胎儿体内SaCas9蛋白抗体的研究

目的 通过检测成人及胎儿体内是否存在SaCas9蛋白抗体,观察患者体内针对SaCas9蛋白抗体的体液免疫情况,从而进一步评价CRISPR/SaCas9系统临床应用的安全性并探究治疗遗传病的新方法。方法 收集于郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心进行唐氏筛查或产前诊断孕妇检测后欲废弃的血清、羊水、胎儿脐带血样本,通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测样本中SaCas9蛋白抗体的存在情况。结果 在42例孕妇血清样本中均可检测到SaCas9蛋白抗体,18例胎儿羊水及10例胎儿脐带血样本中均未检测出。结论 成人血清内存在SaCas9蛋白抗体,而羊水和脐血内均未检测出,表明胎儿体内可能没有针对CRISPR/SaCas9系统的体液免疫,从而为遗传病的宫内基因治疗提供了一定依据。     

支架载体在BMP-9转导干细胞成骨基因治疗中特性的研究

目的:比较3种可能的支架载体在以骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP-9)介导细胞为基础的裸鼠成骨基因治疗模型中的不同促成骨特性.方法:4～6周龄雌性裸鼠40只,体重15～20 g,随机分为4组.3种支架载体分别为:Ⅰ型胶原纤维,羟基磷灰石-磷酸三钙,脱钙基质骨(Demineralized bone matrix,DBM).分别将表达BMP-9重组腺病毒Ad-BMP-9感染后的小鼠成肌细胞系C2C12细胞注入埋植于皮下一侧的3种载体.将表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)重组腺病毒Ad-GFP感染后的C2C12细胞分别注入埋置于其对侧皮下的3种载体作为对照.第4组仅在双侧皮下分别注入Ad-BMP-9或Ad-GFP感染后的C2C12细胞.4周后处死实验裸鼠,行X线检查和组织学分析.结果:X线检测显示:Ⅰ型胶原纤维组90%样本出现新骨形成,HA-TCP组、DMB组和皮下注射组的新骨形成率分别为89%、50%和44%.组织学分析显示:Ⅰ型胶原纤维组和HA-TCP组新骨质量和数量更佳;Ⅰ型胶原纤维组样本中干细胞及新骨分布较其它组更趋均匀;DBM组样本中存活干细胞数量少于其它组.结论:在以BMP-9基因转导细胞为基础的基因治疗中,使用Ⅰ型胶原纤维或HA-TCP载体较脱钙基质骨载体可更有效成骨.同时,Ⅰ型胶原纤维和HA-TCP载体可为基因治疗中使用的细胞提供更好的组织工程环境.     

杜氏肌营养不良（DMD）患儿营养状况与膳食营养摄入情况的横断面研究

目的 调查杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy, DMD）患儿营养状况及膳食摄入情况,初步探索两者的相关关系,为制定DMD患儿合理营养治疗提供理论依据。方法 选择2017年7月–2021年4月于四川大学华西第二医院就诊并经基因检测法诊断为DMD的共223名2～14岁患儿作为研究对象,采用3天24小时膳食回顾法进行膳食调查,采用化学发光法测定血清维生素D水平。结果 营养状况正常DMD患儿仅占33.2%,生长迟缓、低体质量、超重、肥胖发生率分别为13.5%、14.4%、14.3%、8.1%,血清维生素D缺乏和不足患儿分别占9.0%和89.7%;膳食调查DMD患儿每日碳水化合物、蛋白质和脂肪供能比分别为（47.40±6.64）%、（14.46±2.22）%和（38.17±5.30）%;每日膳食钙和维生素D摄入量分别为（433.32±164.39） mg/d、（155.73±89.30） IU/d;生长迟缓DMD患儿蛋白质摄入量/蛋白质平均需要量的比值（P=0.003）和能量摄入量/能量需要量的比值（P=0.007）低于营养状况正常DMD患儿。结论 DMD患...     

H7N9禽流感病毒在小鼠体内的适应性研究

目的进一步探讨H7N9禽流感病毒对哺乳动物的感染与致病能力,并对其分子机制进行研究。方法以病毒滴鼻感染小鼠,在BALB／c小鼠肺组织中连续传代,通过病毒全基因组测序及比对探寻适应的分子机制。结果禽流感H7N9A／Anhui／1／2013病毒,经过在小鼠体内进行9次传代后,对鼠肺适应株与野生型毒株进行基因比对,发现适应株HA基因,NA基因以及PA亚基共发生了4个有义突变。结论禽流感H7N9A／Anhui／1／2013病毒经连续传代后基因发生突变,但对病毒的毒力以及致病力影响仍需后续实验验证。     

125I-Genistein 在荷人乳腺癌裸鼠体内分布的实验研究

目的研究^125I-Genistein在荷人乳腺癌裸鼠体内的生物学分布情况．探讨Genistein用于治疗人乳腺癌的可行性。方法Iodogen法标记Genistein；建立荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型；测定^125I-Genistein在荷瘤裸鼠体内的放射性分布．计算肿瘤（T）与非肿瘤组织（NT）的放射性比值。结果^125I-Genistein比活度为336KBq/μg．放射性化学纯度为98．72％。尾静脉给药30min后肿瘤组织的放射性达到高峰．但在各观察时相点肿瘤（T）放射性均显著低于血液、肝脏与肾脏（NT）（P〈0．01）；肾脏放射性明显高于肠道,30min后高于除血液外的其他受检组织；肠和脾脏的放射性始终处于极低水平。结论Genistein用于人乳腺癌的治疗需要进一步研究。以提高其在肿瘤组织中的分布。     

杜氏肌营养不良小鼠肌损伤对肝脏脂质代谢的影响及其作用机制

杜氏肌营养不良(Duchene muscular dystrophy,DMD)是一种严重的进行性肌肉萎缩性疾病,近年来关于其患者脂质异常的报道增多,但对其肝脏脂质的关注不多.本实验旨在探究抗肌萎缩蛋白的基因缺陷对肝脏脂质合成产生的影响.以7周龄的mdx雄性小鼠为DMD模型,通过肝脏组织形态学检查、血生化检测,以及基因和...     

3例无家族史Duchenne肌营养不良患者的基因突变研究

目的探讨3例无Duchenne肌营养不良(DMD)家族史DMD患者的发病原因。方法采用17对引物检测dystro-phin基因外显子的缺失,结合45CA、49CA、50CA、3′CA和5′CA这5个短串联重复序列(STR)多态位点,对3个无DMD家族史而只有1例明确患者的家系进行连锁分析。结果 STR连锁分析显示3例患者的49CA位点dystrophin基因缺失,但其母亲49CA位点均为杂合子。结论 3个家系中的3位母亲均不是致病基因的携带者,DMD是由于患者自身发生基因突变所致。     

125I标记的[Tyr3]-Octreotide在小鼠体内的分布及其药代动力学研究

目的 探讨^125ICh-T法标记生长抑素类似物奥曲肽的方法，观察其在小鼠体内的生物学分布。方法用Ch-T法进行[Tyr3]-octreotide的^125I标记，标记完成后加入NH4HAc以防止标记物的再氧化。SephadexG-10分离纯化，纸层析测定放化纯，并行小鼠体内分布和药代实验。结果 ^125I[Tyr^3]-octreotide比活度为5.92TBq／mmol。标记率为76％，放化纯为95％。注射后1．0h血液中放射性下降了90％，肠道、肝脏和肾脏中均有浓集，标记物24h内排出体外。结论 ^125I的Ch-T法标记[TyT^3]-octreotide放化纯高，方法简便，标记物的稳定性尚可。^125I-[TyT^3]-octreotide在小鼠体内血液清除快，药代动力学符合二室开放模型，T1/2a为5．28min，T1/2β为141.3min，经肠-肝途径和泌尿系统排除。     

AAV介导的FHL2-siRNA治疗荷瘤小鼠的实验研究

目的 探讨FHL2-siRNA对裸鼠体内人大肠癌移植瘤的抑制作用。方法 建立裸鼠体内人大肠癌移植瘤动物模型, 当移植瘤平均体积约为 50mm3 时, 在裸鼠体内进行FHL2-siRNA治疗,观察人大肠癌移植瘤的生长情况和组织形态学改变。 结果 裸鼠人大肠癌移植瘤的生长受到明显抑制，siRNA治疗组、siRNA+5FU联合治疗组与对照组比较, siRNA治疗组与siRNA+5FU联合治疗组比较差异具有显著性 (P<0.05)。结论FHL2-siRNA可有效抑制裸鼠体内人大肠癌移植瘤的生长, 为大肠癌的基因治疗提供重要的实验依据。     

人骨髓间充质干细胞在mdx鼠体内的动态分布

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)在mdx鼠体内的动态分布特点。方法用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记hBM-MSCs,将1×107个干细胞(0·3ml)经尾静脉注入免疫抑制的mdx鼠(8~10周龄)体内。于移植后48h、2、4、8、12、16、20、24周处死鼠,用免疫荧光法检测各组织器官的BrdU阳性细胞核数、骨骼肌人细胞核(Hu)及人抗肌萎缩蛋白(Dys)的表达,RT-PCR检测人Dys mRNA的表达。结果移植后4周内,BrdU阳性细胞核可见于多数组织、器官,其中以骨髓、肝、肺较多;肝、肺BrdU阳性细胞核数4周后逐渐下降;移植后48h骨髓BrdU阳性细胞核数较多,2周最多,16周后仍维持较高水平;4周后骨骼肌的BrdU阳性细胞核数逐渐增加。移植后2周骨骼肌检测到少量人特异性抗核抗体(anti-Hu)阳性细胞核,4周后在骨骼肌肌膜可见少量人特异性Dys阳性细胞,8周后有Dys mRNA的表达;随着移植时间的延长,anti-Hu抗体阳性细胞核数和Dys阳性细胞比例逐渐增高,DysmR-NA的表达逐渐增强。结论hBM-MSCs移植mdx鼠后早期(2~4周)主要分布在骨髓、肝、肺,后期(4周后)主要分布在骨髓、骨骼肌。     

18F-FMISO在肺癌模型小鼠体内的生物分布及PET显像研究

目的 评价乏氧显像剂18F-硝基咪唑丙醇(18F-FMISO)在肺腺癌动物模型中的诊断价值.方法 荷肺腺癌T739小鼠经尾静脉注入18F-FMISO后不同时间(30、60、90、120 min)处死,测量18F-FMISO的生物分布,并行PET显像.对照组小鼠在注入18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)后行PET显像.结果 荷瘤鼠肿瘤PET显像清晰.生物分布研究表明肿瘤有明显的放射性摄取.在肾脏和肝脏有较高的放射性分布.肿瘤对血和肌肉的T/NT比值均大于2.结论 肺部恶性肿瘤组织中18F-FMISO摄取高于正常组织,可通过PET清晰显像,为进一步临床应用于肿瘤的乏氧诊断提供了依据.     

人生长激素基因在小鼠体内的高效表达

目的　观察人生长激素基因在小鼠体内的表达。方法　将构建的表达质粒直接注射于小鼠的股四头肌内 ,通过免疫组化和ELISA方法检测注射部位和血清中生长激素(GH)的表达情况。结果　免疫组化显示在注射部位有GH的表达 ,在血清中GH的浓度从d5开始即有表达 ,在d90仍有表达。结论　人生长激素基因通过直接注射法可以在小鼠体内有较长时间的表达 ,这为临床上基因治疗提供了新的途径。     

儿童假肥大型肌营养不良临床表现及其相关基因突变的研究

目的 回顾性分析海军军医大学第一附属医院儿科近年收治的5例假肥大型肌营养不良的患儿资料,以加强对该疾病的认识。方法 收集2009年7月-2020年5月收治于海军军医大学第一附属医院儿科,并确诊为假肥大型肌营养不良的5例患儿资料。观察患儿的一般资料、临床症状、体征(主要为Gower征)、实验室检查结果、肌肉活组织检查(简称活检)结果等。实验室检查主要指标包括肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme MB, CK-MB)、ALT、AST、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。采集患儿及其父母外周静脉血2 mL,应用高通量测序进行杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy, DMD)全基因panel检测。DMD基因缺失(或重复)的验证采用多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)。结果 纳入的5例假肥大型肌营养不良患儿均为男性,就诊时年龄为2 d～8岁,发病年龄为1 d...     

99mTc-ASON-EGF在荷乳腺癌裸鼠体内分布及反义显像研究

目的 研究^99mTc-ASON-EGF放射性药物在荷乳腺癌BALB/c裸鼠体内的分布及反义显像.方法 制备^99mTc-ASON-EGF,用SKBR-3细胞构建荷乳腺癌裸鼠模型;随后用放射性计数法测定其在荷乳腺癌BALB/c裸鼠体内的生物分布;最后在荷乳腺癌裸鼠模型中进行反义显像.结果 ^99mTc-ASON-EGF经鼠尾静脉注射后0.5、1、2、4h,在乳腺癌组织中的%ID/g值分别是4.17、11.32、18.36、7.86;其中,2h最高,为18.36;同样,经鼠尾静脉注射0.5、1、2、4h后进行反义显像,2h效果最好.结论 ^99mTc-ASON-EGF在体内具有良好的稳定性,在乳腺癌组织高浓聚,且在靶部位显像效果好,可望用于乳腺癌的显像诊断和治疗.     

半乳糖修饰的反义核酸在小鼠体内肝脏导向作用研究

半乳糖修饰的反义核酸在小鼠体内肝脏导向作用研究周永兴，郭军，姚志强，温守明，王升启，冯志华，张文彬，李光玉（唐都医院传染病科西安７１００３８空军总医院，军事医学科学院）关键词半乳糖受体；肝脏导向；反义核酸；基因治疗中图号Ｒ５１２．６国外曾有人将天然去...     

CRISPR/Cas9系统在现代生物学研究和临床试验中的应用

 规律成簇间隔短回文重复结构(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protien 9,Cas9)系统在生物医学研究中被广泛应用于基因编辑及探索基因的功能。这种基因编辑技术越来越多地运用在人类疾病的治疗中,包括巴斯综合征、杜氏肌萎缩症、血友病、地中海贫血和囊性纤维化。CRISPR/Cas 9基因编辑系统可以在体外细胞实验和体内动物实验上修复突变的DNA序列,也能改变 CCR5、PD-1/L1、CAR-T等基因序列,用于控制 HIV病毒的入侵及提高肿瘤免疫治疗的疗效。该技术还被运用于诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)分化,形成某些具有功能的器官用于器官移植。本文综述了CRISPR/Cas 9系统的来源、结构和作用原理,以及其在现代生物学研究和基因治疗领域的应用。     

三氧化二砷制剂在小鼠体内分布情况的研究

目的:了解三氧化二砷溶液及混悬液在小鼠体内的分布情况;方法:将三氧化二砷溶液及混悬液注入小鼠体内后,不同时间取小鼠脏器组织并测定其三氧化二砷含量,而得到三氧化二砷溶液及混悬液在小鼠体内的大致分布情况.结果与结论:从分布总量看,①肝、肺、肾中砷分布量的时间过程变化显著而血、心、脾、胃、脑中砷分布量的时间过程变化不明显(P＞0.05);②2种制剂在各脏器(体液)中砷分布量的差异明显(P＜0.01);③混悬液在血、脾、肺、脑中的砷分布量明显高于溶液(P＜0.05).     

成肌调节因子MyoD和myogenin在不同月龄DMD模型鼠mdx小鼠的表达

目的探讨成肌调节因子MyoD和myogenin在不同月龄DMD模型鼠mdx鼠的表达情况。方法取不同月龄DMD模型鼠mdx鼠以及相应的同龄正常C57鼠的腓肠肌,冰冻切片后用HE染色显示肌肉病理,SABC-DAB染色检测成肌调节因子MyoD和myogenin的表达。结果不同月龄mdx鼠肌肉坏死和再生程度不同,MyoD和myogenin在1月龄mdx鼠表达最强,在13月龄mdx鼠仍有表达,在正常同龄C57鼠不表达。结论MyoD与Myogenin在肌肉损伤后的再生修复过程中起作用,可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标。     

杜氏肌营养不良症家系致病基因的遗传学研究

目的 明确2个杜氏肌营养不良症(DMD)家系的致病因素,指导优生实现健康生育.方法 采用一代测序和肌肉组织mRNA水平测序分析2个家庭受检者基因型,对有再生育需求的2个家庭进行产前基因诊断.结果 一代测序发现1号家庭孕妇在DMD基因上存在c.2717-2721dupTCCTG杂合性突变,该孕妇为DMD的携带者,男性胎儿...     

白桦脂酸在小鼠体内组织分布初步研究

目的本研究主要为制定出合理的白桦脂酸HPLC检测方法,并测定给药后在小鼠体内各组织中的分布情况。方法通过灌胃给药的方式,建立色谱条件后进行方法学考察,通过测定白桦脂酸在小鼠组织中浓度,以分析白桦脂酸在小鼠体内的分布规律。结果色谱方法符合生物样品检测要求,能够测定组织中的药物浓度。结论白桦脂酸在肝、肾中分布最多,在其他组织中浓度上升相对较缓。