miR-30a-5p通过调节靶基因ARG1对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响

目的:探讨miR-30a-5p通过调节靶基因精氨酸酶-1(ARG1)对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响.方法:选取急性缺血性脑卒中患者60例为病例组,同期体检健康者60例作为对照组.RT-qPCR检测外周血候选miRNAs,miR-30a-5p及靶基因ARG1表达情况;将miR-30a-5p模拟物、阴性对照模拟物及mock转染到HL-60或RAW264.7细胞中,荧光素酶报告基因分析miR-30a-5p与ARG1的作用关系;RT-qPCR和Western blot检测ARG1 mRNA和蛋白的表达情况.结果:miR-30a-5p、miR-579-3p和Let-7e表达水平在病例组和对照组存在统计学差异(P<0.001),生物信息学预测miR-579-3p和Let-7e没有免疫调节相关的靶基因,而ARG1是miR-30a-5p潜在靶基因.荧光素酶报告基因实验证实ARG1是miR-30a-5p直接作用靶点,ARG1 mRNA在缺血性脑卒中外周血中明显上调(P<0.05).miR-30a-5p模拟物转染HL-60和/或RAW 264.7细胞24 h后,ARG1 mRNA和蛋白表达水平较mock和NC组明显降低(P<0.05).miR-30a-5p对LPS处理后的RAW 264.7细胞48 h后,miR-30a-5p模拟物组NO水平较mock和NC组明显升高(P<0.05).结论:miR-30a-5p及其靶基因ARG1是急性缺血性脑卒中重要的分子标志物之一,miR-30a-5p可能通过抑制靶向基因ARG1表达参与缺血性卒中免疫应答的病理生理过程.     

miR-148a-3p对LPS诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及炎症因子的影响

目的 探讨miR-148a-3p对LPS诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及炎症因子的影响及其机制.方法 以肾小球系膜细胞(HBZY-1)为研究对象,分为control组、LPS组(10 μg/mL)和miR-148a-3p inhibitor组3组;qPCR法检测各组细胞中miR-148a-3p的表达水平;克隆形成实验检...     

miR-181a-5p靶向HMGB1调节急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-181a-5p调控HMGB1的表达在雨蛙素(cerulein)联合脂多糖(lipopolyasccharide, LPS)诱导的严重急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常组,1×10^-8 mol/L的cerulein联合10μg/mL的LPS诱导AR42J细胞24 h建立体外严重AP组,用脂质体转染法将miR-NC(空载体)和miR-181a-5p mimic转染至严重AP组作为miR-NC对照组和miR-181a-5p过表达组。采用qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 m RNA的表达水平;Western Blot检测HMGB1和Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-181a-5p和HMGB1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 与正...     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

miR-203对LPS诱导的肺泡巨噬细胞释放炎症因子和氧化应激的影响

目的 研究miR-203对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞释放炎症因子和氧化应激的影响.方法 将肺泡巨噬细胞分为Control组(空白对照)、LPS组(LPS处理)、LPS+NC组(转染mimics control,LPS处理)、LPS+miR-203组(转染miR-203 mimics,LPS处理).采用qRT-P...     

miR-548a-3p调控TLR4抑制脂多糖诱导结肠上皮细胞的凋亡

目的 探究微小RNA(miRNA)-548a-3p对脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞的凋亡和炎症反应影响及其机制。方法 收集2019年1月至2020年5月于南方医科大学深圳医院就诊,经肠镜及病理学检查确诊为活动期溃疡性结肠炎35例患者的肠黏膜组织及正常肠道黏膜组织。取正常结肠上皮细胞分为6组：对照组不做任何处理;LPS组给予50μg/mL LPS处理;miR-NC组、miR-548-3p mimics组、miR-548-3p inhibitor组、miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-toll样受体4(TLR4)组分别转染相应序列,随后使用等量LPS处理。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-548a-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素8(IL-8)含量,双荧光素酶报告基因实验验证miR-548a-3p与TLR4的结合关系;Western blot实验检测TLR4、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因-相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果 miR-...     

miRNA-29a和miRNA-10a-5p对脓毒症所致急性肾损伤患者28d死亡率的预测价值

目的 探讨miR-29a和miR-10a-5p对评估脓毒症伴有急性肾损伤(AKI)患者28 d死亡率的预测价值.方法 收集我院124例急性肾损伤患者(AKI)血清样本,分为观察组(74例脓毒症所致AKI)和对照组(脓毒症无AKI)41例,记录患者一般情况,并用RT-PCR检测其中miR-29a和miR-10a-5p的表达情况,随访28 d,记录患者生存情况,采用Pearson相关分析检验miR-29a和miR-10a-5p与观察组患者血清肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)和肾损伤分子1(KIM-1)的相关性;多因素Logistic回归分析miR-29a、miR-10a-5p、Scr、Cys-C、KIM-1以及其他危险因素与脓毒症患者28 d死亡率的相关性.ROC曲线分析比较miR-29a和miR-10a-5p与Cys-C和Scr在脓毒症患者预后评估中的价值,最后进一步用统计学方法分析miR-29a和miR-10a-5p联合与Scr及Cys-C联合对脓毒症患者预后评估的价值.结果 随访28 d后:(1)74例AKI患者中21例死亡,占整体人数的35.53％;(2)相比于生存组,死亡组患者血清Scr及Cys-C表达上升(P＜0.05),死亡组患者血清中miR-29a和miR-10a-5p表达升高,有统计学意义(P＜0.05);(3)Pearson相关分析结果显示miR-29a和miR-10a-5p分别与Scr、Cys-C及KIM-1表达呈正相关;(4)多因素回归结果显示,miR-29a和miR-10a-5p均为脓毒症患者死亡的独立危险因素;(5)ROC曲线分析结果显示miR-29a和miR-10a-5p曲线下面积(auRoC)分别为0.82(95％CI,0.71-0.89)及0.75(95％CI,0.64-0.85),Cys-C、Scr和KIM-1曲线下面积分别为0.72(95％CI,0.66-0.86)、0.71(95％CI,0.63-0.84)及0.81(95％CI,0.72-0.81).miR-29a及miR-10a-5p二者联合检测的auROC值优于单一检测miR-29a、miR-10a-5p、Cys-C、Scr和KIM-1(P＜0.05).结论 miR-29a和miR-10a-5p在评估脓毒症患者死亡率时具有良好的预测价值.     

miR-146a-5p靶向IRAK-1调控DVT患者内皮祖细胞的增殖及炎症

目的 研究微RNA(miR)-146a-5p靶向白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)调控深静脉血栓(DVT)患者内皮祖细胞(EPCs)的增殖及炎症.方法 选取2018年7月至2019年6月该院诊断为DVT的10例患者及10例体检的健康志愿者为研究对象,分离外周血EPCs,检测miR-146a-5p、IRAK-1的表达水平;DVT患者的EPCs分为miR-阴性对照(NC)组、miR-146a-5p组、miR-NC+NC质粒组、miR-146a-5p+NC质粒组、miR-146a-5p+IRAK-1质粒组,检测细胞增殖活力及吸光度(A490)值、miR-146a-5p、IRAK-1、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 DVT患者EPCs中miR-146-5p相对表达水平低于健康志愿者,IRAK-1相对表达水平高于健康志愿者(P<0.05);miR-146a-5p组A490值、miR-146a-5p相对表达水平高于miR-NC组,IRAK-1、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达水平、野生型IRAK-1基因的荧光活力低于miR-NC组(P<0.05);miR-146a-5p+IRAK-1质粒组A490值低于miR-146a-5p+NC质粒组,I-RAK-1、NF-κB、TNF-α、IL-1β水平高于miR-146a-5p+NC质粒组(P<0.05).结论 miR-146a-5p靶向I-RAK-1促进DVT患者的EPCs增殖并抑制炎性反应.     

miR-10a-5p靶向ITSN1对宫颈癌细胞增殖和顺铂化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平.利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设...     

沙格列汀通过miR-15a-5p/INSR轴缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究

目的 探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(INSR)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制.方法 以INSR为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向INSR的miRNA并取交集.随后荧光素酶实验验证靶向关系.构建胰岛素抵抗2型糖尿病(IR-T2DM)模型.随后对IR-T2DM大鼠进行阴性对照、miR-15a-5p mimic、miR-15a-5p inhibitor转染或沙格列汀处理,8周后处死大鼠获取股四头肌及外周血.对各组大鼠血压、血糖、脂代谢相关指标进行测定,同时测定稳态模型评估(HOMA)胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI).定量-PCR检测各组大鼠骨骼肌中交集miRNA、INSR、IRS-1 和 GLUT4 mRNA 的表达.Western blot检测各组大鼠骨骼肌中INSR、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达.结果 miR-15a-5p被选定为INSR的靶向miRNA.与阴性对照组相比,IR-T2DM大鼠经miR-15a-5p inhibitor或沙格列汀处理后骨骼肌中INSR、IRS-1和GLUT4表达、外周血中HDL-C浓度、BW、ISI升高(均P＜0.05),但外周血中糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度、收缩压(SP)、舒张压(DP)和IRI在上述组中降低(均P＜0.05).上述指标的趋势在miR-15a-5p mimic组中与miR-15a-5p inhibitor及沙格列汀组完全相反(均P＜0.05).此外,与沙格列汀或miR-15a-5p inhibitor单独处理比较,两者联合处理能更有效地缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗(均P＜0.05).结论 沙格列汀能通过下调miR-15a-5p来上调INSR表达从而缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗.     

miR-519d-3p调控TLR4抑制脂多糖所致THP-1源性巨噬细胞炎症的机制研究

目的 探究miR-519d-3p在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症中的作用和分子机制.方法 用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应作为后续实验的细胞模型,应用荧光定量PCR检测miR-519d-3p表达;利用antago-miR-519d-3p及antago-NC或者miR-519d-3...     

miR-125 a-5 p在非小细胞肺癌血清中的表达及其意义

目的探究miR-125a-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达情况,分析miR-125a-5p与临床病理特征之间的相关性及其在NSCLC早期诊断中的意义。方法收集2017年7月至2018年3月安徽医科大学附属巢湖医院44例NSCLC患者为试验组和20例体检的健康志愿者为对照组。采用Q-PCR术检测NSCLC患者和健康者外周血清miR-125a-5p的表达量,并评估其临床意义。结果试验组血清miR-125a-5p相对表达量为0. 025(0. 017,0. 051),低于对照组的0. 050(0. 034,0. 117),差异有统计学意义(P <0. 05)。试验组患者miR-125a-5p的表达量与临床TNM分期呈负相关性(r=-0. 688,P <0. 05),而在性别、年龄、吸烟、组织分型间差异无统计学意义,与癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)水平均无相关性(P> 0. 05)。试验组患者CEA、CYFRA21-1的表达量与临床TNM分期均无相关性(P> 0. 05)。结论 miR-125a-5p在NSCLC患者血清中表达下调,对NSCLC早期诊断优于CEA、CYFRA21-1,可能成为NSCLC早期诊断的重要生物学指标。     

外周血中miRNAs表达水平对精神分裂症的诊断价值

目的:探讨外周血中miRNAs的表达水平对精神分裂症的诊断价值.方法:选取40例精神分裂症患者作为观察组,40例健康体检者作为对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定精神分裂症患者外周血液中miRNAs表达情况.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNAs的诊断效能.采用可视化和集成发现数据库(DAVID)工具对miRNAs靶基因进行基因功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:两组受试对象外周血miR-30d-5p、miR-181b-3p、miR-652-5p、miR-193a-3p、miR-181b-5p、miR-346、miR-572、miR-7-5p、miR-564、miR-548d-3p和miR-30a-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p表达水平高于对照组(P<0.05);miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.763,0.659和0.725,三者联合检测的AUC值为0.802.miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p靶基因与突触结构和神经功能密切相关,三者共同靶基因SATB2和PER2在精神分裂症患者中异常表达(P<0.05).结论:miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p在精神分裂症中异常表达,三者及其靶基因结合有望作为精神分裂症诊断规范和治疗监测的生物标记物.     

MiR-371a-5p表达与非小细胞肺癌预后的关系

目的 探讨微小RNA-371a-5p(miR-371a-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法采用实时定量聚合酶链反应技术(RT-qPCR)检测136例NSCLC肿瘤组织和其癌旁正常组织(距离肿瘤5 cm以上)标本miR-371 a-5 p的表达,应用χ2检验分析miR-371 a-5 p表达与病人...     

miR-155靶向JAK/STAT3通路促进LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应

目的 探讨miR-155在THP-1巨噬细胞炎性反应中的作用及调控机制.方法 使用脂多糖(LPS)处理THP-1来源的巨噬细胞构建体外巨噬细胞炎性模型,分为control组、LPS组、miR-155 mimics+LPS组和mimics NC+LPS组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述各组中miR-15...     

多柔比星对心肌细胞的损伤作用及对microRNA的影响

目的 探讨多柔比星对原代乳鼠心肌细胞的损伤作用及其对微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,不同浓度多柔比星(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)处理组.对照组细胞正常培养,处理组细胞使用终浓度分别为0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L的多柔比星处理24 h.倒置显微镜下观察心肌细胞搏动频率,CCK-8法检测细胞活力,微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测心肌细胞miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达水平.结果 与对照组相比,多柔比星减慢心肌细胞搏动频率,降低细胞活力,升高LDH活性(P<0.05).qRT-PCR结果显示,与对照组相比,多柔比星1μmol/L处理组心肌细胞miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达显著上调,miR-133a-5p表达显著下调.结论 多柔比星对原代乳鼠心肌细胞具有损伤作用,其机制可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p等miR-NA表达有关.     

miR-135a-5p通过调控Bcl-2/Bax通路对青光眼视网膜神经节细胞凋亡的作用机制

目的 探讨miR-135 a-5 p与Bcl-2/Bax间的关系及其对青光眼视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的作用和机制.方法 建立BALB/C小鼠青光眼模型,检测眼压和视网膜RGCs数量及miR-135 a-5 p表达.实验用RGCs细胞分为miR-135 a-5 p组、空白组、miR-135 a-5 p抑制组,mi...     

miR-199a在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变中的表达及意义

目的探讨miR-199a在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)中的表达情况及与宫颈癌各种临床病理特征的关系。方法采用茎环Realtime RT-PCR方法检测48例宫颈癌、12例CIN及正常宫颈组织中miR-199a-3p和miR-199a-5p的表达,分析miR-199a-3p和miR-199a-5p表达与宫颈癌常见的临床病理特征的关系。结果用茎环Realtime RT-PCR方法检测miR-199a-3p和miR-199a-5p表达的敏感性和特异性良好;miR-199a-3p和miR-199a-5p在宫颈癌及CIN组织中的表达低于非肿瘤组织,差异性显著(P<0.05),miR-199a-5p/miR-199a-3p表达比值未见明显差异(P=0.219)。其中miR-199a-5p的表达与宫颈癌的组织分化程度存在一定相关性。小细胞型(Ⅲ级)宫颈癌的miR-199a-5p表达低于其他组织分化类型的标本(P=0.054))。miR-199a-3p和miR-199a-5p的表达与年龄、肿块大小、大体类型、病理类型及FIGO分期未见显著相关性(P>0.05)。结论 miR-199a-3p和miR-199a-5p在宫颈癌及CIN组织中的表达显著低于正常宫颈组织。miR-199a-5p的表达与肿瘤的分化程度存在一定相关性。miR-199a在宫颈癌组织中的异常表达,可能在宫颈癌的发生和发展过程中发挥重要作用,有望成为宫颈癌新的治疗靶点。     

HR-HPV宫颈上皮内瘤变术后miR-145、miR-135a-5p、miR-365的表达与HR-HPV转归的关系及预测价值

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)宫颈上皮内瘤变(CIN)患者术后微小RNA-145(miR-145)、miR-135a-5p、miR-365的表达与HR-HPV转归的关系及预测价值。方法 选取2019年2月至2021年3月武汉市红十字会医院和华中科技大学附属协和医院行手术治疗HR-HPV CIN患者98例,根据HR-HPV感染转归分为转阴组(n=48)、未转阴组(n=50)。比较2组一般资料、miR-145、miR-135a-5p、miR-365表达;采用多因素Logistic回归分析术后HR-HPV感染转归的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)及ROC下面积(AUC)分析miR-145、miR-135a-5p、miR-365预测术后HR-HPV感染转归的价值。结果 未转阴组miR-145、miR-365表达低于转阴组,miR-135a-5p表达高于转阴组(均P<0.05);miR-145、miR-365是转阴的保护因素,miR-135a-5p是转阴的危险因素(均P<0.05);miR-145、miR-135a-5p联合miR-365预测HR-HPV转阴的AUC(0.925)大于单独的miR-145(0.769)、miR-135a-5p(0.800)、miR-365(0.799);miR-145、miR-365高水平者持续感染风险分别是低水平者的0.449倍、0.465倍,miR-135a-5p高水平者持续感染风险是低水平者的3.712倍(均P<0.05)。结论 CIN术后miR-145、miR-365表达降低和miR-135a-5p表达升高与HR-HPV转归密切相关,三者联合检测可能是早期预测HR-HPV感染转归的有效方法。     

环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR⁃181d⁃5p/miR⁃199a⁃5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的：探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法：收集 30 例 OSCC 患者的临床组织,采用实时定量 PCR 检测 circ- FAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证 miR-181d- 5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测 circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于 OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P ＜ 0.001)。circFAT1可以同时靶向miR- 181d-5p和miR-199a-5p(P ＜ 0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR 通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用 (P ＜ 0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P＜0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P ＜ 0.05)。结论：circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p 促进OSCC细胞恶性进展。