TBLR1-RARα融合基因对K562细胞向红系分化的影响

目的:探讨融合基因TBLR1-RARα的表达对于白血病细胞系K562细胞向红系分化的作用及其可能的机制。方法:应用Tet-Off系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控TBLR1-RARα的条件性表达。将TBLR1-RARα融合基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight-Puro连接,感染K562细胞并获得稳定克隆,Western blot证实TBLR1-RARα融合蛋白的表达情况。应用实时定量荧光PCR检测全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRA)处理的K562细胞红系分化的表面标志CD71以及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平;流式细胞术(flow cytometry)分析细胞表面CD71和CD235a的表达情况,联苯胺染色观察血红蛋白的生成情况。结果:实时定量PCR显示,ATRA能够使这些细胞的红系分化相关的CD71及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平上调;流式分析结果同样表明,ATRA促使红系分化早期标志CD71细胞所占比例增加。ATRA处理后,联苯胺染色证实这些细胞的胞浆出现蓝染,表明ATRA能够诱导表达TBLR1-RARα的K562细胞产生血红蛋白。结论:TBLR1-RARα融合基因表达,有利于ATRA诱导K562细胞向红系分化。     

人类ERMAP-siRNA对Ara-C诱导K562细胞向红细胞系分化过程的影响

为探讨人类ERMAP基因在红细胞分化发育过程中的作用,本研究设计ERMAP—dsDNA,制备ERMAP—shRNA表达质粒,并建立稳定表达ERMAP—shRNA的K562细胞系（即ERMAP—shRNA／K562细胞系）,观察Ara-C诱导ERMAP—shRNA／K562细胞向红细胞系分化过程中,细胞形态、联苯胺染色细胞阳性率和细胞表面标记等的变化,同时以FQ—PCR检测K562细胞人类ERMAP基因表达量的变化。结果发现：经Ara-C诱导72小时,ERMAP—shRNA／K562细胞与对照组比较,体积较大,胞浆量较少,着色大部分呈深蓝色或蓝紫色,部分细胞仍可见1—2个核仁;联苯胺染色阳性率由1．17％增加至2．04％（P〈0．05）,但仍低于Ara—C诱导K562组（P〈0．05）;CD36^-／CD235a^＋细胞比例从8．83％增至11．28％,CD36^＋／CD235a^＋细胞比例从1．23％增至2．64％,CD36^＋／CD235a^-细胞比例从0．59％增至1．47％,均明显低于Ara—C诱导K562细胞组;与此同时,ERMAP—shRNA／K562细胞ERMAP基因的表达量从诱导前的2．52×10^-3缓慢增加至诱导72小时后的4．53×10^-3,明显低于K562细胞组。结论：ER—MAP—shRNA可抑制Ara—C诱导K562细胞向红系分化的过程,这进一步提示人类ERMAP基因与红细胞分化发育过程有关。     

肽核酸阻断PYR复合体与DNA位点结合对γ-珠蛋白基因表达的影响

目的:探讨肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)阻断PYR复合体(polypyrimidine complex)与DNA序列结合对γ-珠蛋白基因表达的影响。方法:设计并合成PYR-PNA、β-PNA和RS-PNA(随机序列PNA),以阳离子脂质体lipofectamine 2000为载体,将PNA转染到K562细胞中。用RT-PCR和Western blot技术分别在转录水平和蛋白翻译水平检测K562细胞在转染24、48和72 h后γ-珠蛋白基因的表达情况。结果:PYR-PNA组在转染24、48和72 h后γ-珠蛋白基因mRNA和蛋白表达水平均显著高于RS-PNA组和空白对照组(P0.05),其中以转染48 h后的表达上调最为明显,分别为空白对照组的2.0和2.5倍。结论:PYR-PNA可显著上调K562细胞中γ-珠蛋白基因的表达;本研究为β-地中海贫血基因治疗提供了新的研究思路。     

白头翁皂苷A对K562细胞红系诱导分化作用的研究

目的:探讨白头翁皂苷A对K562细胞向红系诱导分化的作用。方法:应用不同浓度的白头翁皂苷A作用于K562细胞后,采用联苯胺染色阳性细胞计数、细胞内血红蛋白测定及流式细胞术检测细胞膜表面CD71及GPA分化抗原表达等方法评价白头翁皂苷A对K562细胞的诱导分化作用。结果:不同浓度的白头翁皂苷A均可提高K562细胞内血红蛋白的含量;上调K562细胞膜表面CD71及GPA分化抗原的表达。其中以4μg/ml的白头翁皂苷A的作用最为显著。结论:白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。     

CHIP基因稳定转染人慢性髓系白血病K562细胞诱发有丝分裂异常

本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP（carboxyl terminus of Hsc70／Hsp70—interacting protein）的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型，以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响。采用脂质体介导的方法，经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U—box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆。对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖，流式细胞术检测细胞周期，Western blot法检测相关蛋白表达，瑞氏一姬姆萨染色进行细胞形态学观测。结果表明，过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响，细胞周期中G2／M期细胞比率增加，CHIP对BCR—ABL激酶的稳定性没有影响，但却明显导致细胞形态异常，表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多，出现异常有丝分裂相等，提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用。结论：野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常。     

人参皂苷Re对K562细胞向红系分化的作用

背景:既往研究表明,人参皂苷既能促进正常血细胞生成,又能抑制白血病细胞的增殖,人参皂苷Re是人参皂苷的一类主要有效成分,有多种活性,但是对白血病细胞的作用及机制尚不清楚.目的:观察人参皂苷Re对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)分化的影响.方法:取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度为7×108 L-1.空白对照组予以RPMI1640培养基常规培养;人参皂苷Re组予以含人参皂苷Re的RPMI1640培养基培养,终浓度分别为30,60,90,120,150 μmol/L.Wright's染色、联苯胺染色、血红蛋白测定检测K562细胞向红系细胞分化的特征,流式细胞术测定细胞表面标志物表达.结果与结论:人参皂苷Re 90 μmol/L可以诱导K562细胞向早期红系细胞分化,表现为:①K562细胞形态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,胞浆丰富,核浆比例降低.②人参皂苷Re在体外对K562细胞有诱导血红蛋白生成的作用.③细胞膜表面CD13阳性率增加.     

人参多糖注射液体外诱导人白血病细胞株K562增殖抑制及分化

背景:既往研究表明,人参多糖既能促进正常血细胞生成,又能抑制白血病细胞的增殖,但这种双向调控的机制尚不清楚.目的:体外观察人参多糖注射液对人白血病细胞株 K562 增殖抑制及诱导分化的影响.方法:K562 细胞由重庆医科大学临床检验系提供,人参多糖注射液为山西普德药业有限公司生产.取对数生长期的 K562细胞,调整浓度为 7×108 L-1.对照组予以常规培养;人参多糖组分别加入 25,50,100,200,400,600,800 mg/L 的人参多糖注射液.MTT 比色法检测人参多糖注射液对 K562 细胞增殖情况的影响;血红蛋白测定及联苯胺、Wright's 染色检测 K562 细胞向红系细胞分化的特征;流式细胞仪测定细胞凋亡情况.结果与结论:人参多糖在体外对 K562 细胞的增殖有明显抑制作用,并能诱导 K562 细胞向红系细胞分化,表现为 K562 细胞的增殖受到抑制.K562 细胞形态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,胞浆丰富,核浆比例降低;人参多糖在体外对K562 细胞有诱导血红蛋白生成的作用,在 100-800 mg/L 范围内,呈浓度依赖性,且均在作用 48 h 时抑制率达高峰;细胞凋亡率增加.提示人参多糖注射液能抑制 K562 细胞增殖,诱导其凋亡,并使 K562 细胞向红系细胞方向分化.     

人红白血病K562细胞的红系终末分化研究

人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系，但在体外 种诱导剂诱导向红素终末分化，出现红系表征：停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核，因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文就K562细胞红系分化的机制和研究进展作一综述。     

WAVE1基因在K562/A02白血病细胞多药耐药中的作用

目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）基因在K562／A02白血病细胞多药耐药机制中的作用。方法 将pEFBOS—WAVE1真核表达质粒转染K562细胞构建WAVE1高表达的K562细胞，将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA（WAVE1siRNA）转染K562／A02细胞构建WAVE1低表达的K562／A02细胞。Western blot和RT-PCR法检测基因转染前后K562／A02细胞及K562细胞WAVE1基因及蛋白的表达；可溶性噻唑盐WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度（IC50）；Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率；RT—PCR检测多药耐药基因mdrl mRNA表达；Western blot检测Bcl-2表达。结果 ①与K562细胞相比，K562／A02细胞WAVE1 mRNA表达水平增加70％，蛋白表达水平增加63％。②转染WAVE1基因的K562细胞WAVE1过表达，并降低了对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（0．05±0．00）μg／ml，增加到（2．99±0．12）μg／ml，在阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别下降30％、35％。③转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低，并可增强对阿霉素的药物敏感性，使IC50从转染前的（4．29±0．15）μg／ml下降到（1．85±0．07）μg／ml，阿霉素浓度为1.5μg／ml时，凋亡细胞分别增加24％、21％。④转染WAVE1的K562细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平均增高，而转染WAVE1 siRNA的K562／A02细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低。结论 WAVE1参与了K562／A02细胞多药耐药的形成，其机制可能与调控mdr1和Bcl-2水平有关。     

联合培养法优化K562细胞红系诱导分化及红系相关基因和膜蛋白表达分析

目的 优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能.方法 采用红系诱导联合培养法,优化诱导试剂丁酸钠、红细胞生成素、氯化高铁血红素等成分组合和剂量组合.诱导效率鉴定指标选用红系ALAS mRNA和粒系bcr/abl mRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数.红系分化进一步鉴定指标选用Realtime-PCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物.结果 优化红系诱导组合联合培养K562细胞120 h后,联苯胺染色计数阳性细胞可达100%.Realtime-PCR检测Spectrina、Spectrinβ、band3、eALAS、CD47、RhD、EPB4.2的mRNA水平分别为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、1.94倍,而ber/abl mRNA水平为对照组的0.39倍.流式细胞术测定红系膜蛋白CD47,band3、RhD水平明显增高(P<0.01),GPA无明显差异.结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,良好细胞状态利于转外源基因操作,进行红系统疾病研究.RhD比GPA更早在红系细胞表达,可作为早期红系特异标记.     

右旋柠烯对HL-60、K562白血病细胞体外作用的研究

本研究观察右旋柠烯（d-limonene，D-L）对HL-60和K562白血病细胞增殖凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。首先采用碘化丙锭染色法观察右旋柠烯对HL-60、K562细胞增殖的影响，再通过细胞形态学观察、流式细胞术分析、免疫细胞化学半定量测定突变型p53、bcl-2、bax基因的表达水平，系统观察D-L对HL-60、K562细胞体外诱导凋亡的情况。结果表明：D-L抑制HL-60和K562细胞的增殖，IC50均为0．75mmol／L，呈剂量时间依赖关系；D-L诱导HL-60、K562细胞凋亡；D-L在诱导HL-60细胞凋亡过程中随作用浓度增加，bcl-2的表达下降；D-L在诱导K562细胞凋亡过程中随作用浓度增加，突变型p53及bcl-2的表达下调，而bax的表达上调。结论：D-L抑制HL-60和K562细胞增值并诱导其凋亡；突变型p53，bcl-2，bax参与了D-L诱导凋亡的基因调控，     

mdr1基因shRNA表达载体逆转白血病耐药细胞系K562/ADM多药耐药的实验研究

目的 探讨mdr1短发夹RNA（mdr1 shRNA）对人红白血病耐阿霉素细胞系K562／ADM的耐药逆转作用。方法 编码设计合成靶位mdr1基因mRNA具有19个碱基发夹结构互补的寡核苷酸模板，构建2个shRNA表达载体pSilencer^Tm3．1-H1 neo mdr1—A和mdr1—B，将其稳定转染K562／ADM细胞。用RT—PCR法检测转染后K562／ADM细胞mdr1 mRNA表达，Western blot检测P-糖蛋白（P—gP）表达，流式细胞术和MTT法分别检测K562／ADM细胞凋亡和对阿霉素的敏感性，用激光共聚焦荧光显微镜观察并测定细胞内柔红霉素的积累。结果 在pSilencer^TM3．1-H1 neomdr1—A和mdr1—B shRNA表达载体稳定转染的K562／ADM细胞，mdr1mRNA表达分别减少到转染前的35．9％（P〈0．05）和27．5％（P〈0．01）；同时Western blot结果显示P—gP表达被明显而特异地抑制，对阿霉素的耐药性由79倍分别减低到38倍和30倍；并且，细胞内荧光强度与对照组相比显著增加（P〈0．05），与阿霉素联合应用凋亡细胞百分率分别增加至18．1％（P〈0．05）和54．4％（P〈0．01）。结论 靶向mdr1基因shRNA表达载体可有效逆转耐药，使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。     

线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用

本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病（CML）信号转导中的作用。用脂质体转染法将bcr3／abl2反义寡核苷酸（ASO）导入CML细胞系K562细胞中;用MTr法检测bcr3／abl2 ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术（FCM）分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位（△ψm）的变化;Western blot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C（CytC）的表达。结果表明,2μmol／Lbcr3／abl2 ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65．7％;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16．9％;可下调K562细胞线粒体△ψm,有38．33％的细胞出现线粒体△ψm下降;可增强CytC的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2．33±0．3升高到4．78±0．1。结论：线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用。     

shRNA干扰IER3IP1基因表达对K562细胞增殖和红系分化的影响

目的 探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响.方法 针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞后用RT-PCR方法鉴定沉默效果.采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT-PCR,观察抑制IER3IP1基因表达后对K562细胞的影响;采用0.2μmoL/L伊屿替尼诱导K562细胞2 d,观察诱导分化过程中IER3IP1基因表达变化情况.抑制IER3IP1基因表达后对红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin以及细胞表面GPA蛋白表达的影响.结果 成功构建针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体,转染至K562细胞中,该基因mRNA表达水平明显降低,抑制率达76%(P<0.01).与对照组细胞相比,K562-shRNA-IER3IP1组bcr-abl mRNA表达升高(P<0.05);MTT检测结果显示细胞增殖能力增强(P<0.01);流式细胞术检测结果显示S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少(P<0.05);电镜可见细胞常染色质增加、异染色质减少,内质网部分扩张,囊泡样结构滞留.0.2μmol/L伊马替尼作用48 h后,K562-shRNA-IER3IP1组联苯胺染色阳性率由作用前的(44.7±2.5)%降低至(22.7±1.5)%(P<0.01),且红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin的mRNA表达水平明显降低,细胞表面GPA蛋白表达水平降低.同时伊马替尼作用过程中IER3IP1基因在作用3 h时表达明显升高,6 h时降低,12～48 h表达水平基本不变.结论 干扰IER3IP1基因表达后,K562细胞增殖加快,红系分化过程受阻,提示该基因可能在K562细胞增殖和向红系分化过程中发挥作用.     

人红白血病K562细胞的红系终末分化研究

人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系,但在体外可被多种诱导剂诱导向红系终末分化,出现红系表征:停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核,因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文就K562细胞红系分化的机制和研究进展作一综述。     

BCL11A基因对γ-珠蛋白基因转录的影响

本研究旨在探讨B细胞淋巴瘤/白血病11A（B-cell lymphoma/leukemia 11A,BCL11A）基因对γ-珠蛋白基因转录的影响。通过小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术沉默人红白血病细胞（K562细胞）的BCL11A基因的表达,用实时荧光定量RT-PCR法定量细胞内γ-珠蛋白基因mRNA水平,分析BCL11A基因对γ-珠蛋白基因转录的调控作用。结果表明,所构建的4个siRNA表达载体对BCL11A基因表达的沉默率分别为49.7%、55.4%、78.2%和84.1%。将沉默率为84.1%的siRNA表达载体转导K562细胞,K562细胞的γ-珠蛋白基因的转录水平较转导对照载体质粒升高了2.4倍。结论：BCL11A基因表达被沉默后γ-珠蛋白基因mRNA水平升高显示BCL11A基因对γ-珠蛋白基因表达可能存在负调控。     

联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分...     

ZD6474对伊马替尼耐药的K562细胞增殖的影响

目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂ZD6474(Vandetanib)对K562细胞及其衍生的伊马替尼耐药的K562/G细胞的增殖抑制作用及其分子机制.方法 通过逐渐增加药物浓度的方法诱导伊马替尼耐药的K562/G细胞株,采用Western blot方法检测耐药细胞株中明显变化的分子.WST方法检测伊马替尼和ZD6474对细胞增殖的影响,流式细胞术检测药物对细胞周期的影响.采用RT-PCR、Western blot和体外Src激酶卣接测定的方法研究ZD6474作用的分子机制.结果 伊马替尼对K562细胞的IC50值为(0.28 4-0.04)μmol/L,而对K562/G细胞的IC50值为(15.80±0.93)μmol/L,K562/G细胞的耐药倍数为56倍,Western blot结果提示其耐药机制与磷酸化Src激酶(p-Src)的表达增强,Bcl-2和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达升高有关.ZD6474呈剂量依赖的方式抑制K562和K562/G细胞增殖,48 h的IC50值分别为1.61 μmol/L和3.18 μmol/L.ZD6474作用24 h,可以显著诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡.分子机制研究显示,ZD6474显著抑制Src激酶活性,上调Bax/Bcl-2的比例,以及下调p-STAT3表达.结论 ZD6474可以有效抑制伊马替尼耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡.其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关.     

毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究

本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，annexin V—FITC／PI双染法FCM检测凋亡率的变化，Ca^2＋荧光指示剂Fura-2／AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的改变，Rh123单染法FCM检测线粒体△ψm的变化，Western blot检测caspase-3，-7，-9，-12、细胞色素C和GRP78蛋白的改变。结果显示：4μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞48小时后，荧光显微镜观察到细胞呈典型的凋亡形态变化，早期凋亡细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状；晚期凋亡细胞核染色质呈固缩状或斑块状。1、2、4、8μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞24和48小时后细胞凋亡率分别为7．51％、11．65％、23，22％、30．56％和12．85％、20.27％、31．5l％、44．16％，在一定范围内呈剂量和时间依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。毒胡萝卜素诱导K562细胞[Ca^2＋]i升高以及线粒体△ψm下降，并均呈一定的浓度依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示，毒胡萝卜素诱导K562细胞caspase-3，-7，-9，-12剪切活化、细胞色素C释放、GRP78表达上调。结论：毒胡萝卜素可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡，内质网是细胞内诱导凋亡的一个重要新场所；caspase-3，-7，-9，-12剪切和活化、线粒体△ψm破坏和细胞色素C释放是毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡的重要机制之一，线粒体参与内质网应激反应性凋亡途径并发挥重要作用。     

靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用

目的 研究小干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞系K562／ADM细胞mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562／ADM为靶细胞，设计、筛选和合成2对针对mdr1基因mRNA的siRNA（mdr1 siRNA-1和mdr1siRNA-2），用脂质体介导转染K562／ADM细胞；实时荧光定量PCR（real—time PCR）法检测mdr1 mRNA的表达；流式细胞术测定P-糖蛋白（P—gP）水平和caspase-3活性；细胞形态学和FITC标记的膜联蛋白V／碘化丙锭（Annexin V—FITC／PI）双染色法检测细胞的凋亡。结果 筛选出的mdr1 siRNA-1和mdr1 siRNA-2显著抑制K562／ADM细胞mdr1的表达，mdr1 mRNA的表达分别降低91．2％和82．0％，P-gp水平下降74．1％和84．4％；增强caspase-3活性，活化caspase-3增加约40％；K562／ADM耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性增强，Annexin V—FITC／PI染色检测细胞凋亡率提高约60％。结论 siRNA通过沉默mdr1 ／P—gp表达而逆转K562／ADM多药耐药细胞的凋亡抑制现象。