乙酰基转移酶抑制剂对食管癌细胞KAT5、Survivin乙酰化水平及细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙酰基转移酶抑制剂NU9056对食管癌EC109细胞乙酰基转移酶KAT5、Survivin乙酰化水平及细胞增殖和迁移的影响。方法 NU9056处理食管癌EC109细胞为实验组(NU9056组),有机溶剂DMSO处理食管癌EC109细胞为对照组(DMSO组)。采用MTT法筛选并确定NU905最佳给药浓度,RT-qPCR检测KAT5 mRNA表达,Western blot检测KAT5、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、癌基因-Myc(c-Myc)、B淋巴细胞瘤-2(BCL2)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,免疫共沉淀检测Survivin乙酰化水平,MTT法检测细胞增殖情况,划痕修复实验检测迁移能力,Transwell小室实验检测侵袭能力。结果 NU9056可浓度依赖性抑制食管癌EC109细胞增殖,其IC₅₀=0.946μmol/L,确定NU905最佳给药浓度为0.9μmol/L。NU9056组中KAT5 mRNA和蛋白表达较DMSO组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。NU9056组Survivin乙酰化水平较DMSO组明显下降,...     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

转录因子Yin Yang 1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响

目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用?方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移?侵袭能力的变化?结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1 蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高?此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化?TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭?迁移能力增强?结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力?因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点?     

X-盒结合蛋白1在食管癌癌组织中的表达及对食管癌生物学行为的影响

【摘要】 目的 观察X-盒结合蛋匂1在食管癌组织中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 60例食管癌与癌 旁组织,分别以Real-time PCR、western-blot、免疫组化检测XBP-1表达情况。在TE-1细胞系中,转染 pcDNA3. 1-XBP-1,检测TE-1细胞增殖、迁移、侵袭能力变化。结果 Real-time PCR检测结果显示,食管癌组织中 XBP-1 mRNA水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0. 05)。Western-blot检测结果显示,食管癌组织中XBP- 1蛋匂表达水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05) o 60例食管癌组织中,48例呈阳性表达,12例呈阴性 表达。60例癌旁组织中,15例呈阳性表达,45例呈阴性表达。食管癌组织中XBP-1阳性表达率显著高于癌旁组织 (P<0.05)。在TE-1细胞中,转染pcDNA3. 1-XBP-1组细胞增殖率显著高于空匂对照组及空载对照组(P<0. 05)o TE-1细胞中,转染pcDNA3. 1-XBP-1后迁移细胞数、侵袭细胞数均显著多于转染pcDNA3. 1及空匂对照组(P<0.05)。结论 XBP-1在食管癌中表达量显著高于癌旁组织,转染XBP-1基因可促进食管癌细胞TE-1增殖、迁移、侵袭。     

UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1（UBQLN1）及上皮-间质转化（EMT）标志分子在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织（P<0.05）,而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关（r=-0.517 3,P<0.001）,而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关（r=0.780 3、0.685 6,P<0.001）。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。     

芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响

  目的  研究芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响。  方法  MTT法检测各浓度芒果苷元对HK-2细胞活力的影响；用TGF-β1诱导HK-2细胞成EMT模型，并给以芒果苷元干预，在TGF-β1诱导24 h时显微镜下拍照记录细胞形态变化，划痕实验法检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测纤连蛋白（fibronectin，FN）和Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）蛋白表达水平。  结果  （1）芒果苷元（10-9～10-5 mol/L）浓度下HK-2细胞活力均无明显变化（P > 0.05）；（2）与正常组相比，模型组细胞形态变长变梭，迁移和侵袭能力显著增强（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调（P < 0.05，0.01）；与模型组相比，芒果苷元组细胞能维持原来的鹅卵石形，迁移和侵袭能力显著下降（P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）。  结论  芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移和侵袭，阻止细胞形态的改变，下调细胞外基质成分FN和ColⅠ的蛋白表达，从而抑制EMT的发展。     

hsa-miR-302a-3p靶向VEGFA抑制胃癌细胞增殖的机制研究

目的 探讨过表达hsa-miR-302a-3p下调血管内皮生长因子A（VEGFA）对胃癌细胞SGC-7901存活、运动和上皮间质转化的调节作用。方法 采用细胞转染,将hsa-miR-302a-3p mimic转染于miR组细胞,pc-VEGFA转染于VEGFA组细胞,同时将两个基因共转染于miR+VEGFA组。采用RT-PCR和Western blot检测转染效率,生物信息学靶向预测和荧光素实验验证两个基因靶向关系,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell检测各组细胞侵袭能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,显微镜下观察细胞的形态是否发生上皮间质转化（EMT）,采用Western blot检测各组细胞存活相关蛋白Ki67和Caspase-3、EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail以及VEGFA下游靶基因p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平。结果 VEGFA是miR-302a-3p的预测靶位点;与对照组相比,miR组细胞数量、侵袭和迁移率均下降（ P<0.05）,VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均升高（ P<0.05）;与VEGFA组相比,miR+VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均下降（ P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平上调（ P<0.05）,Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白表达水平下调（ P<0.05）,p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平下调（ P<0.05）。结论 hsa-miR-302a-3p通过抑制VEGFA的表达,抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭和迁移。     

miR-148a对食管癌细胞迁移及侵袭的影响及潜在分子机制研究

目的探究微小核糖核酸148a（miR-148a）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及对食管癌TE-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集48例食管癌患者肿瘤及癌旁组织的RNA标本，逆转录PCR合成互补脱氧核糖核酸（cDNA），实时荧光定量聚合酶链反应PCR检测miR-148a 在肿瘤及癌旁组织中的表达情况，分析肿瘤组织中miR-148a 表达差异的临床意义。将人工合成的miR-148a模拟物（miR-148a mimics）转染入食管癌细胞TE-1中，划痕愈合实验检测过表达miR-148a对TE-1细胞迁移的影响，Transwell小室模型检测miR-148a 对TE-1 侵袭的影响。Western blot检测miR-148a 过表达对TE-1 细胞中原癌基因（c-myc）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达的影响。结果MiR-148a在食管癌组织中表达水平下调（P =0.031）；过表达miR-148a能够抑制TE-1细胞迁移（P =0.021）及侵袭（P =0.018）并下调细胞内c-myc（P =0.037）及MMP-9（ P=0.026）的表达水平。结论miR-148a 在食管癌中低表达，miR-148a可能通过抑制c-myc/MMP-9 通路的表达来发挥抑制食管癌细胞迁移及侵袭。     

电离辐射促进食管鳞癌细胞上皮间质转化及迁移

目的:探讨电离辐射对人食管鳞癌TE-1细胞株的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响和潜在机制。方法:用不同强度的电离辐射(0,2,4,8 Gy)处理TE-1细胞,定量PCR检测Snail 1、激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)的mRNA表达,蛋白质印迹法检测Snail 1、Slug、E-钙黏蛋白、波形蛋白的表达量,免疫荧光观察E-钙黏蛋白、波形蛋白的表达,采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;结合Notch通路抑制剂DAPT,经蛋白质印迹法测定电离辐射(4 Gy)后TE-1细胞中Notch 1/NICD/Hes 1通路蛋白、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达变化。结果:电离辐射处理后TE-1细胞EMT相关转录因子Snail 1、Slug、AP-1明显上调,E-钙黏蛋白的表达显著减少,波形蛋白、MMP-9的表达显著增多,且4Gy处理水平即具有明显的促进作用(P<0.01);电离辐射上调了TE-1细胞的迁移能力(P<0.05);电离辐射通过上调Notch 1/NICD/Hes 1信号通路蛋白的表达水平,促使EMT相关蛋白的上调(P<0.01)。结论:电离辐射通过人食管鳞癌TE-1细胞中Notch信号通路诱导EMT及迁移。     

云芝多糖-B对人食管癌细胞Eca109转移的影响

【目的】 应用新型云芝多糖-B(CVPs-B)作用食管鳞癌Eca109细胞,探讨其对Eca109细胞转移特性的作用?【方法】 Western blot检测CVPS-B作用后,食管鳞癌Eca109细胞CXCL12蛋白表达的变化,Transwell侵袭实验评估食管癌细胞侵袭能力的变化,MTT法观察食管癌细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测食管癌细胞迁移能力的变化?【结果】 实验组Eca109细胞CXCL12蛋白表达水平较对照组显著降低(P < 0.05)?CVPs-B孵育后,食管癌Eca109细胞黏附?侵袭及迁移能力下降?【结论】CVPs-B降低食管癌细胞CXCL12蛋白表达,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CVPs-B可能可以通过CXCL12/CXCR4通路抑制食管鳞癌细胞转移特性?     

IL-23促进食管鳞状细胞癌细胞上皮间质转化和迁移

［摘要］目的: 探讨外源性IL-23通过PI3K/AKT/c-Myc通路对TE-1细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和迁移的影响。方法: 采用免疫组织化学和免疫荧光检测12例食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者癌组织与配对癌旁组织中IL 23及其受体(IL 23R)的表达和胞内定位;蛋白质印迹检测TE 1细胞与阴性对照NIH3T3细胞中IL-23p19表达,流式细胞术检测IL-23R的表达;PCR和蛋白质印迹法检测空白对照组,50 ng/mL IL-23组,1 μmol/L Wortmannin +50 ng/mL IL-23组细胞中c-Myc mRNA及其蛋白与E 钙黏蛋白、波形蛋白、p-AKT、Snail 1、Slug蛋白的表达;划痕和Transwell实验检测各组TE-1细胞侵袭和迁移能力。结果： 与癌旁组织比较,ESCC组织及其细胞质中IL-23呈高表达,细胞膜上IL-23R高表达;与阴性对照比较,TE 1细胞中IL-23p19及IL-23R呈过表达（P均<0.01）;与对照组比较,IL-23组细胞中c-Myc mRNA及其蛋白、p-AKT、波形蛋白、Snail 1、Slug蛋白明显升高,E 钙黏蛋白表达明显降低,TE-1细胞划痕愈合率和迁移数明显升高(P均<0.05)。与IL-23组比较,IL-23+Wortmannin组细胞中c Myc mRNA及其蛋白、p-AKT、波形蛋白、Snail 1、Slug蛋白明显降低,E-钙黏蛋白明显升高,TE-1细胞划痕愈合率和迁移数明显降低(P均<0.05)。结论： IL-23通过PI3K/AKT/c-Myc通路促进食管鳞癌细胞上皮间质转化和迁移。     

IBP通过上皮间质转化促进结肠癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨干扰素调节因子4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)能否影响结肠癌细胞上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的发生,观察IBP在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中作用.方法 干预结肠癌细胞中IBP的表达,构建IBP过表达的HT-29-IBP细胞株与IBP沉默的HCT116-shIBP细胞株;干预IBP表达后,采用Western blot检测结肠癌细胞EMT相关分子的蛋白表达;Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力的改变;MTT实验检测结肠癌细胞增殖能力的改变.结果 HT-29-IBP细胞中上皮相关分子E-cadherin和ZO-1表达水平降低,间质相关分子Fibronectin表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(P＜0.05);HCT116-shIBP细胞则E-cadherin、ZO-1表达水平升高,Fibronectin及Snail表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力降低(P＜0.05).结论 IBP通过调节EMT促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭.     

组蛋白去乙酰化酶1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法：体外合成针对HDAC1的小干扰RNA （siRNA）,利用脂质体转染入人卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot方法检测细胞内HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达,利用荧光定量PCR方法检测HDAC1、尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）基因的mRNA表达;通过划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果：经转染HDAC1基因siRNA后,卵巢癌SKOV3细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达水平均下调,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加;SKOV3细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少;SKOV3细胞内uPA和uPAR基因mRNA表达也降低.结论：HDAC1基因沉默能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,机制可能与增加组蛋白乙酰化水平、抑制uPA和uPAR基因表达有关.     

基因沉默整合素连接激酶对滋养细胞生物学功能的影响

目的：研究基因沉默整合素连接激酶（ILK）对人滋养细胞TEV-1细胞增殖、迁移和侵袭等的影响。方法：构建ILK-siRNA慢病毒载体后,转染人TEV-1细胞,分ILK基因沉默组（KD组）和空白质粒转染组（NC组）进行;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达,MTT法、Transwell法和划痕实验等检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：基因沉默ILK后,TEV-1细胞的ILK基因和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）,证明干扰ILK表达成功。沉默ILK后,TEV-1细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降（P＜0.05或P＜0.01)。ILK-siRNA转染TEV-1细胞后,MMP-9和p-GSK3β mRNA和蛋白水平显著下降（P＜0.01）。结论：沉默ILK通过下调GSK3β和MMP-9的表达抑制人滋养细胞的增殖、迁移和侵袭。     

桔梗皂苷D基于TGF-β/Smad通路调控上皮-间质转化对人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨桔梗皂苷D调控上皮间质转化（EMT）对人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移、侵袭的影响,及对转化生长因子β（TGF-β）/Smad信号通路的调节作用。方法 取第4代对数生长期的人子宫内膜癌Ishiwaka细胞,随机分为对照组、桔梗皂苷D组、激动剂组和桔梗皂苷D+激动剂组。桔梗皂苷D组细胞加入桔梗皂苷D 18 μmol/L培养24 h,激动剂组细胞加入重组人TGF-β 20 ng/mL刺激24 h,桔梗皂苷D组+激动剂组细胞先加入重组人TGF-β 20 ng/mL刺激24 h后,再加入桔梗皂苷D培养24 h。MTT法检测细胞存活率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力及蛋白印迹法检测TGF-β1、p-smad2/3、上皮钙粘蛋白（E-cad）和神经钙粘蛋白（N-cad）相对表达量。结果 与对照组比较,桔梗皂苷D组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量降低,细胞迁移和侵袭能力减弱,E-cad蛋白相对表达量升高,激动剂组TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量升高,细胞迁移和侵袭能力增强,E-cad蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与桔梗皂苷组比较,桔梗皂苷D+激动剂组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量升高,细胞迁移和侵袭能力增强,E-cad蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与激动剂组比较,桔梗皂苷D+激动剂组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量降低,细胞迁移和侵袭能力减弱,E-cad蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。结论 桔梗皂苷D可能通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路调控上皮间质转化降低人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移及侵袭能力。     

HIPK2抑制非小细胞肺癌上皮间质转化及迁移侵袭的作用及机制

目的 研究同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)以及迁移侵袭的影响及机制。 方法 应用Lipofectamine 2000将HIPK2高表达质粒pcDNA3.1-HIPK2和对照质粒pcDNA3.1-Vector转染至A549、H520细胞,分别为高表达组和对照组;应用慢病毒转染HIPK2干扰质粒GV248 shHIPK2和对照质粒GV248 shVector,在A549细胞中分别构建沉默组和对照组;在A549 细胞沉默组中应用Lipofectamine 2000转染GV248 shZEB1质粒和GV248 shVector质粒,分别为干扰组和对照组。Western blotting检测HIPK2表达水平及其对EMT标记蛋白的影响;应用细胞划痕实验、Transwell实验、Matrigel实验检测细胞迁移、侵袭能力。 结果 与对照组相比,高表达组上皮细胞标记蛋白表达增强(P<0.01)、间质细胞标记蛋白表达下降(P<0.01),EMT受到抑制。高表达组迁移距离小于对照组(P<0.05),高表达组细胞迁移和侵袭至下室的细胞数也明显减少(P<0.01)。沉默HIPK2则促进EMT发生、增强细胞的迁移和侵袭。干扰锌指E盒结合蛋白(ZEB1)的表达可以缓解HIPK2沉默引起的EMT和迁移侵袭现象。 结论 HIPK2具有抑制NSCLC细胞EMT和迁移侵袭的作用,其发生机制可能与转录因子ZEB1有关。     

siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移

目的探讨小干扰RNA（siRNA）干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1（PSIP1）的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移 的影响并初步探讨其机制。方法采用化学合成靶向PSIP1的siRNA,脂质体法转染U87细胞,用Real-time PCR检测RNA干 扰效率;Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力;划痕实验检测其迁移能力;干扰PSIP1表达后,Western blot 检测间质细胞来源的 N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。结果PSIP1-siRNA 转染胶质瘤U87细胞后,PSIP1的mRNA水平及蛋白 水平明显下降（P<0.001）,U87 细胞侵袭和迁移能力下降,与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义（P<0.001,P< 0.001）,Western blot 显示,间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin 蛋白表达量降低,同时与上皮间质转化（EMT）相关的转录因 子Slug 的表达降低。结论在胶质瘤中,抑制PSIP1 的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,N-cadherin、β-catenin 蛋白和转录 因子Slug的表达量降低,提示PSIP1 可通过调控经典Wnt/β-catenin 信号通路来调节Slug 的表达,进而调控EMT,从而参与胶 质瘤U87 细胞的侵袭及迁移。     

靶向沉默Notch-1基因抑制滋养细胞上皮间质转化的机制研究

目的探讨靶向沉默Notch-1基因对滋养细胞JEG-3上皮-间质转化(EMT)过程和侵袭能力的影响及相关机制。方法设计合成Notch-1-si RNA干扰片段,稳定转染JEG-3细胞。采用Transwell小室侵袭实验检测滋养细胞侵袭能力的变化。采用Western blot检测转染后各组细胞Notch-1蛋白、E-cadherin、vimentin蛋白的表达和EMT转录调节子slug,snail,twist的表达水平变化。结果转染Notch-1-si RNA后,滋养细胞JEG-3中Notch-1蛋白的相对表达量明显下降;滋养细胞JEG-3的侵袭能力明显降低;JEG-3细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达显著升高,而间质细胞标志物vimentin表达显著下降;EMT转录调节因子slug、snail和twist的表达显著下降。结论靶向沉默Notch-1基因能够影响滋养细胞的浸润;Notch-1通过调节滋养细胞EMT过程降低其侵袭能力。     

EPS8L3对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响及作用机制

目的探讨表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3（EPS8L3）对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法采用RNA干扰下调乳腺癌MAD-MB-231细胞的EPS8L3表达水平,分为shRNA1-EPS8L3组、shRNA2-EPS8L3组、shRNA-NC组（空白对照）。采用qRT-PCR法检测细胞EPS8L3、Rac1mRNA表达情况,Westernblot法检测细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达,划痕实验检测干扰前后乳腺癌细胞的迁移能力,侵袭实验检测干扰前后乳腺癌细胞的侵袭能力。结果与shRNA-NC组相比,shRNA1-EPS8L3组和shRNA2-EPS8L3组细胞EPS8L3mRNA、Rac1mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）,细胞迁移、侵袭能力均减弱（均P＜0.05）,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达上调（均P＜0.05）,间质细胞标志物波形蛋白、纤黏蛋白表达下调（均P＜0.05）。结论EPS8L3可能通过影响Rac1表达调节乳腺癌细胞EMT过程和迁移、侵袭,提示EPS8L3与乳腺癌发生、发展相关,可能为乳腺癌诊治提供新的靶点。     

heparanase通过调控EMT促进人膀胱移行细胞癌细胞T24迁移及侵袭的作用研究

目的 探讨乙酰肝素酶（heparanase）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响膀胱移行细胞癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人膀胱移行细胞癌细胞T24、EJ、MGH-U1以及BIU-87中heparanase的表达水平;设计并合成靶向heparanase的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染heparanase表达最高的膀胱移行细胞癌细胞T24以构建稳定低表达heparanase细胞株,通过Western blot法检测和定量PCR来验证shRNA的干扰效率;通过transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail和WNT-5a的变化.结果 heparanase-shRNA转染后,能够有效抑制T24细胞中heparanase的表达;Transwell法结果显示,heparanase干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组（P ＜0.001）.Western blot法检测结果发现,heparanase干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,heparanase干扰组细胞的Snail以及WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默T24细胞的heparanase基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响膀胱移行细胞癌细胞的迁移及侵袭.提示heparanases可能在膀胱移行癌T24细胞的发生发展中起重要作用,抑制heparanase的表达可能成为一种治疗膀胱移行细胞癌的新方法.