加味寿胎丸联合黄体酮调节NKG2D、NKG2A表达治疗肾虚型URSA作用机制研究

目的?探讨NK细胞活性变化在不明原因复发性流产（URSA）发病中的机制;加味寿胎丸联合黄体酮通过调节NK细胞受体表达变化诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制。方法?选取加味寿胎丸联合黄体酮治疗肾虚型URSA成功患者20例,并选取同期URSA妊娠丢失组及健康早孕（HEP）组各15例,以流式细胞术检测各组外周血NKG2D、NKG2A的表达,并比较URSA妊娠组治疗后与健康早孕组血E₂、P、β-HCG水平。结果?URSA妊娠丢失组pNK细胞NKG2D呈高表达及NKG2A呈低表达,与HEP组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。URSA妊娠组治疗后pNK细胞NKG2D表达水平明显低于治疗前,与HEP组比较有统计学意义（P＜0.05）,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）;NKG2A表达水平明显高于治疗前（P＜0.01）,与HEP组比较无统计学意义,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。经加味寿胎丸联合黄体酮治疗后,URSA妊娠组血清E₂、P、β-HCG水平与HEP组分别比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论?NK细胞受体NKG2D、NKG2A的表达参与了URSA的发病;加味寿胎丸联合黄体酮能通过下调URSA患者NKG2D的表达水平,上调NKG2A的表达水平介导母胎免疫耐受治疗URSA;固肾安胎法是治疗肾虚型URSA的有效方法,加味寿胎丸是治疗肾虚型URSA的有效方剂。      

慢性乙肝患者外周血NK细胞NKp46和NKG2A的表达

目的检测免疫清除期和免疫耐受期慢性乙肝患者外周血中NK细胞频率和NK受体NKp46和NKG2A表达情况。方法分离患者和建康对照者外周血单个核细胞,流式细胞仪检测各组NK细胞频率和受体表达。结果慢性乙肝免疫清除期患者外周血NK细胞占淋巴细胞比例（10．91％±3．93％,n=21）较免疫耐受期患者（15．65％±5．58％,n=15,P=0．024）和健康者（14．23％±7．37％,n=25,P=0．011）下降,免疫清除期患者NK细胞的NKp46表达f45．45％±14．00％,n=19）较免疫耐受期患者（23．35％±6．56％,n=8,P〈0．001）和健康者（31．69％±13．07％,n=20,P=0．001）明显上升,NKG2A表达（35．62％±13．20％,n=19）较免疫耐受期患者（25．57％±5．56％,n=8,P=0．038）和健康者（26．80％±10．49％,n=20。P=0．0471上升。结论慢性乙肝患者外周血NK细胞频率下降,NKp46和NKG2A表达上调,这些改变与免疫清除病毒有关。     

原发性肝癌患者外周血自然杀伤细胞受体NKG2D的表达及意义

目的 探讨原发性肝癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D表达的变化,并分析其对NK细胞杀伤活性的影响.方法 用流式细胞仪分析20例原发性肝癌、23例乙型肝炎后肝硬化、20例慢性乙型肝炎及20名健康者的外周血NK细胞数量及其NKG2D的表达情况,并用酶标仪检测各组样本NK细胞的细胞毒活性.结果 原发性肝癌患者的NK细胞杀伤率、NK细胞NKG2D的表达率(中位数)、NKG2D+NK细胞数(中位数)、NK细胞中NKG2D的表达水平(中位数)及NK细胞数[(25±7)%、6%、0.7×107/L、15、(1.1±0.6)×108/L]均明显低于正常组[(63±7)%、36%、8.3×107/L、116、(27±1.1)×108/L]和乙肝组[(41±8)%、16%、2.8×107/L,49、(1.9±1.1)×108/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05);与肝硬化组[(29±10)%、7%、0.6×107/L、29、(1.5±1.2)×108/L]比较也略低,但只有NK细胞NKG2D的表达水平两组差异有统计学意义(P＜0.05),其余两组间差异均无统计学意义(均P＞0.05).NK细胞的活性与NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达率、NKG2D+NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达水平均呈正相关关系(r=0.657、0.770、0.927、0.734,均P＜0.01).结论 原发性肝癌患者外周血NK细胞活性及其细胞表面NKG2D的表达明显降低,NKG2D的表达与NK细胞的活性密切相关,提高NK细胞表面NKG2D的表达水平可为原发性肝癌的过继免疫治疗开创新的思路.     

食管癌患者外周血调节性T细胞与NKG2D表达及相关性分析

目的探讨NK细胞活化受体（NKG2D）及调节性T细胞（Treg cells）在食管癌患者外周血中表达水平及其临床意义。方法采用流式细胞术检测140例食管癌患者及51例健康者外周血NKG2D表达率、及调节性T细胞占CD4＋T百分比,分析研究各细胞表达与食管癌临床TNM分期及调节性T细胞与NKG2D相关性。结果食管癌外周血NKG2D表达小于健康者（P〈0.001）;调节性T细胞表达大于健康者（P〈0.001）。NKG2D与调节性T细胞呈负相关性（r=-0.346,P〈0.001）。NKG2D表达总变异的12%与调节性T细胞有关（R2=0.120）。结论食管癌患者外周血调节性T细胞、NKG2D表达均与临床TNM分期有关。调节性T细胞抑制了NKG2D介导的NK细胞抗肿瘤功能。     

NKG2A、NKG2C受体及其配体HLA-E在子痫前期患者蜕膜中的表达

目的 研究杀伤细胞C型凝集素样受体-1（KLC1或NKG2A）和受体-2（KLC2或NKG2C）及其配体人类白细胞抗原（HLA）-E在子痫前期患者蜕膜中的表达水平,探讨其与子痫前期发病的关系。方法 收集46例正常足月妊娠孕妇、30例轻度子痫前期和42例重度子痫前期患者的蜕膜标本,采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）和免疫组化法检测蜕膜中NKG2A、NKG2C mRNA和受体蛋白的表达,以及HLA-E mRNA的表达。结果HLA-E mRNA的表达水平在子痫前期患者,特别是重度子痫前期患者蜕膜中降低（P<0.05）。重度子痫前期患者NKG2A、NKG2C mRNA和受体蛋白表达水平较正常足月妊娠孕妇增加（P<0.05）,重度子痫前期患者NKG2A和NKG2C表达水平之比较正常足月妊娠孕妇低（P<0.05）,且重度子痫前期组中NKG2C mRNA和受体蛋白表达水平较NKG2A高（P<0.05）。HLA-E和NKG2A、NKG2C mRNA表达水平均与孕晚期血压、24 h尿蛋白等临床及实验室指标相关。结论 HLA-E表达降低和NKG2A、NKG2C不均衡地表达增加可能参与了子痫前期发病机制。     

类风湿性关节炎患者CTL和NK细胞颗粒酶素B和穿孔素的表达及临床意义

目的:检测类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血T杀伤细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)和自然杀伤细胞(NK)中颗粒酶素B和穿孔素的表达,探讨其可能的临床意义.方法:取25例健康者、43例RA患者(31例活动期、12例稳定期;初发16例、复发27例)外周血及其中15例患者(初发8例、复发7例)关节液标本.采用三色流式细胞术胞内检测外周血及关节液标本中CTL、NK细胞颗粒酶素B和穿孔素的表达.结果:RA患者关节滑膜液中CTL和NK细胞颗粒酶素B及穿孔素的表达显著高于RA患者健康者外周血(P＜0.01或P＜0.05).活动期RA患者外周血CTL和NK细胞表达颗粒酶素B、穿孔素明显高于稳定期RA患者(P＜0.01或P＜0.05).初发和复发患者关节液及外周血中二者表达无显著差异.结论:RA患者外周血及关节液中CTL和NK细胞颗粒酶素B及穿孔素的表达显著高于正常人外周血,对其水平的检测利于判断疾病活动程度,但对判断疾病初发、复发的意义不大.     

NKG2D及NF-κB在胃腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨NKG2D和核因子-κB(NF-κB)在胃腺癌及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系.方法 通过免疫组织化学的方法,检测南昌大学第一附属医院20例胃腺癌组织及癌旁正常组织中NKG2D和NF-κB的蛋白表达情况,分析组织中表达率及表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 ①NKG2D在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为55%和100%(P<0.01);而NF-κB在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为95%和20%(P<0.01).②NKG2D在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌组织中显著降低,而NF-κB在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌中显著升高(P<0.05).③NKG2D和NF-κB的表达之间呈负相关(P<0.05).结论 胃腺癌组织中NKG2D表达下调而NF-κB表达上调,且二者的表达成负相关,NKG2D和NF-κB在胃癌发生发展中可能有重要作用.     

高原胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D的表达

目的研究高原胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达,并分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法对41例高原胃癌患者及30例健康人,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况并行相关分析。结果高原胃癌患者及健康者外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为（13.26±7.51）%、（32.18±5.14）%,胃癌组明显低于正常组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高原胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调有关。高原胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。     

肺癌患者外周血Th1、Th2细胞及NKG2D检测的临床意义

目的检测肺癌患者外周血中Th1、Th2型细胞因子及NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达水平,探讨其临床意义。方法选择64例初发未治疗的肺癌患者为病例组,体检中心健康人60例为对照组,分别用CBA法检测两组外周血Th1细胞因子ATh2细胞因子,流式细胞仪检测两组外周血NK细胞表面NKG2D含量。分析上述指标的不同表达水平在肺癌患者中的意义。结果（1）与正常对照组相比,病例组外周血中IL-2、IFN—γ、IL-10、表达水平低于对照组（p〈0.05）,IL-4、IL—6及TNF—α水平高于对照组（P〈0．05）,NKG2D水平低于对照组（P〈0.05）;（2）III-IV期肺癌患者IL-2、IFN—YANKG2D的表达明显低于I-II期患者,IL-4的表达则相反;（3）在不同病理分型中,鳞癌、腺癌及小细胞癌患者外周血中IFN—γ表达差异有统计学意义（F=3.995,P〈0.024）,其余指标表达差异无统计学意义,（4）TNF—α在男性患者中表达高于女性患者（t=2,087,P=0．041）,其余指标差异无统计学意义;（5）所检测指标在吸烟与否的患者间差异无统计学意义;（6）在对照组中,IL-2与IL-4、IL-10、TNF-α呈正相关;在病例组中,IL-2与IL-4、IFN—γ、TNF-α呈正相关,IL-4与IL-6、IL—10、IFN—γ、TNF-α呈正相关,IL-6与IL—10正相关,IFN—γ与IFN-α呈正相关,上述结果差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）肺癌患者Th1型细胞因子ANKG2D在外周血中低表达,Th2型细胞因子高表达,且与肺癌的分期有关;（2）Th1／Th2细胞因子的失衡ANKGaD的下调导致患者免疫功能失调,是肺癌发生发展的重要原因;（3）检测上述指标有助于了解患者的免疫功能状态,可为临床肿瘤的生物免疫治疗提供依据。     

人NKG2D基因重组质粒的构建及鉴定

目的 构建人NKG2D重组质粒。方法 应用RT-PCR，自健康人外周血单个核细胞(PB-MC)中获取NKG2D cDNA，克隆于pMDl8-T载体中，并经酶切和测序鉴定。结果 重组载体中插入片段序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。结论 成功地构建了重组载体pMDl8T-NKG2D，为研究NKG2D的生物学活性奠定了基础。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

慢性乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达在肝病重型化中的作用

目的分析乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达与肝病重型化的关系。方法应用免疫荧光技术和流式细胞术（FCM）分选20例慢性重型乙肝（FHB）、10例无症状表面抗原携带者（ASC）、10例健康对照的外周血NK细胞，并定量分析NKG2D表达。应用免疫组化SP法分析20例慢性乙肝（CHB）（轻度8例，其中G1级6例，G2级2例；中度7例，重度5例，其中G3级9例，G4级3例）、11例FHB肝组织内细胞毒细胞NKG2D的表达差异。结果经FACS可获得高纯度、高活性的NK细胞。FHB患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量高于ASC和正常对照组，差异有显著性（P〈0．01）。免疫组化结果显示，FHB组肝脏免疫细胞NKG2D蛋白表达量分别高于CHB（G3、G4）组、CHB（G1、G2）组和正常对照组，差异有显著性（P〈0．01）。CHB（G3、G4）组高于正常对照组（P〈0．01），但CHB（G1、G2）组分别与CHB（G3、G4）组和正常对照组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论乙型肝炎外周血NK细胞和肝组织内细胞毒细胞NKG2D过度表达与重型肝炎发生相关。     

类风湿性关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化的临床意义

目的和方法：本文通过文献综述和数据统计等方法，对类风湿性关节炎患者外周T血淋巴细胞进行细致研究。分析类风湿性关节炎外周血T淋巴细胞亚群变化的特征表现，以探讨其诱发的病因和临床意义。结果：在CD3 +T细胞和CD4+T细胞上，二者无明显变化,而患者的CD8 +T细胞明显减少，CD4+/CD8+T比值增加，并且类风湿性关节...     

宫颈癌患者自然杀伤细胞活性受体NKG2D及其配体MICA表达的初步研究

目的 研究宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者与正常人外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达及局部组织中相应配体MICA的表达情况,初步探讨NKG2D-MICA在宫颈癌中的抗肿瘤机制和肿瘤免疫逃逸机制.方法 采用流式细胞术检测宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者组与宫颈组织正常组外周血NK细胞NKG2D的表达状况,RT-PCR技术检测各组组织标本中MICA的表达.结果 宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者组与宫颈组织正常组外周血NK细胞受体NKG2D的表达分别为(76.87±9.39)%、(81.84±7.94)%、(86.77±8.68)%、(93.968±4.9)%,各病例组与正常对照组相比,均有统计学意义,但各病例组之间的两两比较无统计学意义.相应配体MICA mRNA的表达率在宫颈癌组织中明显高于正常组和子宫肌瘤组,其差异有统计学意义,而各病例组与对照组相比均有统计学差异. 结论 宫颈癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一.NKG2D的配体MICA基因在宫颈癌组织中的表达上调,且随着病变进展其表达有升高趋势,可能与宫颈鳞状上皮损伤向宫颈癌的转化有一定的相关性,宫颈癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关.     

类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞计数与感染的相关性研究

目的探讨外周血淋巴细胞计数与RA患者感染的相关性,为RA患者合并感染的防治提供临床依据。方法分析嘉兴市第一医院2004年1月-2008年12月住院RA患者319例,其中,男性75例,女性244例,平均年龄57.1±13.1（20～88）岁 平均病程10.5±8.0（3个月～40年）年。感染组104例,非感染组215例。检测项目包括外周血白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板、红细胞沉降率、C-反应蛋白、类风湿因子和淋巴细胞亚群。计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用t检验。结果与非感染组RA患者比较,感染组患者的年龄大、男性多、病程长、ESR快、CRP和中性粒细胞增多以及血红蛋白、淋巴细胞计数减低差异有统计学意义,其中,淋巴细胞计数与感染呈显著性负相关（r=0.701,P〈0.01） 而类风湿因子、外周血白细胞、血小板在感染组与非感染组之间差异无统计学意义。结论RA患者感染的危险因素包括年龄大、男性、病程长、ESR快、CRP升高、中性粒细胞增多、贫血,外周血淋巴细胞计数与感染呈显著性负相关。     

类风湿关节炎患者CD5+B淋巴细胞的研究

目的:通过检测血CD5+B淋巴细胞水平以探讨类风湿关节炎的发病活动因素。方法:利用流式细胞仪分析类风湿关节炎患者38例(高度活动组28例,低活动组10例)和健康对照组35例外周血CD5+B淋巴细胞的百分率。结果:类风湿关节炎患者cD5+B淋巴细胞水平(4.68％±2.2％)显著高于健康对照组CD5+B淋巴细胞水平(1.47％±0.6％)(P<0.01)。高度活动的类风湿关节炎患者CD5+B淋巴细胞水平(5.9％±1.8％)显著高于低度活动的类风湿关节炎患者CD5+B淋巴细胞水平(2.7％±1.1％)(P<0.01)。高度活动的类风湿关节炎患者CD5+B淋巴细胞百分率经治疗后明显降低(P<0.01)。结论:类风湿关节炎患者CD5+B淋巴细胞水平显著增高,并与类风湿关节炎病情活动相关。     

类风湿性关节炎患者外周血白细胞介素-37及可溶性PD-1分子的检测价值分析

目的 研究类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血抗炎性因子及可溶性PD-1(soluble PD-1,SPD-1)分子的检测价值.方法 选择2015年1月至2016年12月四川省雅安市人民医院收治的RA患者68例纳入病例组,选择同期健康人68例纳入对照组,以酶联免疫吸附试验检测两组外周血白细胞介素-37(IL-37)、白细胞介素-1(IL-1)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)及SPD-1等细胞因子水平,评价病例组患者RA诊断得分,并判断病例组IL-37、SPD-1与RA诊断得分、IL-1、IFN-γ、TNF-α水平的相关性.结果 病例组外周血IL-37、SPD-1、IL-1、IFN-γ、TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).病例组外周血IL-37、SPD-1和RA诊断得分呈正相关性(P<0.05);病例组外周血IL-37与IL-1、IFN-γ、TNF-α均呈正相关性(P<0.05);病例组外周血SPD-1与IL-1、IFN-γ、TNF-α均呈正相关性(P<0.05).结论 RA患者外周血IL-37、SPD-1与RA的严重程度及其他多种炎性因子密切相关,在RA的临床检测中具有较高应用价值.