AAV6-hNGFβ转染对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用与PI3K/Akt信号通路的关系

目的 观察转染AAV6-hNGFβ对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury)的保护作用与PI₃K/Akt信号通路之间的关系。方法 健康雄性SD大鼠72只,体质量250~300g,随机分为4组(n=18),即假手术组、模型组、hNGFβ组(模型组+AAV6-hNGFβ-EGFP)和阴性对照组(模型组+AAV6-EGFP)。hNGFβ组、阴性对照组和模型组均采用脑缺血再灌注模模型,并于造模后分别在股静脉注射AAV6-hNGFβ-EGFP 、AAV6-EGFP和等量0.9%氯化钠注射液,测定不同病程(1、2、4周)大鼠神经功能评分和脑梗死体积,TUNEL法检测神经细胞凋亡,以及脑内皮质NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著升高,NGF表达显著下降,PI₃K/Akt通路受到抑制,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阴性对照组神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数无明显变化,NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax表达水平接近;与模型组和阴性对照组比较,hNGFβ组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著降低,NGF表达显著升高,PI₃K/Akt通路得到激活,Bcl-2蛋白表达也显著升高,Bax蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染AAV6-hNGFβ-EGFP可提高NGF表达,激活大鼠PI₃K/Akt通路,提高Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白增加,对大鼠脑缺血再灌注损伤起到保护作用。结论 转染AAV6-hNGFβ可激活大鼠PI₃K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白同时抑制Bax蛋白表达,从而保护大鼠脑缺血再灌注损伤。     

藏红花素通过调控PI3K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松

目的 探究藏红花素通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松。方法 建立去卵巢骨质疏松小鼠模型,再每天给予雌激素(25μg/kg)和藏红花素(20mg/kg)灌胃治疗,另设假手术组,每天给予等量蒸馏水灌胃。术后4周开始连续灌胃12周,称量动物体质量,双能X线测量骨密度,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨组织病理形态,全自动生化分析仪检测小鼠血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、尿钙(U-Ca)、尿磷(U-P)、尿肌酐(Cr)含量,ELISA检测小鼠血清骨钙素(osteocalcin,OC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平。体外原代培养小鼠成骨细胞,利用ALP染色鉴定成骨细胞。加入藏红花素和LY249002,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)及其磷酸化水平的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 与假手术组比较,模型组小鼠体质量迅速增加,骨密度降低,骨小梁分布稀疏,尿液中U-Ca、U-P、Cr含量升高,血清中OC、ALP水平也升高,骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达下调;与模型组比较,雌激素组和藏红花素组小鼠体质量增加缓慢,骨密度增加,改善骨小梁分布和排列,降低尿液中U-Ca、U-P、Cr含量和血清中OC、ALP水平,上调了骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达。在成骨细胞中,与假手术组比较,模型组成骨细胞凋亡增多,下调p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与模型组比较,藏红花素组抑制了成骨细胞凋亡,上调了p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与藏红花素组比较,藏红花素+LY249002组抵消了藏红花素对成骨细胞凋亡的抑制作用。结论 藏红花素抑制了骨质疏松症发生和进展,可能是通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡来介导的。     

苦参碱通过PTEN/PI3K/Akt通路调控非小细胞肺癌上皮间质转化并影响细胞迁移和侵袭

目的 探讨苦参碱对非小细胞肺癌的影响及其对肿瘤生长、转移和侵袭的作用机制。方法 使用1.0mg/ml浓度的苦参碱体外处理A549和H1650,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI染色用于细胞凋亡的检测,Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;构建非小细胞肺癌小鼠皮下移植瘤模型,连续用苦参碱处理一段时间后,测量肿块直径和重量并观察形态;蛋白免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白、EMT相关蛋白和PTEN/PI₃K/Akt通路相关蛋白表达水平。结果 苦参碱处理后,人肺癌细胞活性显著降低,细胞凋亡被促进,并且其作用效果呈浓度依赖性;同时,苦参碱减弱了细胞迁移和侵袭能力;EMT相关蛋白E-cadherin表达显著上调,vimentin、N-cadherin和Snail表达下调,EMT过程被抑制。PTEN/PI₃K/Akt通路中,相关蛋白PTEN表达增多,p-Akt表达下调。在体内实验研究中,肿瘤变小,说明苦参碱能够抑制体内肿瘤生长,并且通过影响上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程影响肿瘤转移。结论 苦参碱不仅能够影响肿瘤细胞生长,而且能够调控非小细胞肺癌EMT过程,进而影响细胞迁移和侵袭,这种调控作用依赖于PTEN/PI₃K/Akt通路。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

miR-23a调控ESRP1干预直肠癌细胞增殖和凋亡

目的 分析微小RNA-23a （microRNAs-23a,miR-23a）在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及miR-23a对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。方法 采用qRT-PCR检测miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用qRT-PCR检测miR-23a在直肠癌SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a抑制剂（inhibitor） RNA片段和抑制剂阴性对照RNA片段（inhibitor negative control,inhibitor NC）,并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率;Western blot法检测上皮剪接调节蛋白1（epithelial splicing regulatory protein 1,ESRPl）蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建野生型pGL3-ESRP1-3''UTR （wt-pGL3-ESRP1-3''UTR）或突变型pGL3-ESRP1-3''UTR （mut-pGL3-ESRP1-3''UTR）质粒,HEK293和SW480细胞经上述质粒分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染后测定双荧光素酶活性。结果 与癌旁正常组织相比较,miR-23a在直肠癌组织中的相对表达水平明显上调,差异有统计学意义（P=0.000）;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调,差异有统计学意义（P=0.000）;SW480细胞转染miR-23a inhibitor后,细胞增殖较inhibitor NC组下降35.54%±5.27%,两组结果差异有统计学意义（P=0.000）;转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显高于inhibitor NC组（P=0.000）;荧光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;SW480细胞转染inhibitor NC后对ESRP1蛋白表达无明显影响,而转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高。结论 miR-23a在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著升高,miR-23a可通过下游靶基因ESRP1从而调控直肠癌细胞增殖和凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨白藜芦醇改善大鼠化疗性卵巢损伤的机制

目的 基于PI₃K/Akt/mTOR信号通路探讨白藜芦醇改善大鼠的化疗性卵巢损伤的分子机制。方法 30只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、化疗组(顺铂组)、化疗给药组(白藜芦醇+顺铂组),实验时间共21天。化疗给药组大鼠给予白藜芦醇25mg/(kg·d)灌胃,化疗组给予0.9%NaCl溶液。在实验的第15天,除对照组,其余两组均给予单剂量5mg/kg的顺铂腹腔注射。1周后取大鼠卵巢制作石蜡切片,采用苏木精-伊红染色(HE)观察卵巢形态及卵泡发育情况。原位缺口末端标记法(TUNEL)检测分析卵巢组织的调亡情况。蛋白免疫印迹实验(Western blot)法分析比较卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化水平的蛋白表达差异。结果 与对照组比较,化疗组卵巢萎缩,黄体退化,各级生长卵泡数明显减少;卵巢细胞的凋亡数目增多,凋亡指数升高(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均下降(P＜0.01)。化疗给药组与化疗组比较,可见卵巢结构较化疗组有明显改善,间质纤维化程度有所减轻,且可见一定数量的黄体,各级生长卵泡数增多;卵巢细胞凋亡数目减少,凋亡指数降低(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均上升(P＜0.01)。结论 白藜芦醇能改善顺铂化疗导致的大鼠卵巢损伤,其机制可能与激活PI₃K/Akt/mTOR信号通路有关。     

SLFN11基因表达对SW480细胞 L-OHP敏感度的影响

目的 探讨SLFN11基因表达对奥沙利铂抑制结直肠癌细胞株SW480生长的影响。方法 通过SLFN11基因沉默(siRNA)降低SLFN11基因表达水平,并通过RT-qPCR和Western blot法方法鉴定SLFN11基因mRNA和蛋白表达水平;利用MTT实验验证奥沙利铂对SW480细胞株生长增殖的影响;通过流式细胞仪检测SW480细胞周期及细胞凋亡情况。结果 siRNA干扰可特异性地显著降低SW480细胞株SLFN11基因的表达和蛋白表达水平,MTT实验发现SLFN11基因沉默组较基因未干扰组,奥沙利铂对SW480细胞株的生长抑制明显减低(P<0.05),而且减弱奥沙利铂对SW480细胞株的细胞凋亡的诱导(P<0.01),减少G₂/M期细胞周期阻滞(P<0.01)。结论 SLFN11基因低表达可以降低SW480细胞对奥沙利铂的敏感度,可能预测奥沙利铂治疗结直肠癌细胞的疗效。     

抑制PI3K通路增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用

目的 探讨CAHB单独使用及与LY294002联合应用对Jurkat细胞体外作用的影响.方法 分别用不同剂量的CAHB(0、5、10、20、40mmol/L)诱导Jurkat细胞,用MTS法检测Jurkat细胞的增殖抑制效应,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况;取40mmol/L浓度的CAHB加入PI₃K抑制剂LY294002,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况.结果 CAHB对Jurkat细胞生长有显著的抑制作用,并能显著诱导Jurkat细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量、时间依赖性.PI₃K抑制剂LY294002能显著增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.结论 CAHB能抑制Jurkat细胞增殖,并诱导其凋亡.抑制PI₃K通路能增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.     

西洋参茎叶总皂苷对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠的作用效应及机制研究

目的 研究西洋参茎叶总皂苷(PQS)对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠的作用效应及机制。方法建立PCOS-IR大鼠模型,分为正常组、模型组、PQS低剂量组(30mg/kg)和PQS高剂量组(60mg/kg),每组10只。给药4周后,ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察卵巢组织形态学变化;免疫组化检测卵巢组织Bcl-2和Bax表达;Western blot法检测PI₃K、p-PI₃K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现典型多囊样改变,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数均显著升高,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著减少,Bax表达显著升高;与模型组比较,PQS组大鼠卵巢组织多囊样改变显著改善,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数显著降低,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著升高,Bax表达显著降低。结论 PQS对PCOS-IR大鼠具有显著治疗效应,机制可能与激活卵巢组织PI_3k/Akt信号通路,调控Bcl-2与Bax分子的表达相关。     

粉防己碱对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50 增殖凋亡影响的可能机制研究

目的 观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI₃K)/蛋白激酶B(Akt)通路对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖及凋亡的影响。方法 对数期生长S0-Rb50细胞分为4组,即对照组、Tet低、中、高剂量组,分别用0、2.5、5.0、10.0μmol/L Tet处理,观察干预24h细胞形态学变化;MTT法检测干预24、48、72h时各组吸光度(A)值;流式细胞术检测干预24h各组细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及Western blot法检测干预24h各组细胞PI₃K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达量及裂解的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达量。结果 倒置相差显微镜观察发现,对照组细胞形态规则、融合成片,不同干预组细胞随Tet浓度升高细胞体积逐渐减小、核质比例减小,不能融合成片,视野内漂浮细胞或细胞崩解碎片增多。与对照组比较,Tet高剂量组干预24h时A值较低,差异有统计学意义(P＜0.05),Tet各剂量组干预48、72h时A值均较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。对照组MTT试验A值随干预时间的延长呈升高趋势(P＜0.05),Tet高剂量组MTT试验A值随干预时间的延长无明显变化(P＞0.05)。与对照组比较,Tet各剂量组G₀/G₁、S期细胞占比、PI₃K、Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量及pAkt/Akt较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,Tet各剂量组G₂/M期细胞占比、凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量及cleaved caspase-3蛋白相对表达量较高,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tet可抑制人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖、促进凋亡,可能与抑制PI₃K/Akt信号通路、下调Bcl-2 mRNA和蛋白、上调Bax mRNA和蛋白及cleaved caspase-3蛋白表达相关。     

丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响及机制研究

目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。     

As2O3诱导NB4、HL-60细胞凋亡的机制研究

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)在体外抑制急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia, APL)细胞NB4、HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制。方法 通过WST-8法检测上述两个细胞株的增殖抑制曲线;用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞的凋亡;用Real time PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、p53、C-myc、Survivin在As₂O₃处理前后的表达变化,同时用Westernblot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、P53在As₂O₃处理前后的表达变化。结果 As₂O₃能够显著抑制两种细胞增殖, Westernblot检测及Realtime PCR结果显示,As₂O₃处理引起了两种细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8 、Caspase-9基因表达水平增加,且蛋白表达水平上都出现了活性形式的Caspases。NB4细胞中Survivin、C-myc、Bcl-2的基因表达水平都显著降低,突变型p53蛋白在细胞内的量同样显著下降;HL-60细胞的C-myc表达水平显著降低,但Survivin、Bcl-2表达水平无明显变化。结论 As₂O₃能在药物临床浓度范围内有效抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60、NB4的细胞增殖, 但方式不同;1.5μmol/L浓度的As₂O₃对NB4细胞生长的抑制体现在诱导细胞分化并诱导细胞凋亡,对HL-60细胞生长的抑制只体现在诱导细胞分化。HL-60细胞中高表达的Survivin、Bcl-2抑制了细胞的凋亡。NB4、HL-60细胞株中P53基因的细胞遗传学变异的不同可能是As₂O₃对这两种细胞增殖抑制机制差异的主要原因之一。     

BCOR突变通过PI3K/Akt/mTOR通路介导 MDS细胞生物学行为改变的机制研究

目的 探讨BCOR(BCL6 co-repressor)基因突变介导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)细胞生物学行为的分子机制。方法 通过构建BCORP483L过表达慢病毒以及空载体病毒,转染K562细胞,采用集落形成实验检测BCOR突变对细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Western blot法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测细胞焦亡和PI₃K/Akt/mTOR通路分子水平,采用转录组测序技术(RNA-sequencing, RNA-Seq)检测分析BCORP483L突变对下游靶基因表达的影响。结果 BCORP483L突变显著地抑制细胞克隆形成能力,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞和细胞焦亡水平增加。RNA-Seq分析发现,BCORP483L突变后K562内与细胞凋亡、G₂M周期检查点、慢性髓系白血病、细胞衰老、细胞内炎性反应相关的基因以及原癌基因MYC目标基因表达上调。Western blot法实验进一步证实,BCORP483L突变细胞的PI₃K/Akt/mTOR通路明显受到抑制。结论 BCOR突变导致细胞PI₃K/Akt/mTOR通路受到抑制,进而导致细胞凋亡增加、增殖受抑。BCOR突变能通过上调细胞衰老相关基因以及原癌基因MYC目标基因表达,提高细胞内炎性反应水平,从而促进MDS疾病进展。     

唾液酸Tn抗原与半乳糖凝集素-3在膀胱癌 PI3K/Akt/mTOR信号通路中的研究进展

膀胱癌为泌尿系统最常见的肿瘤之一,其发生率呈现上升趋势。研究证实唾液酸Tn(sialyl Tn, sTn)抗原与半乳糖凝集素-3(Galectin-3)在膀胱癌中高表达,且与不良预后相关,sTn抗原与Galectin-3可通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI₃K)/蛋白激酶B(protein kinase B, PKB),通常也被称为Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路在膀胱癌的发生、发展中发挥作用。本文就sTn抗原与Galectin-3在膀胱癌PI₃K/Akt/mTOR通路中的进展进行综述。     

钙黏蛋白17对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其PI3K/AKT/mTOR信号通路调节机制

目的：探讨钙黏蛋白17 (Cadherin-17)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的机制。方法：构建Cadherin-17基因过表达及小干扰质粒,包装成慢病毒,转染至SW480细胞,构建过表达和干扰病毒稳转株。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中Cadherin-17 mRNA和蛋白表达水平,验证转染效率并鉴定稳转株。SW480细胞分为对照组、空载体组、 Cadherin-17过表达质粒(OV-Cadherin-17)组和Cadherin-17小干扰质粒(si-Cadherin-17)组,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Cadherin-17、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002处理...     

NVP-BEZ235对人结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨NVP-BEZ235对人结直肠癌细胞株SW480的抑制、凋亡作用及其可能的作用机制。方法:以不同浓度的NVP-BEZ235处理体外人结直肠癌细胞株SW480,分别用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测NVP-BEZ235对SW480细胞的增殖抑制作用、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的表达。结果:NVP-BEZ235对人结直肠癌细胞株SW480的生长具有显著的抑制活性,诱导其凋亡,抑制p-Akt、p-p70S6K蛋白的表达,且均与药物浓度和作用时间呈正相关。结论:NVP-BEZ235具有抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长作用并诱导其凋亡,且机制可能是通过抑制p-Akt、p-p70S6K蛋白的表达来实现的。     

TMAO通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响心脏原代成纤维细胞的增殖

目的 探讨研究氧化三甲胺(trimethylamine-N-oxide,TMAO)通过PI₃K/AKT/mTOR信号通路影响心脏原代成纤维细胞的增殖的机制。方法 分别用0、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0μmol/L 的TMAO培养心脏原代成纤维细胞48h,作为浓度梯度组;用TMAO分别处理心脏原代成纤维细胞0、15、30、60min,作为时间梯度组;在用TMAO处理细胞前,加入PI₃K抑制剂LY294002 预处理细胞30min,作为抑制剂组。裂解细胞收集蛋白,用Western blot法检测蛋白表达量。 结果 TMAO增加了PI₃K/AKT/mTOR细胞增殖信号通路中p-PI₃K、p-AKT、p-mTOR的表达量,p-PI₃K 在TMAO为10μmol/L、处理30min的时候表达量最高,p-AKT和p-mTOR在 TMAO为25μmol/L 处理60min的时候表达量最高。在抑制剂组中,与单纯用TMAO处理的细胞比较,同时用PI₃K抑制剂处理组,其p-PI₃K、p-AKT、p-mTOR的表达量明显减少。结果较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TMAO可能促进心脏原代成纤维细胞的增殖,且是通过激活PI₃K/AKT/mTOR信号通路起作用。     

基于lncRNA DGCR5介导miR-1180/SFRP1/Wnt通路对结直肠癌细胞生长转移的影响

目的 分析长链编码RNA (lncRNA) DiGeorge综合征临界区基因5 (DGCR5)对结直肠癌细胞生长转移的影响,并基于miR-1180/分泌型卷曲相关蛋白1 (SFRP1)/Wnt通路分析其中的机制。方法 选取人结直肠癌细胞系SW480进行培养。将SW480细胞分为对照组（C组,正常培养SW480细胞）、DGCR5 NC组（SW480细胞+转染DGCR5 NC载体）、DGCR5 mimic组（SW480细胞+转染DGCR5 mimic载体）以及DGCR5 inhibitor组（SW480细胞+转染DGCR5inhibitor载体）。转染完成后采用qPCR检测各组细胞中DGCR5的表达,验证细胞是否转染成功;分别采用CCK8法、克隆形成实验、平板划痕实验以及Transwell实验检测细胞活力、增值、迁移以及侵袭情况。荧光素酶报告测定lncRNA DGCR5与miR-1180的靶向关系;qPCR检测转染后各组细胞miR-1180/SFRP1的表达;WB检测各组细胞SFRP1、Wnt和β-catenin蛋白表达水平。结果 与DGCR5 NC组比较,DGCR5 inhibitor组...     

miR-630对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞的增殖、凋亡与氧化损伤的影响

目的 探讨miR-630对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞的增殖、凋亡与氧化损伤的影响。方法 将HLE-B3细胞分为对照组、H₂O₂组、H₂O₂₊阴性对照组(H₂O_2+miR-NC)和H₂O_2+miR-630抑制剂组(H₂O_2+miR-630 inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞中miR-630的表达水平。细胞集落形成实验和EdU实验分析各组细胞的增殖能力。细胞划痕愈合实验分析各组细胞的迁移能力。Annexin Ⅴ-FITC/PI分析各组细胞凋亡能力。试剂盒检测ROS水平和SOD含量。Western blot法检测各组细胞中Bcl-2和Akt蛋白的表达。结果 与对照组比较,H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组中miR-630的表达显著上调(P=0.000);与H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组比较,低表达miR-630使HLE-B3细胞中miR-630的表达降低。与对照组比较,H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组HLE-B3的增殖能力(P均<0.000)、迁移能力显著下降(P均=0.000),凋亡能力明显提高(P均=0.000);与H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组比较,H₂O_2+miR-630 inhibitor组HLE-B3细胞的增殖能力(P均<0.01)、迁移能力提高(P均<0.05),凋亡能力显著下降(P=0.000)。与对照组比较,H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组中ROS水平上调(P均=0.000)、SOD含量减少(P=0.000)、Bcl-2和Akt蛋白表达水平下调(P均=0.000);与H₂O₂组和H₂O_2+miR-NC组比较,H₂O_2+miR-630 inhibitor组中ROS水平下调(P均<0.01)、SOD含量增加(P<0.05)、Bcl-2和Akt蛋白表达水平上调(P<0.01,P<0.05)。结论 低表达miR-630可能促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞的细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡和减少氧化损伤,其可能与Bcl-2和Akt的表达上调相关。     

NVP-BEZ235调节肿瘤细胞DNA辐射损伤修复作用研究进展

放射治疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一,但辐射抵抗严重制约其疗效,是亟需解决的难题。目前认为,DNA损伤修复是辐射抵抗的重要原因,对修复途径进行抑制有助于增加肿瘤细胞的辐射损伤。NVP-BEZ235是PI₃K/mTOR双靶点抑制剂,在结直肠癌等多瘤种的体外/异种移植瘤研究中,通过抑制PI₃K/Akt/mTOR通路、非同源末端结合修复途径、同源重组修复途径有效抑制细胞DNA损伤修复反应,增加肿瘤细胞辐射损伤。本文综述了肿瘤细胞经辐射诱导后的DNA损伤修复机制,和NVP-BEZ235对该机制的抑制作用。