琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1双转基因 AD小鼠的作用研究

目的 探讨琐琐葡萄黄酮(flavones from Vitis vinifera L.,VTF)对APP/PS-1双转基因AD小鼠神经保护作用研究。方法 选用6月龄雄性APP/PS-1双转基因AD小鼠75只,随机分为模型组、阳性对照组(多奈哌齐组,0.7mg/kg)和琐琐葡萄总黄酮(VTF)低、中、高剂量组(70、210、420mg/kg),另取15只同龄雄性C57BL/6小鼠为空白对照组,模型组和空白对照组给予等量0.5%CMC-Na灌胃,8周后采用Morris水迷宫观察小鼠空间认知能力,应用HE染色和免疫组化学染色(IHC)观察小鼠海马CA1区神经元细胞形态以及APP和Aβ1~42 蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠逃逸潜伏期显著延长(P<0.01),有效区域进入次数显著减少(P<0.01);与模型组比较,VTF各剂量组逃逸潜伏期显著缩短(P<0.05),VTF低和中剂量有效区域进入次数显著增多(P<0.05)。镜下观察结果显示,与空白对照组比较,模型组存在大量呈凋亡趋势的神经元细胞,排列不规则,胞质萎缩出现间隙,CA1区APP和Aβ1~42蛋白表达量增加;阳性对照组及VTF各剂量组海马神经元大多数较正常,排列较规整紧密,核仁清晰,核固缩浓染减轻,APP和Aβ1~42蛋白表达量减少。结论 VTF可改善APP/PS-1双转基因AD小鼠学习记忆能力,对小鼠大脑神经元细胞有良好的保护作用,可减少APP和Aβ1~42在小鼠脑内的过表达,对APP/PS-1双转基因AD小鼠具有较好的防治作用。     

琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病小鼠神经炎症的保护作用

目的 研究琐琐葡萄黄酮（VTF）对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠神经炎症保护作用的机制。方法 选取6月龄APP/PS-1双转基因雄性小鼠75只,随机分为模型组（0.5%CMC-Na）、阳性组（多奈哌齐0.7 mg/kg体重）、VTF低剂量组（VTF 70 mg/kg体重）、VTF中剂量组（VTF 210 mg/kg体重）、VTF高剂量组（VTF 420 mg/kg体重）,每组15只;另选取6月龄同背景SPF级C57BL/6小鼠15只为对照组（0.5%CMC-Na）。灌胃8周后,免疫组织化学检测IBA1蛋白表达;Western blotting检测APP、IBA1蛋白表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脑组织的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果 对照组、阳性组及VTF各剂量组IBA1蛋白阳性表达率较模型组低（P <0.05）;对照组、阳性组及VTF各剂量组APP、IBA1蛋白相对表达量较模型组低（P <0.05）;对照组、阳性组及VTF各剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α含量较模型组...     

回神颗粒对APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠A沉积的影响

目的 研究回神颗粒对APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 通过Morris水迷宫的方法检测小鼠行为学变化,HE染色观察各组海马神经细胞形态,免疫组化方法检测小鼠海马区Aβ1-42、SorLA、Caveolin-1、BACE1、PS-1、APP的表达.结果 中药回神颗粒能降低APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠脑组织的A沉积(P＜0.01),提高脑组织中SorLA表达、降低Caveolin-1、BACE1、PS-1、APP(P＜0.05,P＜0.01).结论 回神颗粒可通过调节胞内SorLA、胞膜Caveolin-1蛋白的表达进而抑制Aβ生成、沉积等病理改变,防治阿尔茨海默病.     

胰淀素在痴呆小鼠和正常小鼠脑内的分布和表达变化

目的 观察胰淀素在正常小鼠、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠和肥胖模型小鼠脑内的分布和表达情况,分析其与小鼠脑内老年斑的关系,探讨胰淀素是否参与老年性痴呆的发病.方法 取5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠(AD模型小鼠)、ob/ob肥胖模型小鼠及野生型小鼠(正常小鼠),采用免疫荧光染色方法检测胰淀素和老年斑在各组小鼠脑内的分布和表达.结果 免疫荧光双标检测结果显示:胰淀素免疫阳性神经元广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内,包括皮质、海马、丘脑等区域,强阳性表达于岛叶和梨形皮质区域(P＜0.01),而老年斑则选择性表达于新皮质、海马等区域,胰淀素的分布范围较老年斑的分布广泛,在部分老年斑的周围可见胰淀素免疫阳性物质分布.5月龄AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠新皮质内胰淀素阳性神经元数目明显高于正常小鼠(P＜0.05,P ＜0.01).结论 胰淀素在AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠及正常小鼠脑内的分布和表达存在差异,这种差异有可能促进老年斑的形成以及参与AD疾病的发生.     

五味子水提取液对APP/PS1小鼠大脑皮层神经细胞保护作用研究

目的:探讨五味子水提取液(SWE)对APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层的神经细胞保护作用。方法:将C57BL/6小鼠分为正常组(Control),模型组(APP/PS1双转基因小鼠,Tg)和给药组(Tg+10、30、50 mg/kg的SWE,灌胃40 d);水迷宫检测各组小鼠的学习与记忆能力;Nissl法检测各组小鼠大脑皮层神经细胞的形态;TUNEL法检测各组小鼠大脑皮层神经细胞的凋亡情况;硫代巴比妥酸检测丙二醛(DMA)含量;黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与模型组比较,灌胃SWE明显提高Tg小鼠的学习与记忆能力;改善大脑皮层神经细胞的形态;减少神经细胞凋亡;显著降低MDA的含量以及增强SOD的活性。结论:SWE对Tg小鼠大脑皮层的神经细胞有一定的保护作用,可能是通过减轻氧化应激造成的损伤来发挥治疗作用。     

石菖蒲有效成分对APP/PS1双转基因小鼠GAP-43表达的影响

目的:观察石菖蒲有效成分β-细辛醚对APP/PS1双转基因小鼠生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)表达的影响,探讨β-细辛醚对APP/PS1双转基因小鼠神经突触可塑性的保护作用及对阿尔茨海默病(AD)的治疗作用机制。方法:选取2019年3-4月40只2月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,盐酸多奈哌齐组,低剂量组及高剂量组,每组10只,选用10只相同月龄C57BL/6小鼠为空白对照组。空白对照组与模型组分别给予0.1 mL/10 g 0.9%氯化钠溶液,盐酸多奈哌齐组给予0.33 mg/(kg·d)盐酸多奈哌齐,低剂量组给予β-细辛醚25 mg/(kg·d),高剂量组给予50 mg/(kg·d)β-细辛醚,五组均连续灌胃4周。采用Morris水迷宫法检测并比较各组学习记忆能力,采用免疫荧光法检测并比较各组海马区GAP-43蛋白的表达变化,采用RT-PCR技术检测并比较各组海马区GAP-43mRNA表达水平。结果:模型组、盐酸多奈哌齐组、低剂量组与高剂量组逃避潜伏期均高于空白对照组,且跨越平台次数均低于空白对照组(P0.05)。盐酸多奈哌齐组、低剂量组与高剂量组逃避潜伏期均低于模型组,且跨越平台次数高于模型组(P0.05)。盐酸多奈哌齐组与高剂量组逃避潜伏期均低于低剂量组(P0.05)。盐酸多奈哌齐组与高剂量组跨越平台次数均高于低剂量组,且高剂量组高于盐酸多奈哌齐组(P0.05)。模型组、盐酸多吗哌齐组、低剂量组与高剂量组GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达量均高于空白对照组(P0.05)。盐酸多奈哌齐组、低剂量组与高剂量组GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达量均低于模型组(P0.05)。结论:β-细辛醚具有改善AD的作用,并且作用机制与调控小鼠海马神经突触可塑性相关因子GAP-43的表达相关。     

慢性脑缺血对APP/PS1双转基因小鼠行为学及脑组织形态学的影响

目的:探讨慢性脑缺血对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠的行为学以及脑组织形态学的影响。方法:将20只3月龄APP/PS1 AD模型小鼠随机分成2组,每组10只,对其中一组采用改良的双侧颈总动脉狭窄术,另一组双侧颈总动脉未结扎小鼠为假手术对照组。术后1个月分别采用Morris水迷宫、组织学和免疫组化染色,检测模型组和假手术组小鼠行为学的改变、海马区神经细胞形态学的改变、海马区神经细胞内Neu N和APP及Aβ的表达变化。结果:行为学实验结果:(1)可视平台下,2组小鼠找到平台的时间(t=1.31,P=0.19)及搜索的平均路程(t=0.04,P=0.97)无显著差异;(2)隐蔽平台下,脑缺血模型组小鼠(26.39±1.37)找到平台的时间较假手术对照组(20.19±1.19)明显延长(t=3.44,P=0.00);(3)空间探索实验中,经过平台的次数,脑缺血模型组小鼠(3.11±0.37)较对照组(4.25±0.34)明显减少(t=2.24,P=0.03)。HE染色:脑缺血模型组小鼠海马内神经细胞明显肿胀、细胞排列紊乱。免疫组化结果:脑缺血模型组小鼠海马内Neu N阳性神经元数量(93.40±10.44)较对照组(156.20±24.16)显著减少(t=2.39,P=0.04);而APP-阳性神经元(t=2.35,P=0.047)、Aβ40-阳性神经元(t=2.54,P=0.04)以及Aβ42-阳性神经元(t=2.476,P=0.04)较假手术组明显增加。结论:本实验新建立的改良双侧颈总动脉狭窄术能导致小鼠慢性脑缺血;慢性脑缺血可加速APP/PS1双转基因AD模型小鼠的病理进程。     

金钗石斛水提物通过调节APP/PS1小鼠突触可塑性及胶质细胞激活缓解学习记忆损伤

目的：探讨金钗石斛水提物（dendrobium nobile lindl,DNL）是否能通过调节突触的可塑性缓解APP/PS1阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠的学习记忆损伤。方法：12只野生型C57BL/6雄性小鼠随机分成两组（n=6）：对照组（WT），单纯DNL处理组（WT+DNL）:DNL(10 mg/kg，灌胃，每天1次，持续2个月)；12只APP/PS1小鼠分为2组：APP/PS1 AD模型组（APP/PS1）和APP/PS1 AD模型治疗组（APP/PS1+DNL）:APP/PS1小鼠7个月龄时给予DNL(10 mg/kg，灌胃，每天1次，持续2个月)。Morris水迷宫检测小鼠记忆能力；高尔基染色法检测小鼠脑海马区树突棘数量；海马脑片电生理检测长时程增强（long term potentiation,LTP）；免疫组织化学技术检测海马区胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）及离子钙接头蛋白（Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1）...     

胃旁路手术对阿尔茨海默病模型小鼠认知功能的影响

目的观察胃旁路手术对APP/PS1/Tau三转基因阿尔茨海默病模型小鼠(AD模型小鼠)认知功能的影响。方法 2018年2月—2019年3月在武汉大学人民医院中心实验室及动物实验中心进行实验,选取来自亲代APP/PS1/Tau三转基因型的子代小鼠(6月龄)随机分为AD胃旁路手术组(n=6)、AD模型组(n=6),另取相同月龄同窝生的C57小鼠随机分为WT正常对照组(n=6)、WT正常胃旁路手术组(n=6)。胃旁路手术2个月后进行APP/PS1/Tau三转基因小鼠的基因鉴定,鉴定后4组行Morris水迷宫实验检测认知功能,最后取4组小鼠海马部位组织用Western-blot方法检测P-Tau(Ser396)和P-Tau(Thr231)蛋白的表达,了解各组小鼠Tau蛋白磷酸化水平情况。结果AD模型组和AD胃旁路手术组的小鼠均携带APP、PS1及Tau 3种基因,即为APP/PS1/Tau三转基因小鼠,造模成功。在水迷宫定位航行实验中,AD胃旁路手术组小鼠较AD模型组平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),而与WT正常对照组比较,AD胃旁路手术组逃避潜伏期延长(P<0.05);空间探索实验中,AD胃旁路手术组较AD模型组跨越平台次数明显增加(t=3.376,P=0.007)。AD胃旁路手术组小鼠较AD模型组Tau蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.01)。结论胃旁路手术能明显改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能。     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

阿尔茨海默病转基因小鼠高场强磁共振影像学与病理学对照研究

目的 观察和分析转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠模型早期的脑部影像学特征,确立7.0 T高场强磁共振显微成像(MRMI)对于早期AD的诊断价值.方法 3、6、9个月龄的APP/PS-1转基因小鼠各6只作为实验组,同龄野生型小鼠作为对照组;应用Bruker Phama Scan 7.0 T磁共振仪对小鼠脑部进行扫描;成像后取小鼠脑组织切片经β-淀粉样蛋白(Aβ)免疫组织化学染色,并与脑部的T2WI进行对照.结果 随着月龄的增加,APP/PS-1转基因小鼠脑部的Aβ沉积加剧,在6个月龄的APP/PS-1转基因小鼠脑部切片上已有Aβ斑块的形成,而9个月的APP/PS-1转基因小鼠皮质和海马内Aβ沉积斑块数量增多;9个月龄实验组小鼠海马及皮质可见散在点状低信号区,分布范围与病理改变相符;3、6个月龄APP/PS-1转基因小鼠及3组各月龄对照组小鼠脑组织结构T2WI未见明显低信号区.结论 与Aβ免疫组化病理结果对照,7.0T高场强MR能够显示9个月龄APP/PS-1转基因小鼠脑部的Aβ斑块沉积,有助于早期AD的诊断.

Abstract：

Objective To observe and investigate the neuroimaging characters in early progression of transgenic Alzheimer's disease (AD) mice model, and make sure the diagnosis value of 7.0 T high field magnetic resonance microimaging(MRMI). Methods APP/PS-l transgenic mice aged 3,6, 9 months and the same aged wild type mice were each divided into 6 groups(6 mice in every groups) based on age. The mice brains were scaned with 7.0T high magnetic field MR. Then the mice were killed. The Aβ immunohistochemistry examination was analyzed in the mice brains specimens, and pathological changes were in comparison with the T2 weighted imaging in the mice brains. Results There were a few Aβ plaques in the brains of 6 months APP/PS-1 transgenic mice, while Aβ plaques were increased both in number and volume in the cerbral cortex and hippocampus of 9 months AD mice. The brains of APP/PS-1 double transgenic mice of 3, 6 months and the control group mice were not showed intensity loss on T2 weighted MR images, while the signal intensity loss was visualized in the cerbral cortex and hippocampus of 9 months AD mice. Conclusion 7. 0T high magnetic field MR could display Aβ plaques in the brains of APP/PS-1 double transgenic mice of 9 months and it is helpful to diagnosis early AD.     

参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5表达的影响

目的探讨参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元突触信号传递相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5表达的影响。方法将雄性3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分成5组,模型组、多奈哌齐组[0.92 mg/(kg·d)],参枝苓大剂量组[50 g/(kg·d)]、参枝苓中剂量组[25 g/(kg·d)]、参枝苓小剂量组[12.5 g/(kg·d)]。正常组为同月龄同背景野生型C57BL/6J小鼠。连续灌胃3个月,进行行为学跳台实验。实验结束后取海马组织,运用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学方法检测小鼠海马CA1区突触相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5的表达。结果 Western blot检测显示,模型组小鼠海马α7-nAChRs的蛋白条带比正常组小鼠明显变窄,颜色变浅(P0.01)、而mGluR5蛋白条带明显增宽,颜色变深(P0.01);与模型组小鼠相比,各干预组α7-nAChRs蛋白条带增宽、颜色变深(P0.05或P0.01),mGluR5蛋白条带变窄、颜色变浅(P0.05或P0.01)。免疫组织化学染色检测小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5的阳性细胞表达结果与Western blot检测结果一致。结论参枝苓口服液可能是通过调节小鼠海马CA1区突触中的关键蛋白,改善突触功能发挥减缓阿尔茨海默病(AD)大脑损伤,维持记忆获得能力,从而发挥抗痴呆作用。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元ChAT表达的影响

目的 观察淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/PS1)双转基因小鼠海马CA1区神经元胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆的影响.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组及姜黄素大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组.各治疗组每天灌胃给药1次,连续灌胃3个月.应用跳台实验、免疫组织化学和蛋白质印迹( Western-blot)检测学习记忆能力和海马神经元ChAT的变化.结果 与正常组小鼠相比,模型组小鼠潜伏时间显著缩短(P＜0.01),与模型组小鼠相比,姜黄素各剂量组小鼠潜伏时间增加(P＜0.05或P＜0.01).免疫组化检测,模型组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞较正常对照组明显减少(P＜0.01),而姜黄素干预组可以使其不同程度地恢复.Western blot检测,模型组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带比正常组小鼠明显变细、颜色变浅(P＜0.01);姜黄素干预组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P＜0.05或P＜0.01).结论 姜黄素能通过增加ChAT的蛋白表达,促进阿尔茨海默(AD)模型动物神经传导障碍,进而改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力.     

LXRβ调节海马突触可塑性改善APP/PS1小鼠认知功能的研究

目的 探讨肝X受体(LXR)β激动剂T0901317对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马突触可塑性及认知功能的影响.方法 共纳入30只9个月龄雄性小鼠,其中10只野生型(WT)小鼠作为WT组,20只APP/PS1转基因AD模型小鼠分为AD组和AD+T0组.采用新物体识别实验、Morris水迷宫、免疫组织化学及Wester...     

姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响,探讨姜黄素神经保护作用机制.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组、姜黄素高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,并以同窝阴性小鼠作为正常对照组.连续灌胃6个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法进行检测.结果 免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较正常组明显增加(P＜0.01),与模型组相比,各干预组IRS-1阳性细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01),p-IRS-1结果与IRS-1结果相反.Western blot检测海马IRS-1和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组化检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组化和Westernblot结果一致.结论 姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并调节IRS-1 mRNA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗阿尔茨海默病作用.     

姜黄素在阿尔茨海默病中对炎症以及神经元的保护机制研究

目的:通过观察姜黄素治疗后阿尔茨海默病炎症及神经元的变化,初步探讨姜黄素在该疾病中对炎症以及神经元的保护机制。方法:将3月龄APP/V717转基因小鼠及C57BL/6小鼠随机分为C57BL/6野生鼠对照组、姜黄素治疗组(APP/V717转基因小鼠),转基因鼠对照组(APP/V717转基因小鼠)各10只。其中C57BL/6野生鼠对照组和转基因鼠对照组喂养正常的鼠粮,姜黄素治疗组连续喂养含姜黄素的鼠粮9个月(姜黄素按600ppm/d加入到鼠粮中)。喂养后通过水迷宫测试检测小鼠的学习记忆能力;Nissl染色观察小鼠神经细胞的变化;Western blot检测炎症因子IL-1β、TNF-α及凋亡相关的蛋白Bax/Bcl-2的表达;TUNEL法观察小鼠海马区的细胞凋亡情况。结果:1正常鼠粮和含姜黄素鼠粮喂养小鼠体重未发现明显差异;2C57BL/6野生鼠对照组的潜伏期为(21.71±8.69)s,姜黄素治疗组的潜伏期为(25.12±4.28)s,而转基因对照组小鼠的潜伏期为(44.28±8.74)s,姜黄素治疗组小鼠的潜伏期明显低于转基因小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);3Nissl染色发现姜黄素治疗组小鼠的神经元细胞与野生型小鼠相似,而转基因小鼠神经元形态不完整,仅有散在的尼氏小体;4IL-1β、TNF-α在转基因小鼠组中表达最高,野生型小鼠中最低,而转基因小鼠在姜黄素治疗后IL-1β、TNF-α的含量明显降低,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);5转基因小鼠的海马区发现较多凋亡的神经元,而在野生型小鼠中几乎未见凋亡神经元,姜黄素治疗组小鼠中见到少量散在的凋亡神经元;6转基因小鼠中Bax的表达明显高于野生型小鼠和姜黄素治疗组小鼠,而Bcl-2的表达量显著低于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素治疗阿尔茨海默病小鼠可以改善小鼠的认知功能,并且有效的减少炎症因子的产生、减少神经元的凋亡。     

侧脑室注射rAAV-HIF-1a基因治疗AD模型大鼠的研究

目的 在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1a(hypoxia-inducible factor-1a,HIF-1a)腺相关病毒rAAV-HIF-1a对阿尔茨海默病(Alzheime s disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①正常组(normal组):未作任何特殊处理;② AD模型组(AD组):右侧脑室注射2μ1β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ) 25-35 (10mg/m1);③假手术组(sham组):右侧脑室注射2μ1生理盐水;④AD模型+rAAV-HIF-1a 组(AD+rAAV-HIF-1a组):右侧脑室注射2μ1Aβ25-35后1周右侧脑室注射10μ1rAAV-HIF-1a(1x1012v.g./ml).以上各组动物于注射Aβ25-35或生理盐水后5周取材检测海马神经细胞HIF-1a蛋白表达及凋亡百分率.结果 Western blot 检测表明rAAV-HIF-1a组海马神经细胞HIF-1a蛋白表达明显增强(P<0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率.结论 侧脑室注射rAAV-HM-1a能够在AD模型大鼠海马高效表达HIF-1a蛋白并抑制海马神经细胞凋亡.     

不同月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元线粒体的动态变化

目的:检测不同月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠海马神经元中线粒体自噬的动态变化,并探讨其意义.方法:选取20只雄性APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象,分为3月龄组、6月龄组、9月龄组和12月龄组,以C57小鼠为对照组.获取海马组织,通过电镜观察海马区神经元中线粒体的形态变化,用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达水平;线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和Miro1的表达水平;线粒体外膜蛋白Tom20的表达水平.结果:电镜观察结果显示:随着月龄增大,APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元中线粒体损伤的病理变化呈逐渐加重的过程,即线粒体明显水肿、透明,嵴排列不规则,断裂,甚至消失.Western blot结果显示,与野生小鼠组比较,LC3、P62、PINK1和Parkin蛋白表达水平在6月龄组、9月龄组和12月龄组小鼠中明显增高(P＜0.05),而Miro1蛋白却明显降低(P＜0.05),Tom20的表达水平无明显差异(P＞0.05).结论:随着APP/PS1双转基因AD小鼠月龄的增加,其海马区神经元线粒体病理改变呈动态,线粒体自噬呈动态增强但伴随线粒体清除障碍.     

益智汤对APP695转基因小鼠行为学及脑内β淀粉样蛋白及其前体蛋白的影响

目的 观察益智汤对APP695转基因小鼠行为学及脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)及其前体蛋白(APP)的影响,探讨益智汤治疗阿尔茨海默病(AD)的机理.方法 3月龄APP695转基因小鼠随机分为模型组、益智汤组,同月龄同背景转基因阴性小鼠为正常组.益智汤组给予益智汤0.1 g/kg灌胃,模型组和正常组给予等体积蒸馏水.益智汤治疗3个月后,使用电迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学方法观察各组小鼠大脑皮层、海马APP和Aβ的表达情况.结果 电迷宫检测发现,模型组小鼠学习记忆能力低于正常组(P<0.05),益智汤组小鼠学习记忆能力较模型组增强(P<0.05).免疫组织化学结果提示,模型组小鼠脑组织各区APP和Aβ的表达高于正常组(P<0.01),益智汤组小鼠脑组织各区APP和Aβ的表达比模型组明显减弱(P<0.05).结论 APP695转基因小鼠是研究AD的良好模型,益智汤通过下调APP和Aβ的表达来改善其学习记忆能力.     

早老素增强子-2在APP/PS1双转基因小鼠脑内的分布及表达

目的 研究γ-分泌酶组件早老素增强子-2(presenilin enhancer-2,Pen-2)在APP/PS1双转基因小鼠脑内的表达及分布,以进一步明确Pen-2与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的关系.方法 对APP/PS1双转基因小鼠交配后产下的子代进行基因分型,用免疫组化方法检测Pen-2和老年斑在APP/PS1双转基因AD模型小鼠和同窝野生型正常小鼠脑内的分布和表达情况.结果 Pen-2广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内各区域,包括大脑皮质、海马、基底核、小脑、嗅脑、脑室脉络丛等,而老年斑则选择性地出现在大脑皮质、海马、嗅脑等区域,并且Pen-2的分布范围广于老年斑的分布.AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2阳性神经元的着色程度(2.09±0.33)显著高于正常小鼠(1.29±0.31,P ＜0.05),且AD模型小鼠大脑新皮质内Pen-2免疫阳性物质主要分布于细胞膜和细胞质,而正常小鼠大脑新皮质内的Pen-2阳性神经元仅细胞膜周围染色较深,而细胞质染色极浅甚至不着色.结论 Pen-2在AD模型小鼠和正常小鼠脑内的表达存在差异,这种差异可能与老年斑的形成和AD的发生相关.