环状RNA circ_0024707对乳腺癌细胞的生长和转移的影响

目的 环状RNA(circRNA)hsa_circ_0024707尚未被报道研究。本研究通过检测hsa_circ_0024707在乳腺癌组织和细胞株中的表达,探索环状RNA hsa_circ_0024707通过调节miR-448对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测乳腺癌组织和细胞株中hsa_circ_0024707的表达。以hsa_circ_0024707表达最低的乳腺癌细胞株感染空载慢病毒(对照组)和载有hsa_circ_0024707的慢病毒(实验组)。CCK-8实验和Transwell侵袭实验检测hsa_circ_0024707过表达对乳腺癌细胞株增殖和侵袭的影响。生物信息学技术预测hsa_circ_0024707的下游基因。qPCR和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测下游基因的表达。结果 hsa_circ_0024707 在乳腺癌组织和癌旁组织中表达分别为1.73±0.46和4.53±0.76(P<0.05)。与永生化乳腺上皮细胞比较,hsa_circ_0024707在乳腺癌细胞株中呈低表达(P<0.05),在BT549细胞中的表达量最低(P<0.01)。与对照组比较,过表达hsa_circ_0024707可抑制BT549细胞的增殖(P<0.05)。对照组和实验组侵袭细胞数分别为82.46±8.49和38.34±8.84(P<0.05)。hsa_circ_0024707靶基因可能为miR-448,miR-448靶基因可能为SPRY2。与对照组比较,hsa_circ_0024707过表达导致BT549细胞中miR-448的表达下调(P<0.01),SPRY2的表达上调(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 hsa_circ_0024707在乳腺癌组织和细胞株中均呈低表达,hsa_circ_0024707能抑制乳腺癌BT549细胞的增殖和侵袭,其分子机制可能是下调miR-448的表达,上调SPRY2蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

miR-495-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测miR-495-3p在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达,探讨miR-495-3p对CRC细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR检测22对CRC及其癌旁组织和CRC细胞以及正常结肠上皮细胞中miR-495-3p的表达,选取其中差异表达最明显的两组细胞株转染miR-495-3p mimic、miR-495-3p inhibitor以及各自对照组。CCK-8和EdU实验检测细胞增殖能力、Transwell检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:CRC组织和细胞中miR-495-3p表达降低(P<0.01)。与对照组相比,转染miR-495-3p mimic后细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05),凋亡细胞增多(P<0.05);转染miR-495-3p inhibitor后细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05)。结论:miR-495-3p在CRC组织和细胞中低表达,上调miR-495-3p表达后能降低细胞增殖、迁移能力,增加细胞凋亡率,在CRC中扮演着抑癌基因的作用。     

miR-17-5p在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用

目的：探讨microRNA-17-5p（miR-17-5p）在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用及相关机制。方法：利用miR-17-5p类似物及拮抗物分别过表达和抑制大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞中miR-17-5p的表达,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法进行检测。利用CCK-8法检测miR-17-5p表达调控前后细胞增殖以及对卡麦角林（CAB）治疗反应的变化。通过生物信息学方法预测miR-17-5p的靶点基因,然后采用荧光素酶报告检测法进行验证,继而用qRT-PCR及Western blot法检测miR-17-5p对靶基因表达的影响。慢病毒细胞转染过表达MMQ细胞中的PTEN基因,用Western blot检测PTEN的表达水平,并采用CCK-8法检测PTEN过表达对MMQ细胞耐药性的影响。结果：miR-17-5p过表达可促进MMQ细胞的增殖,而miR-17-5p敲减则能抑制MMQ细胞的增殖。miR-17-5p敲减能上调MMQ细胞对CAB治疗的敏感性,相反,miR-17-5p过表达则显著降低MMQ细胞对CAB治疗的敏感性。生物信息学方法预测PTEN为miR-17-5p潜在作用靶点,荧光素酶报告检测法进一步验证了两者的相互作用关系,同时miR-17-5p过表达的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著下降,而miR-17-5p敲减的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著上升。PTEN表达上调能部分逆转miR-17-5p过表达引起的MMQ细胞对CAB治疗敏感性降低。结论：miR-17-5p可通过下调PTEN的表达促进MMQ细胞增殖并降低其对CAB治疗的反应。     

circCDYL靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞的增殖和转移

目的探讨环状RNA Y染色域样(circCDYL)对微小RNA-552-5p(miR-552-5p)及胃癌AGS细胞增殖和转移的影响。方法实时荧光定量PCR分析胃癌组织、癌旁正常组织样本中circCDYL和miR-552-5p表达水平。运用CCK-8法、集落形成、划痕愈合实验和Transwell实验分析circCDYL和miR-552-5p表达对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。Western blotting分析E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。双荧光素酶报告实验分析circCDYL和miR-552-5p靶向关系。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织中circCDYL表达显著降低(P＜0.05),而miR-552-5p表达显著升高(P＜0.05)。过表达circCDYL或干扰miR-552-5p后AGS细胞增殖、集落形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数均显著降低(P＜0.05)。circCDYL直接与miR-552-5p结合,上调miR-552-5p能够逆转过表达circCDYL对AGS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05)。结论circCDYL通过靶向miR-552-5p抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

碘-125粒子调控微小RNA-193b-5p抑制胃癌的增殖和侵袭

目的探究碘-125粒子放疗胃癌过程中微小RNA(miR)-193b-5p的作用。方法以胃癌细胞系BGC-823作为对象,建立碘-125粒子体外照射模型,采用小分子RNA测序技术检测miRNA的表达谱。通过实时定量PCR检测碘-125辐照组和非辐照组细胞中miR-193b-5p的表达水平,使用hsa-miR-193b-5p抑制物和相应阴性抑制物转染胃癌细胞系BGC-823建立miR-193b-5p敲减细胞和对照细胞(miR-193b-5p敲减组和对照组),采用噻唑蓝(MTT)检测2组细胞增殖情况,采用Transwell分析2组细胞的侵袭情况。结果碘-125辐照组细胞miR-193b-5p表达水平(0.853±0.180)显著高于非辐照组(0.173±0.045),差异有统计学意义(t=6.371,P <0.05);敲减组细胞miR-193b-5p表达水平(1.264±0.311)明显低于对照组(12.219±2.464),差异有统计学意义(t=-7.640, P<0.05); miR-193b-5p敲减组细胞的增殖能力(0.574±0.382)明显高于对照组细胞(0.424±...     

miR-96-5p靶向PTEN激活PI3K-Akt信号通路抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭实验研究

目的:探讨miR-96-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法:在人NSCLC细胞系A549中转染miR-96-5p类似物(miR-96-5p mimics)、阴性对照(NC mimics)或miR-96-5p抑制剂(miR-96-5p inhibitor)、阴性对照(NC inhibitor),通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力;采用荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p与磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)启动子区DNA的结合;采用蛋白质免疫印迹实验检测miR-96-5p对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:抑制miR-96-5p, NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖能力降低,过表达miR-96-5p促进NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖(均P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-96-5p能与PTEN启动子区DNA结合;蛋白质免疫印迹实验结果表明,抑制miR-96-5p, PTEN表达升高、p-Akt的表达降低,过表达miR-96-5p后,PTE...     

miR-17-92通过靶向抑制QKI促进结直肠癌转移

目的探讨miR-17-92和QKI蛋白在结直肠癌(CRC)生物学行为中的作用及其可能的作用机制。方法收集2017年1—12月辽宁省人民医院确诊的CRC患者29例的新鲜癌组织和癌旁组织,分别通过实时定量(qRT)-PCR技术检测miR-20a、Western blot方法检测QKI蛋白在结直肠组织中的表达水平,并观察和分析两者表达相关性;在结肠癌SW480细胞系中转染miR-20a模拟物或共转染QKI蛋白过表达质粒,通过Western blot检测QKI蛋白的表达量,同时运用Transwell迁移实验对结直肠癌细胞迁移能力的变化进行分析。结果 qRT-PCR检测显示,miR-20a在CRC组织中呈高表达(t=4.099,P=0.000);Western blot检测显示,QKI蛋白在CRC组织中呈低表达(t=3.037,P=0.005);相关性分析结果显示,miR-20a和QKI蛋白在CRC组织中的表达呈负相关(r=-0.437,P=0.018)。Western blot检测和Transwell细胞迁移实验结果显示,在结肠癌SW480细胞过表达miR-20a后,QKI蛋白的表达量下降,细胞的迁移能力增强(P<0.05);而共转染QKI过表达质粒后,QKI蛋白的表达量有所上升,细胞迁移能力的增强作用有所减弱。结论 miR-17-92和QKI共同参与结直肠癌的进展;miR-17-92可能通过靶向抑制QKI而促进结直肠癌的转移。     

hsa_circ_0005389在新生儿急性呼吸窘迫综合征细胞炎症模型中的作用研究

目的：基于人环状RNA（circular RNA,circRNA）高通量测序和生物信息学分析结果,研究hsa_circ_0005389与新生儿急性呼吸窘迫综合征（neonatal acute respiratory distress syndrome,NARDS）的关系,以期为NARDS的诊断和治疗提供新的方向。方法：建立脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导急性肺损伤细胞模型。通过 RT-qPCR及Western blot检测炎性标志物及相关通路指标在阴性对照组和敲低 hsa_circ_0005389 表达的干预组中的表达变化情况,同时用CCK-8与流式细胞仪检测正常 A549细胞与建立急性肺损伤模型的 A549 细胞敲低或者过表达 hsa_circ_0005389后的增殖与凋亡情况。结果：RT-qPCR及 Western blot结果显示,A549 细胞暴露于10 μg/cm² LPS 48 h时,各炎性标志物及相关通路指标高表达（P < 0.05）。与阴性对照组相比,敲低 hsa_circ_0005389 表达后,A549 细胞中可溶性肿瘤坏死因子受体 1（soluble tumor necrosis factor receptor 1, sTNFR1）mRNA 相对表达量和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）蛋白表达量显著降低（P < 0.05）;在急性肺损伤模型中,敲低hsa_circ_0005389表达后,各炎性标志物及相关通路指标mRNA相对表达量均下降（P < 0.001）。CCK-8与流式细胞仪检测结果显示,与阴性对照组相比,敲低hsa_circ_0005389表达的A549 细胞增殖加快,凋亡率降低（P < 0.05）,而过表达 hsa_circ_0005389后A549细胞增殖减慢,凋亡率增加（P < 0.05）。结论：急性肺损伤细胞模型中,hsa_circ_0005389促进肺损伤炎性标志物的表达,并且影响肺上皮细胞的增殖和凋亡,提示hsa_circ_0005389 参与NARDS的炎症过程,可能是NARDS潜在的干预靶标。     

miR-377-5p通过下调VEGF-C对结肠癌的血管和淋巴管生成的影响研究

目的探讨miR-377-5p通过下调VEGF-C对结肠癌的血管和淋巴管生成的影响研究。方法该实验分为3组,miR-377-5p干扰组、miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组。采用实时荧光RT-PCR、Western blot、CCK-8、流式细胞、细胞划痕、Transwell、血管生成实验检测miR-377-5p m RNA和蛋白表达、细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、血管和淋巴管生成。结果与正常结肠组织对比,结肠癌组织中miR-377-5p m RNA和miR-377-5p蛋白的表达明显低于正常结肠组织(均P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组中的m RNA及蛋白显著升高(均P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的m RNA及蛋白明显增加(P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖能力明显降低(P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖凋亡明显升高(P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞凋亡能力显著升高(P<0.05);伤口愈合实验显示,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞的迁移能力显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05);miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞的侵袭能力也明显低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P <0.05);miR-377-5p过表达组的VEGF-A、VEGF-C和P-Akt、VEGFR-3蛋白水平显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05);miR-377-5p过表达组的MVD(微血管密度)和LMVD(淋巴微血管密度)显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05)。结论 miR-377-5p在结肠癌中低表达,抑制了结肠癌细胞的增殖、细胞迁移和侵袭,促进了结肠癌细胞的凋亡能力,并直接靶向VEGF-C抑制肿瘤的血管和淋巴管生成。     

地西他滨通过甲基化调控DU145细胞中miR-3064-5p的表达

目的 探讨miR-3064-5p在前列腺癌（PCa）细胞中的表达调控机制。方法 利用脂质体转染法将阴性对照（NC）组及miR-3064-5p模拟物（miR-3064-5p mimics）转染入PCa细胞DU145中,细胞平板克隆实验、划痕实验、Western blot法分别检测DU145细胞增殖和迁移侵袭能力;qRT-PCR检测前列腺正常上皮细胞及PCa细胞中miR-3064-5p的表达;生物信息学软件分析,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测miR-3064-5p启动子区的甲基化水平;使用地西他滨（decitabine,DAC）处理DU145细胞,MSP和qRTPCR分别检测DAC对miR-3064-5p启动子甲基化状态和表达的影响;Western blot检测相关蛋白水平。结果 过表达miR-3064-5p可抑制DU145细胞的增殖和转移（P均<0.05）;与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,miR-3064-5p在前列腺癌细胞中表达均下调（P均<0.05）;miR-3064-5p的启动子区存在甲基化岛,miR-3064-...     

circRNA＿0005075在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、侵袭能力的调控机制

目的 环状RNA(circRNA)与胃癌发生发展有关,本研究旨在探讨circRNA＿0005075对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及其对miR-767-5p/TRIM27轴的调控作用。方法 采用RT-qPCR和RNA FISH法检测circRNA＿0005075在胃癌组织和配对癌旁组织中的表达水平。用慢病毒感染技术过表达胃癌细胞的circRNA＿0005075,并通过体内RNA免疫共沉淀技术、Western blotting、荧光素酶活性实验和挽救实验对其分子作用机制进行探讨。结果 癌组织circRNA＿0005075相对表达量为0.51±0.13,低于癌旁组织的3.51±0.69(P<0.05)。癌旁组织中circRNA＿0005075的荧光强度OD值为1.35±0.24,高于癌组织的0.67±0.16(P<0.05)。circRNA＿0005075低表达的胃癌患者总体生存时间显著短于高表达患者(P<0.05)。circRNA＿0005075过表达可抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。RT-qPCR及荧光素酶活性实验证实circRNA＿0005075可与miR-767-5p结合。利...     

CircRNA EZH2通过调控miR-30c-5p促进前列腺癌细胞增殖和迁移

目的 探究circRNA EZH2通过调控miR-30c-5p对前列腺癌细胞的增殖和迁移的影响及其相关作用机制。方法 通过TCGA数据库分析circRNA EZH2在前列腺癌组织中的表达差异及生存曲线;转染siRNA敲降前列腺癌LNCaP细胞中的circRNA EZH2表达后,CCK-8实验和划痕实验观察LNCaP细胞增殖和迁移,RT-qPCR和Western blot法测定miR-30c-5p、JAK1和PI3K蛋白的表达。结果 在前列腺癌组织中circRNA EZH2的表达显著上调（P <0.000 1）,且高表达circRNA EZH2的患者生存率降低;沉默circRNA EZH2的LNCaP细胞较正常LNCaP细胞的增殖和迁移能力下降（P <0.000 1）,miR-30c-5p表达增高（P <0.000 1）,JAK1表达降低（P <0.000 1）,PI3K信号受抑制。结论 EZH2在前列腺癌中高表达,通过调控miR-30c-5p激活PI3K信号通路促进前列腺癌LNCaP细胞的增殖和迁移。     

微小RNA-105-5p靶向白细胞介素6受体调控卵巢癌细胞增殖和转移临床研究

目的:探讨微小RNA-105-5p(miR-105-5p)靶向白细胞介素6受体(IL-6R)调控卵巢癌细胞(SKOV-3)增殖、迁移和侵袭。方法:实时定量PCR(RT-qPCR)分析miR-105-5p和IL-6R mRNA在卵巢癌组织中表达量。双荧光素酶报告实验确定miR-105-5p与IL-6R的靶向关系,RT-qPCR检测过表达miR-105-5p后SKOV-3细胞IL-6R表达量。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell实验分析miR-105-5p和IL-6R表达对SKOV-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:卵巢癌组织中miR-105-5p表达量较癌旁组织显著降低(P<0.05),而IL-6R mRNA表达量较癌旁组织显著升高(P<0.05)。IL-6R是miR-105-5p的靶基因,过表达miR-105-5p后IL-6R表达量显著降低(P<0.05)。过表达miR-105-5p或干扰IL-6R表达后SKOV-3细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(均P<0.05)。与过表达miR-105-5p比较,同时过表达miR-105-5p和IL-6R后...     

结直肠癌患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系分析

目的 研究结直肠癌(CRC)患者血清微小RNA(miR)-21-5p、miR-377-3p表达及与Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路及预后的关系。方法 选取2017年1月—2018年1月中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院肿瘤科收治的CRC患者92例作为CRC组,医院同期健康体检者60例作为健康对照组。检测血清miR-21-5p、miR-377-3p表达量及Wnt/β-catenin通路指标Wnt3a、β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达量。Pearson相关分析miR-21-5p、miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达的相关性。比较不同临床病理特征CRC患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达差异。Kaplan-Meier曲线及Logrank检验分析不同血清miR-21-5p、miR-377-3p表达CRC患者预后的差异。多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果 与健康对照组比较,CRC组患者血清miR-21-5p、Wnt3a、β-catenin、c...     

MiR-185-5p靶向调控REG1A表达对膀胱肿瘤发生和侵袭的影响

目的　探讨REG1A基因和微小RNA miRNA-185-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化的影响,并探讨其可能存在的分子调控机制。方法　应用荧光实时定量PCR（qRT-PCR)分别检测膀胱癌细胞系中REG1A和miR-185-5p的mRNA表达水平,应用免疫组化技术检测24对膀胱癌临床样本中REG1A的蛋白表达水平。应用荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A的特异性结合,进一步应用细胞转染技术和qRT-PCR明确miR-185-5p和REG1A的调控关系。应用细胞转染技术分别研究miR-185-5p抑制物(inhibitor)和模拟物(mimic)对膀胱癌T24细胞功能的影响。利用小RNA干扰技术敲低REG1A后进行T24细胞功能回复实验。结果　与正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1相比,T24、J82和UM-UC-3细胞系中REG1A显著高表达（P<005）,miR-185-5p显著低表达(P<005);与癌旁组织相比,膀胱癌组织中REG1A蛋白显著高表达（P<005）。荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A存在特异性结合,qRT-PCR结果表明,细胞转染后miR-185-5p靶向调控REG1A在T24细胞的表达。miR-185-5p mimic和inhibitor能分别抑制和增强T24细胞的增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）,差异有统计学意义（P<005）。REG1A-siRNA能减弱miR-185-5p inhibitor对T24细胞的增殖、侵袭、血管形成能力和EMT的促进作用。结论　miR-185-5p靶向调控REG1A表达影响膀胱癌的增殖、侵袭、血管形成和EMT发生,miR-185-5p/REG1A调控通路是潜在的膀胱癌治疗靶点。     

环状RNA circLRP6介导的miR-5590-5p改善肝衰竭机制研究

目的 探究环状RNA circLRP6、miR-5590-5p和C5aR1在肝衰竭中的保护作用及调控机制。方法 通过D-半乳糖胺和脂多糖(D-galactosamine and LPS,D-GalN/LPS)诱导来构建体外肝衰竭细胞模型,流式细胞术检测L02细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测circLRP6和miR-5590-5p的表达,Western blot法检测C5aR1蛋白的表达,RNA免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验检测circLRP6和miR-5590-5p之间的结合作用,同时利用双荧光素酶报告基因实验检测C5aR1和miR-5590-5p的结合作用。结果 与对照组比较,D-GalN/LPS诱导L02细胞凋亡率上升(P<0.05),circLRP6和C5aR1表达上调,miR-5590-5p表达下调(P<0.05)。同时,与D-GalN/LPS+miRNA-NC组比较,D-GalN/LPS+miR-5590-5p模拟物组的L02细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。另外,双荧光素酶报告...     

下调miR-409-5p对口腔癌细胞SCC-9增殖、迁移的影响

目的探讨下调微小核糖核酸-409-5p(miR-409-5p)对人口腔癌细胞SCC-9增殖、迁移的影响。 方法收集口腔癌患者口腔癌组织及癌旁正常组织,采用qRT-PCR检测癌组织及癌旁正常组织中miR-409-5p mRNA相对表达量。qRT-PCR筛选出细胞株SCC-9细胞后,将其分为空白对照组(Lip2000处理SCC-9细胞)、阴性对照组(Lip2000＋阴性对照序列处理SCC-9细胞)、miR-409-5p组(Lip2000和inhibitor-miR-409-5p共同处理SCC-9细胞)。采用MTT法、Transwell小室法检测miR-409-5p对细胞增殖、侵袭、迁移的影响。qRT-PCR法、Western blotting法检测细胞vimentin mRNA和蛋白的相对表达量。 结果与癌旁正常组织比较,口腔癌组织中miR-409-5p显著增加(P＜0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-409-5p组细胞增殖、侵袭和迁移能力均下降(P＜0.05);miR-409-5p组vimentin mRNA和蛋白相对表达量也显著降低(P＜0.05)。 结论下调miR-409-5p能够抑制SCC-9细胞的增殖、迁移,其机制可能与下调vimentin蛋白表达有关。     

miR-204-5p通过调控IL-11对甲状腺乳头状癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探讨miR-204-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中的角色和生物学行为。方法qRT-PCR用于检测PTC细胞中miR-204-5p的表达水平,TPC-1细胞分别转染miR-204-5p或miR-neg观察两组生物学功能的变化。MTT用于检测细胞增殖;流式细胞术用于检测细胞凋亡水平和周期分布。生物信息学TargetScanHuaman 7.1用于预测靶点序列,双荧光素酶报告基因用于验证靶向位点。TPC-1细胞分别转染anti-miR-204-5p或anti-miR,qRT-PCR和Western blot法用于检测IL-11的表达水平。结果 miR-204-5p在PTC细胞中低表达(P<0.05)。通过过表达miR-204-5p可抑制TPC-1细胞增殖(P<0.05)并诱导细胞周期停滞(P<0.05)和细胞凋亡(P<0.05)。miR-204-5p可直接结合IL-11 mRNA的3′-UTR并且两者之间存在负性调节关系(P<0.05)。结论 miR-204-5p通过调节IL-11表达在TPC-1...     

微小RNA191-5p通过靶向CDK6抑制胃癌细胞的生长

目的探讨微小RNA191-5p(miR-191-5p)对胃癌细胞迁移、克隆形成和增殖的影响。方法采用实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测分析了来自山西省肿瘤医院的60例胃癌患者的胃癌组织(C组)及其癌旁正常组织(N组)中miR-191-5p的表达水平;应用pcDNA3.1载体构建过表达miR-191-5p的重组质粒(pcDNA-mRNA-191-5p),实现miR-191-5p在胃癌细胞中的过表达,用miRNA-191-5p inhibitor实现miR-191-5p在胃癌细胞中的低表达;分别用划痕愈合实验、克隆形成实验和CCK-8法检测细胞迁移、克隆形成和增殖能力;Targetscan预测miR-191-5p与周期素依赖性激酶6(CDK6)的结合位点,并通过双荧光报告基因验证;Western印迹检测miR-191-5p对p21和CDK6蛋白表达的影响。结果与N组相比,C组中有53例(88%)胃癌组织中出现miR-191-5p的表达下调;C组miR-191-5p的表达水平为0.43±0.13,显著低于N组的0.88±0.12,P<0.001,过表达miR-19...     

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的 探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠（FNI）中施万细胞的调控作用。方法 用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低（P<0.001）,抑制细胞的增殖（P<0.001）和迁移（P<0.001）。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖（P<0...