苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 实验分组如下,A组：膀胱癌EJ细胞不作处理;B组：加入苦豆碱浓度25μmol/L;C组：加入苦豆碱浓度50μmol/L;D组：加入苦豆碱浓度100μmol/L。通过CCK8检测各组细胞的存活率,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Erk1/2蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示,B、C、D组较A组细胞存活率降低（P<0.05）;流式细胞术结果显示：B、C、D组较A组细胞凋亡率增加（P<0.05）;Western blot结果显示：B、C、D组较A组Bcl-2、p-Erk1/2表达水平降低（P<0.05）,Bax表达水平增高（P<0.05）。结论 苦豆碱可降低膀胱癌EJ的存活率,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Erk1/2的磷酸化而实现的。     

青藤碱调节EC109细胞增殖与凋亡的COX-2信号通路研究

目的研究青藤碱对食管癌EC109细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制。方法以不同浓度青藤碱分别处理体外培养的食管癌EC109细胞,72h后用CCK8法检测细胞增殖,用AnnexinV/PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡,用Westernblot检测COX-2和Survivin蛋白的表达。结果采用0.2、0.4mmol/L青藤碱处理EC109细胞72h后,细胞增殖显著被抑制;细胞凋亡检测结果显示,与对照组相比,中、高剂量组细胞凋亡率显著升高;Westernblot检测结果显示COX-2和Survivin蛋白在中、高剂量组中表达水平显著下降。结论青藤碱在体外能抑制EC109细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与抑制COX-2和Survivin蛋白表达相关。     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

游离脂肪酸通过刺激整合素连接激酶表达促进肾癌786-O细胞增殖

目的:探讨游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶(inte-grin-linked kinase,ILK)蛋白表达的影响。方法:分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸(oleic acid,OA)作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmol/L组作为对照组。利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果:MTT检测结果显示,0.05、0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高(光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs.0.495±0.034,P均<0.001);而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显(凋亡率2.42%±0.25%vs.2.33%±0.87%vs.2.25%±0.51%,P=0.082);与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调。结论:FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关。     

PPARγ在肾癌细胞凋亡中的调控作用

目的 探讨PPARγ激动剂罗格列酮和抑制剂T0070907对肾癌A498细胞促凋亡, 抗肿瘤的影响.方法 A498细胞分为3组, 分别加入含有PBS, 罗格列酮 (50μmol/L) 以及T0070907 (50μmol/L) 的完全培养液孵育24 h, MTT法检测各组细胞增殖情况, 应用Western Blot和RT-q PCR分析细胞中BAX、Caspase-3、Cyt-C和Bcl-2的表达水平, 分别在光镜和荧光显微镜下观察A498细胞形态变化.结果 MTT实验结果显示, 罗格列酮和T0070907能够明显抑制A498细胞增殖率 (P<0.05) , 上调A498细胞内Caspase-3、Cyt-C及Bax蛋白和m RNA的表达, 下调Bcl-2蛋白和m RNA的表达 (P<0.05) ;经光镜和Hochest染色观察也发现罗格列酮和T0070907能够促进A498细胞凋亡.结论 罗格列酮和T0070907均可抑制肾细胞癌A498细胞的增殖, 诱导其凋亡, 其抗肿瘤机制有可能与PPARγ的介导有关.     

槐果碱对肺癌A549细胞增殖凋亡的作用机制

目的 探讨槐果碱对肺癌细胞的体外抑制作用及可能的作用机制.方法 不同浓度(1、2、4、8、16、32、64 mmol/L)槐果碱处理肺癌细胞A549,MTT检测槐果碱对A549的IC50,选择适宜浓度的槐果碱处理肺癌细胞A549(槐果碱组),未作处理的A549细胞作为对照组,克隆形成实验和BrdU实验检测两组细胞增殖,TUNEL和流式细胞数检测两组细胞凋亡,Western blot检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、MYC、Bax、Bcl-2和脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)和PTGDR2蛋白表达,A549细胞给与5 ng/ml PGD2激活剂处理(PGD2组),克隆形成实验、TUNEL实验和Western blot实验检测PGD2对A549细胞增殖和凋亡的影响.结果 槐果碱对A549的IC50为5.196 mmol/L.克隆形成和BrdU实验结果显示,5 mmol/L槐果碱处理的槐果碱组肺癌细胞A549细胞增殖低于对照组,凋亡高于对照组,PC-NA、MYC、Bcl-2蛋白表达低于对照组,Bax蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);槐果碱组L-PTGDS和PTGDR2蛋白表达高于对照组(P＜0.05),给予5 ng/ml PGD2激活剂处理的A549细胞增殖受到抑制,凋亡显著增加(P＜0.05).结论 槐果碱可以抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡,激活PGD2/PTGDR2通路,从而抑制肺癌的发生.     

游离脂肪酸通过刺激整合素连接激酶表达促进肾癌786-O细胞增殖

目的：探讨游离脂肪酸（free fatty acids, FFAs）异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK）蛋白表达的影响。方法：分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸（oleic acid,OA）作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmol/L组作为对照组。利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果：MTT检测结果显示,0.05、 0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高（光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs. 0.495±0.034,P均＜0.001）;而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显（凋亡率2.42%±0.25% vs. 2.33%±0.87% vs. 2.25%±0.51%, P=0.082）;与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调。结论：FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关。     

盐酸小檗碱对恶性黑素瘤细胞A375增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨盐酸小檗碱对恶性黑素瘤细胞A375增殖、凋亡和迁移的影响.方法 根据盐酸小檗碱浓度将人恶性黑素瘤A375细胞株分为四组:空白对照组(0μmol/L)、低剂量组(40μmol/L)、中剂量组(80μmol/L)和高剂量组(120μmol/L).采用CCK8法检测各组A375细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情...     

丹皮酚对食管癌细胞放射增敏作用及其机制

目的通过研究丹皮酚对食管鳞癌细胞株KYSE450、TE10放射敏感性的影响及探讨该作用的分子机制,为丹皮酚作为放射治疗增敏药物应用于食管鳞癌的综合治疗提供根据。方法稳定培养食管癌细胞株,经不同浓度的丹皮酚作用后,CCK8法检测细胞增殖。克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。Western blotting实验检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果丹皮酚剂量依赖性地抑制食管癌细胞的增殖（P < 0.05~P < 0.01）,并且抑制放射治疗后的肿瘤细胞克隆形成能力,增加肿瘤细胞的凋亡率（P < 0.01）;Western blotting实验表示放疗与丹皮酚联合处理可降低Bcl-2的表达,增加Bax、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP的表达。结论丹皮酚联合放疗可通过下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-3、PARP、cleaved caspase-3表达,从而抑制体外食管癌细胞的生长,实现放疗增敏。     

小檗碱对人肝癌SMMC-7721细胞 bcl-2、bax表达的影响

目的:研究小檗碱(Berberine)对体外培养肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用CCK8法测定Berberine不同浓度(0mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L)及不同时间点(24h、48h、72h)对细胞增殖的影响,选取最适浓度和最适时间点,采用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果:CCK8发现Berberine对肝癌SMMC-7721细胞有显著的增殖抑制作用,在48h时间点和0.2mmol/L浓度条件下抑制最明显。Western blot检测结果发现,Berberine可致人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2表达下调,bax表达上调,bax/bcl-2比值升高,促进凋亡发生。结论:Berberine抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,通过上调bax蛋白、下调bcl-2蛋白,诱导凋亡。     

青藤碱对胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响及机制

目的探究青藤碱(SIN)对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其机制。方法正常培养人胃正常黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌细胞SGC-7901作对照组(Control),分别用0.5、1.0、2.5 mmol/L SIN处理细胞48 h,并设立阳性对照(50μmol/L塞来昔布),采用CCK-8法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;经在线预测软件分析miR-33a-5p和乳酸脱氢酶A(LDHA)靶向关系,并通过双荧光素酶报告确认;将miR-33a-5p mimics转染SGC-7901细胞,采用RT-qPCR检测miR-33a-5p和LDHA mRNA的表达;重组构建过表达LDHA载体转染SGC-7901细胞,用0.5、1、2.5 mmol/L SIN处理细胞48 h,检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况。结果与Control组相比,SIN可提高SGC-7901细...     

褪黑素联合顺铂对人胃癌细胞增殖及相关凋亡蛋白表达的影响

目的 探究褪黑素（MLT）联合顺铂（CDDP）对人胃癌AGS细胞的疗效及相关凋亡蛋白表达的影响。方法 将体外培养的人胃癌细胞AGS细胞株分为4组,即AGS对照组、AGS MLT组（2mmol/L）、AGS CDDP组（4μg/ml）和AGS MLT+CDDP组（2mmol/L MLT和4μg/ml CDDP）。采用CCK8试验检测各组细胞增殖的抑制情况,Annexin Ⅴ FITC/PI凋亡试剂盒检测各组细胞早晚期细胞凋亡情况,Western blot法检测各组细胞凋亡蛋白表达情况。结果 MLT+CDDP组细胞的生存率明显低于AGS对照组和AGS 单药组;流式细胞术检测细胞凋亡情况表明,正常对照组、单药组和联合组细胞的早期凋亡率依次增加;蛋白水平研究表明,相比单药组和正常组,联合组的Bcl-2、原形态caspase-3表达显著降低,Bax及活化态cleaved-caspase-3表达明显增高。结论 与单用顺铂相比,褪黑素联合顺铂能明显抑制胃癌AGS细胞增殖并加强促凋亡能力,这可能与联合药影响相关凋亡蛋白表达有关。     

苦参碱联合Akt信号通路抑制剂影响肾癌细胞的活力与凋亡

目的本研究探讨苦参碱联合蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂对肾癌细胞增殖活力及凋亡的影响及机制。方法以肾癌细胞为研究对象,用不同浓度的苦参碱作用后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的苦参碱和Akt信号通路抑制剂分别处理细胞记为苦参碱组和抑制剂组,同时以半数抑制浓度的苦参碱和Akt信号通路抑制剂共同处理后的细胞为联合组,以正常培养的细胞为对照组,MTT检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,蛋白质印迹法检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3, cleaved caspase-3)表达。结果苦参碱能够呈浓度依赖的抑制肾癌细胞增殖活力。与对照组比较,苦参碱组、抑制剂组、联合组细胞存活率降低,凋亡率升高,ROS水平升高,p-p38水平、cleaved caspase-3蛋白水平升高。与苦参碱组、抑制剂组比较,联合组胞存活率降低,凋亡率升高,ROS水平升高,p-p38水平、cleaved caspase-3蛋白水平升高。结论苦参碱联合Akt信号通路抑制剂能够抑制肾癌细胞增殖活力,促进肾癌细胞凋亡,ROS和p38信号通路可能是其作用机制之一。     

柔红霉素对人B细胞淋巴瘤OCI-LY7细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨柔红霉素对人B细胞淋巴瘤OCI-LY7细胞凋亡的影响及其机制,阐明柔红霉素在弥漫大B细胞淋巴瘤中的耐药机制。方法：将体外培养的OCI-LY7细胞分为0、0.1、1.0和10.0 mg·L^-1柔红霉素组。采用MTT法检测各组OCI-LY7细胞存活率,流式细胞术检测各组OCI-LY7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组OCI-LY7细胞中凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3和survivin表达水平。后续实验分为对照组、柔红霉素组、柔红霉素+空载体组和柔红霉素+survivin组,按照上述方法检测survivin过表达后各组OCI-LY7细胞存活率、凋亡率和细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与0 mg·L^-1组比较,处理48 h后0.1、1.0和10.0 mg·L^-1柔红霉素组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平逐渐降低（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05）。与对照组比较,柔红霉素组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与柔红霉素组比较,柔红霉素+survivin组OCI-LY7细胞存活率和细胞中survivin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3及Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：柔红霉素可诱导OCI-LY7细胞凋亡,其作用机制可能与下调survivin蛋白表达有关。     

青藤碱对人结肠癌细胞株SW480增殖和细胞周期的影响

目的 研究青藤碱对人结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响.方法 用不同浓度的青藤碱处理体外培养的人结肠癌SW480细胞24、48、72h后,采用CCK法检测细胞的增殖活性,采用流式细胞术检测细胞的细胞周期分布,并用光镜和透射电镜观察SW480细胞的形态学变化.结果 青藤碱在体外可抑制SW480细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性.干预48h后,中、低浓度的青藤碱（8mmol/L、4mmol/L）可诱导SW480细胞G1期细胞比例增加,而高浓度的SIN（16mmol/L、10mmol/L）可诱导G1期、G2期细胞比例增加.光镜与电镜下均见凋亡细胞增多.结论 青藤碱在体外能抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导该细胞系的凋亡,其机制可能与其阻滞细胞周期进程有关.     

丹皮酚通过内质网应激和线粒体损伤途径促进卵巢癌细胞凋亡

【目的】探讨丹皮酚对卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。【方法】用不同剂量(0、1、2、3、4、5、6、7、8 mmol/L)丹皮酚处理人正常卵巢表面上皮细胞HOSEpiC和人类卵巢癌细胞SKOV3。应用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定丹皮酚对HOSEpiC和SKOV3细胞的毒副作用,选择低剂量丹皮酚(1、2、5 mmol/L)进行后续实验。用丹皮酚(1、2、5 mmol/L)处理SKOV3细胞,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法观察SKOV3细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测SKOV3细胞Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax、葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源(CHOP)、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、细胞色素c(Cyto-c)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素c氧化酶4(COX IV)、cleaved Caspase-9的表达,流式细胞术检测细胞SKOV3凋亡和Ca2+水平。【结果】丹皮酚(2、5 mmol/L)对正常细胞无害,可剂量依赖性地降低SKOV3细胞存活率。丹皮酚(2、5 mmol/L)抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。与空白对照组比较,丹皮酚(2、5 mmol/L)均升高内质网应激相关的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表达水平及Ca~(2+)含量(均P 0.05)。与空白对照组比较,丹皮酚2、5 mmol/L均降低线粒体损伤相关的凋亡通路Cyto-c、AIF(线粒体内)水平,升高Cyto-c、AIF(胞质)的表达水平,升高cleaved Caspase-9表达水平,下调Bcl-2及上调Bax表达水平(均P 0.05),且呈剂量依赖性。【结论】丹皮酚剂量依赖性地调控SKOV3细胞中内质网应激和线粒体损伤相关的凋亡通路蛋白,可促进卵巢癌细胞凋亡。     

姜黄素抑制硝普钠诱导的大鼠软骨细胞凋亡机制研究

目的 探讨姜黄素抑制硝普钠(SNP)诱导的大鼠软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取4只SD大鼠关节软骨，细胞进行原代培养，将软骨细胞分成6组，分别为空白对照组(A组)，SNP损伤组(B组)，SNP+5 μmol/L姜黄素组(C组)，SNP+10 μmol/L姜黄素组(D组)，SNP+20 μmol/L姜黄素组(E组),SNP+30 μmol/L姜黄素组(F组)。用CCK8法检测不同浓度的姜黄素对软骨细胞增殖的影响，同时检测各组中软骨细胞的活性；用RtPCR检测软骨细胞MMP-13、caspase-3、Bax和Bcl-2基因的表达情况；用Hoechst 33342染色观察软骨细胞核凋亡情况；Western Blotting检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达情况。 结果 ①当姜黄素的浓度为20 μmol/L时，姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显；②CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组＞E组＞D组＞C组＞F组＞B组；③RtPCR检测软骨细胞caspase-3、Bax和Bcl-2表达量经姜黄素处理后均有显著变化；④Hoechst 33342染色结果表明姜黄素能改善SNP诱导的软骨细胞核染色质的损伤，减少软骨细胞中的线粒体膜电位；⑤Western boltting检测各组软骨细胞中caspase-3、Bax、蛋白的表达情况，表达量依次为B组＞E组＞A组；Bcl-2蛋白的表达情况，表达量依次为A组＞E组＞B组。 结论 姜黄素通过抑制线粒体凋亡途径，从而减少SNP诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。      

青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究天然化合物青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测青藤碱对DU145细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测青藤碱对DU145细胞凋亡的影响;采用电子显微镜观察青藤碱作用DU145细胞后细胞超微结构的变化.结果 MTT结果显示青藤碱浓度在100～400 μmol/L时,作用24、48小时后,细胞增殖受到抑制,呈现明显时间剂量效应关系;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法显示青藤碱(0、200、400 μmol/L)作用于细胞24小时后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应关系;电子显微镜下青藤碱处理组细胞可见染色质浓聚、边集等典型的凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 青藤碱能有效抑制人前列腺癌DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

洛铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的实验研究

目的探讨洛铂(LBP)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用机制。方法取对数生长期的A549细胞分为阴性对照组和实验组(分别加入2.5、5和10μmol/L LBP)。采用倒置相差显微镜观察各组A549细胞形态学改变,利用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡A549细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果显微镜下观察到LBP抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪结果显示LBP诱导A549细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性;RT-PCR结果显示LBP可使A549细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,二者呈负相关。结论 LBP明显诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,通过线粒体途径参与其凋亡过程。