厄贝沙坦对肾硬化大鼠肾小管间质中MMP-9/TIMP-1表达的影响

为探讨基质金属蛋白酶9（MMP－9）及其抑制剂（TIMP－1）在单侧肾切除后，重复注射阿霉素复制肾小球硬化大鼠肾小管－间质的表达，以及厄贝沙坦对其的影响和可能的保护作用机制。将肾小球硬化大鼠分为厄贝沙坦治疗组和对照组，设假手术组为正常对照。检测厄贝沙坦治疗4周后，肾功能和病理改变，并用免疫组化或原位杂交的方法分别检测肾小球和肾小管－间质中MMP－9／TIMP－1，转化生长因子β1（TGF－β1）的表达。结果表明肾小球硬化组肾小管中MMP－9，TIMP－1，TGF－β1显著增加。厄贝沙坦组中肾小管中上述指标表达下降。提示厄贝沙坦在延缓肾小球硬化同时，在减轻肾小管－间质纤维化方面有一定保护作用。     

纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

背景：纤维连接蛋白表达增加在肾间质纤维化疾病进展过程中发挥着的重要作用。 目的：观察纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达。 方法：72只大鼠随机等分为对照组、假手术组和模型组。模型组建立单侧输尿管梗阻模型;假手术组仅开腹游离左侧输尿管;对照组不做任何处理。 结果与结论：与对照组及假手术组比较,模型组大鼠梗阻时间越长,肾小管间质损害程度越重,纤维化越明显,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达即明显增多,且随着梗阻时间延长,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达呈持续增加趋势,至造模后第14天达到高峰,与同期对照组、假手术组相比差异有显著性意义(P < 0.01),说明在大鼠肾纤维化形成过程中,纤维连接蛋白的蛋白表达在肾损伤早期即显著增加,并随肾间质纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肾纤维化的发生。而基质金属蛋白酶9的高表达可能是加重肾间质损害的因素之一。     

结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及其调控

CTGF, a member of the CCN family of immediate early genes, is a recently discovered profibrotic growth factor, which is involved in many pathophysiologic procedures. CTGF acts as a downstreame ffector of TGF-β acting on interstitial ceils to enhance the progression of fibrotic renal diseases. It has been shown that CTGF gene expression can be induced or blocked by some kinds of cytokine and drugs. It is an interesting candidate target for future intervention strategies of renal interstitial fibrosis.     

MMP-1、TIMP-1在肝纤维化组织中的表达及其病理意义

目的 研究MMP-1和TIMP-1在肝纤维化发展的不同时期的表达情况及病理学意义,为肝纤维化的防治提供理论依据.方法 采用免疫组织化学S-P法.分别检测MMP-1和TIMP-1在57例肝纤维化发展不同时期的组织中的表达情况,应用SPSS10.0统计软件分析它们在病变不同时期的表达差异及二者之间的相关性和其意义.结果 ①MMP-1在各组间的表达无显著性差异(P＞0.05);②TIMP-1的阳性表达随肝组织炎症及纤维化程度增加而增强(P＜0.05);③MMP-1/TIMP-1比值与肝纤维化程度呈负相关.结论 MMP-1/TIMP-1系统在肝纤维化形成过程中起着重要的调控作用.     

MMP-2,TIMP-1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及抑制剂-1(TIMP-1)在人肝癌及癌旁组织中的表达及其与肝癌侵袭转移的关系.方法:应用免疫组织化学法研究50例肝癌及癌旁组织中MMP-2和TIMP-1的表达.结果:MMP-2在肝癌和癌旁组织表达阳性率分别为76%和72%,明显高于正常肝组织的表达(P<0.01)a TIMP-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为58%和56%,高于正常肝组织中的表达(P<0.01).而MMP-2洋相表达率与肝细胞癌的转移、淋巴浸润、包膜形成和肿瘤分化有关(P<0.05).而TIMP-1的表达与癌组织的转移,淋巴结浸润和包膜形成有关(P<0.05).结论:MMP-2,TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达明显增高,可能对于判断肝癌的浸润、转移有重要价值.     

糖尿病大鼠肾小管TGF-β1和MAPK1/3表达的动态观察

目的:动态观察糖尿病大鼠肾小管转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK_1/3)和纤维连接蛋白(FN)的变化,探讨其在肾小管间质病变发生发展中的作用。方法:将大鼠分为正常对照组;糖尿病1周、2周、4周和8周组。用链脲菌素复制糖尿病模型;免疫组化法检测肾小管间质TGF-β₁、MAPK_1/3和FN的表达;Western blot检测TGF-β₁蛋白质;HE和PAS染色,光镜观察动物肾组织形态;生化法测定血糖、血肌酐及尿蛋白。结果: 正常肾小管可见少量MAPK_1/3表达,而未见TGF-β₁表达。糖尿病1周可见肾小管上皮细胞表达TGF-β₁,并且随着病程发展而增加。MAPK_1/3和FN从糖尿病两周开始表达亦呈持续增加,并且与TGF-β₁及肾重/体重比呈正相关。糖尿病1周时MAPK_1/3与TGF-β₁无显著相关,但与FN呈正相关。 结论:大鼠糖尿病状态诱导肾小管表达TGF-β₁并激活MAPK_1/3,MAPK_1/3介导高糖和TGF-β₁的信号而促进FN的生成和沉积,在糖尿病肾脏肥大和纤维化中可能起重要作用。     

缬沙坦对大鼠肾间质纤维化的影响

肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种原因引起的肾脏疾病进展至终未期肾功能衰竭的共同病理特征.     

肾小管上皮细胞在肾间质纤维化中的作用

肾小管是连接肾小球与肾间质的枢纽 ,肾小管上皮细胞可通过产生趋化因子、致纤维化细胞因子、表型转化为成纤维 /肌成纤维细胞以及细胞凋亡等方式 ,主动参与肾间质纤维化的发生与发展。干预肾小管上皮细胞的表型转化及凋亡 ,可能会为抗纤维化治疗提供新的思路和手段     

TGF-β1对人肾间质成纤维细胞PAI-1表达的作用

目的：探讨转化生长因子β1（TGF－β1）在肾间质纤维化中的作用机理。方法：体外分离培养人肾间质成纤维细胞,应用不同浓度（0,2,5,10ug/L)的TGF－β1培养刺激24h,和以5μg/L TGF－β1作用不同时间（0,6,12,24,48h),以逆转录－PCR技术检测成纤维细胞表达纤溶酶原激活剂的抑制物（PAI－1）mRNA的变化。结果 TGF－β1 在0－10μg/L浓度范围可促进肾间质成纤维细胞2PAI－1 mR-NA的表达,且呈剂量效应相关性,在0－48h内,5μg/L TGF－β1刺激后PAI－1表达,参与肾纤维化中基质的合成和降解过程,从而在肾间质纤维化过程中发挥作用。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。     

Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达

目的:探讨Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及可能作用。 方法:采用单侧输尿管结扎（UUO）模型，分别于造模后1、3、7、14、21和28 d取肾组织，用免疫组化法检测TGFβ₁、磷酸化Smad2/3和α-SMA在梗阻肾肾组织中的表达；用原位杂交方法检测梗阻肾组织TGFβ₁ mRNA的表达。结果:正常大鼠肾组织具有基础的TGFβ₁(4.32%±1.72%)和磷酸化Smad2/3［(19.31±5.37）个/mm2］的表达，α-SMA只表达于血管平滑肌，肾小管-间质无表达。UUO术后1 d，TGFβ1的表达无明显增加(5.15%±2.08% vs对照组，P>0.05)，第3 d明显增加(13.55%±6.33% vs 对照组，P<0.01)，第7 d达高峰(26.78%±8.77% vs 对照组，P<0.01)，此后表达减少；磷酸化Smad2/3的表达在UUO术后3 d明显增加［(67.95±13.87）个/mm2 vs 对照组，P<0.01］，并持续增加到第7 d［（150.61±27.34）个/mm² vs 对照组，P<0.01］，此后表达减少；而UUO术后3 d肾组织α-SMA表达亦明显升高（5.58％±1.23％ vs 对照组，P<0.01），7 d达到高峰（13.43％±3.32％ vs 对照组，P<0.01），14 d表达开始下调；UUO术后肾间质细胞外基质的沉积随着疾病的进展而进行性增加，第28 d达到最高峰。梗阻肾肾组织中TGFβ₁、磷酸化Smad2/3以及α-SMA的表达时相一致并呈明显正相关（r₁=0.932, P<0.01；r₂=0.946, P<0.01），并与肾间质区域细胞外基质的积聚密切相关。 结论:磷酸化Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达明显增高，可能在肾间质纤维化的过程中起重要作用。     

人脑星形细胞瘤纤溶酶原激活抑制因子1基因表达研究

目的研究人脑星形细胞瘤纤溶酶原激活抑制因子１（ＰＡＩ１）基因表达及其临床意义。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和免疫组化ＡＢＣ方法检测３６例人脑星形细胞瘤ＰＡＩ１ｍＲＮＡ和蛋白表达，分析其与临床病理因素之间的关系。结果所有星形细胞瘤组织均可表达３．０ｋｂ和２．２ｋｂ的ＰＡＩ１ｍＲＮＡ转录物；高分级星形细胞瘤ＰＡＩ１ｍＲＮＡ表达水平显著高于低分级星形细胞瘤（Ｐ＜００１）；正常脑组织未检测出ＰＡＩ１ｍＲＮＡ表达。ＰＡＩ１ｍＲＮＡ表达水平与星形细胞瘤的坏死（ｒ＝０．５１，Ｐ＜０．０１）、微血管数（ｒ＝０．３３，Ｐ＜０．０１）及脑水肿（ｒ＝０．２７，Ｐ＜０．０１）呈显著正相关，与患者性别、年龄及瘤体大小无显著相关性。免疫组化染色显示，ＰＡＩ１蛋白主要分布在高分级星形细胞瘤的瘤细胞和内皮细胞，尤以血管增殖部位和坏死灶周围较为显著，低分级星形细胞瘤呈低水平表达。结论ＰＡＩ１基因表达与人脑星形细胞瘤的分级、坏死、血管生成及脑水肿密切相关，可作为星形细胞瘤恶性程度的分子标记。     

肝纤维化时肝脏OPN和PAI-1的表达变化

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化。方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型,大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色,采用SABC法做免疫组织化学染色及Western blotting检测OPN和PAI-1蛋白表达,抽提肝组织总RNA,RT-PCR检测OPN mRNA表达。结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞浆、枯否氏细胞、汇管区的部分肝细胞、肝窦壁内皮细胞。PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色。Western blotting检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(P0.01)。与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强。RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(P0.05)。研究结果证明,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高。结论:肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制ECM降解、加速肝纤维化进程。     

博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化及其发生机制

目的： 了解博来霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化,探讨BLM致肺纤维化的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组（N组）和肺纤维化模型组（B3、B7、B14、B28、B56组）,每组10只。除N组外,其余各组采用气管内注入BLM致大鼠肺纤维化模型, 分别于3、7、14、28、56 d处死各组大鼠,右肺行苏木精-依红（HE）、Masson胶原及天狼猩红染色,测定左肺羟脯氨酸（HYP）的含量。 RT-PCR法半定量测定转化生长因子-1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）mRNA在肺内的表达。免疫组化法观察TGF-β1、MMP-9及TIMP-1蛋白在大鼠肺组织的表达。结果：(1) 模型组大鼠肺组织HYP含量显著高于N组（P<0.05）,模型组大鼠肺组织肺泡炎症的程度也明显重于N组,B14、B28和B56组大鼠肺纤维化的程度明显重于N组,大鼠在灌注BLM后不同时点其肺组织有着不同的病理变化。 (2) TGF-β1、MMP-9及TIMP-1在正常组大鼠肺脏中即有表达,但表达较弱,灌注BLM后它们的表达均增强,不同时点它们在肺组织内的分布有不同的特点。结论：给予后不同时点大鼠肺组织有着不同的病理变化特点,TGF-β1、MMP-9和TIMP-1在BLM诱导的肺纤维化形成过程中起着重要的调节作用。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：检测大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型不同时期，肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，观察比较在间质纤维化不同阶段，3者的动态变化及关系。 方法： 采用雄性SD大鼠36只，分为假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，再分3、7、14、21和28 d共6组，每组6只，于各时点处死大鼠，取肾组织，常规HE、Masson染色，按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。 结果： 随梗阻时间的延长，小管间质纤维化加重，28 d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重，CTGF和α-SMA表达逐渐增加，两者与小管间质损害积分呈正相关，CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14 d达高峰后，逐渐减少，但仍高于对照组。 结论： UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关，CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。     

体外培养的血管内皮细胞低氧低糖损伤后tPA、PAI-1表达变化

目的：观察体外培养的血管内皮细胞低氧低糖损伤后组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)表达变化，探讨脑缺血后纤溶系统的变化及机制。材料和方法：制备体外内皮细胞低氧低糖损伤模型，利用HE染色、免疫细胞化学染色观察tPA、PAI-1表达变化。结果：低氧低糖损伤后，tPA、PAI-1表达均明显增强。结论：成功制备体外内皮细胞低氧低糖损伤模型。内皮细胞低氧低糖损伤可以诱导tPA、PAI-1表达增多，进一步说明脑缺血损伤后tPA、PAI-1表达增加并参与损伤过程。     

纤溶酶原激活物抑制剂1 siRNA对大鼠肺纤维化的治疗作用

 目的： 观察纤溶酶原激活物抑制剂1 （PAI-1）siRNA对博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺纤维化的治疗作用,并初步探讨其机制。方法： 72只Wister大鼠分为4组,即对照组（control组）、BLM组、BLM+非特异 siRNA 组(BLM+N组)和BLM+PAI-1 siRNA组(BLM+P组)。BLM 5 mg/kg气管内滴入制作肺纤维化模型,control组注入等体积的生理盐水。造模后,于局麻下BLM+P组每周2次气管内注入PAI-1 siRNA 7.5 nmol (0.2 mL);BLM+N组注入相同剂量的非特异siRNA;control组和BLM组注入等体积的生理盐水,28 d共给药8次。分别于第7 d、14 d和28 d每组处死6只,左肺行肺泡灌洗测定PAI-1活性,右中叶肺组织RT-PCR法检测Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）的mRNA表达。结果： 造模后,7 d、14 d和28 d肺泡灌洗液中PAI-1活性持续升高,每周2次气管内注入PAI-1 siRNA可以使肺泡灌洗液中PAI-1的活性降低,与同一时点BLM组比较有明显差异（均P<0.05）;模型组7 d、14 d和28 d  Ⅲ型胶原、α-SMA和TIMP-1的mRNA表达明显增高,BLM+P组3个时点Ⅲ型胶原、α-SMA和TIMP-1的mRNA表达明显减少,分别与同一时点BLM组比较有明显差异（均P<0.05）。结论： 每周2次气管内给予PAI-1 siRNA可以持续减少PAI-1表达。PAI-1 siRNA不但直接抑制肺纤维化进展,而且可以打破基质金属蛋白酶及组织抑制因子之间的平衡。     

人参皂苷Rb1对白消安诱导人脐静脉内皮细胞表达PAI-1、TF和TGF-β1的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用机制。方法:体外培养HUVECs，分别用白消安（BU）和人参皂苷Rb1干预，以RT-PCR、实时荧光定量PCR以及ELISA方法检测其PAI-1、TF和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达。结果:60 mg/L BU使HUVECs PAI-1、TF和TGF-β₁ 蛋白水平明显增高及mRNA表达显著增强，80 mg/L人参皂苷Rb1则可明显抑制BU对HUVECs的这种作用。结论:BU可能通过激活TGF-β₁信号转导途径而上调PAI-1及TF的表达，增强HUVECs促凝活性；人参皂苷Rb1则可能通过抑制这一途径降低PAI-1及TF表达，保护HUVECs，纠正其高凝、低纤溶活性的异常状态。