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目的:研究miR-216a-5p对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制.方法:培养正常乳腺上皮细胞MCF10A和乳腺癌细胞MCFF7、MDA-MB-231、SK-BR-3,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-216a-5p和甲状腺激素受体相互作用蛋白4(TRIP4)的表达;将乳腺癌细胞MCF7分为Contro... 相似文献
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目的探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用。结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Panc-1和MIA Pa Ca-2的生长受到抑制(P<0.05),早期凋亡率分别增加13.6%和11.0%(P<0.05),细胞集落数目分别下降27.3%和27.8%(P<0.05),Panc-1细胞S期细胞百分比降低11.8%(P<0.05)。结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用。 相似文献
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目的 探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用.方法 收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用.体外培养AML细胞系THP-1,分别给予转染空载体、mi... 相似文献
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研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应(real time-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定两组泛素蛋白连接酶(UBE3C)mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[(203.7±16.8)% vs(330.4±20.7)%(p =0.000)];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比(258±30.2)%,对照组相对活细胞百分比(403.4±28.4)%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组(p =0.001)。细胞划痕实验示:miR-30a-5p组划痕愈合率为(23.2±2.7)%,对照组划痕愈合率为(89.2±4.8)%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组(p =0.000)。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为(0.15±0.02),对照组UBE3C mRNA 表达水平为(1.03±0.09),miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组(p =0.000);Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为(1.57±0.26),对照组UBE3C 蛋白表达水平为(5.32±0.42),miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组(p =0.000)。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。 相似文献
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目的 探究长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)RP11-1C8.5对糖尿病心肌细胞凋亡和增殖的影响及其分子机制。方法 分别采用5.5、10.0、13.9、22.2和33.3mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养人心肌HCM细胞24h后,实时定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测不同葡萄糖浓度培养下HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平。选择RP11-1C8.5表达最高的葡萄糖浓度继续培养HCM细胞,分别感染RP11-1C8.5干扰腺病毒(实验组)和对照病毒(对照组)。流式细胞术和CCK-8法检测对照组和实验组HCM细胞的凋亡情况和细胞活力。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证RP11-1C8.5与miR-181a-5p的结合作用。qPCR检测对照组和实验组HCM细胞中miR-181a-5p的表达水平。Western blot法检测下调RP11-1C8.5表达对凋亡相关蛋白Bax、caspase3、Bcl-2、CED-9表达的影响。结果 与正常葡萄糖浓度(5.5mmol/L)比较,在高糖培养心肌HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平显著增加(P<0.01),其中在33.3mmol/L葡萄糖浓度培养HCM细胞中的表达最高(P<0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞中RP11-1C8.5的表达显著降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞的凋亡率显著降低(P<0.01),细胞活力明显增加(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-1C8.5与miR-181a-5p存在互补结合作用(P<0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞促凋亡蛋白Bax、caspase3表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2、CED-9表达增加。结论 下调RP11-1C8.5通过结合miR-181a-5p发挥抑制糖尿病心肌细胞凋亡和促进细胞增殖的作用。 相似文献
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目的:探究miR-30a-5p通过靶向细胞增殖调控基因4(Up-regulated gene 4/Up-regulator of cell proliferation,URG4/URGCP)对胃癌(Gastric cancer,GC)细胞凋亡和糖酵解的影响,并阐明其潜在调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-30a-5p和URGCP在正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GC细胞(AGS、HGC-27和SGC-7901)中的表达。选用HGC-27细胞作为后续实验研究对象并随机分为六组,除Control组外,其他组细胞分别转染miR-NC、miR-30a-5p mimic、pcDNANC、pcDNA-URGCP和pcDNA-URGCP+miR-30a-5p mimic。CCK-8实验用于检测各组细胞增殖活力,流式细胞术用于检测各组细胞凋亡水平。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)和乳酸检测试剂盒检测各组细胞乳酸生成和ATP水平。此外,双荧光酶素报告实验用于验证miR-30a-5p和URGCP之间的靶向关系。结果:相比较正常胃黏膜上皮细胞... 相似文献
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目的 探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平.利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设... 相似文献
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目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 相似文献
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目的 观察苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 实验分组如下,A组:膀胱癌EJ细胞不作处理;B组:加入苦豆碱浓度25μmol/L;C组:加入苦豆碱浓度50μmol/L;D组:加入苦豆碱浓度100μmol/L。通过CCK8检测各组细胞的存活率,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax、p-Erk1/2蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示,B、C、D组较A组细胞存活率降低(P<0.05);流式细胞术结果显示:B、C、D组较A组细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blot结果显示:B、C、D组较A组Bcl-2、p-Erk1/2表达水平降低(P<0.05),Bax表达水平增高(P<0.05)。结论 苦豆碱可降低膀胱癌EJ的存活率,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Erk1/2的磷酸化而实现的。 相似文献
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目的 研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法 合成miR-370-5p(实验组)和dsControl(阴性对照组),分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术分析细胞周期变化,利用MTT法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果 Real-time PCR结果提示,转染miR-370-5p后DU-145和LNCaP细胞中p21 mRNA水平分别上调3.43倍(P<0.01)和3.06倍(P<0.01),CDK4 mRNA水平分别下调0.51倍(P<0.01)和0.43倍(P<0.01),Cyclin D1 mRNA水平分别下调0.31倍(P<0.01)和0.35倍(P<0.01)。Western blot法检测结果符合这一趋势。流式细胞术检测结果显示,转染miR-370-5p后,位于S期和G2/M期的细胞比例下降,位于G0/G1期的细胞比例则上升,说明细胞周期被阻滞在G0/G1期。MTT分析结果显示,与dsControl组相比,转染miR-370-5p后,DU-145和LNCaP细胞活力明显降低。集落形成实验显示,miR-370-5p组的集落数数量明显较少,细胞增殖能力降低。结论 miR-370-5p能显著激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。 相似文献
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目的 探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法 实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。靶基因预测软件预测miR-145-5p的靶基因,生物信息学、Western blot、双荧光素酶基因验证报告实验、挽救实验等方法预测并验证miR-145-5p在卵巢癌细胞中发挥作用涉及的分子机制。结果 卵巢癌细胞中miR-145-5p的表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(t=4.345,P=0.049)。与对照组相比,过表达miR-145-5p的卵巢癌细胞增殖率明显降低(t=-15.790,P<0.001),凋亡率明显增加(t=5.433,P=0.032)。TargetScan软件在线预测及双荧光素酶基因验证报告实验结果表明,ARK5是miR-145-5p的直接靶基因(t=4.583,P=0.010)。ARK5过表达细胞的增殖率明显升高(t=27.290,P<0.001),凋亡率明显下降(t=-8.241,P=0.001)。过表达miR-145-5p可在mRNA(t=-12.824,P<0.001)及蛋白水平(t=-4.792,P=0.001)明显下调ARK5的表达。ARK5的挽救性表达显著抵消了miR-145-5p对细胞增殖的抑制(t=15.580,P=0.004)和促细胞凋亡(t=-12.470,P=0.006)的效果。结论 miR-145-5p可能是通过靶向抑制ARK5来抑制卵巢癌细胞增殖和促进细胞凋亡的。 相似文献
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目的 探讨microRNA-122-5p(miR-122-5p)与microRNA-199a-5p(miR-199a-5p)在子宫内膜异位症(EMS)患者血清的表达及临床意义。方法 前瞻性设计,随机选取2016年1月—2017年12月华北石油管理局总医院诊治的EMS患者90例(EMS组)及同期不孕症检查的患者70例(对照组)为研究对象。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组人群血清的miR-122-5p和miR-199a-5p的表达及白细胞介素-6(IL-6)的表达,并分析其与临床特征的相关性。构建受试者操作特征(ROC)曲线。结果 EMS组患者的血清及腹腔液中IL-6、miR-122-5p、miR-199a-5p的表达与对照组比较,差异有统计学意义(P?<0.05),EMS组均增高。miR-122-5p的表达与IL-6水平(r?=0.578,P?<0.05)、miR-199a-5p表达(r?=0.721,P?<0.05)呈正相关。miR-199a-5p的表达与IL-6水平(r?=0.562,P?<0.05)呈正相关。miR-122-5p和miR-199a-5p检测EMS的敏感性分别为94.7%和92.1%,特异性分别为90.5%和88.6%。结论 血清miR-122-5p和miR-199a-5p在EMS患者中的表达增加,miR-122-5p与miR-199a-5p有成为诊断子宫内膜异位症的生物标志物的潜力。 相似文献
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目的研究分析miR-146a-5p基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)发病风险的相关性。方法回顾性选取PCOS患者122例为观察组,选取同期本院体检正常者110例为对照组。收集两组年龄、身高、体质量及BMI等指标。采用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA,采用四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(T-ARMS-PCR)法对miR-146a-5p rs2910164位点进行基因分型。Logistic回归模型用于评价miR-146a-5p的rs2910164位点与PCOS发病风险的关联强度及PCOS的危险因素。结果观察组体质量、BMI显著高于对照组(P<0.05);观察组与对照组miR-146a-5p的基因型分布差异有显著性(P<0.05);miR-146a-5p的基因型在两组间的分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。观察组和对照组的CG基因型分布差异存在显著性(OR=2.16,95%CI=1.19~3.70,P=0.004)。观察组的C等位基因频率显著高于对照组(OR=1.78,95%CI=1.15~2.36,P=0.001)。在C等位基因的显性作用(CC+CG与GG之间的比较)中,CC+CG基因型显著增加了PCOS的风险(OR=1.91,95%CI=1.42~2.75,P=0.001)。对年龄和BMI进行调整后,共显性、显性和隐性模型的基因型在OR中均未显示任何显著变化。以PCOS为因变量,以体质量、BMI和miR-146a-5p基因型为自变量,进行Logistic回归分析,结果显示miR-146a-5p rs2910164、体质量、BMI是PCOS的独立危险因素。结论miR-146a-5p的rs2910164位点C等位基因与PCOS发病风险增加有关,可以作为预测PCOS发病风险的潜在预警生物标志物。 相似文献
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目的:探讨微小RNA-216a-5p(miR-216a-5p)靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白(WASL)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法:收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物(miR-216a-5p)、模拟物阴性对照(miR-con)、沉默对照(si-con)、沉默WASL的小干扰RNA(si-WASL)、抑制物阴性对照(anti-miR-con)、miR-216a-5p抑制物(anti-miR-216a-5p)、miR-216a-5p及空载质粒(pcDNA)和miR-216a-5p及WASL过表达质粒(pcDNA-WASL)分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR(Real-time RT-qPCR)和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低(P<0.05),WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),两者呈负相关关系(r=-0.317,P<0.01)。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平(P<0.01)和细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。 相似文献
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【摘要】 目的 探讨miR 20a 5p在人肝癌细胞系中表达及其对肝癌细胞Bel 7402增殖及凋亡的影响。方法 通过反转录实时定量聚合酶链反应(RT qPCR)考察miR 20a在肝细胞L 02和7种肝癌细胞中的表达;构建过表达或沉默miR 20a 5p的人肝癌Bel 7402细胞株;通过噻唑蓝(MTT)实验考察过表达或沉默miR 20a 5p后对细胞增殖的影响;通过AnnexinV FITC/PI流式实验考察对细胞凋亡的影响,并进一步通过蛋白质免疫印迹试验考察对凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。结果 与人肝细胞L 02相比,6种细胞系的miR 20a 5p表达水平较低。过表达miR 20a 5p后细胞增殖能力显著下降(P=0.011),沉默后显著上升(P=0.007)。高表达miR 20a 5p后细胞凋亡和早期凋亡比例均显著增加(P=0.009、0.017),沉默miR 20a 5p均明显降低(P=0.012、0.007)。高表达miR 20a 5p后细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、Survivin、Bcl 2表达下调,凋亡促进蛋白Bax表达上调;沉默miR 20a 5p后XIAP、Survivin、Bcl 2表达上调,Bax表达下调。结论 miR 20a 5p在6种肝癌细胞中低表达,可促进肝癌细胞Bel 7402凋亡,抑制细胞增殖能力。 相似文献
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miRap下调人肝脏星形细胞系LX中鞘胺醇激酶的表达 《首都医科大学学报》2019,40(1):94-100
目的 预测、筛选并探究是否存在特定的microRNA能够影响人肝脏星形细胞LX-2中鞘胺醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)mRNA的表达。方法 采用生物信息学数据库预测microRNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测SphK1 mRNA的表达。结果 预测筛选出的miR-378a-5p、miR-92a-2-5p和miR-708-5p中,只有miR-378a-5p能够抑制LX-2中由转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的SphK1 mRNA表达上调这一过程。而在LX-2中转染miR-378a-5p的抑制剂阻断其作用后,SphK1 mRNA的表达上调。结论 miR-378a-5p参与LX-2中SphK1 mRNA表达的调控,并且能够抑制由TGF-β1介导的SphK1 mRNA表达上调。 相似文献