松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平。以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg^-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg^-1)组。每天灌胃给药1次,连续给药30 d。第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查。结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L^-1作用HepG2.2.15细胞6 d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其最高抑制率分别为42.68%,46.29%;同时在100 mg·L^-1对HBV DNA具有抑制作用。此外,松果菊苷在50 mg·kg^-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82%,29.12%,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用。提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用。     

白背叶根抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的观察白背叶根体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法以HepG2.2.15细胞株为模型,用微粒酶免疫测定技术(MEIA)检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg含量,用PCR荧光定量技术检测细胞上培养上清液中HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果白背叶根对HepG 2.2.15细胞的TC50为48.25 mg/m l,对抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的治疗指数分别为13.26和43.08。对HBVDNA仅有微弱抑制作用。结论白背叶根在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。     

蜗牛多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的:探讨蜗牛多糖抗乙肝病毒活性。方法:将不同浓度蜗牛多糖与HepG2.2.15细胞株共培养,以拉米夫定为阳性对照药,用ELISA法检测HBsAg和HBeAg分泌水平,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量,计算抑制率。结果:蜗牛多糖在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌,最大抑制率分别为42.8%和52.1%;对HBV DNA的复制有一定抑制作用(P<0.05)。结论:蜗牛多糖在体外具有显著的抗乙型肝炎病毒作用,且毒性较小,具有良好应用前景。     

细脚拟青霉多糖抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的:探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:通过CCK-8试剂盒检测PtPs对HepG2.2.15的细胞毒性。以无或低毒浓度的PtPs作用于HepG2.2.15细胞,采用ELISA法检测细胞内和培养上清的HBsAg,HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测细胞内和培养上清中HBV DNA的水平。结果:随着PtPs浓度的增加细胞内的HBeAg和上清中的HBeAg、HBV DNA的水平显著下降。PtPs对细胞内和上清中HBeAg的抑制率高度相关,r=0.994,P<0.01。PtPs作用24 h后细胞内和上清中的HBeAg的治疗指数分别为5.63和3.30。结论:PtPs在体外对HBeAg和HBV DNA的合成与分泌有抑制作用。     

槐果碱体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg HBeAg的影响

目的:探讨槐果碱的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法:采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐果碱,以拉米夫定作阳性对照,作用9天后检测上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,观察药物对HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,同时以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,从而评价药物的抗HBV作用。结果:药物作用9天后,槐果碱对HepG2.2.15细胞的50%生长抑制率(TC50)为0.002M,对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的50%抑制率(IC50)为4.9uM,其治疗指数(TI=TC50/IC50)为408.16;而拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%。槐果碱对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%,但明显优于拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率。结论:槐果碱在体外具有显著的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,是一个高效低毒的抗乙肝病毒的有效药物。     

氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:体外观察氧化苦参碱(OM)抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并初步探讨其作用机制.方法:用125,250,500,1000,2000 mg·L-1OM连续作用于90％汇合度的HepG2.2.15细胞9d,以MTT比色法观察药物细胞毒性;用酶联免疫法测定细胞上清液中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定细胞上清液中HBV DNA,细胞中HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:OM对细胞内HBV DNA和cccDNA,以及细胞外HBV DNA均有抑制作用,随着浓度升高抑制作用加强,2000 mg·L-1OM对细胞内HBV DNA,cccDNA和细胞外HBV DNA的抑制率分别为64.56％,52.12％,54.25％;对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,且浓度越高、处理时间越长,抑制作用越明显;在相同条件下对HBsAg的抑制作用强于HBeAg,OM浓度为2000 mg·L-1时对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为51.59％,17.88％.结论:OM能有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制,该作用是抑制病毒核酸复制和基因表达的结果.     

乙肝转阴散对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的 :研究乙肝转阴散(YGZYS)对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)分泌的影响。 方法 :采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测YGZYS对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀);在TC₀基础上观察药物5个不同浓度作用于HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养4 d和8 d的细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。 结果 :TC₅₀ 5.386 g ·L^-1,TC₀ 0.736 g ·L^-1。提示YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,YGZYS能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg;且治疗指数(TI)均大于2,说明YGZYS为高效低毒的抗HBV药物。 结论 :YGZYS可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌,且毒性较低。     

HH胶囊抗乙肝病毒的体外(2.2.15细胞)实验研究

目的 研究HH胶囊体外抗2.2.15细胞乙肝病毒作用.方法 HepG2.2.15是最常用的乙肝病毒感染的体外实验模型,用不同浓度的HH胶囊干预2.2.15细胞,用CCK-8检测药物细胞毒性,酶联免疫法检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg),荧光定量聚合酶链反应法检测乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA).结果 HH胶囊可以不同程度降低细胞外HBsAg、HBeAg、HBV DNA及细胞内HBV DNA,此作用具有时间和药物浓度依赖性.结论 HH胶囊具有良好的抗HBV作用.     

槐定碱体外抗乙肝病毒的实验研究

目的 观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞分泌HbsAg、HBeAg和Pre-S1的影响,探讨槐定碱的体外抗乙型肝炎病毒作用.方法 采用HepG 2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐定碱,作用9天后收集上清液,用MTT法观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞的抑制作用,用ELISA法检测上清液中HBsAg、HBeAg和Pre-S1的分泌,观察药物对HepG 2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,从而评价药物的抗HBV作用.结果 槐定碱对HepG 2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为6.86E-3M.在该浓度下对HBsAg和HBeAg的50%抑制浓度(IC50)分别为0.339 mmol和0.356 mmol,治疗指数分别为20.21和19.26;浓度为0.001 mmol时对Pre-S1的抑制率为62.20%.结论 :槐定碱具有一定的抗HBV作用,属低毒有效药物.     

槐定碱体外抗乙肝病毒的实验研究

目的观察槐定碱对HepG2.2.15细胞分泌HbsAg、HBeAg和Pre-S1的影响,探讨槐定碱的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐定碱,作用9天后收集上清液,用MTT法观察槐定碱对HepG2.2.15细胞的抑制作用,用ELISA法检测上清液中HBsAg、HBeAg和Pre-S1的分泌,观察药物对HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,从而评价药物的抗HBV作用。结果槐定碱对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为6.86E-3M。在该浓度下对HBsAg和HBeAg的50%抑制浓度(IC50)分别为0.339mmol和0.356mmol,治疗指数分别为20.21和19.26;浓度为0.001mmol时对Pre-S1的抑制率为62.20%。结论:槐定碱具有一定的抗HBV作用,属低毒有效药物。     

阿德福韦酯固体脂质纳米粒体外抗病毒药效研究

 目的研究阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)经固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle,SLN)转运后的体外抗乙肝病毒药效。方法采用溶剂扩散法制备包载阿德福韦酯的固体脂质纳米粒(ADV-SLN),以紫外分光光度法测定药物包封率和载药量;以硬脂胺-异硫氰基荧光素标记SLN,通过荧光倒置显微镜观察HBVDNA转染人肝癌细胞HepG2.2.15对SLN的经时摄取情况;采用酶免疫测定试剂盒测定HbsAg,HBeAg指标,采用实时定量PCR试剂盒测定HBVDNA指标。结果ADV-SLN药物包封率为(16.72±2.81)%,载药量为(3.86±0.42)%。SLN可被HepG2.2.15有效摄取并具一定的时间依赖性。与游离药物相比,ADV经SLN转运后,对HepG2.2.15表达的HbsAg,HbeAg,HBVDNA的抑制作用均有明显增强。结论阿德福韦酯经SLN转运后,药物疗效增强,在抗乙肝病毒靶向治疗中体现出良好的应用前景。     

中国圆田螺多糖体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:探讨中国圆田螺多糖(PCC)体外抗乙肝病毒的生物学活性.方法:以HepG2 2.2.15细胞系为体外实验模型.MTT法检测细胞毒性,将不同安全浓度的PCC及阳性对照药物3TC作用于此细胞系,实验同时设不加药物的细胞对照,第9天收集细胞培养上清液.采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg水平,荧光探针定量PCR检测HBV-DNA含量.结果:PCC在HepG2 2.2.15细胞培养中的TCo为1g·L-1,TC50 ＞10 g·L-1,对细胞毒性较小.PCC对HepG2 2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌的IC50分别为0.501,0.401 g·L-1,SI分别为＞19.96和＞24.94.PCC可以有效抑制HBsAg,HBeAg的分泌,且PCC对HBeAg的抑制效果优于HBsAg.PCC在0.1,1g·L-1(P＜0.05)对HepG2 2.2.15细胞中的HBV-DNA有明显的抑制作用.结论:中国圆田螺多糖具有一定的体外抗HBV活性,且毒性较小,具有良好的应用前景.     

毛鸡骨草含药血清体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的:观察毛鸡骨草(Abrus mollis)含药血清体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采取中药血清药理实验方法,以HepG2.2.15细胞为研究模型,将毛鸡骨草含药血清加入HepG2.2.15细胞培养液中培养,分别在72 h和144 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞株表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBV DNA复制的影响。结果:毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的表达和HBV DNA复制都有不同程度的抑制,以给药剂量为30 g·kg-1·d-1的毛鸡骨草含药血清组作用144 h对HBsAg的抑制率和对HBV DNA复制的抑制率最明显,抑制率分别为34.4%和41.7%。结论:毛鸡骨草在体外有一定的抗HBV作用。     

毛鸡骨草醇提液对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面 抗原及乙型肝炎E抗原的影响

目的:观察毛鸡骨草体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采用MTT法检测毛鸡骨草对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定相似文献   

甘草甜素对HepG2．2．15细胞株HBV感染的影响

目的探讨甘草甜素（GL）对HepG2．2．15细胞上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的作用,及对细胞存活率的影响。方法实时荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,ELASA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞的增殖活性,计算细胞存活率。结果给药后各组HBsAg分泌结果显示总体均数间差异显著（P=0．000）,GL各组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,抑制作用存在剂量依赖关系;而对HBeAg水平的影响因剂量不同而表现为升高和降低两种趋势,除50pg／mL组外,其余各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但800μg／mL组HBeAg分泌增加,400μg／mL以下组为HBeAg降低;HBVDNA的表达显示GL各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但400pg／mL以下组为HBVDNA降低,800μg／mL组出现HBVDNA复制增强;MTT实验显示,200μg／mL以下3个剂量组均可促进细胞增殖（P〈0．01）,400、800μg／mL2组均显著抑制细胞增殖（P〈0．01）;MTT分别与HBeAg和HBVDNA水平呈显著负相关（P〈0．01）,但与HBsAg呈显著正相关（r=0．869,P=0．000）。结论GL对HepG2．2．15细胞株上清中的HBeAg和HBVDNA水平可能具有双向作用,而对HBsAg具有剂量依赖的抑制作用,提示GL的使用应注意选择适应证及合适的剂量。     

赋肝能抗病毒作用实验研究

 目的研究中药制剂赋肝能(由植物鹅绒蒌陵菜Potentilla asserina L.分离提取而得的主要活性成分)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法建立以HBV转染的人肝癌细胞系(Hep G2)2.2.15细胞系为体外模型,HBV静脉感染、血清DHBV DNA(duck hepatitis B virus DNA)呈强阳性的北京鸭为体内模型,分别观察2.2.15细胞含药培养基中HBsAg和HBeAg及鸭血清中DHBV-DNA水平。结果 体外实验中,8 d时,各剂量组赋肝能对HBsAg和HBeAg均有明显抑制作用。大剂量赋肝能对HBsAg和HBsAg有显著抑制作用(P＜0.01)。体内实验观察,大剂量和中剂量赋肝能对DHBV-DNA有明显抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),其抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。结论赋肝能对乙型肝炎病毒具有明显抑制作用,可能成为较好的治疗乙型肝炎的临床用药。     

替诺福韦体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究

 目的观察抗乙型肝炎病毒(HBV)核苷类似物替诺福韦体外对HBV复制的抑制作用。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性作用。将乙型肝炎病毒复制子pHBV1.3质粒转染HepG2细胞,在转染细胞培养液中加入不同浓度的替诺福韦,然后在不同时间段观察替诺福韦的抗病毒作用。ELISA检测培养上清中HbsAg,HBeAg的表达,荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测培养上清中HBV DNA拷贝数,Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果替诺福韦降低了培养上清中HbsAg,HBeAg水平及HBV DNA拷贝数,抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替诺福韦对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论替诺福韦在体外对HBV复制有较强的抑制作用,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎。