - A3限制性CTL表位.结论:MAP30具有潜在的7个HLA-A2/A3限制性CTL表位.     

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

大肠癌组织A3AR蛋白表达及A3AR mRNA基因扩增临床意义的探讨

目的:检测大肠癌组织中A3AR蛋白表达和A3AR mRNA基因扩增,并探讨其与临床病理特征的关系.方法:分别用免疫组化和实时荧光定量PCR方法检测31例大肠癌组织和10例癌旁正常组织中A3AR蛋白表达及其A3AR mRNA扩增.结果:大肠癌及癌旁正常组织中A3AR的阳性率分别为61.29%(19/31)和10.00%(1/10).差异有统计学意义,P<0.05.大肠癌及癌旁正常组织中A3AR mRNA扩增分别是0.0348±0.0195和0.0214±0.0145,两组差异有统计学意义,P<0.05.两组的表达均与大肠癌的临床分期和淋巴结转移密切相关.结论:大肠癌组织A3AR在蛋白和基因水平均升高,与临床分期和淋巴结转移相关,提示可能参与了大肠癌的侵袭和转移.     

MEX3A在肿瘤中的研究进展

MEX3蛋白是RNA结合蛋白中的一类，参与人的多种生理和病理过程。随着分子生物学研究的进展和人们对肿瘤认识的深入，越来越多的证据表明MEX3A在多种肿瘤的发病和发展中起着重要的作用。MEX3A可能成为很多肿瘤的分子标志物和治疗目标,为肿瘤的诊断和治疗提供了新思路和方向。本文综述了MEX3A的结构、功能特点及其在多种肿瘤发生发展中的研究进展。     

PI-3K/Akt抑制剂LY294002对卵巢癌细胞A2780/Taxol多药耐药性的逆转作用

背景与目的:磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)可抑制细胞凋亡,对PI-3K抑制剂的研究可以更好地了解PI-3K的促癌机制,为多种癌症如卵巢癌、乳腺癌等的基因治疗提供线索。本研究目的在于探讨PI-3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对卵巢癌耐紫杉醇细胞株A2780/Taxol多药耐药的逆转作用。方法:用LY294002处理A2780/Taxol细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对紫杉醇的药物敏感性,RT-PCR检测MDR1mRNA的表达,Western blot方法分析LY294002作用前后磷酸化Akt及P-gp蛋白的表达。结果:10和50μmol/L LY294002干预A2780/Taxol细胞24h后,A2780/Taxol细胞凋亡率分别为(8.84±1.65)%和(20.78±2.47)%,显著高于未干预细胞的凋亡率(1.25±0.78)%(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),相对逆转效率最高可达(78.08±0.37)%;MDR-1mRNA、磷酸化Akt及P-gp蛋白均明显降低。结论:PI-3K/Akt信号通路的激活与卵巢癌细胞多药耐药的产生有关,PI-3K/Akt抑制剂LY294002可逆转卵巢癌细胞A2780/Taxol的多药耐药。     

MAG E-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗诱导消化道肿瘤患者CTL的研究

目的：研究肿瘤患者树突状细胞经MAGE－3／CEA(HLA-A2/A24 肽疫苗冲击后诱导特异性CTL的杀伤活性。方法：选择MAGE－3－HLA－A2／A24＋或CEA－HLA－A24肿瘤患者，收集PBMNC中的贴壁细胞在含有rhGM-CSF、rhIL-4的1640中培养诱导DC细胞，第7日加入HLA－A2－MAGE－3，HLA－A24－MAGE－3、HLA－A24－CEA肽冲击。以肽冲击后的DC与未经纯化的T细胞混合培养诱导的CTL作为效应细胞，Mel526,803,Raji,K562作为靶细胞，以LDH法检测特异性CTL的杀伤力。结果：未纯化的T细胞及肽冲击后的DC与该T细胞混合培养后的细胞表型变化表明CD3、CD4、CD25、CD16／CD56均无显著性差异，表达的CD8、CD86、CD69、CD45RO／CD8、HLA－DR有显著性差异。T－IL－2细胞与T－DC－P细胞对Raji和K562细胞株的杀伤活性无显著性差异。T－IL－2细胞与T－DC－P细胞对Mel256和803细胞株的杀伤活性有显著性差异。结论：肽疫苗可以诱导MAGE、CEA特异性的CTL应答。DC为基础的疫苗是肿瘤免疫治疗的重要的新方法，因其简便、快速的特点，具有良好的前景。     

食管癌高表达抗原HLA-A2/A3 限制性细胞毒性T 淋巴细胞表位预测

 目的 预测食管癌普遍高表达蛋白COX-2和MAGE-4的HLA-A2/A3限制性CTL表位。方法运用生物信息学的方法,SYFPEITHI初步预测,结合三维构效定量关系和蛋白酶体酶切位点分析。结果 对SYFPEITHI预测〉20的九肽用MHCPred和NetChop3.0作进一步分析,并与已报道抗原肽进行比对,初步筛选出了42个潜在的CTL表位。结论 这42个九肽均未见文献报道,进一步鉴定将为CTL表位疫苗的研究提供更多的线索。其中,MAGE-422-30、202-210、286-294及COX-2479-4874个九肽具有与HLA-A2和HLA-A3超型潜在的交叉免疫活性,将为研制简约的高效广谱食管癌疫苗提供候选肽。     

Panx1调控ATP/IP3通路促进顺铂诱导A549细胞的凋亡

目的 观察顺铂诱导肺腺癌细胞凋亡过程中Panx1对ATP/IP3信号通路的调控及作用机制.方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,以甘珀酸(CBX)为药物干扰工具.将人肺腺癌A549细胞分为:空白组(Control组)、甘珀酸组(CBX组)、顺铂组(DDP组)、甘珀酸+顺铂组(CBX+DDP组).MTT法和Annexi...     

PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究

目的 探讨PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选用PI3K/MTOR双重阻断剂NVP-BEZ235体外处理肾癌A498细胞,浓度分别为0、100、250、500 nmol/L.48 h后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肾癌A498细胞中AKT和MTOR蛋白磷酸化情况;MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot法检测细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达变化.结果 肾癌A498细胞中p-AKT、MTOR、p-MTOR、E-Cadherin、PTEN的表达及细胞增殖率、迁移率、穿膜细胞数量各自在不同NVP-BEZ235浓度下比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01).与0 nmol/L组比较,100、250、500 nmol/L的NVP-BEZ235处理肾癌A498细胞后,细胞中磷酸化蛋白p-AKT和p-MTOR的表达均下调,细胞增殖率下降,细胞迁移率下降,穿膜细胞数量减少,细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 通过阻断PI3K/AKT/MTOR信号通路可以抑制肾癌A498细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与上调细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达有关.     

重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究

目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响.方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响.结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Transwell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成.结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法.     

纳米粒子介导E1A基因体外转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3

目的探讨纳米粒子介导E1A基因转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3的可行性和效率,并检测转染细胞对X线的敏感性和X线诱导转染细胞凋亡。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小。用制备的包裹DNA纳米粒子转染人甲状腺未分化癌细胞HTC/3,并以阳离子脂质体为对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PER)方法检测转染细胞(HTC/3-E1A)的E1A基因mRNA表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HTC/3-E1A细胞、对照细胞的体外生长率和不同剂量X射线对HTC/3-E1A细胞的生长抑制率。HTC/3-E1A细胞经一定剂量X线(2 Gy)照射后,用流式细胞仪进行细胞周期分析,DNA电泳观察细胞凋亡。结果制备的纳米粒子直径为150-280 nm,包埋率为0.78%,体外释放约为18 d。在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数多于脂质体组(P<0.05)。RT-PCR结果表明,纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因mRNA表达。HTC/3-E1A细胞群体生长缓慢,倍增时间延长(是亲本细胞的1.44倍)。HTC/3-E1A细胞对X线敏感性较转染空载体细胞(HTC/3-Vect)和HTC/3细胞分别提高约2.9倍和2.8倍。流式细胞仪分析显示,HTC/3-E1A细胞亚G0/G1期比例显著高于HTC/3-Vect和HTC/3细胞(P均<0.01),S期比例显著低于HTC/3-Vect细胞和HTC/3细胞(P均<0.01)。DNA电泳显示,HTC/3-E1A细胞出现典型的凋亡梯度变化,而HTC/3-Vect和HTC/3细胞无此变化。结论纳米粒子可携带外源基因进行基因转染并获得表达,转E1A基因HTC/3细胞对X线敏感性明显提高,且X线诱导了转E1A基因HTC/3细胞凋亡。     

肿瘤相关抗原CT45的HLA-A2/A3限制性CTL表位的预测

目的:预测肿瘤相关抗原CT45的HLA-A2/A3限制性CTL表位,为CTL表位肽的合成和活性筛选提供依据。方法:基于新近发现的CT45抗原的氨基酸序列,用NetCTL 1.2 Server人工神经网络法远程预测系统进行HLA-A2/A3限制性CTL表位预测打分,挑选出分值较高的作为候选表位。结果:共预测出了5个潜在的HLA-A2限制性CTL表位九肽,15个潜在的HLA-A3限制性CTL表位九肽,所有这些表位均为首次报道。结论:NetCTL 1.2 Server人工神经网络法能高效的预测CTL表位肽,基于新近发现的CT45抗原,我们通过该系统成功预测出了5个潜在的HLA-A2限制性CTL表位,15个潜在的HLA-A3限制性CTL表位,可以对其进行进一步的研究。     

CYP3A4、CYP3A5在肺腺癌中表达及其与预后的相关性

目的 探讨CYP3A4、CYP3A5在肺腺癌组织中的表达水平及与预后的相关性.方法 收集南京医科大学附属肿瘤医院胸外科87例肺腺癌病理组织及其对应的临床资料,病理标本制作组织芯片,通过免疫组化法明确组织芯片中C YP3 A4、CYP3A5蛋白的表达情况,结合临床病理特征和随访资料进行统计分析.结果 肺腺癌组织芯片的免疫组化结果显示,CYP3A4在肺腺癌组织中显著高表达,而其在癌旁正常组织中则显著低表达(P =0.012);肺腺癌中CYP3A4的表达水平与肺腺癌TMN分期(P=0.013)和肿瘤分化程度(P =0.044)相关.与之相反,CYP3A5在肺腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织(P ＜0.001);肺腺癌中CYP3A5的表达与肺腺癌组织分化程度(P =0.013)显著相关.CYP3A4高表达患者总生存期和无瘤生存期较CYP3 A4低表达患者显著缩短(P＜0.05),CYP3A5低表达患者总体生存期和无瘤生存期较CYP3A5高表达患者显著缩短(P＜0.05);联合分析显示,CYP3A4高表达合并CYP3A5低表达的患者预后较其他患者差(P＜0.05),COX多因素分析显示,CYP3A4高表达合并CYP3A5低表达为肺腺癌预后不良的独立危险因素.结论 CYP3A4高表达合并CYP3A5低表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素;CYP3A4高表达合并CYP3A5低表达可作为预测肺腺癌预后的一个新靶标.     

Thyroid Hormone Controls Breast Cancer Cell Movement via Integrin αV/β3/SRC/FAK/PI3-Kinases

Thyroid hormones (TH) play a fundamental role in diverse processes, including cellular movement. Cell migration requires the integration of events that induce changes in cell structure towards the direction of migration. These actions are driven by actin remodeling and stabilized by the development of adhesion sites to extracellular matrix via transmembrane receptors linked to the actin cytoskeleton. Focal adhesion kinase (FAK) is a non-receptor tyrosine kinase that promotes cell migration and invasion through the control of focal adhesion turnover. In this work, we demonstrate that the thyroid hormone triiodothyronine (T3) regulates actin remodeling and cell movement in breast cancer T-47D cells through the recruitment of FAK. T3 controls FAK phosphorylation and translocation at sites where focal adhesion complexes are assembled. This process is triggered via rapid signaling to integrin αV/β3, Src, phosphatidylinositol 3-OH kinase (PI3K), and FAK. In addition, we established a cellular model with different concentration of T3 levels: normal, absence, and excess in T-47D breast cancer cells. We found that the expression of Src, FAK, and PI3K remained at normal levels in the excess of T3 model, while it was significantly reduced in the absence model. In conclusion, these results suggest a novel role for T3 as an important modulator of cell migration, providing a starting point for the development of new therapeutic strategies for breast cancer treatment.