丝裂素活化蛋白激酶参与AngII诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ;以 10 -5mol·L-1PD980 5 9(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂 )预孵育 30min10 -7后再用AngII刺激为PD980 5 9组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ;免疫印迹法测定培养 2 4h时心肌细胞PDGF - β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 2 4h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,PD980 5 9可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。结论　丝裂素活化蛋白激酶参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

磷脂酶C在血管紧张素II诱导心肌细胞血小板衍生 生长因子受体表达中的作用

目的　探讨磷脂酶C在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以 10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ,以 10 -5mol·L-1U73 12 2 (一种特异性磷脂酶C抑制剂 )预孵育 3 0min为U73 12 2组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ,免疫印迹法测定培养 6h时心肌细胞PDGF- β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 6h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,U73 12 2可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。 结论　磷脂酶C参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

卡托普利对大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的　探讨卡托普利对肾性高血压大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)表达的影响。方法　复制二肾一夹高血压动物模型作为实验组 ,术后 4周开始给予卡托普利者作为治疗组 ,以未进行二肾一夹者为对照组。术后 8周测定动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK的表达。结果　与对照组相比 ,实验组动脉血压及心肌肥大指数显著升高 ,MAPK表达显著增强 (P <0 .0 1) ;卡托普利显著降低心肌MAPK的表达。结论　心肌MAPK表达增强可能是血管紧张素II介导的心肌肥大信号转导通路中的重要环节。     

肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ水平、碱性成纤维细胞生长因子和丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的观察肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达。方法20只健康雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,实验组制备二肾一夹高血压大鼠模型,假手术组大鼠未进行二肾一夹,观察2组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ含量、心肌组织bFGF与MAPK的表达。结果与假手术组比较,实验组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ水平明显增高(P<0.01,P<0.05),心肌bFGF与MAPK表达显著增强(P<0.05)。结论bFGF、MAPK参与肾性高血压大鼠心肌肥大的发生机制。     

肾性高血压大鼠肥大心肌丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)在肾性高血压致心肌肥大中的作用。方法　制作肾性高血压大鼠动物模型为实验组 ,观察术后第 4周、8周动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK表达的改变 ,并与对照组进行比较。结果　实验组大鼠术后第 4周、8周动脉血压持续升高、心肌肥大逐渐加重 ,第 4周、8周心肌MAPK表达分别显著高于对照组 (P<0 .0 5和P <0 .0 1)。结论　MAPK表达增强可能是肾性高血压时各种细胞外刺激因素介导心肌肥大发生的重要途径     

不同水平干预对AngⅡ作用心肌细胞活力的影响

目的：通过使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)两种亚型受体AT1-R、AT2-R拮抗剂(Valsartan和CGP42112A)及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)特异阻断剂，观察对心肌细胞活力的影响，探讨从受体和MAPK信号不同水平的阻断是否能有效干预心肌细胞能量代谢，为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据。方法：应用MTT比色法测定AngⅡ对培养心肌细胞活力的影响和AngII受体拮抗剂及MAPK抑制剂的干预作用。结果：AngⅡ刺激心肌细胞在10^-8～10^-5mol／L浓度范围，一定时间内呈浓度依赖性增加心肌细胞活力变化；使用Valsartan、PD98059可有效抑制AngII引起的心肌细胞活力改变；CGP42112A干预后对AngⅡ作用无明显影响。结论：AngⅡ的作用主要通过AT1-R介导；与细胞增殖、分化密切相关的ERK信号介入了心肌细胞能量代谢的过程，这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心力衰竭发生中的作用及临床上探讨细胞信号系统不同层面对心衰进行干预具有重要参考价值。     

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1抑制血管紧张素Ⅱ刺激的血管成纤维细胞活化

目的:观察丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的血管成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的影响.方法:用磷酸钙共沉淀的方法向血管成纤维细胞转染MKP-1的基因;测定培养的血管成纤维细胞内丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性、3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)及3H-脯氨酸参入.结果:10-7mol*L-1 AngⅡ刺激培养的血管成纤维细胞后其MAPK活性及3H-TdR参入较对照组增加293%(P<0.01)及190%(P<0.01);胶原的合成和分泌较对照组分别增加146%(P<0.01)和502%(P<0.01).而转染了MKP-1野生型基因的细胞与未转染时相比,AngⅡ诱导的MAPK活性和3H-TdR参入分别低65%(P<0.01)和67%(P<0.01);参入细胞内及介质中的3 H-脯氨酸分别低65%(P<0.05)和80%(P<0.01).转染MKP-1突变型及MKP-1空载体基因的细胞对于AngⅡ的上述各种刺激作用均无明显抑制.结论:MKP-1具有抑制AngⅡ刺激的血管成纤维细胞MAPK激活、成纤维细胞增殖及胶原合成和分泌的作用,提示MKP-1可能参与了AngⅡ刺激的血管重塑的调节.     

丝裂素活化蛋白激酶介导神经肽Y促心肌细胞肥大效应

目的 观察丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）在神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）及去甲肾上腺素（NE）促心肌细胞肥大过程中的作用。方法 进行原代乳鼠心肌细胞培养，使用髓磷脂碱性蛋白为底物，γ-^32P-ATP为磷酸基来源，测定在NPY、NE作用过程中MAPK活性的变化。结果 NPY、NE作用后5min内，MAPK活性即有明显升高，在15min达高峰，25min后仍显著高于对照组（P〈0．01）；二者合用可使MAPK活性进一步增高（P〈0．01）。结论 作为一种快速、有力的信息传递工具，信息共同通路MAPK在NPY、NE生物学信息传导过程发挥了重要作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导的新生小鼠心肌细胞肥大模型

目的 探索新生小鼠心肌细胞的原代培养方法,建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。方法 使用0.03%的胰酶+0.04%的2型胶原酶多次消化分离心肌细胞,差时贴壁法纯化心肌细胞。1μmol/L AngⅡ刺激心肌细胞肥大,α-actinin染色进行心肌细胞纯度鉴定及面积检测,实时定量RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物的表达,Western blot法检测蛋白质磷酸化水平。结果 培养得到的小鼠心肌细胞具有较高纯度及存活力;AngⅡ刺激后心肌细胞面积增大、蛋白合成增加,ANP、BNP、β-MHC等心肌细胞肥大标志物的mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而α-MHC表达则下降(P<0.05);此外,AngⅡ刺激组ERK、JNK与p38的磷酸化水平较对照组明显上调(P<0.05)。结论 使用改良的新生小鼠心肌细胞原代培养方法,成功培养了具有较高纯度及存活力的小鼠心肌细胞,并建立了AngⅡ诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。     

高糖刺激人脐静脉内皮细胞丝裂素活化蛋白激酶P38的表达

目的：探讨丝裂素活化蛋白激酶P38（P38MAPK）在糖尿病血管并发症中的作用。方法：采用体外培养和Western-blot等方法，以不同浓度D－葡萄糖及不同时间刺人脐静脉内皮细胞系，分别检测人脐静脉内皮细胞系P38MAPK的蛋白表达。结果：随D－葡萄糖浓度增加，P38MAPK磷酸化蛋白表达量增加；延长刺激时间，P38MAPK磷酸化蛋白表达量亦随之增加。结论：高糖引发的P38MAPK表达异常，可能在糖尿病血管并发症的发生、发展中起关键作用。     

高血压心肌肥大大鼠心肌丝裂素活化蛋白激酶的活性

目的：探讨高血压心肌肥大的细胞内信息传递途径。方法：选用１２０￣１４０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，随机分成两组（ｎ＝６）：（１）高血压组：制作腹主动脉狭窄和高盐摄入性高血压模型；（２）对照组：除不结扎腹主动脉和常规喂养外，其余操作同高血压组。饲养３０ｄ后，采用胶内髓磷脂硷性蛋白原位磷酸化法测定心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性，以＾３２Ｐ放射活性表示，采用ｔ检验和直线相关回归作统计学处理。结果：高     

高血压心肌肥大大鼠心肌丝裂素活化蛋白激酶的活性

目的：探讨高血压心肌肥大的细胞内信息传递途径。方法：选用１２０～１４０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，随机分成两组（ｎ＝６）：（１）高血压组：制作腹主动脉狭窄和高盐摄入性高血压模型；（２）对照组：除不结扎腹主动脉和常规喂养外，其余操作同高血压组。饲养３０ｄ后，采用胶内髓磷脂硷性蛋白原位磷酸化法测定心肌丝裂素活化蛋白激酶（Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）活性，以３２Ｐ放射活性表示，采用ｔ检验和直线相关回归作统计学处理。结果：高血压大鼠心肌ＭＡＰＫ活性较对照组升高约１倍（Ｐ＜０．０１），与血压呈正相关（ｒ＝０．６６，Ｐ＜０．０５），与左心室肥大程度呈正相关（ｒ＝０．９２，Ｐ＜０．０１）。结论：高血压心肌肥大的细胞内信息传递途径可能涉及ＭＡＰＫ系统。     

血小板衍生生长因子受体在膀胱癌中的表达意义

目的　探讨血小板衍生生长因子受体 (PDGFR)表达与膀胱移行上皮细胞癌发生、生物学行为及预后的关系 .方法　采用免疫组织化学技术——两步法检测 6 8例膀胱移行细胞癌和 10例正常膀胱组织 PDGFR表达及膀胱癌组织中微血管密度 (MVD) .结果　 PDGFR阳性染色分布于癌细胞、间质、血管及炎症细胞的胞质及胞膜 .膀胱癌组织PDGFR阳性率为 83.8% ,明显高于正常膀胱组织 (30 .0 % ,P<0 .0 1) ,膀胱癌组织中 PDGFR阳性表达组的微血管密度(MVD)明显高于 PDGFR阴性表达组 (85± 30 vs 36± 15 ,P<0 .0 1) .结论　 PDGFR表达与正常膀胱组织生长有关 ,过度表达与癌的形成、血管的形成及炎症细胞功能相关 ,未发现PDGFR表达与肿瘤分期、分级及预后相关 .     

丝裂素活化蛋白激酶介导^60Coγ射线抑制血管平滑肥细胞增生的机制

目的：研究^60Coγ射线对平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法：采用同位素技术，测定^3H-TdR掺入和丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性。结果：14、28Gy^60Coγ射线明显抑制平滑肌细胞增殖，同时MAPK活性明显下降。结论：^60Coγ射线抑制平滑肌细胞增殖可能是通过降低MAPK活性途径实现的。     

大鼠胸主动脉球囊成形术后血管壁丝裂素活化蛋白激酶…

丝裂素活化蛋白激酶与大鼠胸久动脉内皮剥脱术后平滑肌细胞增殖的关系。将剥脱术后的Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为两组，分别于术后７天和１４天时处死取材，其血管条分别做＾３Ｈ－ＴｄＲ参入和ＭＡＰＫ活性测定，并与假手术组相比较。结果：剥脱术后７天和１４天与假手术组相比，＾３Ｈ－ＴｄＲ参入分别是后者的２．６倍和２．０倍，ＭＡＰＫ活性分别为７．６％倍和２．４倍。     

钙离子,血管紧张素Ⅱ受体在血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质…

通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨血管紧张素Ⅱ受体，Ｃａ＾２＋在血管紧张素Ⅱ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察血管紧张素Ⅱ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达，结果发现培养液中加入钙通道阻断剂（ｖｅｒａｐａｍｉｌ），细胞外钙螯合剂（ＥＧＴＡ），肌浆网钙释放抑制剂（ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ）和细胞内钙螯合剂（Ｆｕｒａ－２／ＡＭ）可使血管紧张素Ⅱ介导的＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量较单独加血管     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP1)对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 转染MKP1质粒72h后，收集培养的血管平滑肌细胞(VSMC)，利用P^42／P^44磷酸化抗MAPK抗体通过免疫印迹法测定MAPK活性，用流试细胞仪测定细胞周期、细胞周期素和P27蛋白的表达。结果 转染MKP1质粒后，MAPK活性明显下降，VSMC阻滞于G0-G1期，同时抑制了细胞周期素D、E的表达，P27蛋白表达却明显增加。结论 MKP1抑制VSMC增殖可能是通过降低MAPK活性，抑制细胞周期素表达和增加P27蛋白表达途径实现的。     

血管紧张素Ⅱ 1型受体和血小板源性生长因子在原发性肝细胞癌中的表达和意义

目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和血小板源性生长因子(PDGF)在原发性肝细胞癌的表达及与临床特征之间的关系。方法:免疫组化法检测36例原发性肝细胞癌组织中AT1和PDGF表达,并以17例正常肝组织为对照。结果:肝癌组织中AT1和PDGF阳性率分别为88.9%和80.5%;2者在低分化组表达强度均高于高分化组(P<0.001);有转移者表达强度([8.17±0.75)和(6.67±0.82)]高于无转移者([4.23±2.23)和(3.80±2.44);]术前化疗组([6.86±1.35)和(6.57±0.98)]高于未化疗组([4.41±2.51)和(3.72±2.43);]AT1和PDGF二者呈正相关关系(r=0.883,P<0.001)。结论:AT1和PDGF在原发性肝细胞癌中高表达,可能在肝细胞癌的增殖、转化和转移过程中起重要作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。