氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞A型清道夫受体表达的调节作用

目的研究氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对人肾小球系膜细胞(HMC)A型清道夫受体(SR-A)表达的调节作用,探讨在慢性肾脏疾病中Ox-LDL加重肾病进展的作用机制.方法脂质体转染含SR-A cDNA的表达质粒,建立稳定高表达SR-A的人肾小球系膜细胞株(HMCL),油红"O"染色检测HMCL对Ox-LDL的摄取;RT-PCR法检测Ox-LDL和LDL对HMC SR-A mRNA表达的作用.结果稳定高水平表达SR-A的HMCL对Ox-LDL的摄取明显强于未转染细胞;Ox-LDL上调HMC SR-A mRNA的表达,作用于24 h达到高峰;Ox-LDL(10～100μg/ml)作用24 h对HMC SR-A mRNA的上调作用呈剂量依赖性;天然LDL对SR-A的表达无明显影响.结论在HMC,SR-A是Ox-LDL进入细胞内的主要受体之一,Ox-LDL具有上调HMC SR-A mRNA表达的作用,推测在慢性肾脏疾病进展中,局部沉积的LDL经氧化修饰后可能通过刺激SR-A的表达进入细胞内增强其对HMC的毒性作用,进而加重肾小球硬化的进展.     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制

[目的]通过体外实验研究绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制。[方法]采用体外培养人THP-1巨噬细胞,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,用绞股蓝总皂苷进行干预。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)的变化,并利用RT-PCR方法检测CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达。[结果]与ox-LDL诱导组相比,绞股蓝总皂苷组(GPS组)巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少,同时CD36受体mRNA表达明显降低,而ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达明显升高。[结论]绞股蓝总皂苷可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,降低细胞内脂质积累,促进细胞内的脂质向细胞外转运,有利于防止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的进程。该作用可能与绞股蓝总皂苷下调巨噬细胞CD36受体表达,上调巨噬细胞ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体表达从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取和促进...     

USP37稳定SREBP1a促进胆固醇摄取和脂质沉积

目的 筛选影响胆固醇调节元件结合蛋白1a(cholesterol regulatory element binding protein, SREBP1a)蛋白稳定性的去泛素化酶,并探索其调控机制。方法 通过去泛素化酶库筛选显著影响SREBP1a表达的去泛素化酶,免疫蛋白印记实验和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)评估去泛素化酶对SREBP1a以及升脂基因表达的影响;通过红色荧光蛋白标记人源低密度脂蛋白(human Dil-low density lipoprotein, Human Dil-LDL)摄取和油红O染色等实验技术检测细胞摄取低密度脂蛋白(LDL)和脂质沉积情况。结果 去泛素化酶库筛选发现泛素特异肽酶37(ubiquitin specific peptidase 37,USP37)可显著增加肝细胞SREBP1a蛋白表达水平,促进胆固醇摄取及脂质沉积。USP37基因敲除可显著降低SREBP1a蛋白表达水平,抑制升脂基因表达及脂质沉积。结论 去泛素化酶USP37通过稳定SREBP1a蛋白表达,促进胆固醇摄取及脂质沉积,揭示了SREBP1a翻译后调控的新模式。     

泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其IL-1β表达的影响

目的:观察泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及IL-1β表达的影响。方法:采用Ox-LDL(50 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,采用20%泽泻汤血清干预后,油红O染色观察细胞内脂质沉积情况;酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细IL-1β表达情况。结果:成功建立巨噬细胞泡沫化模型;相比于空白组的巨噬细胞,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加明显,实验组巨噬细胞内脂质沉积显著减少,IL-1β呈低水平表达,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:Ox-LDL(50 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型。泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,其作用机制可能是通过下调IL-1β的表达来实现的。     

载LOX-1-siRNA靶向超声微泡的制备及其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用

目的 构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1 (lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)-siRNA靶向超声微泡,研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用.方法 薄膜-水化-超声乳化法构建载LOX1-siRNA纳米级超声微泡(nanobubbles,NBs-siRNA).从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs).通过凝胶迁移阻滞实验与siRNA细胞内化实验验证超声微泡可运载siRNA进入靶细胞内;qRT-PCR及Western blot检测LOX1的mRNA和蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂质聚集情况.构建Wistar大鼠动脉硬化模型,实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-siRNA的NBs-siRNA微泡100 μg,并使用超声仪照射.治疗15 d后,取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度;免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况.结果 凝胶迁移阻滞实验结果显示,证实NBs与siRNA结合成功.激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导siRNA内化入VSMCs之中.qRT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.01).油红O染色显示实验组细胞泡沫化较oxLDL组减弱.组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻;免疫组化实验结果显示,实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低(P＜0.01).结论 成功制备能够有效运载LOX-1-siRNA的超声微泡,体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部,下调LOX-1表达,减少泡沫细胞形成,降低动脉硬化斑块病变的严重程度.     

H2S显著减少巨噬细胞COX-2表达和泡沫化

目的:探讨H2S对巨噬细胞COX-2表达及泡沫化的影响?方法:建立氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导RAW264.7细胞泡沫化模型,同时给予不同浓度的H2S?应用油红O染色观察泡沫细胞的形成;Real-time qPCR检测COX-2 mRNA的表达;Western blot检测COX-2蛋白的表达?结果:Ox-LDL能够明显增加细胞内脂质的沉积,同时伴有COX-2的产生?不同浓度的H2S可以明显减少由Ox-LDL引起的COX-2的表达,同时也减少了细胞内脂质的沉积,以250 μmol/L最为明显,差异具有统计学意义(P < 0.05)?结论:H2S可以显著减少巨噬细胞COX-2的表达及泡沫化?     

番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的实验研究

目的 研究番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的作用。方法 建立THP-1单核-巨噬细胞源性泡沫细胞模型,根据CCK-8法测定的番石榴叶总黄酮对该细胞的安全浓度范围,将配制的番石榴总黄铜溶液在其安全范围内选取低、中、高三个剂量组,以无血清培养液的空白对照组及ox-LDL模型组为对照。采用油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶偶联比色法检测细胞内总胆固醇含量,Western blot法检测LOX-1的蛋白表达水平。结果 三个剂量组细胞内总胆固醇含量均低于模型组（P〈0.05）,并随番石榴叶总黄酮浓度升高而下降;三个剂量组的LOX-1蛋白表达均低于模型组（P〈0.05）,抑制作用随剂量升高而增强。结论 番石榴叶总黄酮通过抑制LOX-1的表达,减少巨噬细胞摄取ox-LDL,抑制泡沫细胞形成,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

Ox—LDL诱导大鼠系膜细胞TGF—betal转录增强和NF—kB的活化

目的：研究氧化低密度脂蛋白(oxidation of low density lipoprotein，Ox-LDL)对肾小球系膜细胞(mesangial cell，MsC)核转录因子kB(nuclear factor-kB,NF-kB)与转化生长因子β1(transforming growth factor-betal，TGF-β1)活性的影响，探讨脂质肾损伤的分子机制。方法：以TGF-β1转录起始位点上游序列构建的报告基因质粒转染系膜细胞研究Ox-LDL对TGF-β1启动子的活性的影响，RT—PCR半定量方法检测不同时间和不同浓度的Ox-LDL。诱导后TGF-β1 mRNA水平的变化，并用凝胶迁移分析实验观察不同浓度和不同时间组的Ox-LDL对肾小球系膜细胞NF-kB结合活性的影响。结果：Ox-LDL呈浓度依赖性增加TGF-β1启动子活性，100μg/ml的Ox-LDL可使TGF-β1启动子活性在36h达到最高点；NFkB的结合活性对Ox-LDL刺激依时间延伸呈持续激活，在早期有明显波动，活性最强分别在6h和36h。结论:Ox-LDL诱导系膜细胞TGF-β1表达增强可能有核转录因子NF-kB的参与。     

桑抹茶对THP-1源性泡沫细胞脂质沉积的作用研究

目的 明确桑抹茶对THP-1泡沫细胞脂质沉积的改善作用。方法 实验分为正常对照组：佛波酯诱导的THP-1源性巨噬细胞,模型对照组：佛波酯+Ox-LDL诱导的THP-1源性泡沫细胞,药物干预组：THP-1源性泡沫细胞+不同浓度（10、20、40、80、160、320、640 μg/ml）桑抹茶提取物,同时设RPMI 1640培养基为空白对照。MTT法检测各组细胞活力;油红O染色观察细胞内脂质沉积;荧光显微镜观察THP-1巨噬细胞内吞Dil-Ox-LDL情况;Western blotting检测各组细胞介导细胞内胆固醇流出蛋白ABCA1及PPARγ蛋白表达水平。结果 桑抹茶提取物能浓度依赖地抑制THP-1源性泡沫细胞对Ox-LDL的摄取,减少THP-1泡沫细胞内脂质沉积;与对照组比较,模型组泡沫细胞内脂质水平显著升高[(0.974±0.033)比(0.794±0.030),P<0.01],ABCA1蛋白表达量增加[(0.702±0.005)比(0.575±0.014),P<0.01],PPARγ表达量降低[(0.099±0.004)比(0.875±0.019),P<0.01]。与模型组比较,93、186、372 μg/mL桑抹茶提取物能显著降低泡沫细胞内脂质水平[(0.876±0.032)、(0.835±0.019)、(0.815±0.028)比(0.974±0.033),P<0.01],增加PPARγ蛋白表达量[(0.270±0.006)、(0.328±0.014)、(0.706±0.020)比(0.099±0.004),P<0.01],93、372 μg/mL桑抹茶能提高ABCA1蛋白表达量[(0.823±0.041)、(1.411±0.048)比(0.702±0.005),P<0.01]。结论 桑抹茶可能通过减少Ox-LDL摄取,促进细胞内胆固醇流出,减少细胞内脂质沉积。     

转染靶向SAA基因siRNA对高糖诱导人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白及肿瘤坏死因子-α的影响

目的 研究siRNA-SAA干扰对高糖条件培养下的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HM-Cs)炎症反应及细胞外基质(extra-cellular matrix.ECM)的影响,探讨血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,sAA)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)发生发展中的作用.方法 传代培养的HMCs同步化后分组,脂质体Lipofectamine TM2000转染抑制SAA表达的siRNA或无关的siRNA (negative siRNA,neg-siR-NA),用荧光倒置显微镜观察转染效率,利用real-time RT-PCR技术检测SAA及肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-d)的mRNA表达,ELISA技术检测SAA、纤连蛋白(fibronectin,FN)、TNF-α蛋白的表达情况.结果 SAA-siRNA转染可抑制高糖刺激的HMCs中SAA、FN、TNF-α的表达水平(P＜0.05).结论 SAA是高糖诱导HMCs分泌ECM及炎症反应的重要介质,通过RNA干扰(RNA interference,RANi)技术抑制SAA的表达,可减少高糖刺激下系膜细胞FN、TNF-α的积聚,减少肾小球的ECM和炎症反应,为进一步寻找DKD防治的靶点提供了新的实验依据.     

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9) siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响?方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达?结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P < 0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异?结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展?     

炎症促进清道夫受体基因敲除小鼠主动脉脂质积聚的分子机制

目的 探讨炎症促进清道夫受体A和CD36双敲(SR double knockout,SR DKO)C57BL/6J小鼠主动脉固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein2,SREBP2)表达,加重主动脉脂质异常积聚的分子机制.方法 13只SR DKO雄性小鼠,按体质量大小,采用完全随机的方法,分为炎症组(n=6)和对照组(n=7).喂养高脂饮食14周,检测血清炎症因子和脂质水平;油红O染色观察主动脉脂质积聚;实时定量PCR和免疫组织化学染色,分析主动脉低密度脂蛋白受体(LDLr)、调控其转录的SREBP2及SREBP2裂解激活蛋白(SCAP)mRNA和蛋白表达水平.结果 炎症组血清淀粉样蛋白A(SAA)水平比对照组明显增高[(10.32±2.88)ng/ml vs (5.50±2.67)ng/ml,P<0.05];主动脉切片油红O染色结果发现,炎症组比对照组脂质积聚明显增加;炎症组主动脉的SREBP2、SCAP和LDLr mRNA和蛋白表达水平比对照组明显增高(P<0.05).结论 SR DKO小鼠在炎症状态下,促进主动脉胆固醇敏感器SCAP和SREBP2表达,上调LDLr,使胞内摄入胆固醇增加,加重主动脉脂质的异常积聚.     

IL-10对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞LOX-1表达的影响

目的:检测急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者外周血单核细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(1ectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达水平,以及抗炎因子白介素-10(intedeuidn.10,IL-10)对其表达的影响.方法:收集28例健康体检者和28例ACS患者,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)检测血清中IL-10和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α水平.分离外周血单核细胞进行培养,加或不加IL-10(20μg/L)进行体外干预,检测单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达的变化.结果:与健康对照组相比,ACS患者血清中IL-10和TNF-水平明显升高(P＜0.01).ACS患者外周血单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01),IL-10(20G/L,3 h)可明显下调单核细胞LOX-1的蛋白和mRNA表达(P＜0.01).结论:抗炎因子IL-10可能通过抑制ACS患者外周血单核细胞LOX-1的表达而起到稳定斑块的作用,这可能是IL-10抗动脉粥样硬化的又一新机制.     

外源性硫化氢通过抑制SR-A表达减少THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积

目的探索外源性硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制。方法以硫氢化钠(NaHS)做为外源性硫化氢的供体,采用油红O染色结合光密度法测细胞内脂质含量,RT-PCR和Westernblot法测SR-A mRNA和蛋白表达。结果氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积和SR-A表达,而NaHS呈浓度依赖性降低ox-LDL诱导的细胞内脂质蓄积,并显著下调SR-A mRNA和蛋白水平。结论外源性硫化氢可能通过抑制SR-A表达减少ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积。     

近红外荧光分子标记的LOX-1抗体靶向小鼠动脉粥样硬化模型的成像研究

目的:探讨近红外荧光分子标记的凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)抗体探针在ApoE-/-鼠主脉动脉粥样硬化近红外荧光(NIRF)成像中的可行性。方法:将ApoE-/-小鼠以高脂饮食喂养20周,建立动脉粥样硬化模型。将24只ApoE-/-动脉粥样硬化模型小鼠随机分为3组,即抗LOX-1抗体-NIR-797组、非特异性IgG-NIR-797组和单纯磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组8只,分别经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797、非特异性IgG-NIR-797和单纯PBS。另取8只C57BL/6小鼠作为对照组,经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797,注入探针24 h后取小鼠主动脉及主要脏器行NIRF成像,再取主动脉行油红O染色,比较NIRF成像面积和油红O染色面积比例的差异。结果:ApoE-/-小鼠经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797探针24 h后,NIRF成像显示有强荧光信号聚集于小鼠离体主动脉的斑块区域,而注入非特异性IgG-NIR-797组斑块区信号明显减弱,PBS组及对照组C57BL/6小鼠仅见较弱荧光信号,单因素方差分析结果显示差异有统计学意义(F=232,P<0.001)。NIRF阳性面积与斑块油红O染色面积比例分别为(42.70±1.25)%和(42.78±1.51)%,两者差异无统计学意义(t=0.409,P=0.695)。结论:近红外荧光分子标记的抗LOX-1抗体探针能够特异性地显示ApoE-/-鼠主动脉粥样硬化斑块的分布,可以作为小鼠动脉粥样硬化斑块成像的有效工具,LOX-1将来可能成为一个新的评价动脉粥样硬化的良好靶点。     

LOX-1介导ox-LDL诱导大鼠系膜细胞表达TGF-β1及分泌细胞外基质

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠肾小球系膜细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及分泌细胞外基质(ECM)的影响,并观察LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(PIA)对ox-LDL上述作用的影响.方法:体外培养肾小球系膜细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1 mRNA的表达;RT-PCR观察空白组、ox-LDL组(50 μg/ml)和PIA组(50 μg/ml ox-LDL 250 μg/ml PIA)肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA的表达,ELISA法检测上述3组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的含量.结果:RT-PCR结果表明,25、50、100 μg/ml ox-LDL组LOX-1 mRNA表达明显高于0 μg/ml组(P＜0.05),其中50 μg/ml组表达最高;50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA表达明显高于空白组和PIA组(P＜0.01).ELISA结果表明50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1 、FN、Col Ⅳ的含量明显高于空白组和PIA组(P＜0.05).结论:ox-LDL体外可促进大鼠肾小球系膜细胞表达LOX-1、TGF-β1及分泌细胞外基质,PIA可抑制ox-LDL的上述作用,提示LOX-1可能介导了ox-LDL对肾小球系膜细胞的损伤,参与了肾小球硬化的发生和发展.     

脂肪肝小鼠的肝脏脂质代谢相关基因表达特征分析

目的 分析ob/ob肥胖小鼠脂肪肝中脂质代谢相关基因的表达特征.方法 18周龄雄性ob/ob及其同窝对照小鼠各4只,禁食16h后处死.检测小鼠体质量、肝脏湿质量/体质量、肝脏三酰甘油(TG)水平;用H-E和油红O染色观察肝脏的形态结构和脂质沉积情况;用实时荧光定量PCR方法检测肝脏脂质代谢相关基因的mRNA表达情况.结果 Ob/ob小鼠体质量、肝脏湿质量/体质量和肝脏组织TG水平均高于对照小鼠(P＜0.05),H-E和油红O染色显示ob/ob小鼠发生肝脏脂质沉积;肝脏脂肪酸转位酶(CD36)、脂肪酸结合蛋白1(FABP1)、脂肪酸合酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、极长链脂肪酸延长酶6(ELOVL6)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)等mRNA表达水平在ob/ob小鼠肝脏均高于对照小鼠(P＜0.05),而过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、软脂酸辅酶A氧化酶1(ACOX1)、载脂蛋白B(ApoB)和微粒体TG转移蛋白(MTP) mRNA在两组小鼠肝脏中的mRNA表达水平差异无统计学意义.结论 Ob/ob小鼠肝脏的脂肪酸摄取和从头合成相关基因的mRNA表达水平升高,而脂肪酸氧化及脂质向肝外转运的相关基因的mRNA表达水平无明显改变.     

黄芪甲苷对高糖环境下人肾小球系膜细胞损伤保护作用及其机制研究

目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖(HG)环境下人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖和氧化应激损伤保护作用及其可能机制.方法 采用MTT方法检测高糖作用不同时间点时及不同浓度AS-Ⅳ干预后HMCs增殖情况;采用实时荧光定量PCR(qPCR) 、Western blot方法分别检测不同浓度AS-Ⅳ干预高糖环境下HMCs 48 h后核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及其蛋白表达;采用过氧化氢(H2O2)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测不同浓度AS-Ⅳ干预高糖环境下HMCs 48 h后细胞上清液中H2O2、T-SOD、GSH-Px、MDA含量变化.结果 MTT法结果显示,与正常(NG)组比较,高糖环境下HMCs呈过度增殖趋势(P<0.05),不同浓度AS-Ⅳ干预48 h后,与HG组比较,各用药组明显地抑制了高糖环境下HMCs过度增殖且呈剂量依赖性(P<0.01);qPCR及Western blot法结果显示,与HG组比较,各用药组明显地增加了Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达(P<0.01),减少了iNOS与ICAM-1 mRNA及蛋白表达(P<0.05).各试剂盒测试结果显示,与HG组比较,各用药组明显地降低了HMCs上清液中H2O2、MDA的含量(P<0.05),增加了HMCs上清液中T-SOD、GSH-Px的含量(P<0.01).结论 AS-Ⅳ能够明显地抑制HG环境下HMCs过度增殖.对HG环境下HMCs损伤保护作用的部分机制可能是通过激活Nrf2通路并上调Nrf2、HO-1 mRNA及其蛋白其表达,下调iNOS、ICAM-1 mRNA及其蛋白表达,增加HMCs上清液中T-SOD、GSH-Px的含量,降低HMCs上清液中H2O2、MDA的含量.     

高脂高胆固醇饮食致C57BL/6J小鼠肺组织脂质蓄积的研究

【摘　要】目的：研究高脂高胆固醇饮食（Paigen饮食）是否可以导致C57BL/6J小鼠肺组织的脂质蓄积。方法：66只C57BL/6J雄性6~8周龄小鼠随机分为２组,分别喂饲普通饮食和Paigen饮食,于喂养12、16、20周３个时间点,取主动脉做冰冻切片,油红O染色观察粥样硬化斑块形成情况;肺组织冰冻切片油红O染色,观察肺组织脂质蓄积情况;体外培养A549细胞观察用不同浓度低密度脂蛋白（Low density lipoprotein,LDL）处理后,A549细胞内脂质蓄积情况。结果：Paigen饮食可导致C57BL/6J小鼠主动脉粥样硬化;同时,不同时间点C57BL/6J小鼠肺组织油红O染色结果提示该饮食还可以导致C57BL/6J小鼠肺组织出现脂质蓄积,并随着时间延长而加剧;不同浓度LDL刺激A549细胞的油红O染色结果提示：A549细胞的脂质蓄积与LDL处理的浓度间存在剂量效应关系。结论：Paigen饮食可以导致C57BL/6J小鼠肺脏出现时间依赖性的脂质蓄积,其机制可能与肺泡Ⅱ型上皮细胞的脂质代谢异常有关。