N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导大鼠肝细胞内质网应激的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响.方法:培养大鼠肝细胞系BRL细胞,用NAC或LPS分别或共同处理BRL细胞,其中共同处理时把NAC加入培养液中预处理1h再给予LPS处理肝细胞.用锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微技术检测肝细胞凋亡的形态学变化;免疫印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3的表达.结果:与溶剂对照组比较,LPS能时间依赖性地引起肝细胞细胞活力显著降低和细胞凋亡增多,诱导内质网应激标志蛋白GRP78表达明显上调;NAC预处理抑制LPS引起细胞存活率降低和细胞凋亡增多,并且能显著抑制LPS诱导的GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3表达上调.结论:NAC通过阻断LPS诱导的肝细胞内质网应激而减轻肝细胞损伤.     

基于整合生物信息学构建的肺腺癌内质网应激相关预后模型

目的 通过整合生物信息学建立内质网应激风险模型,预测肺腺癌(LUAD)患者的预后。方法 本文从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载数据集,采用单因素、多因素Cox回归分析和Lasso回归分析等方法,筛选和LUAD预后有关的内质网应激相关基因,建立预后风险模型。结果 本研究筛选出8个关键基因,其中,MBTPS2、SEC61G、FURIN和PKP2表达水平与LUAD预后良好呈负相关(P<0.05),EIF2AK3、CAV3、SELENOK和NLRP1表达水平与LUAD预后良好呈正相关(P<0.05)。结合临床特征建立内质网应激风险模型并绘制受试者工作特征曲线,预测1、2、3 a总生存期的曲线下面积分别为0.75、0.75和0.77,提示模型对患者总生存期的预测准确性。结论 本研究提出了1个可作为LUAD独立预后因素的内质网应激风险模型,有助于了解LUAD的致病分子机制及开发新的治疗靶点。     

内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制

目的 利用毒胡萝卜素诱导肝细胞内质网应激模型,观察在内质网应激状态下肝细胞脂肪沉积情况,并初步探讨其分子机制.方法 以人L02、HepG2肝细胞株为研究靶细胞,将两种细胞均分为正常对照组和实验组(培养液内含毒胡萝卜素1 μmol/L),采用三酰甘油(TG)试剂盒、油红O染色检测肝细胞脂肪沉积情况,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c、LXRs的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测GRP78、SREBP-1c、LXRs的蛋白表达情况.结果 蛋白质印迹结果显示,实验组GRP78的表达较对照组升高(P＜0.05),表明肝细胞内质网应激模型建立成功.在内质网应激状态下,毒胡萝卜素作用48 h后实验组L02与HepG2细胞脂肪沉积均较对照组增加(P＜0.01).与对照组相比,实验组L02和HepG2细胞SREBP-1c在基因水平和蛋白水平表达均升高(P＜0.05),而LXRs在基因水平和蛋白水平的表达均无变化.结论 内质网应激可能通过上调SREBP-1c诱导肝细胞脂肪沉积,而LXRs未参与该过程.     

内质网应激在肝细胞凋亡中的意义

目的:探讨内质网应激在肝细胞凋亡中的意义。方法:原位二步灌流法分离并培养BALBC小鼠原代肝细胞,化学合成法制备抗半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12小分子干扰RNA(caspase-12 siRNA),脂质体包裹转染小鼠原代肝细胞。毒胡萝卜内酯4μmol/L诱导肝细胞凋亡。RT-PCR、Western blot检测抑制效果;MTT比色试验检测细胞活力,反映细胞凋亡。结果:siRNA对小鼠原代肝细胞caspase-12 mRNA在浓度200nmol/L时抑制率为86.22%;对凋亡细胞procaspase-12抑制率为50.04%,与单纯诱导凋亡细胞差异有统计学意义(P<0.01);MTT比色试验检测发现,与单纯诱导凋亡细胞相比,转染siRNA后细胞活力增高51.65%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制内质网应激介导细胞凋亡的特异酶caspase-12,能在一定程度上阻抑小鼠原代肝细胞凋亡的发生,内质网应激在肝细胞凋亡中具有重要意义。     

中药调节内质网应激的研究进展

<正>内质网(endoplasmic reticulum, ER)是一种高度动态的细胞器,生理条件下内质网主要负责大多数蛋白的合成、折叠、组装、修饰以及脂质合成和Ca2+储存,当病理条件下新合成的蛋白质聚积并超过了内质网的最大处理能力,即可触发多种信号反应,即内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)[1]。中药可通过调控真核细胞内质网应激从而延缓疾病的发生与发展,因此,将内质网应激的定义与机制、     

内质网应激在眼科疾病中的研究进展

内质网是一种负责蛋白质合成、折叠以及转运,脂类生物合成,空泡运输以及胞内钙存储的多功能细胞器。内质网腔内未折叠蛋白质的蓄积及钙离子稳态的打破,诱发内质网应激,发生具有保护性的未折叠蛋白反应。内质网应激与多个信号通路相互联系,参与炎症、凋亡的发生发展,近年来得到越来越多的关注。本文就内质网应激发生机制及相关的眼科疾病的研究进展作一综述。     

内质网应激对T细胞抗肿瘤功能调控的研究进展

内质网应激参与肿瘤的发生与发展,近年来,内质网应激对T细胞发育和功能调控的研究也逐渐深入。肿瘤微环境中浸润的T细胞内质网应激的发生加剧T细胞的耗竭,损害T细胞抗肿瘤免疫功能。内质网应激抑制剂的使用可以减轻T细胞的耗竭程度,改善肿瘤微环境中T细胞的抗肿瘤功能。此外,一些时钟基因如Per1和Per2的下调也促进了T细胞耗竭的进展,而内质网应激通路的效应分子能够调控生物钟网络中Per基因家族的转录,增强T细胞的免疫功能。本文就内质网应激调控T细胞的抗肿瘤功能进行论述,为肿瘤免疫治疗提供新策略。     

糖尿病血糖漂移下内质网应激对海马神经元的影响

目的研究内质网应激通路相关蛋白在糖尿病血糖漂移状态下对糖尿病大鼠海马CA1区神经元的影响,探讨波动性高血糖加重糖尿病脑组织损伤可能的发病机制。方法 65只SD大鼠随机分为正常对照组(n=15)和糖尿病模型组(n=50),糖尿病模型组以1%链尿佐菌素腹腔注射法造模。将造模成功的46只糖尿病模型组大鼠随机分为持续高血糖组(n=20)和波动高血糖组(n=26),波动高血糖组制作血糖漂移模型。波动造模6周后统计各组大鼠每日血糖平均水平(MBG)、每日血糖平均水平的标准差(SDBG)、最大血糖波动幅度(LAGE)。用免疫组化法观察海马CA1区肌醇依赖的跨膜蛋白激酶1(IRE1)和Bcl-2表达情况,用Western blot法测定海马组织CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况。结果波动高血糖组的SDBG、LAGE明显高于正常对照组及持续高血糖组(P<0.05),MBG低于持续高血糖组及正常对照组(P<0.05)。波动高血糖组IRE1、CHOP、GRP78表达较持续高血糖组及正常对照组明显升高(P<0.05);Bcl-2表达较持续高血糖组、正常对照组显著下降(P<0.05)。结论糖尿病血糖漂移状态促进海马神经元内质网过度应激从而加重损伤。     

内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响

目的 探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响.方法 制备搪尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT) C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子( GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达.分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5 μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8 μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达.结果 糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P ＜0.001).经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P＜0.05).结论 糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高.体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufml的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程.     

内质网应激介导的肝细胞凋亡在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 研究在D-氨基半乳糖(D-Galn)/脂多糖(LPS)联合腹腔注射诱导小鼠急性肝衰竭模型中内质网应激介导肝细胞凋亡的作用,从而为急性肝衰竭的治疗提供思路。方法 以雄性巴比塞(BALB/c)小鼠为研究对象,腹腔注射D-GalN 800 mg/kg联合LPS 10μg/kg建立小鼠急性肝衰竭模型。动物实验分组：对照组(仅给予相应量的磷酸盐缓冲液)、急性肝衰竭模型组和4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6 h尾静脉注射)。同时将急性肝衰竭模型组按照给药时间进一步分为1 h、5 h、7 h三个亚组,蛋白质印迹法(Western blot)方法检测各亚组与对照组间内质网应激蛋白标志物78 kDa糖调节蛋白(GRP78)、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/ERP的同源蛋白(CHOP),促凋亡因子Caspase-12和Caspase-3蛋白表达情况。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平评估肝脏功能,观察肝组织病理变化评价肝损伤程度。结果 Westernblot结果显示,与对照组比较,内质网应激蛋白标志物GRP78、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/E...     

大鼠肝细胞线粒体周围内质网的三维重建

目的：研究肝细胞线粒体与内质网的空间结构关系。 方法：通过连续超薄切片重建线粒体与其周围内质网的三维模型,结果：连续超薄切片和三维模型显示：除极少量的线粒体与脂滴直接接触外,几乎每个线粒体都被内质网所包裹,大多数线粒体周围既有RER又有小囊泡状SER,少数线粒体则仅有小的SER。这些内质网与线粒体紧贴如同线粒体外壳,二者的间隙小于30nm,其间无任何其它细胞器。结论：肝细胞线粒体通常在内质网包绕下执行生理功能,二者形成的结构和功能紧系的整体。     

内质网应激与神经系统疾病

内质网（endoplasmic reticulum,ER）是真核细胞中最重要的细胞器之一,附在内质网膜上的各种酶为生命活动过程中各种化学反应的正常进行创造必要条件。ER在细胞内具有正确蛋白质的合成转运、信号肽识别和糖基化修饰、钙离子的贮存和调节、信号转导等生理功能。     

内质网应激与肾脏纤维化

内质网应激是机体对各种病理生理刺激的一种自身应答机制,适度的内质网应激可以恢复内质网稳态以维持细胞生存;而持久或严重的内质网应激则可能导致细胞程序性死亡或凋亡,造成器官损害.研究已证实内质网应激与多种肾脏疾病如糖尿病肾病、膜性肾病、急性肾小管-间质损害、肾脏衰老、肾间质纤维化等密切相关;本文将主要对内质网应激在肾脏纤维化进展中的作用作一综述.     

内质网应激与相关眼科疾病

内质网是一个非常重要的细胞器.当内质网应激发生,细胞内信号分子活化,启动未折叠蛋白反应,细胞最终得以适应性存活或者启动凋亡.诸如白内障、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)、青光眼、色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa,RP)等眼科疾病的发生和发展都与内质网应激过程密切相关,就此研究动态予以综述.     

内质网应激参与细胞脂肪变性的研究

目的阐述内质网应激是否参与了游离脂肪酸(FFA)诱导的细胞脂肪变性模型的脂变形成过程,并探讨二甲双胍对内质网应激的潜在影响。方法将HepG2细胞按培养液成分不同分为4组:空白对照组,二甲双胍组,游离脂肪酸组以及干预组。HepG2细胞培养24h后,检测细胞活力和脂质含量。以反转录PCR和Western blotting检测各组葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)表达水平。结果游离脂肪酸组诱导的细胞脂肪变性的HepG2细胞的甘油三酯、GRP78和SREBP1c的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。同时,干预组的甘油三酯、GRP78和SREBP1c的mRNA和蛋白的表达水平均有所下降,但是没有显著性差异。结论内质网应激参与了游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型的脂变形成过程。内质网应激可能是非酒精性脂肪肝发病机制中新的干预靶点和治疗靶点。     

肝宁方对衣霉素诱导肝细胞内质网应激生存信号分子的影响

目的 研究肝宁方对衣霉素诱导的人肝细胞内质网应激条件下的生存信号分子的影响。方法 将肝细胞分正常组、模型组、治疗组：正常组给予正常大鼠血清培养基培养48h,模型组在正常组基础上给予衣霉素诱导48h,治疗组在模型组基础上给予肝宁方继续培养24h。Western blot法检测各组蛋白ATF6、IRE1α、PERK、GRP78的表达量,分析蛋白表达差异。结果 肝宁方治疗组与衣霉素诱导模型组比较,治疗组内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显减少（P<0.05）;模型组与对照组比较,模型组GRP78、内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显增多（P<0.05）。结论 衣霉素诱导正常肝细胞后可激活ATF6、IRE1α、PERK及GRP78蛋白的表达,肝宁方对衣霉素诱导内质网应激生存信号分子蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达及内质网应激标记蛋白均有抑制作用,从而达到阻止未折叠蛋白的错误激活、抑制肝细胞凋亡,对肝细胞具有保护作用。     

内质网应激与乙型肝炎关系的研究进展

未折叠蛋白或者错误折叠蛋白在内质网内的大量聚集,影响内质网的稳态和正常功能,引发未折叠蛋白反应,称为内质网应激。许多研究表明,乙型肝炎患者肝细胞中都存在内质网应激。本文将以内质网应激作为切入点,阐明内质网应激的作用功能及其与乙型肝炎之间的关系。     

内质网应激在胰岛损伤中作用的研究进展

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是由未折叠与错误折叠蛋白质在内质网腔中积聚引起的一种特殊的细胞内应激。细胞在氧化应激、炎症、钙离子紊乱等多种刺激因素下,内质网稳态被破坏,继而诱发ERS。适应性的ERS通过未折叠蛋白质反应以及保护性自噬恢复内质网稳态,发挥细胞保护作用;严重和持续的ERS将会诱导凋亡、焦亡、自噬等不同类型的细胞死亡。胰岛对氧化应激等介导的损伤非常敏感,不同程度的ERS可与氧化应激、炎症等途径协同作用调节胰岛功能。因此,有效调控ERS可能为糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。