虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 小鼠成纤维L929细胞分为阴性对照组、金合金组、镍铬合金组和铜合金组,各组细胞培养48h后,MTT实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 金合金组和镍铬合金组细胞增殖率与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,铜合金组细胞细胞增殖率显著低于阴性对照组（P<0.01）;金合金组G₁期、S期和G₂期细胞与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组G₁期细胞显著低于阴性对照组,S期和G₂期细胞显著高于阴性对照组（P<0.05）;金合金组细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达均显著高于阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于阴性对照组（P<0.01）。结论 金合金组、镍铬合金组和铜合金组对成纤维细胞增殖凋亡均有一定的影响,金合金组的影响最小,不同齿科合金引起成纤维细胞凋亡的机制可能与调控Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

AAV6-hNGFβ转染对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用与PI3K/Akt信号通路的关系

目的 观察转染AAV6-hNGFβ对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury)的保护作用与PI₃K/Akt信号通路之间的关系。方法 健康雄性SD大鼠72只,体质量250~300g,随机分为4组(n=18),即假手术组、模型组、hNGFβ组(模型组+AAV6-hNGFβ-EGFP)和阴性对照组(模型组+AAV6-EGFP)。hNGFβ组、阴性对照组和模型组均采用脑缺血再灌注模模型,并于造模后分别在股静脉注射AAV6-hNGFβ-EGFP 、AAV6-EGFP和等量0.9%氯化钠注射液,测定不同病程(1、2、4周)大鼠神经功能评分和脑梗死体积,TUNEL法检测神经细胞凋亡,以及脑内皮质NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著升高,NGF表达显著下降,PI₃K/Akt通路受到抑制,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阴性对照组神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数无明显变化,NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax表达水平接近;与模型组和阴性对照组比较,hNGFβ组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著降低,NGF表达显著升高,PI₃K/Akt通路得到激活,Bcl-2蛋白表达也显著升高,Bax蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染AAV6-hNGFβ-EGFP可提高NGF表达,激活大鼠PI₃K/Akt通路,提高Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白增加,对大鼠脑缺血再灌注损伤起到保护作用。结论 转染AAV6-hNGFβ可激活大鼠PI₃K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白同时抑制Bax蛋白表达,从而保护大鼠脑缺血再灌注损伤。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨白藜芦醇改善大鼠化疗性卵巢损伤的机制

目的 基于PI₃K/Akt/mTOR信号通路探讨白藜芦醇改善大鼠的化疗性卵巢损伤的分子机制。方法 30只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、化疗组(顺铂组)、化疗给药组(白藜芦醇+顺铂组),实验时间共21天。化疗给药组大鼠给予白藜芦醇25mg/(kg·d)灌胃,化疗组给予0.9%NaCl溶液。在实验的第15天,除对照组,其余两组均给予单剂量5mg/kg的顺铂腹腔注射。1周后取大鼠卵巢制作石蜡切片,采用苏木精-伊红染色(HE)观察卵巢形态及卵泡发育情况。原位缺口末端标记法(TUNEL)检测分析卵巢组织的调亡情况。蛋白免疫印迹实验(Western blot)法分析比较卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化水平的蛋白表达差异。结果 与对照组比较,化疗组卵巢萎缩,黄体退化,各级生长卵泡数明显减少;卵巢细胞的凋亡数目增多,凋亡指数升高(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均下降(P＜0.01)。化疗给药组与化疗组比较,可见卵巢结构较化疗组有明显改善,间质纤维化程度有所减轻,且可见一定数量的黄体,各级生长卵泡数增多;卵巢细胞凋亡数目减少,凋亡指数降低(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均上升(P＜0.01)。结论 白藜芦醇能改善顺铂化疗导致的大鼠卵巢损伤,其机制可能与激活PI₃K/Akt/mTOR信号通路有关。     

番茄红素对人骨肉瘤细胞顺铂增敏作用及机制研究

目的 研究番茄红素（lycopene,LP）对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗敏感度的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法 体外培养并取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组、LP组（10μg/ml）、顺铂组（40μg/ml）和联合组[LP（10μg/ml）+顺铂（20μg/ml）];药物干预48h后,采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞周期和细胞凋亡状况,反转录PCR（RT-PCR）法检测Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2比值,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测caspase-3蛋白表达。结果 联合干预组与顺铂组比较发现,联合干预组人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,细胞周期G₀/G₁期显著延长（P<0.05）、S期和G₂/M期显著缩短（P<0.05,P<0.01）,细胞凋亡率（apoptosis index,AI）显著升高（P<0.01）,Bax mRNA表达明显上调、bcl-2 mRNA表达显著下调（P<0.05）且Bax/bcl-2比值显著升高（P<0.01）,caspase-3蛋白表达上调（P<0.01）。LP组与空白对照组比较发现,LP组MG-63细胞周期明显改变（G₀/G₁期延长、G₂/M期缩短）,bcl-2 mRNA显表达著下调（P<0.05）、Bax/bcl-2比值显著升高（P<0.05）,caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 LP具有提高人骨肉瘤MG-63细胞顺铂敏感度的药理学作用,其机制可能与LP能够阻滞细胞周期以及调节凋亡相关调控基因和蛋白表达有关。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞及 bcl-2、caspase-3 基因表达的影响

目的 研究昆布多糖硫酸酯 (LAMS) 对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞株的作用,以及对 bcl-2 和 caspase-3 基因表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法 分别用 0、50、100、200 μg/mL LAMS 作用于 PC-3 细胞,用 WST-8 法检测细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术 (FCM) 分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察 PC-3 细胞形态,RT-PCR 和 Western blotting 检测细胞增殖、凋亡相关基因 bcl-2 和 caspase-3 mRNA 及蛋白的表达。结果 LAMS 能抑制 PC-3 细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同质量浓度 LAMS 诱导 PC-3 细胞出现剂量依赖性 S+G₂ 期阻滞;LAMS 作用于 PC-3 细胞后出现凋亡的形态学改变,LAMS 对 PC-3 细胞 bcl-2 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对 PC-3 细胞 caspase-3 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论 LAMS 能抑制体外 PC-3 细胞的生长,并促进其 S+G₂ 期阻滞和凋亡,LAMS 影响 PC-3 细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

野马追内酯O诱导三阴性乳腺癌BT-20细胞凋亡的作用机制研究

[目的] 通过体内外实验探究野马追内酯O(eupalinolide O,EO)对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。[方法] 采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度,以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5 μmol·L-1组、EO 10 μmol·L-1组,后两组以EO处理24 h,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞,建立乳腺癌模型,并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg-1),EO低剂量组(15 mg·kg-1)和EO高剂量组(30 mg·kg-1),每组6只。除对照组外,各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d,期间测量体表肿瘤体积;结束后称取肿瘤质量,并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达。采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X protein,Bax)、聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3)和活化的半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9,cleaved caspase-9)蛋白表达。 [结果] EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性。与空白对照组比较,EO 5、10 μmol·L-1组细胞毒性和凋亡率增加(P＜0.05,P＜0.01),且EO 10 μmol·L-1组的细胞周期明显阻滞于G2/M期(P＜0.01)。与对照组比较,阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低(P＜0.01,P＜0.05),肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低(P＜0.01),肿瘤体积随治疗进展显著缩小(P＜0.01,P＜0.05)。与空白对照组比较,各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05);与对照组裸鼠比较,各给药组的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05)。[结论] EO在体内外抑制BT-20细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关。     

熊果酸抑制AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大实验研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其可能机制。方法 按常规方法分离并培养新生大鼠心肌细胞。CCK-8法确定UA（2、4、8、16μmol/L）对心肌细胞的最佳作用浓度,利用AngⅡ诱导建立新生大鼠心肌细胞肥大模型。实验分对照组（control组）、AngⅡ组、UA干预组、LY294002（PI₃K/Akt通路抑制剂）干预组共4组。UA和LY294002均预处理心肌细胞30min。以心肌细胞表面积、β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA和脑钠肽（BNP）mRNA表达作为心肌细胞肥大标志,同时使用蛋白免疫印迹法检测T-Akt（total Akt）和p-Akt（phospho-Akt）蛋白表达。结果 显微镜下观察各组心肌细胞生长良好。与control组相比,AngⅡ组和UA干预组大鼠心肌细胞表面积增加（P<0.05）,LY294002干预组心肌细胞表面积差异无统计学意义（P>0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组大鼠心肌细胞表面积减小（P<0.05）。与control组相比,AngⅡ组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达显著增加（P<0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均降低（P<0.05）;UA干预组和LY294002干预组之间p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均差异无统计学意义（P>0.05）;4个实验组间T-Akt蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 （1）AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大模型中,心肌细胞表面积增加,BNP mRNA和β-MHC mRNA表达升高,同时伴有p-Akt蛋白表达增加,提示PI₃K/Akt通路在AngⅡ致心肌细胞肥大中起重要作用。（2）UA能减轻AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小,p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达减少,这与LY294002作用一致,提示UA可能是通过抑制PI₃K/Akt通路而发挥抗心肌肥大作用。     

藏红花素通过调控PI3K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松

目的 探究藏红花素通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松。方法 建立去卵巢骨质疏松小鼠模型,再每天给予雌激素(25μg/kg)和藏红花素(20mg/kg)灌胃治疗,另设假手术组,每天给予等量蒸馏水灌胃。术后4周开始连续灌胃12周,称量动物体质量,双能X线测量骨密度,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨组织病理形态,全自动生化分析仪检测小鼠血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、尿钙(U-Ca)、尿磷(U-P)、尿肌酐(Cr)含量,ELISA检测小鼠血清骨钙素(osteocalcin,OC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平。体外原代培养小鼠成骨细胞,利用ALP染色鉴定成骨细胞。加入藏红花素和LY249002,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)及其磷酸化水平的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 与假手术组比较,模型组小鼠体质量迅速增加,骨密度降低,骨小梁分布稀疏,尿液中U-Ca、U-P、Cr含量升高,血清中OC、ALP水平也升高,骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达下调;与模型组比较,雌激素组和藏红花素组小鼠体质量增加缓慢,骨密度增加,改善骨小梁分布和排列,降低尿液中U-Ca、U-P、Cr含量和血清中OC、ALP水平,上调了骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达。在成骨细胞中,与假手术组比较,模型组成骨细胞凋亡增多,下调p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与模型组比较,藏红花素组抑制了成骨细胞凋亡,上调了p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与藏红花素组比较,藏红花素+LY249002组抵消了藏红花素对成骨细胞凋亡的抑制作用。结论 藏红花素抑制了骨质疏松症发生和进展,可能是通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡来介导的。     

lncRNA AK126393通过PI3K/Akt通路调节结直肠癌细胞的增值与凋亡

目的 探索长链非编码 RNA (long non-coding RNA,lncRNA)AK126393在人结直肠癌细胞中的作用机制。方法荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常结肠组织细胞系与结直肠癌细胞系中lncRNA AK126393表达,选取最低表达细胞系进行转染lncRNA AK126393过表达质粒和阴性对照(NC),采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Western blot法检测Bcl2、Bax、PI₃K、P-PI₃K、Akt、P-Akt和LC3蛋白表达。结果 lncRNA AK126393在结直肠癌细胞系中呈现低表达,其中SW480细胞表达最低;过表达质粒转染SW480细胞后lncRNA AK126393相对表达水平显著升高;细胞增值能力显著降低,细胞凋亡水平增加;Western blot法检测结果显示Bcl2、LC3-Ⅱ、P-PI₃K、P-Akt蛋白表达明显升高,Bax和LC3-Ⅰ蛋白表达明显降低,PI₃K和Akt蛋白表达无明显变化。结论 lncRNA AK126393可以通过抑制PI₃K/Akt信号通路激活实现抑制结直肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡以及引起细胞自噬的作用。     

CT-707对缺氧微环境下肝癌细胞能量代谢和细胞周期的影响及作用机制

目的 研究CT-707对缺氧微环境下肝癌细胞能量代谢和细胞周期的影响及作用机制。方法 HepG2细胞分为对照组和CT-707高(6μmol/L)、中(3μmol/L)、低(1.5μmol/L)剂量组,缺氧(2%O₂)条件下培养,采用CCK8法测定细胞活力,HK及LDH试剂盒检测细胞中HK酶活力及LDH含量,Western blot法检测cyclinD1、cyclin E、p-FAK/FAK、p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达。构建HepG2细胞裸鼠皮下成瘤模型,分为模型组和CT-707高(100 mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)剂量组,每组8只,观察并测量肿瘤质量及体积,采用HE染色进行瘤组织病理学观察,免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA的表达。结果 与对照组比较,CT-707各剂量组均可显著降低HepG2细胞活力、HK活性及LDH含量,显著下调cyclin D1、cyclin E、p-FAK/FAK、p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组(P<0.05),中、高剂量组间结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,CT-707各剂量组均可显著减小瘤质量和瘤体积,降低PCNA的蛋白表达水平(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组(P<0.05),中、高剂量组间结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT-707可抑制缺氧环境下肝癌细胞能量代谢,进而诱导细胞周期阻滞,抑制肿瘤生长,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/GSK-3β信号通路激活相关。     

百里醌诱导膀胱癌细胞凋亡作用机制的研究

目的 探讨百里醌对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响及对其诱导凋亡的潜在作用机制。方法 应用CCK8法检测细胞增殖活性, Hoechst33258染色法检测细胞凋亡, 荧光定量PCR检测基因Bcl-2、Bax、caspase-3、c-myc mRNA的表达水平, Wsetern blot法检测不同浓度百里醌作用后Bcl-2、Bax、c-myc蛋白表达水平的变化。结果 细胞增殖抑制曲线结果显示百里醌能明显抑制BIU-87细胞增殖, 其24、48、72h半数抑制浓度(IC₅₀)分别是38.75±0.58、34.33±1.01和32.43±0.71μmol/ L。百里醌能以剂量依赖性方式诱导膀胱癌细胞凋亡。百里醌作用于BIU-87细胞后, Bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-myc蛋白的表达量呈浓度依赖性降低, 而caspase-3、Bax mRNA及caspase-3、Bax蛋白表达水平呈浓度依赖性递增。结论 百里醌能抑制BIU-87细胞的增殖, 且能诱导BIU-87细胞的凋亡, 其诱导凋亡机制可能与Bcl-2、c-myc表达水平降低及caspase-3、Bax表达水平上调有关。     

丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响及机制研究

目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。     

西洋参茎叶总皂苷对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠的作用效应及机制研究

目的 研究西洋参茎叶总皂苷(PQS)对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠的作用效应及机制。方法建立PCOS-IR大鼠模型,分为正常组、模型组、PQS低剂量组(30mg/kg)和PQS高剂量组(60mg/kg),每组10只。给药4周后,ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察卵巢组织形态学变化;免疫组化检测卵巢组织Bcl-2和Bax表达;Western blot法检测PI₃K、p-PI₃K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现典型多囊样改变,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数均显著升高,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著减少,Bax表达显著升高;与模型组比较,PQS组大鼠卵巢组织多囊样改变显著改善,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数显著降低,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著升高,Bax表达显著降低。结论 PQS对PCOS-IR大鼠具有显著治疗效应,机制可能与激活卵巢组织PI_3k/Akt信号通路,调控Bcl-2与Bax分子的表达相关。     

银杏内酯A、B混合物抑制永久性大脑中动脉栓塞大鼠神经细胞JNK凋亡途径

目的 研究银杏内酯A、B混合物（GKAB）对永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法 取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、pMCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组（仅分离动脉而不阻断）外,其余4组均采用阻断右侧大脑中动脉的方法制备大鼠pMCAO模型。GKAB处理低、中、高剂量组于术后10 min分别经舌下静脉注射GKAB 12.5、25、50 mg/kg,假手术组、pMCAO模型组给予中剂量组药物等容量的生理盐水。用药12 h后,采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡率,免疫组织化学法检测神经细胞磷酸化JNK（p-JNK）表达,蛋白质印迹法检测脑组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、细胞色素C（Cyt C）、caspase-9、caspase-3以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与假手术组相比,pMCAO模型组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK表达水平均增加（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均升高（P<0.01）,Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达均降低（P<0.01）;给予GKAB处理后,与pMCAO模型组比较,GKAB处理低、中、高剂量组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK水平均降低（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达也呈下降趋势（P<0.01）,而Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达呈升高趋势（P<0.01）,并表现出一定的剂量依赖性。与假手术组相比,pMCAO模型组神经细胞胞质Cyt C表达升高,线粒体Cyt C表达降低（P<0.01）;与pMCAO模型组比较,GKAB低、中、高剂量组神经细胞胞质Cyt C表达逐渐降低,线粒体Cyt C表达逐渐升高（P<0.05,P<0.01）。结论 GKAB可抑制pMCAO大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与其抑制JNK磷酸化、抑制JNK信号通路的激活、阻断线粒体凋亡途径有关。     

苯丁酸钠通过下调CLDN4基因DNA甲基化对喉鳞状细胞癌增殖与凋亡的作用研究

目的 观察苯丁酸钠对喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞株 Hep-2增殖及凋亡的作用,探讨其作用机制与紧密连接蛋白4(claudin4,CLDN4)基因甲基化的相关性。方法 使用0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mmol/L的苯丁酸钠分别处理Hep-2细胞24h,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测Hep-2细胞增殖、细胞周期与细胞凋亡,细胞免疫荧光法检测Hep-2细胞中caspase-3表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Hep-2细胞中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a)mRNA表达水平,免疫印迹试验(Western blot)法检测Hep-2细胞CLDN4蛋白表达水平,利用甲基化特异性 PCR 法(MSP)分析苯丁酸钠对Hep-2细胞CLDN4基因甲基化的影响。结果 苯丁酸钠呈剂量依赖地抑制Hep-2 细胞增殖,使细胞周期阻滞在 G₀/G₁期,并诱导细胞凋亡;4.0mmol/L苯丁酸钠处理Hep-2 细胞后,caspase-3 蛋白表达明显增加;苯丁酸钠处理Hep-2 细胞后,CLDN4蛋白表达水平随苯丁酸钠浓度增加而升高,而DNMT1、DNMT3a mRNA表达水平随苯丁酸钠浓度增加而下降;苯丁酸钠作用后CLDN4基因的高甲基化被逆转,并呈剂量依赖性。结论 苯丁酸钠可通过抑制甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的表达使CLDN4基因去甲基化,从而抑制Hep-2细胞的增殖并诱导其凋亡。     

干预GLP-1通路保护过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的研究

目的 观察Exendin-4（Ex-4,GLP-1受体激动剂）对H₂O₂孵育的心肌细胞凋亡的影响,探讨GLP-1通路干预心肌细胞损伤的机制。方法 分离、培养心室肌细胞,分成5组∶A组为对照组;B组为H₂O₂干预组（100μmol/L,24h）;C组为H₂O₂+Ex-4（Ex-10nmol/L,孵育24h）组;D组为H₂O₂+Ex-4（Ex-20nmol/L,孵育24h）组;E组为H₂O₂+Ex-4+LY294002（Ex-20nmol/L,LY-5μmol/L,孵育24h）组。荧光染色测定各组细胞内活性氧簇（ROS）生成的水平;流式细胞仪测定各组细胞凋亡率情况。以Western blot法测定各组细胞凋亡蛋白及机制蛋白（PI₃K/AKT）的表达。结果 与H₂O₂孵育组相比,Ex-4干预使得心肌细胞内ROS水平下降,细胞凋亡率下降,在高剂量组（D组）均达到差异统计学意义（P<0.05）。同时,Ex-4干预可使p-AKT/AKT表达显著增加,caspase-3表达显著下降（P<0.05）;而这些效应可被LY294002共孵育（E组）所逆转。结论 干预GLP-1通路,可缓解H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡,此效应至少部分是通过影响PI₃K/AKT途径实现的。     

BDNF对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响及作用机制。方法 45只大鼠留取10只为假手术组,35只建立非心源性缺血性脑卒中模型,建模成功31只,随机分为模型组10只、空载组10只、BDNF组11只。空载组、BDNF组分别向蛛网膜下腔注入含有pGenesiI-1-NC、pGenesiI-1-BDNF脂质体质粒复合物,模型组和假手术组注入0.9%氯化钠溶液。5 天后观察大鼠学习和记忆能力、海马组织病理形态变化及海马神经元细胞凋亡情况;检测海马组织中BDNF、酪氨酸受体激酶B(TrkB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)mRNA及蛋白表达、p-AKT/AKT表达变化。结果 HE染色显示模型组、空载组神经元排列紊乱,出现变性神经元;BDNF组神经元损伤轻微。与假手术组比较,模型组、空载组、BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间均缩短,穿越平台次数均减少,海马神经元凋亡率均升高,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量,p-AKT/AKT均降低(P＜0.05);与模型组、空载组比较,BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间延长,穿越平台次数增加,海马神经元凋亡率降低,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量、p-AKT/AKT升高(P＜0.05)。结论 上调BDNF表达可减少非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡,其机制可能是通过激活PI₃K/AKT信号通路发挥保护作用。     

番茄红素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素（lycopene,LP）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞随机分为5组：正常对照组、LP（20、10、5μg/ml）组和顺铂（40μg/ml）组（阳性对照组）,每组10个复孔。给药干预48h后,观察比较各组细胞生长状况并采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率;通过流式细胞术（flow cytometry）分析细胞周期的改变、检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,反转录PCR（RT-PCR）技术检测Bax mRNA和bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果 与正常对照组比较,LP各组SKOV3细胞呈现不同程度的细胞脱壁、细胞间松散等病理性状态,以LP 20μg/ml组最为显著;LP（20、10μg/ml）组细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率显著升高,caspase-3蛋白表达量显著增高,bcl-2 mRNA表达显著下调、Bax mRNA表达显著上调,Bax/bcl-2表达比值显著升高,上述差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 LP具有抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并促进其凋亡的作用,作用机制可能与LP能够有效提高caspase-3蛋白表达并下调bcl-2 mRNA表达、上调Bax mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值有关。