青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究

目的 研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系 HFL-I细胞株体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据.方法 采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用,用流式细胞术测定细胞凋亡率; RT-PCR法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达.结果 青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖,HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组,Bax mRNA的表达显著高于对照组.结论 青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖,促进HFL-I细胞凋亡.     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响。方法 用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2．5、0．25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率；大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg／mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2．5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0．25)72h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化，并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果 正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2．68％)；低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多，凋亡率峰值分别达8．85％(96h)和25．63％(72h)；各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加，呈剂量依赖性，峰值分别为4．88％、6．47％和8．35％；但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降，大剂量药物处理72h时效应最为明显，凋亡细胞比率由25．63％降至16．24％。正常细胞高表达bcl-2，低表达fas基因；感染HCMV后，bcl-2表达显著下调，fas表达明显增强；大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞，fas表达水平明显低于感染细胞，但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂；病毒可通过下调凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用。大蒜新素本身可诱导HELF凋亡，但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡，其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关。     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的：通过观察敏咳清颗粒对体外培养的肺成纤维细胞（lung fibroblast,LFB）增殖、凋亡的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制。方法：将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高浓度组、敏咳清低浓度组、养阴清肺糖浆高浓度组、养阴清肺糖浆低浓组、地塞米松组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用MTT法检测LFB增殖,TUNEL法检测LFB凋亡。结果：①各组含药血清均可以不同程度地抑制肝素刺激下LFB的增殖,以敏咳清颗粒高剂量组抑制LFB增殖的作用最强,48h的抑制作用强于24h,呈剂量依赖性;②各组均出现不同程度细胞凋亡的形态改变,以敏咳清高剂量组诱导LFB凋亡细胞最多。结论：敏咳清颗粒能显著抑制LFB增殖,诱导LFB凋亡。     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞抗衰老作用的研究

近年来,由于世界人口年龄结构迅速趋于老化,衰老机理和抗衰老药物的研究日益为人们所重视,成为老年医学研究的重要课题之一。中药是祖国医学的宝库,有些药物已经在医疗实践中显示出了抗衰老效应。但究竟是个体自然长寿还是服药后寿命延长,目前尚缺乏有力的证据,同时它们的作用机理还有待于运用科学的方法进一步的探讨和证实。首都医学院宣武医院孙晓莉等对此项工作进行了研究和探讨。人胚肺二倍体成纤维细胞是研究衰老的理想的体外模型,其衰老特征和黄芪抗细胞衰老研究已有零星报道,但一般集中在细胞寿命方面,均缺乏多方面、动态系统的观察。本研究     

开肺化痰解毒法对人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响

目的：研究开肺化痰法对腺病毒作用后的人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响。方法：用31、7b型腺病毒攻击人胚肺成纤维细胞后,分别加入清肺口服液含药血清及利巴韦林注射液,用流式细胞仪检测各组细胞FAS蛋白的表达。结果：经31、7b型腺病毒攻击后,病毒组Fas(CD95)的表达较正常组明显降低,含药血清组、利巴韦林组与病毒组比较,Fas(CD95)的表达均明显升高,空白血清组与病毒组比较无显著性差异,含药血清组与利巴韦林组比较无显著性差异。腺病毒31型攻击后,含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较有显著性差异。腺病毒7b型攻击后,含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较无显著性差异。结论：31、7b型腺病毒对人胚肺成纤维细胞Fas的表达有一定的影响,腺病毒可能通过此机制延长其在细胞内的存活时间,以利于自身复制。清肺口服液含药血清对Fas的表达具有一定的调节作用,此作用可能是其清除病毒在体内的感染,对机体起保护作用的机制之一。     

洋参利脑神胶囊对人胚肺成纤维细胞寿命的影响

洋参利脑神胶囊可以提高人胚肺成纤维细胞增殖期群体倍增水平，延长细胞传代天数，延缓衰老细胞的群体死亡的发生，从而延长细胞的体外寿命。     

苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的：观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法：选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升（P〈0.05）。结论：苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用.方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果:50～200 mg·L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和制胶原沉积,以96 h效果最为明显,并阻滞细胞停滞于G0/G1期,降低S期和G2/M期细胞时相比例.结论:莪术醇通过将细胞周期阻滞于G0/G1,减少DNA复制,抑制人胚肺成纤维细胞增殖和细胞分泌胶原.     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。     

养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响。方法：制备实验用含药血清：空白组、中药组、激素组、中药加激素组;采用钴60射线照射肺成纤维细胞后,用不同含药血清培养细胞,分别于24、48、72 h后用流式细胞技术检测各组的细胞周期及细胞凋亡。结果：24 h,各药物组的细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,中药组的作用最突出。各药物组的细胞周期主要阻滞在G2/M期;空白组与各药物组的S期有显著差异（P〈0.05）。48 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,而各药物组之间没有差异（P〉0.05）。72 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）;各药物组之间亦有差异（P〈0.05）。48、72h各组出现了以G0/G1期比例增高为主的G0/G1期和G2/M期同时阻滞的现象。结论：养阴清肺方能够影响细胞生长周期,减少细胞合成期,诱导G2/M期阻滞,促进肺成纤维细胞的凋亡。     

厚朴酚对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响

目的：研究厚朴酚对H446细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法测定厚朴酚对H446细胞的细胞毒作用。结果：厚朴酚可明显抑制H446细胞增殖,作用呈明显的时间和剂量依赖性。结论：厚朴酚可抑制H446细胞增殖。     

苦参碱对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的观察苦参碱(matrine)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibrob-lasts,HPF)增殖的影响。方法用噻唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 mg/ml)的苦参碱在不同作用时间(24、48小时)对HPF增殖的影响。结果0.4~12.8 mg/ml浓度范围内,作用24~48小时,苦参碱呈剂量依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。结论苦参碱对HPF的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

脂质体对羟喜树碱内酯环的保护

 目的考察脂质体对羟喜树碱的结构中α-羟基内酯环的保护作用。方法采用HPLC测定模拟生理pH下(pH7.4磷酸盐缓冲液,37℃)羟喜树碱脂质体中羟喜树碱以内酯环结构存在的含量。色谱条件为:色谱柱为C₁₈柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-水(60:40),检测波长为266 nm。结果在模拟生理pH下24 h受脂质体包裹的羟喜树碱的闭环率仍大于90%。结论说明脂质体对羟喜树碱结构具有较好的保护作用,能有效地保护羟喜树碱的α-羟基内酯环。     

三叶青提取物对人肺癌H1299细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨三叶青提取物对人肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及其机制。方法采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测三叶青提取物对H1299细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜观察三叶青提取物对H1299细胞形态的影响;荧光显微镜观察三叶青提取物作用细胞后经Hoechst 33258染色的凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测pro-caspase-3、9,cle-caspase-3、9,poly-ADP-ribose polymerase（PARP）蛋白表达变化。结果与对照组比较,浓度为0.5、1、5、10 mg/m L三叶青提取物作用H1299细胞后抑制率升高（P〈0.05,P〈0.01）;同时作用时间越长,抑制率越高（P〈0.01）。倒置显微镜下观察给药后细胞形态明显改变,细胞减少;荧光显微镜下观察荧光染色后细胞核浓染和凋亡小体形成。流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率呈明显的量-效关系。Western blot结果表明：与对照组比较,浓度为5、10 mg/m L三叶青提取物明显抑制H1299细胞中pro-caspase-3、9和PARP蛋白表达,增加cle-caspase-3、9,cle-PARP蛋白的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三叶青提取物对人肺癌H1299细胞具有明显抑制其增殖,促进细胞凋亡作用,且其机制可能与激活caspase蛋白表达有关。     

芒柄花素对人非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响及相关机制探讨

目的:探讨芒柄花素对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:培养人NSCLC细胞株A549,分别按10,20,40,80,160μmol·L~(-1)梯度浓度加入芒柄花素,另设不含药物空白组,培养48 h后采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力,利用Annexin V-FIFC/碘化丙啶(PI)双标法检测细胞凋亡情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞中周期蛋白E_1(cyclin E_1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达。结果:40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白组(P0.05)。与空白组比较,40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组G_0/G_1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组下降更为明显(P0.05);40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组cyclin E_1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均较空白组降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高,与40μmol·L~(-1)芒柄花素组比较,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组cyclin E_1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高(P0.05)。结论:芒柄花素可抑制NSCLC细胞增殖,加速细胞凋亡发生,可能通过下调cyclin E_1表达而影响细胞周期,并通过调控Bcl-2和Bax表达而促使细胞凋亡发生。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

Preparation of tanshinone ⅡA self-soluble microneedles and its inhibition on proliferation of human skin fibroblastsOA

Objective: Hypertrophic scars(HS) are a variety of skin tissue fibrosis disease that occurs in human skin,the effective therapeutic method of which is still inaccessible up to now. As a bioactive constituent of a well-known medical plant, Salvia miltiorrhiza(Danshen in Chinese), tanshinone Ⅱ_A(TSA) is reported to inhibit cell proliferation in HS. Therefore, the aim of this study was to prepare TSA self-soluble microneedles to strengthen its dermal retention and break through the diffic...     

白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期调控的影响

目的观察白头翁汤对人肺腺癌细胞增殖及周期阻滞、促凋亡的影响,初步探讨其抗癌作用机制。方法以人肺腺癌细胞株A549、H1975细胞为研究对象,不同浓度白头翁汤干预后,运用CCK8法检测A549、H1975细胞增殖,细胞克隆形成实验观察A549、H1975细胞克隆形成,流式细胞术检测A549细胞周期,Western blot检测A549细胞周期相关蛋白CDK1、CyclinB1和细胞凋亡相关蛋白Caspase 8、9、3及PARP、Bcl2的表达。结果与对照组比较,不同浓度白头翁汤均能抑制A549、H1975细胞增殖和细胞克隆形成,不同浓度白头翁汤G2/M期细胞比例明显增加,且将A549肺腺癌细胞周期阻滞在G2/M期,0.2mg/mL白头翁汤均明显降低CDK1、CyclinB1和Caspase8、9、3及PARP、Bcl2蛋白的表达。结论白头翁汤有促进人肺腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与其降低细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达有关。