肺岩宁方及其拆方对Lewis小鼠肿瘤肺转移与VEGF/KDR表达关系的影响

目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。     

肺岩宁对晚期非小细胞肺癌生长转移和血清VEGF的影响

观察中药肺岩宁 (黄芪、白术等 )对血管内皮生成因子 (VEGF)分泌的影响及抗晚期非小细胞肺癌侵袭转移的临床疗效。将 ( 91例 )病例分为化疗组 ( 3 1例 )、肺岩宁 +化疗组 (综合组 3 2例 )、肺岩宁组 ( 2 8例 )。化疗组化疗后对症治疗 ,综合组化疗前后服肺岩宁方 ,肺岩宁组单纯服用肺岩宁 ;治疗前后测定血清VEGF水平 ,观察患者原发瘤灶、转移灶变化和新转移灶出现情况 ,评价生活质量和毒副反应。疗程 3～ 4个月。结果 :治疗后原发病灶瘤体综合组与化疗组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;转移灶瘤体综合组治疗后转移灶的增大显著低于化疗组 (P <0 0 5 ) ;新转移灶肺岩宁组和综合组淋巴结转移和远处转移的发生情况显著低于化疗组 (P <0 0 5 ) ;治疗前后相比 ,化疗组患者血清VEGF水平表现出上升趋势 ,肺岩宁组和综合组治疗后血清VEGF水平显著下降 (P <0 0 5 )。实验采用C5 7BL/ 6小鼠 ,接种Lewis肺癌细胞株 ,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组、综合组。实验结果 :用免疫组化法测定肿瘤切片的VEGF表达 ,小鼠肿瘤VEGF的表达。结论 :益气养精、解毒抗癌的肺岩宁具有抗肺癌侵袭转移的作用 ,减少VEGF分泌 ,抑制血管生成 ,可能是肺岩宁抗肺癌生长转移的机理之一。     

肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响

目的:观察肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响,探讨该复方各种治法在抑制肿瘤中的作用及机制。方法:72只小鼠接种Lewis肺癌细胞株造模,随机分为生理盐水对照组、肺岩宁组、益气组、养精组、益气养精组、抗癌组及化疗组,分别给予相应药物干预21d。测定小鼠抑瘤率和肺转移抑制率,应用荧光标记引物的TRAP法检测端粒酶活性。结果:在改善荷瘤小鼠皮下移植瘤瘤重上,肺岩宁组、抗癌组、化疗组较生理盐水组有明显差异(P<0.01)。在抑制肺转移灶上,化疗组、肺岩宁组、抗癌组较生理盐水组疗效有明显差异(P<0.01),而肺岩宁组与益气养精组无差异(P>0.05)。在抑制荷瘤小鼠端粒酶活性上,肺岩宁组、养精组、益气养精组、抗癌组、化疗组的端粒酶活性相对值较低,较生理盐水组有显著的统计学差异(P<0.01);益气组、养精组、益气养精组端粒酶活性相对值较高,较化疗组有显著统计学差异(P<0.01);与肺岩宁组比较,益气组、养精组、益气养精组、生理盐水组端粒酶活性相对值较高,有显著统计学差异(P<0.01)。结论:针对肺岩宁立方原则,益气、养精、解毒散结等治法的综合运用在抗瘤上存在相互协同作用,肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肺癌转移的机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的：观察肺岩宁（Feiyanning,FYN）方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。 方法：建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组（肺岩宁加化疗组）。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果：肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组（P〈0．05）,而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）． 结论：肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。     

肺积方抑制Lewis肺癌肿瘤生长及其抗移植瘤血管生成的实验研究

目的：观察肺积方对移植性肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法：将C57小鼠与裸鼠分别随机分为对照组及中药低、中、高剂量组。①建立C57小鼠Lewis肺癌模型,于接种后第10天开始药物干预,中药组灌胃相应浓度的肺积方,对照组予生理盐水。在给药第5、8、11、14天测量小鼠瘤径,灌胃第14天处死小鼠并称取瘤重。②采用Lewis肺癌细胞株接种于裸鼠背部视窗部位,药物干预同上。分别在给药当天及第4、9、14天静脉注射FITC-dextran以显示功能性血管,在激光共聚焦扫描显微镜下测量单位面积的平均血管数量和直径。结果：①在各观察时间节点,高剂量组瘤径均明显小于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,而低、中剂量组与对照组无明显差异（P〉0.05）;第8、11、14天高剂量组瘤径均明显小于低剂量组（P〈0.01,P〈0.05）,第8、11天高剂量组明显小于中剂量组（P〈0.01）。14 d后,高剂量组瘤重明显低于对照组（P〈0.05）;低、中剂量组均低于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。②第9、14天,中、高剂量组血管数量明显少于对照组与低剂量组（P〈0.01）,而低剂量组与对照组数量相当（P〉0.05）;第4天高剂量组血管直径明显小于低剂量组（P〈0.05）,其余时间点各组血管直径无明显差异（P〉0.05）。结论：肺积方对Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长具有抑制作用,这种作用可能与减少肿瘤组织中功能性血管的数量,从而抑制肿瘤血管新生有关。     

肺积1号方影响小鼠肺癌移植瘤细胞周期蛋白D1表达的实验研究

目的观察肺积1号方对Lewis肺癌小鼠移植瘤CyclinD1表达的影响。方法建立Lewis肺癌细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型,完全随机分为4组,每组8只：（1）模型组：生理盐水0.4 ml/只灌胃,1次/日,作为阴性对照;（2）肺积1号方小剂量组（肺小组）：按照肺积1号方生药20 g/kg给药,用含生药1.0 g/ml的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;（3）肺积1号方中剂量组（肺中组）：按照40 g/kg给药,用含生药2.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;（4）肺积1号方大剂量组（肺大组）：按照80 g/kg给药,灌服含生药4.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只,1次/日。连续用药14天,停药1天,次日颈部脱臼法处死各组小鼠,无菌条件下剥取肿瘤组织,免疫组化法检测肺积1号方对肿瘤组织Cyclin D1表达的影响。结果肺积1号方中、大剂量组CyclinD1的表达均较模型组降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论肺积1号方可下调Lewis肺癌肿瘤组织细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,可能是肺积1号方的抗肿瘤机制之一。     

肺岩宁膏方对Lewis肺癌荷瘤鼠抗瘤作用及对免疫器官的影响

目的探讨肺岩宁方为基础的膏方制剂对荷瘤鼠抗肿瘤活性及免疫功能的影响。方法以C57BL/6小鼠Lewis肺癌为模型,随机分为膏方组、辅料方组、生理盐水组,每组11只,给药10d后检测各组C57BL/6荷瘤小鼠的体质量,瘤重,肺转移灶数,肺转移发生率,脾指数及胸腺指数。结果肺岩宁膏方能明显减少C57BL/6Lewis肺癌荷瘤小鼠的肺转移灶数,降低肺转移的发生率(P<0.05);显著提高荷瘤小鼠的免疫功能,使小鼠的体质量、脾指数、胸腺指数均明显高于空白组(P<0.05);但三组间瘤重无明显差异。结论肺岩宁膏方能够明显提高Lewis肺癌荷瘤小鼠的免疫功能,对Lewis肺癌转移有一定抑制作用,但对Lewis肺癌皮下移植瘤无明显抑制作用。     

肺积方对Lewis肺癌小鼠抑瘤率及EGFR、TNF-α表达的实验研究

目的观察肺积方对Lewis肺癌小鼠肿瘤表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达的影响。方法将48只近交系C57小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,随机分为模型组、顺铂组、肺积方组、顺铂＋肺积方组,每组12只。治疗后处死,取肿瘤组织称重,计算抑瘤率,并将肿瘤组织固定于10%甲醛溶液,常规石蜡包埋切片,免疫组化检测、图像定量分析EGFR及TNF-α的表达。结果顺铂组、肺积方组、顺铂＋肺积方组,其对肿瘤均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为30.95%、15.54%、39.79%。与顺铂组比较,EGFR的积分光度由高到低、平均灰度由低到高分别为肺积方组、顺铂组、顺铂＋肺积方组（P〈0.05）。与顺铂组相比,TNF-α的积分光度由低到高、平均灰度由高到低分别为肺积方组、顺铂组、顺铂＋肺积方组（P〈0.05）。结论肺积方对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的生长具有一定的抑制作用,但低于顺铂组,顺铂与肺积方联合使用效果最佳,其机制可能与降低EGFR的表达及调节肿瘤坏死因子TNF-α的表达有关。     

参蓉肺康散影响Lewis肺癌小鼠VEGF表达的实验研究

目的 研究参蓉肺康散对小鼠Lewis肺癌抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立小鼠lewis肺癌模型并随机分组,分别给予不同处理,比较各组瘤体生长的重量,应用免疫组化法比较观察VEGF在各组中的表达.结果 参蓉肺康散对C57BL/6小鼠的Lewis肺癌的瘤体生长有一定的抑瘤作用,抑制小鼠lewis肺癌VEGF表达作用,其与顺铂的单独治疗作用相差不明显,而当其与化疗药物顺铂的抑瘤作用有相加效果.结论 参蓉肺康散可通过抑制lewis肺癌小鼠VEGF表达以抑制肿瘤生长.     

肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞及肿瘤转移的影响

目的:观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞的影响及肿瘤肺转移的抑制作用。方法:取Lewis肺癌细胞接种在C57BL/6小鼠右腋皮下,制备Lewis肺癌荷瘤鼠模型。C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂组、肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组,除正常组外均造模。予相应干预(中药或生理盐水灌胃,顺铂腹腔注射),14 d后观察小鼠生存质量、肺转移灶及计算肺转移抑制率;ELISA法检测血清中细胞因子IL-10、IL-12、转化生长因子(TGF)-β1含量;免疫组织化学染色检测肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞CD206的表达;Western blot法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、核转录因子(NF)-κBp65的表达。结果:模型组、顺铂组小鼠生存质量最差,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组小鼠生存质量较好。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组3组的肺转移抑制率均明显高于顺铂组。模型组IL-10含量明显高于正常组,各治疗组IL-10含量均显著低于模型组(P0.05);与顺铂组比较,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组IL-10含量均明显升高(P0.05)。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组IL-12含量均显著高于模型组及顺铂组(P0.05)。与顺铂组比较,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组TGF-β1均显著降低(P0.05)。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组均可抑制CD206的表达(M2型),但顺铂组和肺岩宁颗粒联合顺铂组抑制更为明显。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组肿瘤组织中MMP-2、MMP-9、NF-κBp65的表达明显低于顺铂组(P0.05)。结论:肺岩宁颗粒能明显改善小鼠生存质量及抑制肿瘤转移,其机制可能是干预NF-κB信号通路并进一步调节肿瘤相关巨噬细胞。     

肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的影响

目的：分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法：分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP＋肺癌干细胞分为对照组（空白血清＋生理盐水）、单纯化疗（空白血清＋DDP组）、肺岩宁方组（肺岩宁方含药血清＋生理盐水）、综合治疗组（肺岩宁方含药血清＋DDP）,予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP＋肺癌干细胞凋亡情况。结果：分离的SP＋、CD24＋IGF-1R＋、CD133＋细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP＋干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论：本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。     

肺岩宁颗粒对Lewis肺癌细胞周期G1/S检测点信号通路中MDM2-P53生物轴的影响

目的:观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠细胞周期G1/S检测点信号通路中MDM2-P53生物轴的影响。方法:采用C57BL/6小鼠,造模并随机分为6组:模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组、肺岩宁颗粒低剂量组、肺岩宁颗粒中剂量组、肺岩宁颗粒高剂量组,进行相应药物干预。观察各组抑瘤率、瘤重、体质量、去瘤体质量,流式细胞术检测细胞周期时相分布,RT-PCR测定肿瘤组织MDM2、P53的mRNA表达。结果:肺岩宁颗粒中剂量组瘤重显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),与顺铂组比较差异无统计学意义。肺岩宁颗粒中剂量组体质量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组比较,体质量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);肺岩宁颗粒中剂量组去瘤后体质量显著高于煎剂组、模型组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术发现肺岩宁颗粒中剂量组的G0/G1比例较模型组和顺铂组显著增多,癌细胞增殖指数也明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR显示肺岩宁颗粒中剂组MDM2 mRNA水平明显低于模型组、顺铂组、煎剂组,差异有统计学意义(P<0.01);肺岩宁颗粒中剂组P53 mRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组,差异有统计学意义(P<0.01)。肺岩宁颗粒高剂量组无小鼠存活,考虑与颗粒剂溶解度有关。结论:在Lewis肺癌模型中,调节细胞周期G1/S检测点信号通路MDM2-P53生物轴可能是肺岩宁颗粒抗肺癌增殖的重要途径之一。     

人参及人参皂甙对荷瘤小鼠血清中表皮生长因子含量的影响

给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠移植Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞（２×１０＾７）２周后，以放射免疫法测定其血清中表皮生长因子（ＥＧＦ）含量，肿瘤组为０．２８±０．０９μｇ／Ｌ，正常鼠组为０．１８±０．１１μｇ／Ｌ，移植肿瘤后服用人参煎剂组（人参组）为０．１６±０．１０μｇ／Ｌ，移植肿瘤后服用人参皂甙组（人参皂甙组）为０．２９±０．１１μｇ／Ｌ。肿瘤组鼠的ＥＧＦ含量明显高于正常鼠，人参组明显低于肿瘤组鼠，人参皂甙组与肿瘤     

中药胃肠安对比格犬胃癌术后转移的抑制作用

目的：观察中药胃肠安对比格犬胃癌术后转移的防治作用。方法：以乙基硝基亚硝基胍（ENNG）致比格犬胃癌后手术切除建立胃癌术后模型,术后3周随机分为中药组、化疗组和模型组。中药组连续喂服胃肠安煎剂,化疗组每4周予1疗程FAM方案化疗,模型组不予任何药物干预。观察各组生存期、生存质量及复发转移率等。结果：中药组术后生存期、生存质量明显优于模型组和化疗组（P〈0.05）;对于各组生存2个月以上的复发转移率统计显示,中药组生存2个月以上者与模型组存在显著性差异（P〈0.05）,而化疗组与模型组之间无显著性差异。结论：中药胃肠安对胃癌术后比格犬的复发转移有一定的防治作用。     

胃肠安方对人胃癌生长、转移及血管生成和MMP2表达的影响

目的：观察胃肠安方对人胃癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的作用及其对肿瘤血管生成与基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase-2,MMP2）表达的影响。方法：建立裸小鼠胃原位癌模型,随机分为胃肠安组及生理盐水对照组,观察裸小鼠胃癌种植后肿瘤生长及转移灶情况,以及肿瘤生长转移相关基因MMP2表达和肿瘤血管生成情况。结果：胃肠安方能显著抑制胃癌生长与转移。免疫组化结果表明,胃肠安组肿瘤微血管密度明显低于对照组。胃肠安方同时能抑制肿瘤组织MMP2表达。结论：胃肠安方具有抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤生长和转移作用,其作用机制可能与抑制肿瘤新生血管生成及MMP2表达有关。     

芩珠凉血合剂对豚鼠银屑病模型管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的：研究芩珠凉血合剂对豚鼠银屑病模型血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2）的影响,探讨其治疗寻常型银屑病的相关作用机制。方法：选择豚鼠32只,随机取8只为正常组;其余以5％心得安乳剂外涂耳部皮肤造模,使其产生银屑病样病理改变,并随机分为模型组、芩珠凉血合剂治疗组（治疗组）、复方氨肽素片对照组（对照组）,分别予蒸馏水或相应药物干预4周。检测治疗前后银屑病样皮损豚鼠血清VEGF水平、皮损组织中VEGF与VECFR2水平的变化,观察该变化与皮损表现的关系。结果：模型组豚鼠血清VEGF显著高于正常组。经药物干预治疗后,治疗组血清VEGF低于模型组和对照组,与正常组无统计学差异（P〉O．05）;而对照组与模型组无统计学意义（P〉0．05）,仍高于正常组（P〈0．05）。免疫组化切片经图像分析显示,模型组VEGF及其受体VEGFR2表达均高于其余3组。经治疗,两药物干预组豚鼠皮损处的VEGF表达仍高于正常组,且与模型组无统计学差异（P〉0．05）;但治疗组VEGFR2表达却有显著降低,与对照组和模型组有统计学差异（P〈0．05）。结论：芩珠凉血合剂能明显改善豚鼠银屑病样皮损,其作用机制可能与降低血清中VEGF水平和皮损处VEGFR2表达有关。