SMC4对人乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的 探讨敲低染色体结构维持蛋白4(SMC4)基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能的机制.方法 用定量PCR(qPCR)法检测20例乳腺癌患者乳腺癌组织及对应癌旁组织中SMC4的表达情况,并用qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测人乳腺上皮细胞(MCF10A)及人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、T47D、SK-BR-3、MCF7、MDA-MB-468)中SMC4的表达情况.用小分子干扰RNA(siRNA)特异性干扰MDA-MB-231中SMC4的表达后,用qPCR及Western blot检测干扰效果,用CCK8及平板克隆实验检测其增殖与克隆形成能力,Transwell小室检测其迁移及侵袭能力,用Western blot检测可能影响的通路蛋白表达情况.结果 SMC4在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(t=3.265,P＜0.05).SMC4在乳腺癌细胞系中的表达明显高于MCF10A.在成功用siRNA干扰SMC4表达后,MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显下降(P＜0.05),且磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)及磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)的表达同样明显降低(P＜0.05),而AKT及PI3K的表达则无明显影响.结论 干扰SMC4基因的表达可抑制MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活相关.     

HRD1对人乳腺癌细胞增殖迁移的影响及其机制初步研究

目的：研究羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1（HMG?CoA reductase degradation protein 1,HRD1）对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,初步探讨其潜在机制。方法：通过Western blot和免疫组织化学实验检测HRD1和乳酸脱氢酶B（lactate dehydrogenase B,LDHB）在乳腺癌组织和相应癌旁组织中的表达。用腺病毒感染人乳腺癌细胞株MDA?MB?231和MCF?7以过表达HRD1,观察HRD1和LDHB的表达水平,MTT实验和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果：与癌组织相比,HRD1在配对的癌旁组织中高表达,LDHB则呈低表达（P < 0.05）;过表达HRD1能够显著降低MDA?MB?231和MCF?7的增殖和迁移能力,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：过表达HRD1可以降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能是通过下调LDHB蛋白的表达实现。     

BRCA2对乳腺癌癌症干细胞的影响及其机制研究

目的 探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2, BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法 利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体pMSCVneo/eGFP-U6构建BRCA2的载体, 合成慢病毒颗粒, 转染上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞。筛选出单克隆细胞后, 利用Western blot法检测MCF7细胞中干扰BRCA2的效果。球形成试验分析干扰BRCA2后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞的影响。克隆形成试验分析BRCA2下调后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞增殖能力的影响。Western blot法检测乳腺癌癌症干细胞自我更新因子Notch1和Notch4在干扰BRCA2的上皮型乳腺癌中的影响。结果 干扰BRCA2的反转录病毒载体和对照载体测序正确, 可以合成反转录病毒。Western blot法发现干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中BRCA2的表达较对照细胞显著下调。球形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞球形成数量较对照细胞显著增加。克隆形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞克隆形成能力较对照细胞显著增加。Western blot法检测结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中Notch1的表达较对照细胞显著上调, 未在对照和干扰BRCA2的MCF7细胞中检测到Notch4的表达。结论 BRCA2沉默的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞可通过上调Notch1表达使其形成癌症干细胞的能力增加。     

miR⁃588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖和侵袭的作用

目的：探讨miR?588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：用化学合成的miR?588成熟模拟物（miR?588 mimic）过表达miR?588,并验证miR?588过表达率;采用MTT、克隆形成实验检测miR?588对乳腺癌细胞MCF7和MDA?MB?231增殖的影响;采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR?588对MDA?MB?231细胞迁移和侵袭的影响。结果：miR?588在乳腺癌组织及细胞中的相对表达均低于癌旁正常组织及乳腺正常上皮细胞;过表达miR?588能明显抑制MCF7和MDA?MB?231细胞的增殖;上调miR?588可显著抑制MDA?MB?231细胞的迁移和侵袭能力。结论：miR?588在乳腺癌中低表达,过表达miR?588可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

miRNA-1271对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨miRNA-1271对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用RT-PCR法检测80例乳腺癌组织及癌旁正常组织中miRNA-1271的表达。采用脂质体转染法将miRNA-1271模拟物转染至乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中,应用CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、动物实验等探究miRNA-1271对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结果乳腺癌组织中miRNA-1271相对表达量较癌旁正常组织明显降低（P＜0.05）。miRNA-1271表达上调后,MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的吸光度值明显降低（均P＜0.05）,克隆形成数明显减少（均P＜0.05）,细胞凋亡率明显增高（均P＜0.05）。动物实验结果显示,miRNA-1271在体内亦能抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖。结论miRNA-1271在乳腺癌组织中低表达;上调miRNA-1271表达,能抑制乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡的发生,具有抑癌作用。     

siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响

目的：通过小干扰RNAs（siRNA）干扰泛素特异性蛋白酶7（USP7）在喉癌细胞中的表达,来探讨 USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK‐8法、Tr‐answell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌 HEP2细胞USP7 mRNA及蛋白表达,显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力,促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNA‐USP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力,并促进凋亡,提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。     

滑膜素对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨滑膜素(synoviolin)在乳腺癌组织中的表达情况及其对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响?方法:通过Western blot?免疫组织化学染色及免疫组织芯片技术检测乳腺癌组织中滑膜素的表达水平;在乳腺癌细胞MCF-7中利用腺病毒过表达滑膜素,并以划痕实验?Transwell迁移实验?CCK-8细胞增殖试剂盒等检测其对于乳腺癌细胞MCF-7迁移和增殖能力的影响?结果:滑膜素在乳腺癌组织中的表达水平明显低于相应癌旁组织;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化?结论:滑膜素在乳腺癌组织中低表达,可能与抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖能力密切相关?     

PSMA7在胃癌中的表达及对胃癌增殖、侵袭迁移及成瘤能力的影响

目的研究PSMA7在胃癌中的表达及其对胃癌增殖、侵袭迁移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法收集60例胃癌患者的 癌组织及配对的癌旁组织,应用免疫组化法检测胃癌和配对癌旁组织中PSMA7的表达水平;应用慢病毒转染技术在胃癌细胞 株SGC7901中干扰PSMA7;应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）和细胞克隆形成实验检测胃癌细胞增殖能力的变化,Transwell实 验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的变化;稳转细胞株构建裸鼠皮下移植瘤模型,研究干扰PSMA7对皮下移植瘤的影响。结果 免疫组化结果显示PSMA7在胃癌组织中的表达水平显著高于其配对的癌旁组织（P<0.05）;在人胃癌细胞株SGC7901中下调 PSMA7表达能够显著抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭迁移能力（P<0.05）;在BALB/c小鼠皮下移植瘤模型中干扰PSMA7的表达能 够明显抑制皮下移植瘤的生长（P<0.05）。结论PSMA7在胃癌组织中高表达,干扰PSMA7抑制胃癌细胞增殖、侵袭迁移及裸 鼠皮下成瘤的能力。     

SFRP1/FZD6抑制Wnt/β-catenin信号通路对A549肺癌细胞生物学行为的影响

目的研究分泌型frizzled相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)影响A549肺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对细胞增殖、克隆形成和迁移侵袭能力的影响。方法 q RT-PCR和western blot检测SFRP1在肺腺癌及癌旁组织中的表达。在A549细胞中通过质粒过表达SFRP1和用si RNA敲低FZD6的表达,采用q RT-PCR、western blot检测Wnt信号通路相关基因的表达水平变化。通过CCK-8、平板克隆形成、划痕实验以及transwell实验分别检测SFRP1/FZD6对A549细胞增殖、克隆形成、细胞迁移侵袭能力的影响。结果 SFRP1在肺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织(P0.05);过表达SFRP1显著抑制了A549肺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路,干扰受体FZD6的表达能够显著减弱SFRP1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效应。过表达SFRP1显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力等恶性表型,并且能够通过干扰FZD6被逆转。结论 SFRP1通过受体FZD6抑制A549肺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路活化,进而抑制细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。SFRP1/FZD6可能在肺癌进展中发挥重要作用,靶向SFRP1/FZD6有望成为研发治疗肺癌的重要靶点。     

KDM6A在乳腺癌中的表达及其对相关恶性细胞生物学行为的研究

目的 研究赖氨酸去甲基化酶6A (Lysine demethylase 6A,KDM6A)在乳腺癌组织中的表达并检测其对乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测18例乳腺癌患者新鲜癌组织及癌旁正常组织中KDM6A表达差异;构建pcDNA3.0-KDM6A载体,建立KDM6A过表达的乳腺癌细胞株,qRT-PCR进行验证;采用CCK-8实验及流式细胞术检测KDM6A过表达后乳腺癌细胞增殖和凋亡变化;Transwell及细胞划痕愈合实验检测KDM6A过表达后乳腺癌细胞侵袭及迁移变化;Western blot检测凋亡信号通路蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)表达水平。结果 乳腺癌组织中KDM6A表达量较癌旁正常组织显著降低(P<0.001)。与正常乳腺细胞MCF-10A相比,KDM6A在SKBR3、MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞系中的表达明显降低(P<0.05)。过表达乳腺癌细胞中KDM6A后,细胞增殖、侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05),凋亡率明显上升(P<0.05),并且细胞...     

口腔癌过表达蛋白1在结肠癌中的表达及其对细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的 研究口腔癌过表达蛋白1 (oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)在人结肠癌组织中的表达变化并探讨其对结肠癌细胞增殖能力、细胞周期及早期凋亡的影响.方法 收集人结肠癌及癌旁组织标本,分别以qRT-PCR及Western blot检测ORAOV1在mRNA及蛋白水平的表达变化情况;采用RNAi技术获得ORAOV1低表达的LoVo及SW480细胞株,并使用Western blot对干扰结果进行鉴定;采用CCK-8检测干扰ORAOV1表达后两种结肠癌细胞增殖能力的变化;并采用流式细胞术检测干扰ORAOV1表达对结肠癌细胞周期及早期凋亡的影响.结果 qRT-PCR及Western blot结果分别显示结肠癌组织中的ORAOV1 mRNA及蛋白水平高于癌旁组织(P＜0.05);Western blot检测证实LoVo及SW480细胞中ORAOV1干扰成功;在这两种结肠癌细胞株中,CCK-8检测结果显示,干扰ORAOV1可抑制细胞增殖能力;流式细胞术结果显示,干扰ORAOV1可使处于S期比例增加(P＜0.05)、早期凋亡比例增加(P＜0.05).结论 结肠癌组织中的ORAOV1表达增加,干扰ORAOV1可降低结肠癌细胞的增殖能力,可能与S期阻滞及细胞早期凋亡增加有关.     

SND1在食管鳞癌细胞中的表达及对食管癌细胞恶行生物学行为的影响

目的 研究葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1（SND1）基因在人食管鳞状细胞癌(ESCC)中表达水平的表达及对食管癌细胞恶行生物学行为的影响。方法 qRT-PCR及Western blot检测SND1在ESCC细胞株中翻译和转录水平的改变。运用sh-SND1病毒载体构建出SND1稳定干扰的ESCC细胞株模型,利用克隆形成,Transwell小室及流式细胞术等细胞生物学手段研究SND1基因对ESCC细胞增殖和转移、凋亡的影响,运用动物实验研究SND1基因在体内对ESCC细胞的影响。结果 qRT-PCR和Western blot的实验结果表明SND1在ESCC细胞中的转录和翻译水平高于人正常食管上皮细胞（HEEC）;经过培养、染色、拍照和通过统计学分析细胞表型实验数据,结果显示干扰SND 基因表达可显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力;干扰SND1的表达抑制体内食管癌细胞的增殖能力;化疗药物敏感实验结果显示SND1干扰组食管癌细胞对CPT的敏感性增加,细胞凋亡率明显升高。结论 SND1在食管癌细胞中表达上调及促进食管癌细胞恶性生物学行为     

CBLN1基因在肝癌中的表达情况及其对DCC通路调控作用的研究

目的探讨CBLN1基因与肝癌转移的关系,阐明肝癌患者中CBLN1基因表达差异对DCC通路的调控作用。方法采用RT-PCR法检测2017年1月～2018年12月于本院住院的41对肝癌患者术后肝癌和癌旁组织中CBLN1基因的表达水平;通过Western-blot方法检测CBLN1蛋白在肝癌中的表达情况。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默肝癌PLC/PRF/5细胞株中CBLN1基因的表达,并观察对PLC/PRF/5细胞增殖、迁移的影响;采用在Huh-7细胞株中是否过表达CBLN1质粒方法,观察对Huh-7细胞DCC表达及细胞增殖、迁移的影响。结果在41对收集的肝癌和癌旁组织中,30对肝癌样本中CBLN1表达显著增高(P0.05)。在转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3质粒的细胞中CBLN1表达被沉默[2],使得PLC/PRF/5细胞的迁移受到了抑制;在CBLN1过表达的Huh-7细胞株中DCC表达显著降低(P0.05),而转染CBLN1质粒48 h后Huh-7细胞株的迁移能力明显提升。结论抑制CBLN1基因表达肝癌细胞的生长受到抑制,过表达CBLN1基因可能促进了肝癌细胞的迁移,抑制了肝癌细胞DCC的表达,提示CBLN1与肝癌转移有关,其调控肝癌转移与DCC信号通路相关,并为提供潜在的临床诊断与药物治疗的新靶点。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

抑制USP22基因对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的 利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法 免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细胞作为研究细胞。设计、合成针对USP22特异性siRNA,同时设置阴性对照siRNA,利用脂质体转染结直肠癌细胞后,Western blotting检测siRNA抑制效率;通过MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡;Western blotting检测周期相关蛋白CyclinB1、p21、p53、CDK2的表达。结果 结直肠癌组织中USP22表达量与癌旁组织比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,结直肠癌组织中USP22表达量升高。SW480细胞中USP22的表达量最高,因此作为靶细胞进行后续研究。与对照组比较,USP22 siRNA能够降低USP22的表达（P?<0.05）。USP22抑制后,与对照组比较,能够抑制SW480细胞的增殖,促使SW480细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞周期进程,增加细胞凋亡率（P?<0.05）,进而抑制细胞增殖（P?<0.05）;同时,与对照组比较,CyclinB1、CDK2的表达量降低（P?<0.05）,p53和p21的表达量升高（P?<0.05）。结论 USP22抑制后,能够抑制结直肠癌细胞的增殖,其机制可能与抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。     

JMJD2B对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响

目的 探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响.方法 采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达,转染JMJD2B siRNA至A431细胞株,分别采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell法检测细胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、迁移及侵袭情况.结果 JMJD2B在肿瘤组织中的表达高于正常皮肤.与未转染组和转染对照组比较,JMJD2B siRNA转染组增殖、克隆、迁移及侵袭能力显著受抑,肿瘤细胞发生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加(P＜0.05).结论 JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌中呈高表达,JMJD2B siRNA能促进A431细胞的凋亡,同时也抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆、迁移以及侵袭的能力.     

卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的：探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU（suppressor of Fused）表达变化及其意义。方法：通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量，并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后，运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）、迁移与侵袭的情况，并随后用Western blot和实时定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）检测Sonic Hedgehog（SHH）信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平。结果：在3例卵巢癌组织样本中，相比于癌旁组织，癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调，而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证；此外在细胞水平上，人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭，促进凋亡；相反，在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时，相比正常卵巢上皮细胞，卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升；当在卵巢癌细胞中上调SUFU时，SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论：SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展，其作用机制与SHH信号通路相关。     

长链非编码RNA TTN-AS1靶向miR-134-5p调控乳腺癌细胞的生长和转移

【摘要】目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) TTN AS1对乳腺癌生长和转移的作用及机制。方法 qRT PCR检测TTN AS1在MDA MB 231、BT 20、SKBR 3、MCF 7、MDA MB 468 5种乳腺癌细胞中的表达水平。乳腺癌细胞转染shRNA抑制TTN AS1的表达,转染后,CCK8检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Transwell小室法检测各组细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax、Cleaved Caspase 3、Caspase 3相对表达水平。miRcode数据库预测LncRNA TTN AS1与miR 134 5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TTN AS1与miR 134 5p的靶向关系。乳腺癌细胞中转染shRNA抑制TTN AS1的表达的同时转染miR 134 5p inhibitor抑制miR 134 5p的表达,然后检测细胞增殖、凋亡、迁移能力及凋亡相关蛋白的表达。结果 TTN AS1在5种乳腺癌细胞中均高表达;抑制TTN AS1的表达后乳腺癌细胞的增殖和迁移能力显著下调,细胞凋亡水平显著增加,Bcl 2表达显著下调,Bax、Cleaved Caspase 3显著上调（均P＜005）。miR 134 5p为LncRNA TTN AS1靶基因,抑制TTN AS1表达的同时抑制miR 134 5p表达细胞增殖和迁移能力均显著高于单独抑制TTN AS1组,细胞凋亡水平显著低于单独抑制TTN AS1组,凋亡相关蛋白表达亦呈显著变化(均P＜005)。结论 TTN AS1通过靶向抑制miR-134-5p调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移能力以及凋亡相关蛋白的表达。     

SP-141抑制胃癌细胞增殖、迁移并促进凋亡

目的：探讨MDM2的新型小分子抑制剂SP-141对胃癌细胞株MGC803和BGC823增殖、凋亡以及迁移的影响。方法：胃癌细胞经SP-141处理后,采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术、Hoechst染色法和划痕实验分别检测细胞存活率、细胞增殖、周期分布、凋亡以及迁移能力改变。Western blot检测相关分子蛋白质表达水平。结果：TCGA数据库中32对胃癌组织中的MDM2 mRNA表达水平高于癌旁组织（P<0.01）;5种胃癌细胞株均检出MDM2,表达水平差异不大;SP-141抑制MGC803和BGC823的细胞存活率以及克隆形成,诱导其细胞周期阻滞在G2/M期;SP-141增加细胞凋亡发生率,并下调Bcl-2同时上调Bax、Caspase-3剪切体、PARP剪切体的蛋白表达;SP-141抑制细胞迁移并伴有FAK蛋白表达量的下降。结论：MDM2的新型小分子抑制剂SP-141可有效抑制胃癌细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡。     

JOSD1在肝细胞癌中的表达及对细胞增殖、克隆、迁移的影响研究

目的探讨含约瑟芬结构域的蛋白1（JOSD1）在肝细胞癌（HCC）中的表达及对HCC细胞增殖、克隆、迁移的影响。方法利用公共生物信息学分析平台（http://gepia.cancer-pku.cn/detail.php）分析JOSD1在HCC组织及癌旁组织的表达差异;收集2022年10月至2023年5月在嘉兴市第一医院行肝癌根治术的4例HCC组织及癌旁组织标本,分析两种组织中的JOSD1蛋白表达差异;选择人HCC细胞株（Huh7）,转染特异性小干扰RNA（siRNA）,并设立JOSD1敲低组（siJOSD1组）和阴性对照组（siNC组）;CCK-8法、克隆形成实验、Transwell迁移实验检测敲低JOSD1对Huh7细胞增殖、克隆、迁移能力的影响;Westernblot法检测敲低JOSD1对Huh7细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达水平的影响。结果公共生物信息学分析显示HCC组织中JOSD1表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）,进一步临床样本验证发现,HCC组织JOSD1蛋白表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）;与siNC组相比,siJOSD1组Huh7细胞的增殖、克隆、迁移能力均下降（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达水平上调（P＜0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。结论HCC中JOSD1表达上调,敲低JOSD1可显著降低HCC细胞的增殖、克隆、迁移能力,可能通过上调E-cadherin,下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平发挥作用。