大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化

目的采用单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，观察UUO后肾脏病理和肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量及各氧化应激指标的改变，探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用。方法 成年健康Wistar大鼠24只，随机分为两组（n=12）：模型组（UUO组）大鼠麻醉后打开腹腔分离左侧输尿管，并于靠近肾盂段行左输尿管结扎；假手术组（Sham组）仅分离输尿管，不行结扎。两组大鼠于手术后10d处死取左侧肾脏，HE和Masson染色观察大鼠肾脏常规病理；以化学比色法测定梗阻侧肾组织匀浆中羟脯氨酸（Hyp）的含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）的含量。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果 大鼠行单侧输尿管结扎10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组相比，UUO组梗阻侧肾脏病理改变明显，且肾组织中Hyp和MDA含量增加（P〈0．01），T—AOC含量和T—SOD活性下降（P〈0．01）。相关分析显示肾组织中Hyp和MDA含量与Masson染色中胶原沉积成正相关，（r1=0.69，r2=0.66，P〈0．01）；肾组织中T—SOD活性和T—AOC含量与Masson染色中胶原沉积成负相关，（r3=-0．57，P〈0．05，r4=-0．59，P〈0．01）。结论 单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激参与肾间质纤维化的形成。     

羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:评价羟苯磺酸钙对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化影响,并探讨其作用机制。方法:21只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、肾间质纤维化组(UUO组)及羟苯磺酸钙组(CDT组),分别采用病理及免疫组织化学方法观察UUO术后14 d大鼠梗阻侧肾脏的组织学变化和MMP-9、TIMP-l表达情况。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质纤维组织面积显著增加(P<0.01),MMP-9、TIMP-1表达均有显著增高(P<0.01)。与UUO组相比,CDT组大鼠肾间质纤维组织面积减少,MMP-9表达增强、TIMP-1表达减弱(P<0.01),UUO组和CDT组大鼠左肾MMP-9/TIMP-1与肾间质纤维化面积成负相关,且有统计学意义(P<0.01)。结论:羟苯磺酸钙可缓解输尿管梗阻导致的肾间质纤维化,其机制可能与其调节MMP-9/TIMP-1紊乱、改善基质代谢有关。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

抗纤灵方对大鼠单侧输尿管梗阻所致肾纤维化的防治作用

目的：探讨中药抗纤灵方对大鼠单侧输尿管结扎（UUO）所致肾纤维化的防治作用及机制。方法：用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗组以抗纤灵方在造模的同时开始灌胃,1次／d,共4周。治疗的第2周末检测BUN、Scr含量等指标,观察肾功能变化;第4周末采用HE染色、丽春红染色观察。肾组织病理变化和胶原纤维沉积变化;采用RT-PCR法观察梗阻肾皮质C-Met、HGF、Erk1 mRNA表达。结果：模型组大鼠BUN、Scr明显升高;肾小管和间质的结构基本消失,呈现弥漫的细胞增殖;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润;肾组织C-Met mRNA表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药抗纤灵方治疗组肾脏炎性细胞浸润及间质损伤均轻于模型组;BUN含量显著降低,Scr含量趋向正常;肾组织C-Met mRNA表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。ERK总基因水平的表达在假手术组、模型组及中药治疗组之间比较无明显差异。结论：抗纤灵方可能与抑制肾组织C-Met mRNA表达并增加抗肾纤维化的细胞因子HGF mRNA表达来改善大鼠梗阻性肾间质纤维化及肾功能有关。     

低氧在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化中的作用初探

目的证实结扎致单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型梗阻侧肾脏是否存在低氧,不同时间点低氧的特点及低氧与肾间质纤维化的关系。方法选用180g左右的雄性SD大鼠,随机分为8组,即假手术组（Sham组）、单侧输尿管结扎术后12h、24h、48h、3d、5d、7d和10d组,每组4只。除Sham组外,均结扎左侧输尿管建立UUO模型。各组大鼠处死前1．5h腹腔麻醉后,经阴茎静脉注射低氧探针（Hypoxyprobe^TM-,ChemiconInternational,Inc．）60mg／kg,然后开腹取左肾。对各组肾脏Masson三色染色后,半定量分析肾小管间质纤维化程度;用RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学方法检测其转化生长因子（TGF）-β1表达,用免疫组织化学方法观察其低氧程度及分布。结果与Sham组比较,大鼠血肌酐自术后3d组即有不同程度的显著升高（P〈0．01）,血尿素氮自UUO后7d组出现显著升高（P〈0．01）,尿蛋白及血压则无显著差别。Masson染色显示肾小管间质纤维化的程度逐渐加重,术后10d组纤维化程度约增加了10倍。自术后48h组TGF-β1mRNA和蛋白水平均出现进行性上升,主要集中在小管上皮细胞。术后12h组,肾脏低氧的范围和程度有明显加重,免疫组织化学半定量分析表明在术后3d组达到高峰,并持续存在至10d组,主要集中在各种小管细胞。大鼠术后7d内,各组肾脏皮质区低氧程度与间质纤维化程度（r：0．821,P〈0．05）、TGF-β1mRNA（r：0．824,P〈0．05）、TGF-β1蛋白表达量（r：0．834,P〈0．05）之间存在显著相关性。结论UUO大鼠模型术后10d内梗阻侧肾脏持续存在低氧,很可能通过调节TGF-β1等细胞因子参与了梗阻侧肾脏间质纤维化的过程。     

维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨维甲酸（at-RA）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的影响.方法将26只大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,结扎单侧输尿管造成梗阻性肾病模型.术后9天处死大鼠,取梗阻侧肾做组织学检查,HE染色,用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）.结果维甲酸显著减轻肾小管间质损害,治疗组肾间质炎细胞浸润和肾间质CTGF、α-SMA表达显著低于对照组.结论维甲酸减轻UUO模型大鼠肾小管间质损害和炎细胞浸润,降低CTGF表达,抑制α-SMA表达,从而减轻肾间质纤维化.     

螺内酯对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化调节作用的实验研究

目的探讨螺内酯对大鼠单侧输尿管梗阻模型( U U O )肾间质纤维化的影响。方法 32 只大鼠随机分为假手术组、U U O 组、小剂量螺内酯组( 20 m g/kg·d)、大剂量螺内酯组( 50 m g/kg·d),术前 1 d 开始给予螺内酯或等量蒸馏水灌胃,观察第 14 天血清钾、钠、肌酐水平及血压的变化;以 M asson 染色定量分析方法判定肾间质纤维化程度;以免疫组织化学方法测定转化生长因子 -β1( TG F-β1) 和α- 平滑肌肌动蛋白( α-SM A)的表达并进行定量分析。结果与 U U O 组相比,小剂量螺内酯组、大剂量螺内酯组的血清钾、钠,肌酐,血压均无明显变化( P >0.05);肾小管间质纤维化程度及 TG F-β1 和α-SM A 的表达均明显低于 U U O组( P <0.05)。小剂量螺内酯组和大剂量螺内酯组肾间质纤维化程度、TG F-β1 和α-SM A 的表达差异均无显著性( P >0.05)。结论螺内酯可通过下调 TG F-β1 和α-SM A 减少细胞外基质堆积从而减轻肾间纤维化。     

缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其可能机制。方法35只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和缬沙坦组(n=10),建立大鼠UUO模型,于术后4周检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG);取梗阻侧肾组织,以H-E、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肝细胞生长因子(HGF)在肾间质的阳性染色,并进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠SCr、BUN、血浆AngⅡ,尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,缬沙坦组大鼠SCr、BUN,尿NAG及β2-MG水平差异无统计学意义(P>0.05),但血浆AngⅡ及肾间质α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著降低,HGF表达则显著增高(P<0.01)...     

CTGF反义寡核苷酸对大鼠肾间质纤维化的影响

[摘要] 目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,探讨CTGF ASODN应用于临床的可能。方法 32只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(sham-operation group,SOR)、单侧输尿管梗阻组(unilateral ureteral obstruction group,UUO)、CTGF错义寡核苷酸(missense oligodeoxynucleotide,MSODN)对照组和CTGF ASODN治疗组。第15 d收获大鼠。碱水解法测定肾组织胶原含量;Masson染色观测肾皮质胶原染色情况;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、纤连蛋白（fibronectin,FN）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在肾皮质中的蛋白表达。RT-PCR检测肾皮质中α-SMA的mRNA表达水平。结果 肾皮质胶原检测CTGF ASODN组与UUO组、CTGF MSODN组比较,减少胶原含量,p均﹤0.01; Masson染色：CTGF ASODN组较UUO组、CTGF MSODN组胶原染色面积减少; 免疫组化：CTGF ASODN与UUO组、CTGF MSODN组比较,肾皮质α-SMA, FN ,TGF-β1的阳性表达面积、阳性染色强度均下降,p均﹤0.05; RT-PCR：CTGF ASODN组抑制α-SMA的mRNA表达水平,与UUO组、CTGF MSODN组比较,p均﹤0.05。结论 CTGF ASODN有效缓解UUO大鼠肾间质纤维化。     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

缺氧诱导因子-1α在实验性大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的：观察单侧输尿管梗阻（ulilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型。肾组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达,探讨HIF-1α表达水平与肾小管间质纤维化的关系。方法：40只雌性SD大鼠随机分为2组,假手术组,UUO组（每组20只）。制备UUO大鼠模型,术后第7天、第14天处死大鼠,肾组织行HE和Masson染色,免疫组织化学和实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测HIF-1α,Ⅰ型胶原（collagenⅠ,ColⅠ）及α-平滑肌肌动蛋白（α—smooth muscle actin,α—SMA）在肾组织中的表达。结果：假手术组与UUO组各时间点肾小管间质纤维化评分比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。术后HIF-lαmRNA水平随梗阻时间延长而递增。UU0组HIF-1α蛋白表达量随着肾间质损害加重而增加,HIF-1α蛋白主要分布在肾小管,其中以近曲小管表达最明显。HIF—1α表达水平与肾小管间质纤维化评分,α-SMA和ColⅠ的表达水平均存在正相关（R值分别为0．71,0．68,0．82,P均〈0．05）。结论：HIF-1α在肾小管上皮细胞内高表达可能参与了肾间质纤维化发生和发展的过程。     

吡非尼酮对大鼠肾间质纤维化的防治作用研究

目的研究吡非尼酮（PFD）对大鼠肾间质纤维化的作用及其作用机制,为临床使用吡非尼酮提供理论依据。方法24 只标准雄性SD 大鼠,随机分为3 组：正常组（NC 组）、模型组（M 组）及吡非尼酮治疗组（S组）。M组及S 组行左侧输尿管结扎术,复制肾间质纤维化模型。S 组予吡非尼酮250 mg/（kg·d）灌胃,NC 组及M 组大鼠予等量1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。分别于手术后第1、3、5、7 天处死各组大鼠各2 只,取梗阻侧肾脏。HE 染色观察各组肾组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 表达水平,Western blot 检测转化生长因子-β（TGF-β）及α- 平滑肌激动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平。结果NC 组未显示肾纤维化,M 组显示大鼠肾间质纤维化及炎症细胞浸润。NC 组TGF-β、α-SMA 蛋白表达均较低,M 组TGF-β、α-SMA 蛋白及CTGF mRNA 表达较NC 组均升高,差异有统计学意义（p <0.05）,且随着梗阻时间延长,各物质表达量增高,但第7 天M 组及S 组上述物质表达量较第5 天减少,且M 组与S 组之间表达差异无统计学意义（p >0.05）;S 组上述物质各时间点表达则较M 组均减少,差异有统计学意义（p <0.05）。结论吡非尼酮可能通过抑制大鼠肾组织TGF-β和CTGF 的表达进而减少成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,减少细胞外基质（ECM）的沉积,发挥抗肾纤维化作用。     

曲尼司特对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化调节作用的实验研究

目的　探讨曲尼司特 (Tranilast)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法　将3 6只大鼠行右侧输尿管结扎 ,另 18只行假手术 (SIAM) ,结扎后大鼠随机分成模型组 (UUO)组和药物组 (Tranilast) ,用药组于术前一天开始给予Tranilast 2 0 0mg·kg-1·d-1,术后第 5、10及 15天分别处死各组大鼠中的 6只 ,用免疫组化方法测定肾间质转化生长因子 β(TGF -β) ,α 平滑肌动蛋白 (α SMA)及Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原 (coIⅠ .coIⅢ )的表达并行HE、MASSON染色 ,并观察肾脏病理变化。结果　Tranilast可显著减少TGF -β ,α SMA ,coIⅠ ,coIⅢ的表达 (P <0 0 5 ) ,有效地改善肾脏的病理学改变。结论　曲尼司特抑制输尿管梗阻后肌成纤维细胞 (MyoF)释放TGF -β而调节胶原的合成 ,减少肾间质Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原的沉积 ,从而改善UUO所致肾损伤 ,对实验性肾间质纤维化有一定的防止作用     

福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨福辛普利对肾间质纤维化的影响。方法采用单侧输尿管结扎法（UUO）致肾间质纤维化的动物模型,以福辛普利为阳性对照,测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平,免疫组化和原位杂交方法分别检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1mRNA）的表达。结果福辛普利能降低血Scr、BUN、AngⅡ水平,抑制α-SMA、TGF-β1mRNA表达上调,减轻肾间质纤维化程度。结论福辛普利有早期防治肾间质纤维化作用。     

雷公藤多甙对大鼠单侧输尿管结扎后肾小管间质CTGF表达的影响

目的：观察雷公藤多甙对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法输尿管梗阻大鼠随机分为模型组、贝那普利组、雷公藤多甙组、假手术组,雷公藤多甙与贝那普利组以药物10 mg· kg^-1· d^-1溶于5 mL生理盐水灌胃,模型及假手术组以等体积生理盐水灌胃,术后14 d分别处死各组8只大鼠。采用免疫组化（SABC法）检测各组大鼠肾小管间质 CTGF的表达水平。结果模型组、贝那普利组和雷公藤多甙组大鼠肾小管间质CTGF表达均高于假手术组,差异有统计学意义（P ＜0．01）。雷公藤多甙组大鼠肾小管间质的CTGF表达显著低于模型组（P ＜0．01）,亦低于贝那普利组（P ＜0．05）。结论在肾小管间质纤维化中雷公藤多甙起着重要的治疗作用,可能与抑制TGF-β相关。雷公藤多甙可以下调 CTGF表达,减轻肾小管间质损伤,可作为梗阻性肾病的辅助治疗用药。     

福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用

目的观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用。方法采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型。72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只。治疗组于术后2d给予福辛普利10mg/(kg.d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃。各组分别于术后7、14、21d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达。结果模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P0.05);TAK1mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P0.05)。结论福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展。     

Effects of Mycophenolate Mofetil on Renal Interstitial Fibrosis after Unilateral Ureteral Obstruction in Rats

Theseverityoftubulointerstitialfibrosishaslongbeenconsideredasthecrucialdeterminantinprogres siverenalinjuryandlong term prognosisinbothhu manandexperimentalglomerulonephritis[1] Howtoimpedeinterstitialfibrosisandlimittheprogressionofchronicrenaldiseasestowardsend stagerenaldisease(ESRD)becomeanewfocusinthisfield Mycophenolatemofetil (MMF)isahighlyspe cificimmunosuppressor Interestingly ,MMFisanimmunosuppressivedrugthatisalsoknowntohaveaneffectoncellsoutsideimmunesystemandparticu larlyhav…