lncRNA MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴影响喉癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴对喉癌细胞增殖和迁移的作用。方法 qPCR检测MIR34AHG在喉癌细胞系(TU686、Hep-2、TU177、AMC-NH-8、TU212)以及支气管上皮细胞系(16HBE)中的表达。选取MIR34AHG表达最低细胞系,分别构建MIR34AHG过表达细胞系(MIR34AHG组)和对照细胞系(对照组)。MTT法、细胞划痕实验分别检测上调MIR34AHG对细胞增殖和迁移的影响。生物信息学工具预测MIR34AHG的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测MIR34AHG与靶基因之间的相互作用。qPCR和Western blot法检测上调MIR34AHG对相关基因和蛋白表达的影响。结果 与16HBE细胞比较,喉癌细胞系中MIR34AHG呈低表达(P<0.01),且以TU686细胞中表达最低(P<0.01)。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制TU686细胞的增殖和迁移(P<0.05)。MIR34AHG和miR-296-5p之间存在靶向关系(P<0.01),miR-296-5p的靶基因可能是SRCIN1。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制miR-296-5p表达(P<0.01),促进SRCIN1基因的表达(P<0.01)。结论 MIR34AHG可能通过下调miR-296-5p的表达、上调SRCIN1的表达从而抑制喉癌细胞的增殖和迁移。     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

AP000892.6通过靶向miR-616-5p影响膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AP000892.6对膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化进程的影响及相关分子机制。方法 应用GEPIA数据集分析AP000892.6在膀胱癌和癌旁组织中的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测膀胱癌细胞株647V、T24、UMUC3、5637、RT4和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中AP000892.6的表达水平。将AP000892.6过表达质粒或阴性对照质粒转染到T24细胞,实验分为AP000892.6组和NC组,RT-qPCR法验证质粒转染效率。细胞划痕法和Transwell实验分别检测转染T24细胞的迁移和侵袭能力。应用生物信息学方法预测以及双荧光素酶报告基因实验验证AP000892.6的下游靶基因。RT-qPCR法检测AP000892.6下游靶基因的表达。Western blot法检测上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1和间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist的表达。结果 与癌旁组织比较,AP000892.6在膀胱癌组织中表达降低(P<0.01)。与SV-HUC-1细胞比较,AP000892.6在膀胱癌细胞株中表达降低(P<0.05),T24细胞中AP000892.6的相对表达水平最低(P<0.01)。与NC组比较,过表达AP000892.6抑制膀胱癌T24细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因分析证明miR-616-5p是AP000892.6的靶基因(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6对miR-616-5p表达具有负调控作用(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6组T24细胞中上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1表达上调,间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist表达下调。结论 AP000892.6通过靶向miR-616-5p抑制膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭和上皮间充质转化进程。     

miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 分析微小RNA(microRNA)-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法 OncoLnc在线数据库分析miR-3614-5p表达水平与卵巢癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-3614-5p在卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的表达。以miR-3614-5p表达最低的细胞系为转染对象,分别转染化学合成的miR-3614-5p模拟物(miR-3614-5p组)和miR-NC(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测高表达miR-3614-5p对细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测并验证miR-3614-5p的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3614-5p对靶基因表达的影响。结果 miR-3074-5p表达水平较高的卵巢癌患者生存期长于miR-3074-5p表达水平较低的患者(P<0.05)。与IOSE80细胞比较,miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达显著减少(P<0.01),其在OVCAR-3细胞中表达最少(P<0.01)。与对照组比较,miR-3614-5p组OVCAR-3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)、细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。miR-3614-5p与G蛋白α抑制剂2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)mRNA的3′非翻译区存在结合位点(P<0.01)。高表达miR-3614-5p可显著干扰GNAI2基因的表达(P<0.01)。结论 miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达降低,其可通过干扰靶基因GNAI2的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移过程,miR-3614-5p可能是治疗卵巢癌的新靶点。     

上调lncRNA CTA-246H3.12通过调节miR-515-5p 抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,研究上调CTA-246H3.12影响鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法 qPCR分别检测CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取CTA-246H3.12表达量最低的细胞系,分别转染阴性质粒或表达CTA-246H3.12的质粒,定义为阴性对照组和CTA-246H3.12组。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测上调CTA-246H3.12对细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学方法预测CTA-246H3.12的靶基因。qPCR和Western blot法分别检测上调CTA-246H3.12对靶基因表达的影响。结果 与慢性鼻咽炎组织比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌组织表达下调(P<0.01)。与人永生化鼻咽上皮细胞比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌细胞系表达下调(P<0.05),CTA-246H3.12在C666-1细胞中的表达量最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。CTA-246H3.12的靶基因可能是miR-515-5p,miR-515-5p的靶基因可能是尾侧型同源盒转录因子1(CDX1)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞中miR-515-5p表达显著降低(P<0.01),CDX1在mRNA和蛋白水平的表达显著增加。结论 CTA-246H3.12在鼻咽癌组织及细胞系中表达下调,上调CTA-246H3.12可明显抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是通过抑制miR-515-5p的表达,间接促进CDX1基因的表达。     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制.方法 通过逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测PTENP1,PTEN,miR-17在膀胱癌中的基础表达并关联分析.利用Western blot检测膀胱癌细胞系T24与5637中超表达PTENP1后PTEN的表达变化.通过荧光素酶报告试验验证miR-17对PTENP1及PTEN的靶向作用.最后通过在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-17和PTENP1,建立稳定共表达细胞系进行增殖和迁移实验,探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制.结果 miR-17在膀胱癌中普遍呈现高表达趋势,PTENP1在膀胱癌中呈现普遍低表达趋势(P<0.05).与此同时miR-17和PTENP1的基础表达为负相关,PTENP1与PTEN的基础表达为正相关.WB实验发现于膀胱癌细胞系T24和5637中过表达PTENP1后可以在翻译水平增加PTEN的表达,荧光素酶报道实验验证了miR-17可同时靶向PTENP1及PTEN,在膀胱癌中miR-17具有促癌功能,同时在膀胱癌细胞中我们发现miR-17可以部分回复PTENP1的抑癌功能.结论 长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中发挥抑癌功能的分子机制可能是PTENP1结合miR-17作为竞争性内源RNA竞争,从而降低miR-17对抑癌基因PTEN的表达抑制.     

膀胱癌中miR-203的表达及其对吉西他滨化疗敏感性的影响

目的 探讨microRNA-203(miR-203)在膀胱癌中的表达以及其对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 应用Vita-Blue法检测膀胱癌细胞系对吉西他滨的敏感性差异并测定半数抑制浓度(IC50)值.应用探针法实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Taqman-qRT-PCR)检测27例膀胱癌组织和癌旁组织以及膀胱癌细胞系5637、Um-Uc-3、J82、SCaBER、 T24、Biu87中miR-203的表达水平.同时构建带有四环素诱导表达系统的miR-203超表达载体(pINDUCER21-EGFP-miR-203), 在吉西他滨化疗耐受的 Um-Uc-3细胞中转染 pINDUCER21-EGFP-miR-203,并用多西环素诱导表达,未诱导表达的为阴性对照,在化疗敏感的T24细胞中分别转染 miR-203 Antagomir 和 Antagomir control,同样使用 Taqman-qRT-PCR 和Vita-Blue方法检测膀胱癌细胞系中miR-203表达水平的变化及对吉西他滨的敏感性.结果 在膀胱癌组织中miR-203的表达显著低于癌旁组织,在膀胱癌细胞系 T24中miR-203的表达水平最高,Um-Uc-3细胞系中表达水平最低(P＜0.01).膀胱癌细胞系T24和Um-Uc-3细胞中对吉西他滨的IC50值分别为(0.46 ±0. 08)ng/ml和(5. 94 ± 0. 53)ng/ml(P＜0.01);pINDUCER21-EGFP-miR-203(D +)可以明显增加Um-Uc-3细胞的化疗敏感性,而miR-203 An-tagomir可以显著抑制T24细胞对吉西他滨的化疗敏感性.结论 miR-203与膀胱癌的发生发展相关,其高表达水平将提高膀胱癌对吉西他滨的化疗敏感性.     

miR-216a-5p靶向作用于PAK2对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 探讨miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中表达及调控p21活化蛋白激酶2（PAK2）基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-216a-5p在正常膀胱细胞系SV-HUC-1及膀胱癌细胞系5637、J82、T24和EJ中的表达,选取其中两种表达miR-216a-5p最少的5637和J82为对象,实验分两组：对照组（转染miR-NC）、实验组（转染miR-216a-5p）。利用qRT-PCR法检测PAK2 mRNA的表达。Western blot法检测PAK2、p-Akt和p-ERK蛋白的表达。Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验和克隆形成实验检测膀胱癌细胞活力和增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-216a-5p在膀胱癌细胞系中的表达量均低。实验组PAK2基因mRNA及其蛋自的表达明显降低,PAK2 mRNA在5637细胞中对照组和实验组表达量分别为1.01±0.15和0.40±0.11（P<0.01）,在J82细胞中对照组和实验组表达量分别为1.00±0.09和0.56±0.14（P<0.01）。p-Akt和p-ERK蛋白表达显著降低。实验组细胞活力明显被抑制,增殖能力明显降低。实验组细胞凋亡显著增加（P<0.01）。结论 miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中呈低表达,可在体外靶向抑制PAK2基因,抑制膀胱癌细胞系5637和J82的增殖能力,促进细胞凋亡,可能成为具有膀胱癌生物治疗意义的靶标分子。     

miR-3074通过靶向EPS8基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-3074在宫颈癌细胞系(SiHa、HCC94、C33A、HeLa)和正常宫颈上皮细胞H8中的表达。选取miR-3074表达最低的细胞系,分别转染对照模拟物(对照组)和miR-3074模拟物(miR-3074组)。CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活力和侵袭能力。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-3074的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3074与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3074对靶基因表达的影响。结果 miR-3074表达水平较高的宫颈癌患者总生存期长于miR-3074表达水平较低的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。与H8细胞比较,宫颈癌细胞系中miR-3074表达降低(P<0.05),miR-3074表达最低的细胞系是HCC94(P<0.01)。对照组和miR-3074组miR-3074表达分别为1.03±0.17和13.49±2.66,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组HCC94细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01)。miR-3074能作用于EPS8mRNA的3′非翻译区(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组EPS8基因表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-3074在宫颈癌细胞系中表达下调,miR-3074能够抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向抑制EPS8表达有关。     

microRNA-1290通过 NDRG1/NF-κB/IL-6信号通路促进结肠癌细胞迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-1290（microRNA-1290,miR-1290）通过N myc下游调节基因 1（N-Myc downstream-regulated gene 1,NDRG1）调控NF κB/IL 6活化分子机制及其对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法: 选择48例结肠癌患者肿瘤及癌旁组织,用免疫组织化学染色检测IL 6表达;qRT-PCR法检测20例肿瘤组织,结肠癌细胞与正常结肠上皮HCoEpiC细胞中IL-6 mRNA及miR-1290表达;结合miR-1290类似物及抑制剂处理,蛋白质印迹和ELISA法分别检测结肠癌细胞中p-NF-κB、NF-κB、NDRG1、上皮钙黏素、波形蛋白表达以及IL-6外泌量;小干扰RNA及中和性抗体靶向下调IL-6表达,miR-1290类似物处理,划痕实验以及Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力。结果： 结肠癌中IL-6免疫组织化学染色评分明显高于癌旁组织（P<0.01）;结肠癌瘤体内miR-1290与IL-6 mRNA表达呈正相关（r=0.845 4,P<0.01）;与HCoEpiC细胞相比,结肠癌细胞中miR-1290表达明显增高（P均<0.01）;上调miR-1290表达可抑制NDRG1表达从而促进NF-κB信号通路及上皮间充质转化活化（P<0.01）,而下调miR-1290表达可促进NDRG1、上皮钙黏素表达并抑制p-NF-κB和波形蛋白形成（P<0.01）;划痕实验显示上调miR-1290表达可增强结肠癌细胞迁移能力,而敲低IL-6后细胞愈合率则明显抑制（P<0.01）;miR-1290类似物处理促进结肠癌细胞侵袭,而抗体中和IL-6可显著降低侵袭细胞数（P<0.01）。结论： 结肠癌细胞中miR-1290可通过抑制NDRG1形成促进NF-κB/IL-6调控轴诱导的细胞迁移和侵袭发生。     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法:选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系(miR-30-5p组)和对照细胞系(miR-control组)。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果:与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9...     

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨 miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果 卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染 miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。     

EBV下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移的作用及机制研究

目的：探究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法：采用qPCR检测EBV阴性鼻咽癌SUNE1、CNE2、HK1细胞和EBV阳性C666-1细胞中miR-34c表达水平。构建miR-34c模拟物以分析miR-34c对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。使用CCK-8、划痕愈合试验以及Transwell细胞侵袭试验检测鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western blotting测定细胞中迁移、侵袭相关蛋白以及Erk1/2信号通路蛋白的表达水平。结果：miR-34c在EBV阳性C666-1细胞表达下调(P<0.05)。CCK-8结果显示,miR-34c组C666-1细胞在16、24、48 h的活力明显低于EBV组(P<0.01)。划痕试验和Transwell试验结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.01)。Western blotting结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭相关蛋白Vimentin、Snail、MMP-2、MMP-3及E...     

MicroRNA-34a对尿路上皮癌细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响

目的 研究microRNA-34a （miR-34a）对膀胱肿瘤细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响.方法 在5637细胞株中过表达miR-34a,运用小室迁移实验和小室侵袭实验检测细胞迁移力和侵袭力;运用血球计数板法和新型四唑氮盐（MTS）法检测细胞增殖力.结果 过表达miR-34a后,5637细胞迁移力和侵袭力均下降（P＜0.01）,细胞增殖受抑（P＜0.01）.结论 过表达miR-34能抑制膀胱肿瘤细胞株5637的迁移、侵袭和增殖.     

lncRNA FAM27L对喉癌TU212细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) FAM27L对喉癌TU212细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法qPCR检测FAM27L在喉癌组织、相应癌旁组织、喉癌细胞系及人支气管上皮细胞系中的表达。选取FAM27L表达最低的细胞系,构建FAM27L过表达细胞系(FAM27L组)和阴性对照细胞系(阴性对照组)。MTT法和Transwell实验分别检测过表达FAM27L对细胞增殖能力和侵袭能力的影响。采用生物信息学网站LncBase Predicted V.2预测可互补结合FAM27L的miRNA,采用网站miRWalk2.0预测可互补结合miRNA的基因。qPCR检测miRNA和靶基因mRNA的表达。Western blot法检测靶基因蛋白和MAPK信号通路蛋白的表达。结果 在喉癌组织中FAM27L的表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。FAM27L在5种喉癌细胞系中的表达明显低于人支气管上皮细胞(P均<0.05),且以TU212细胞中表达最低(P<0.01)。过表达FAM27L后,与阴性对照组比较,FAM27L组TU212细胞的增殖能力和侵袭能力明显降低(P均<0.05)。LncBase Predicted V.2和miRWalk2.0网站预测显示,FAM27L可与miR-744-3p互补结合,miR-744-3p与核糖体蛋白L41(ribosomal protein L41,RPL41)存在靶向结合位点。与阴性对照组比较,FAM27L组miR-744-3p表达显著降低(P<0.01),RPL41及MAPK信号通路蛋白的表达显著降低(P均<0.05)。结论 FAM27L在喉癌组织和细胞系中低表达,高表达FAM27L可通过下调miR-744-3p的表达促进RPL41基因的表达,干扰MAPK信号通路转导,从而抑制喉癌TU212细胞恶性生物学行为的进展。     

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的：探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果：与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<...     

miR-219a-5p在胃癌中的甲基化调控及生物学功能研究

目的 检测miR-219a-5p在胃癌及其癌旁组织中的表达并分析其启动子区域甲基化水平,探讨其对胃癌细胞系生物学功能的影响。方法 利用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)方法检测胃癌及其癌旁组织中miR-219a-5p的表达及甲基化水平,通过细胞增殖实验和流式细胞仪检测过表达miR-219a-5p后对胃癌细胞增殖和凋亡的影响;体外细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-219a-5p的表达水平在胃癌患者的癌组织中呈现普遍下调,miR-219a-5p在癌组织中的相对表达量(0.769±0.95)明显低于癌旁组织表达(2.114±5.10),差异具有统计学意义(P<0.05);且miR-219a-5p表达下调组的DNA甲基化水平比表达上调组明显升高;过表达miR-219a-5p的胃癌细胞系MGC-803细胞增殖能力和迁移侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),过表达组凋亡比例明显...     

miR-495-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测miR-495-3p在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达,探讨miR-495-3p对CRC细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR检测22对CRC及其癌旁组织和CRC细胞以及正常结肠上皮细胞中miR-495-3p的表达,选取其中差异表达最明显的两组细胞株转染miR-495-3p mimic、miR-495-3p inhibitor以及各自对照组。CCK-8和EdU实验检测细胞增殖能力、Transwell检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:CRC组织和细胞中miR-495-3p表达降低(P<0.01)。与对照组相比,转染miR-495-3p mimic后细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05),凋亡细胞增多(P<0.05);转染miR-495-3p inhibitor后细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05)。结论:miR-495-3p在CRC组织和细胞中低表达,上调miR-495-3p表达后能降低细胞增殖、迁移能力,增加细胞凋亡率,在CRC中扮演着抑癌基因的作用。     

lncRNA ACTA2-AS1通过靶向下调miR-586 表达抑制子宫内膜癌生物学行为的研究

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)ACTA2-AS1在子宫内膜癌中的表达,探讨ACTA2-AS1对子宫内膜癌细胞周期和迁移的作用及其分子机制。方法 采用GEPIA数据库分析ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织中的表达水平。qRT-PCR检测ACTA2-AS1在子宫内膜癌细胞系和正常子宫内膜上皮细胞ESC中的表达水平。分别转染空白质粒(NC组)和ACTA2-AS1过表达质粒(ACTA2-AS1组)至AN3CA细胞。流式细胞法和细胞划痕实验分别检测ACTA2-AS1对子宫内膜癌细胞AN3CA的G₀~G₁期细胞比例和迁移能力的影响。LncBase v.2数据库预测ACTA2-AS1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证ACTA2-AS1对靶基因的调控作用。qRT-PCR或Western blot法检测磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)和PI₃K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达。结果 GEPIA数据库显示ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。ACTA2-AS1在子宫内膜癌细胞系中的表达水平显著低于ESC细胞(P<0.05),ACTA2-AS1表达最低的细胞系是AN3CA(P<0.01)。与NC组比较,上调ACTA2-AS1表达可以增加G₀~G₁期细胞比例(P<0.01)。NC组和ACTA2-AS1组AN3CA细胞迁移率分别为69.54%±6.64%和40.46%±3.76%,上调ACTA2-AS1可以抑制AN3CA细胞迁移能力(P<0.01)。ACTA2-AS1能够靶向结合miR-586(P<0.01)。与NC组比较,上调ACTA2-AS1可明显抑制miR-586表达(P<0.01),PTEN基因表达明显增加(P<0.01),PI₃K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达降低。结论 ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织和细胞系中表达降低。对于存在PI₃K-AKT-mTOR信号通路的子宫内膜癌类型,上调ACTA2-AS1表达通过靶向调控miR-586,促进PTEN基因表达和抑制PI₃K-AKT-mTOR信号通路活化,抑制子宫内膜癌细胞周期和迁移。