小檗碱对大鼠骨髓源性破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响

目的：研究小檗碱对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响,探讨小檗碱抑制骨吸收的细胞学基础。 方法：采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-（OH）2维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜观察细胞形态,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate—resistant acid phosphatase,TRAP）染色和观察骨片上骨吸收陷窝的形成鉴定破骨细胞。磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,计算机图像分析技术测定骨片上破骨性骨吸收陷窝的面积。 结果：小檗碱在0．1～10μmol／L范围内,浓度依赖性地抑制TRAP阳性多核破骨细胞的形成和TRAP活性,减少破骨性骨吸收陷窝的面积;在10μmol／L浓度下,对破骨细胞的抑制作用最强,对TRAP阳性多核破骨细胞的形成和TRAP活性的抑制率分别达到了60．45％和42．12％,骨吸收陷窝面积减少72．69％。 结论：小檗碱通过抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能减少骨质的丢失。     

鹿瓜多肽注射液对PMMA颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解抑制作用的实验研究

目的：通过建立小鼠体内PMMA颗粒颅骨溶解模型来研究鹿瓜多肽注射液在PMMA颗粒诱导小鼠颅骨溶解及破骨细胞增殖中的作用。方法：选用50只BALB/c小鼠,在小鼠的颅骨部位注入PMMA颗粒,建立骨溶解动物模型。按照实验要求随机分为5组,每组10只。A组：空白对照组,手术不加PMMA颗粒,仅给予α-MEM培养液,术后给予腹腔注射生理盐水;其余4组分别为B组、C组、D组及E组,手术中均给予含30g/L PMMA颗粒的α-MEM悬液,术后分别给予腹腔注射生理盐水,5mL/kg鹿瓜多肽注射液,10mL/kg鹿瓜多肽注射液,20mL/kg鹿瓜多肽注射液,1次/日,持续注射2周。2周后麻醉小鼠,取腹主动脉血后,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1、IL-6、PGE2水平。处死动物并取材,行HE染色、TRAP染色检测。结果：经过鹿瓜多肽注射液治疗的C、D、E组细胞液中的TNF-α、IL-1、IL-6、PGE2的含量较单纯PMMA颗粒处理的B组细胞液中的TNF-α、IL-1、IL-6、PGE2含量降低。HE染色示经过鹿瓜多肽注射液干预的各组骨破坏溶解面积较单纯PMMA颗粒处理B组减少。TRAP染色示经过鹿瓜多肽注射液干预的各组中,破骨细胞数目较单纯PMMA处理B组减少。结论：鹿瓜多肽注射液能够抑制PMMA颗粒诱导的骨溶解作用。     

盐酸巴马汀抑制聚甲基丙烯酸甲酯颗粒诱导骨溶解的实验研究

  目的 观察破骨细胞在聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）颗粒诱导的骨溶解中的反应,以及盐酸巴马汀对破骨细胞的抑制作用。方法 将40只小鼠随机分为4组,构建颅骨模型。A、D组小鼠颅骨表面注射生理盐水,B、C组注射PMMA颗粒悬液。1 d后A、B组小鼠颅骨植入颗粒处局部注射PBS,C、D组注射盐酸巴马汀。14 d后处死小鼠,取出颅骨进行相关检查。结果 B组骨溶解明显,炎性细胞及破骨细胞计数较其余3组增多（P0.05）。骨矿物质密度和骨矿物含量检测结果显示,A、D组高于B、C组（P<0.05）,而C组又明显高于B组（P<0.05）。结论 PMMA颗粒可以诱导骨溶解;盐酸巴马汀可抑制破骨细胞的分化成熟,进而抑制PMMA颗粒诱导的骨溶解,对假体无菌性松动有防治作用。     

钛颗粒诱导骨溶解的不同动物模型形态学研究

目的 通过钛颗粒诱导建立3种不同的骨溶解模型,比较其形态学差异、炎性反应水平、骨溶解情况以及破骨细胞计数等指标,为建立骨溶解动物模型的选择提供更好的依据。方法 45只雌性BALB/c小鼠采用数字表法随机分为钛颗粒刺激颅骨骨溶解模型(A组)、钛颗粒刺激气囊模型组(B组)及钛颗粒刺激气囊植骨模型组(C组)。通过大体观察和组织病理学对3组模型进行形态学观察;采用透射电子显微镜观察对比A、B两组骨溶解面积及C组软组织变化的超微结构,讨论其与人体标本病理生理变化的相似性。结果 大体观察:A组可见颅骨表面有钛颗粒浸润,骨面不光整;B组气囊组织中有钛颗粒浸润,气囊囊壁增厚,有炎性水肿;C组可见颅骨块与周围的气囊组织之间有炎性细胞浸润,有钛颗粒包裹,且炎性反应明显。HE染色结果:A组颅骨表面钛颗粒周围有部分炎性反应,骨面欠平整;B组可见气囊囊壁厚,囊壁内有多种炎性细胞浸润,可有钛颗粒聚集;C组可见钛颗粒周围有炎性细胞浸润,骨片表面骨溶解表现。透射电子显微镜结果:A组破骨细胞胞质内见到钛颗粒,钛颗粒下有部分片状骨溶解;B组细胞胞质内有钛颗粒浸润,周围的细胞外散在有基质组织,基质组织中含水量减少;C组颅骨骨片骨面缺失,周围及与界膜之间有增生活跃的破骨细胞。结论 3种不同钛颗粒刺激下骨溶解动物模型的构建,形态学表现各有不同,可为假体周围骨溶解的基础研究提供有效的实验平台。     

柚皮苷抑制钛颗粒诱导糖尿病小鼠颅骨骨溶解的疗效观察

目的观察柚皮苷抑制钛颗粒诱导糖尿病小鼠颅骨骨溶解的疗效。方法将60只小鼠随机分为糖尿病组和非糖尿病组（各30只）。糖尿病组以链脲佐菌素诱导方案制备糖尿病大鼠模型。糖尿病和非糖尿病组小鼠再随机分为3个亚组（各10只）,分别为对照组、纯钛颗粒注射组、纯钛颗粒加柚皮苷注射组。通过酶联免疫吸附法测量血清骨钙素（OCN）及I型末端胶联肽（NTx）水平。μCT检测骨容积／组织容积比率及骨表面积／骨容积比率,组织形态学观测颅骨新骨形成面积、颅骨厚度、颅骨中缝面积改变。结果应用柚皮苷的糖尿病小鼠在新骨形成面积、颅骨厚度、骨容积、中缝面积、OCN水平方面与非糖尿病小鼠比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论柚皮苷可抑制糖尿病小鼠骨溶解,促进骨愈合,对临床治疗有辅助作用。     

锝［99Tc］亚甲基二膦酸盐抑制类风湿关节炎患者外周血单核细胞向破骨样细胞转分化

目的：研究锝［99Tc］亚甲基二膦酸盐（technetium［99Tc］ methylenediphosphonate,99Tc-MDP）对核因子κB受体活化子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage-colony stimulating factor,M-CSF）诱导类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞 (peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向破骨样细胞转分化的影响。方法：从6例RA患者外周血中分离单核细胞,于RPMI-1640培养液中培养,RANKL（25 μg/L）和 M-CSF（25 μg/L）诱导转分化,用不同浓度99Tc-MDP干预（5,10,20,50 mg/L）,在不同时间点（4,12,20 d）终止培养并行HE染色,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色。结果：RA患者外周血单核细胞培养至第12～16天,可见大量TRAP染色强阳性多核巨细胞,99Tc-MDP可显著抑制上述变化,且其抑制作用随浓度的增加而增强（P＜0.05）。结论：99Tc-MDP可通过抑制破骨样细胞转分化而达到延缓RA骨质破坏的作用。     

破骨细胞敲除PDK1基因对PMMA颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解抑制作用的实验研究

目的:研究破骨细胞敲除3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)基因对聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解的抑制作用.方法:取12只C57BL/6小鼠及6只破骨细胞敲除PDK1基因鼠,构建骨吸收模型,随机分为3组,每组6只,分别为假手术(Sham)组、PMMA+C57BL/6组、PMMA+基因敲除(...     

冰茶栓对骨癌痛大鼠骨溶解的影响

目的观察冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨溶解的影响。方法将40只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、邦罗力组及冰茶栓组,采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛模型;模型复制第13天开始,假手术组和模型组给予空白栓,邦罗力组给予邦罗力20μg/kg,冰茶栓组给予冰茶栓101mg/kg。末次给药后,对各组大鼠患肢进行X线摄片并评分以观察骨溶解情况,采用苏木精-伊红染色观察骨组织病理学变化,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数量。结果冰茶栓可明显降低骨癌痛大鼠患肢X线评分(P0.01),改善肿瘤引起的骨损伤,降低骨组织破骨细胞数量(P0.01)。结论冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨溶解具有较好的抑制作用。     

骨髓瘤细胞诱导破骨前体细胞分化的分子机制探讨

目的探讨人骨髓瘤细胞RPMI8226诱导破骨前体细胞分化的分子机制。方法采用RT-PCR和Western blot-ting法检测RPMI8226细胞能表达核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)蛋白和RANKL裂解酶(TACE、ADAM19)mRNA表达。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)细胞化学染色鉴定成熟破骨细胞。利用重组人RANKL蛋白(rhRANKL)、条件培养液和人抑制性RANKL单克隆抗体(RANKL mAb)参与培养,诱导RAW264.7细胞分化为成熟破骨细胞。结果 Western blotting法证实RPMI8226细胞表达跨膜型和可溶型RANKL(mRANKL,sRANKL)。RT-PCR法证明RPMI8226细胞表达RANKL、RANKL裂解酶和TRAP mRNA。TRAP染色观察RPMI8226细胞、MG-63细胞条件培养液与rhRANKL均能明显诱导RAW264.7细胞分化为TRAP阳性多核成熟破骨细胞。RT-PCR法证实此3组能刺激RAW264.7细胞上调TRAP mRNA表达。TRAP染色和TRAP mRNA表达中发现RANKL mAb能阻断RPMI8226细胞条件培养液和rhRANKL诱导的破骨前体细胞分化成熟作用。结论骨髓瘤RPMI8226细胞能表达RANKL,其条件培养液可能含sRANKL,能使RAW264.7细胞分化成TRAP阳性多核成熟破骨细胞。     

小檗碱逆转胰岛β细胞去分化机制网络药理学研究

目的　基于网络药理学技术探讨小檗碱逆转胰岛β细胞去分化的潜在作用机制。方法　借助ＧｅｅｎＣａｒｄｓ数据库筛选小檗碱干预靶基因及胰岛β细胞去分化的相关基因,使用Ｒ 软件ＶｅｎｎＤｉａ ｇｒａｍ 数据包进行交互分析,利用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３．６．１软件进行小檗碱 胰岛β细胞去分化靶点网络构建,建立药物-疾病共同靶点的相互作用网络,运用Ｒ软件ＣｌｕｅＧＯ插件对上述信息进行注释,并进行ＫＥＧＧ 通路富集分析。结果　本研究共获得小檗碱作用靶点２４５个,其中与胰岛β细胞去分化相关的有１９３个,ＫＥＧＧ 通路富集分析显示小檗碱干预胰岛β细胞去分化涉及的主要信号通路有ＰＩ３Ｋ-Ａｋｔ信号通路、ＦｏｘＯ信号通路、ＡＭＰＫ 信号通路及Ｉｎｓｕｌｉｎ信号通路等。结论　小檗碱可能通过多靶点参与胰岛β细胞去分化的调节,并通过调控ＦｏｘＯ、ＰＩ３Ｋ Ａｋｔ、ＡＭＰＫ 以及Ｉｎｓｕｌｉｎ信号通路等途径发挥逆转胰岛β细胞去分化的作用。     

盐酸小檗碱对B16细胞的分化诱导作用

目的 测定盐酸小檗碱对小鼠黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。方法 以MTT法测定盐酸小檗碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过克隆形成实验、细胞黑色素含量的测定以及B16细胞体内成瘤能力的测定观察盐酸小檗碱对B16细胞的诱导分化作用。结果 盐酸小檗碱对B16细胞具有明显的增殖抑制作用;并使B16细胞生长缓慢,平铺不重叠,呈正常上皮样细胞分化,细胞的克隆形成能力降低,细胞内的黑色素生成能力增强,C57/BL小鼠体内成瘤能力降低。结论 盐酸小檗碱对B16细胞具有诱导分化作用。     

去氢骆驼蓬碱在骨和软骨代谢方面的研究进展

去氢骆驼蓬碱是一种β-咔啉类生物碱,广泛分布于植物、动物以及人体组织和体液中。它具有多种药理作用,包括抗菌、抗疟原虫、抗氧化、抗肿瘤、抗诱变、抗糖尿病、舒张血管和兴奋中枢等功能。此外,去氢骆驼蓬碱还可通过影响破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞的增殖分化调控骨与软骨组织的形成和代谢,发挥对骨及软骨组织的促再生和保护作用,从而为骨质疏松、骨折及骨关节炎等疾病的防治开辟一条新途径。     

WT161抑制小鼠破骨细胞分化及骨吸收的研究

目的 研究WT161对破骨细胞分化及骨吸收功能的作用及机制。方法 取8周龄雄性C57BL/6小鼠的骨髓巨噬细胞（bone marrow-derived macrophage,BMM）进行原代培养,通过CCK-8细胞毒性试验探究不同浓度WT161对BMM增殖的作用;通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察各浓度WT161对破骨细胞分化的影响;通过骨吸收试验探究各浓度WT161对破骨细胞骨吸收功能的作用;通过蛋白质印迹试验检测WT161对核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）p65、p-NF-κB p65及活化T细胞核因子（nuclear factor-activated T cell 1,NFATc1）信号通路的影响。结果 CCK-8结果显示当WT161浓度>0.63μmol/L时,WT161对BMM具有显著的抑制增殖作用;诱导破骨细胞分化时,WT161抑制BMM分化为破骨细胞,破骨细胞数目及铺展率明显减少;骨吸收试验显示WT161可显著抑制破骨细胞骨吸收功能;蛋白质印迹试验结果表明,WT161抑制NF-κB p65的磷酸化及下游NFATc1的表达。结论 WT161通过抑制NF-κB及下游的NFATc1信号通路从而抑制破骨细胞的分化及骨吸收功能。     

肿瘤坏死因子-α诱导外周血单核细胞分化为破骨细胞

目的:验证肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以直接诱外周血单核细胞(PBMCs)分化为具有骨吸收作用的破骨细胞. 方法:小白鼠PBMCs体外培养中加入TNF-α和白细胞介素-1α(IL-1α)及巨噬细胞克隆集落刺激因子(M-CSF);同时,分别加入细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的拮抗剂RANK:Fc和抗TNF-α中和抗体. 对培养终末细胞作组织化学染色,检测破骨细胞特征性标志物抗酒石酸磷酸酶(TRAP)的表达;并以象牙磨片上虫蚀样骨吸收陷窝的形成为指标检测其生物学活性. 结果:PBMCs体外培养形成大量TRAP阳性的多核细胞(MNCs);象牙磨片上见到虫蚀样骨吸收陷窝,后者的面积对TNF-α呈剂量依赖性. RANK:Fc对此现象无抑制作用,而抗TNF-α中和抗体可完全阻断该现象的发生. 结论:TNF-α能够直接诱导PBMCs分化为具有骨吸收功能的破骨细胞.     

小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及增殖抑制作用

目的 研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响。方法 应用锥虫蓝排染法、生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长的影响；细胞分化根据细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来判断；细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，IC50为5．29(24h)，2．65(48h)，0．74(72h)mg／L。选择1，2，4，8mg／L小檗碱作用于HL-60细胞，动态观察发现HL-60细胞向成熟细胞分化：细胞核变小，核浆比减少；NBT还原能力显著增强；CD11b表达升高，4mg／L组CD11b阳性率高达85．1％。细胞周期分析发现，小檗碱处理后细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞明显减少。结论 盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖，并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化。     

小檗碱对OX-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的作用

目的:观察小檗碱对巨噬细胞泡沫化的保护作用.方法:利用ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7泡沫化,并在此过程中加入不同浓度小檗碱,通过油红O染色及胆固醇酯与总胆固醇的测定判断细胞泡沫化程度,评价小檗碱的作用效果.结果:与ox-LDL诱导的泡沫细胞组相比,小檗碱加入后细胞内脂质累积明显减少,而且泡沫化程度也降低了.结论:小檗碱能够降低ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化程度.     

抗坏血酸抑制核因子κB受体活化子配体诱导RAW264.7细胞的分化和功能

目的研究抗坏血酸对核因子κB受体活化子配体(RANKL)诱导体外培养的破骨前体细胞RAW2647形成成熟多核破骨细胞的影响,探讨抗坏血酸在破骨前体细胞分化中的作用及机制。方法利用不同浓度的抗坏血酸与RANKL单独或共同处理RAW2647细胞,MTT法测定细胞增殖,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定破骨细胞表型基因和功能基因的表达,Western印迹方法检测碳酐酶Ⅱ基因蛋白表达,破骨细胞的骨吸收功能用骨吸收陷窝面积计数法分析。结果抗坏血酸和RANKL都抑制RAW2647细胞的增殖(P<005),但它们之间无协同作用。抗坏血酸本身不能诱导RAW2647细胞形成破骨细胞,但可抑制RANKL诱导的TRAP阳性多核破骨细胞形成(P<005)。抗坏血酸下调RANKL诱导的碳酐酶Ⅱ和RANK基因mRNA表达及碳酐酶Ⅱ基因蛋白表达,抑制骨吸收功能(P<005)。结论抗坏血酸能直接抑制RANKL诱导的破骨细胞形成和功能。