生长抑素对瘦素诱导肝星状细胞的活化增殖、PTP1 B表达及JAK2-STAT3通路的影响

目的研究生长抑素对瘦素诱导大鼠肝星状细胞(HSC)的活化增殖、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表达及JAK2-STAT3通路的影响,探讨生长抑素抗肝纤维化的相关机制。方法以重组大鼠瘦素作用于HSC-T6细胞(100 ng/ml),同时加入各浓度的生长抑素(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L)。在处理24 h后,采用CCK-8法检测HSC增殖的变化,免疫细胞化学检测 p-JAK2及 p-STAT3蛋白表达, RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和 PTP1B 的mRNA表达。结果 CCK-8法显示生长抑素可通过剂量依赖方式抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖( P<0.05);免疫细胞化学检测显示,生长抑素组HSC-T6细胞质p-JAK2及细胞核内 p-STAT3蛋白表达明显低于瘦素对照组( P <0.05);RT-PCR法检测生长抑素干预组 HSC α-SMA mRNA的表达较瘦素对照组及空白对照组明显降低(P<0.05),而PTP1B的mRNA表达量升高(P<0.05)。结论生长抑素能上调PTP1B的表达,阻断瘦素在HSC内 JAK2-STAT3信号通路的转导,并且抑制瘦素诱导HSC的活化与增殖。     

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的：观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠残肾功能及肾脏纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法：随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾功能衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为5/6肾切除组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,Western blot检测各组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、I型胶原蛋白（Col-I）、III型胶原蛋白（Col-III）、α-SMA蛋白表达水平,免疫组织化学染色法测定小鼠肾组织Col-I、Col-III、α-SMA水平,用RT-qPCR法测定TGF-β1、Smad3 mRNA水平。结果：治疗8周后,模型组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达均较假手术组上调（P＜0.01）,模型组小鼠肾组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达较假手术组上调（P＜0.01）;与模型组比较,代文组、温阳消癥方组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达和TGF-β1、Smad3 mRNA表达均下调（P＜0.01）;与代文组比较,除TGF-β1、α-SMA外,温阳消癥方组其余指标均下调（P＜0.01）。结论：温阳消癥方能够保护5/6肾切除小鼠残肾功能,减轻肾纤维化病变程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3、JAK2/STAT3通路相关。     

沉默HE4对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响

目的 探讨沉默人附睾蛋白4(HE4)对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响.方法 选取124例结肠癌患者和40例健康人.用Western blot和免疫组织化学染色法检测结肠癌组织和癌旁组织中HE4的表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠癌患者和健康人血清中HE4的表达水平.Western blot检测结肠癌细胞株Caco-2、SW480、HT-29、HCT-116和正常结肠上皮细胞株HCoePic 中 HE4的表达水平.用 HE4 si-RNA 或 si-control 分别转染HT-29细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western blot检测JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白表达水平.结果 结肠癌组织HE4蛋白相对表达量高于癌旁组织(P＜0.05).HE4在结肠癌组织中呈阳性表达,其中高表达78例(62.90％),而癌旁组织中高表达仅24例(19.35％),差异有统计学意义(P＜0.05).结肠癌患者血清HE4浓度高于健康人(P＜0.05).结肠癌 Caco-2、SW480、HT-29、HCT-116细胞的HE4蛋白相对表达量均高于正常结肠上皮HCoePic细胞(均P＜0.05).HE4表达水平与性别、年龄、肿瘤大小无关,而与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05).沉默HE4后,HT-29细胞的增殖和侵袭能力下降,而凋亡率提高(均P＜0.05).沉默HE4对JAK1、JAK2和STAT3总蛋白无明显影响,但是可以下调p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量(均P＜0.05).结论 沉默HE4可以抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡,并且下调JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达.     

黄连素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响以及机制. 方法 用不同浓度的黄连素 (0、10、20、40) g/ml处理人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞培养72 h后,MTT法检测 MCF-7 细胞增殖抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、 Bax、 Bcl-2、 Cleavage-PARP 和 Cleavage-Caspase3表达. 结果 黄连素呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的增值抑制和凋亡,上调Bax、Cleavage-PARP和Cleav-age-Caspase3表达,下调 p-JAK2、p-STAT3 和 Bcl-2,对 JAK2和STAT3表达无明显影响. 但高表达p-STAT3的MCF-7细胞可以抑制黄连素的减少增殖和促进凋亡作用. 结论 黄连素诱导MCF-7细胞增殖抑制和凋亡的机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路.     

AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

【摘要】 目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及意义。方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组（正常的PASMCs）、0μM 组（予30 μg/L PDGF-BB 孵育48h)和25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组（25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组分别给予25/1、50/3、100/5μmol/L AG490/5-Aza共同孵育细胞）。采用RT-qPCR检测IL-6、GATA6、JAK2及STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测GATA6、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结果 与对照组比较,0 μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达均增加,GATA6mRNA及蛋白水平降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达升高（P＜0.05）。与0μM AG490组比较,25、50、100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2和STAT3mRNA的表达均降低,GATA6mRNA及蛋白表达升高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,50和100μM组中p-STAT3/STAT3水平降低（均P＜0.05）;与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6mRNA表达降低,GATA6蛋白、p STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,JAK2、STAT3mRNA水平无显著差异（P＞0.05）;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6mRNA表达增高(P＜0.05)。结论 AG490及5-Aza对 PDGF-BB诱导的PASMCs增殖具有抑制作用,该作用可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制IL-6调节GATA6启动子甲基化有关。     

IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

雌激素受体α在胰岛素致动脉粥样硬化中的作用

目的 探讨在胰岛素诱导动脉粥样硬化发生的过程中,雌激素受体α(estrogen receptor α,ER-α)的作用.方法 ①8周龄Apoe/Lepr基因双敲小鼠按随机数字表法分为对照组和实验组(4 IU胰岛素组),每组4只.HE染色及免疫组化观察小鼠血管动脉斑块形成及α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin-α,α-SMA)、ER-α的表达.②用胰岛素及甲基化转移酶抑制剂干预大鼠血管平滑肌细胞,采用RT-PCR及Western blot检测DNA甲基化酶、ER-α的表达,划痕实验及流式细胞仪检测ER-α对血管平滑肌细胞增殖的影响.结果 ①实验组小鼠血管出现动脉斑块,免疫组化结果显示α-SMA、ER-α表达降低(P＜0.05).②与对照组比较,胰岛素处理后血管平滑肌细胞中DNA甲基化酶的mRNA与蛋白表达升高(P＜0.01),而ER-α表达下降(P＜0.01),甲基化酶抑制剂可以消除这种差异,高表达ER-α后,划痕实验及流式细胞仪检测结果显示血管平滑肌细胞增殖减慢(P＜0.05).结论 胰岛素通过促进DNA甲基化酶的表达,诱导ER-α基因甲基化,使ER-α表达下降,最终导致动脉粥样硬化的发生.     

基于JAK2/STAT3/VEGF通路探讨周氏固金消瘤汤抗人肺腺癌A549细胞的机制研究

目的   研究周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)对人肺腺癌A549增殖、凋亡和血管生成的影响及其机制。方法   通过CCK-8法检测ZSGJXLT对细胞活性的影响;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;体外血管形成实验观察血管生成情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、VEGF、JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3表达;构建小鼠A549肺癌皮下移植瘤模型,并给予不同浓度ZSGJXLT治疗,21 d后处死小鼠称取瘤质量,计算抑瘤率。结果   ZSGJXLT显著抑制A549的活性(P < 0.01),具有时间及浓度依赖性;ZSGJXLT诱导A549细胞凋亡(P < 0.05~0.01),具有浓度依赖性;ZSGJXLT显著抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外小管形成(P < 0.01),呈浓度依赖性;Western blot结果显示ZSGJXLT能引起Bax/Bcl-2表达明显上调(P < 0.05~0.01),VEGF、p-STAT3/STAT3和p-JAK2/JAK2的表达明显下调(P < 0.01);小鼠体内实验结果表明,与模型组比较,不同浓度ZSGJXLT(0.25、1、4 g/kg)均可显著抑制肿瘤生长(P < 0.05~0.01),抑瘤率分别为21.66%、35.52%和48.24%。结论   周氏固金消瘤汤可以通过影响JAK2/STAT3/VEGF通路的活化,发挥抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抗血管生成等多途径抗人肺腺癌A549的作用。为开发新型抗肺癌中药复方ZSGJXLT提供了实验依据。      

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L~(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。     

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

lncRNA Zeb1-AS1调控JAK2/STAT3信号通路影响骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)E盒结合锌指蛋白1反义1(Zeb1-AS1)对骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡的影响,并探讨其机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路有关。方法：将骨关节炎软骨细胞分为si-NC组、si-Zeb1-AS1组、si-Zeb1-AS1+JAK2/STAT3信号通路抑制剂(AG490)组。运用细胞计数试剂盒、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。Western blotting分析B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果：与si-NC组比较,si-Zeb1-AS1组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.01)。与si-Zeb1-AS1组比较,si-Zeb1-AS1+AG490组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P&...     

基于网络药理学探讨健脾益气方治疗DEN肝癌大鼠的分子机制及关键通路的验证

目的 利用网络药理学分析方法探讨健脾益气方治疗肝癌的活性成分与靶点;并在此基础上利用二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌大鼠,对其中筛选出的关键通路白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)进行验证.方法 采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库、中国知网和Swiss Target Prediction平台获取健脾益气方的活性成分和对应靶点;基于Gene Cards、CTD以及gene数据库获取肝细胞癌(HCC)相关靶点;将疾病相关靶点和药物靶点取交集后得出潜在靶点,导入Cytoscape软件绘制活性成分-靶点网络图;并利用STRING数据库对潜在靶点进行蛋白相互作用(PPI)网络构建与分析,以获取核心靶点.采用腹腔注射DEN[70 mg/(kg·d)]制备肝癌大鼠模型.将大鼠随机分为正常组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3抑制组(C188-9,4.5 mg/kg)和糖蛋白130(gp130)抑制组(SC144,4.5 mg/kg),均连续干预4周.采用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态学变化;采用RT-qPCR法检测大鼠肝脏组织IL-6、gp130、Janus激酶1(JAK1)、Janus激酶2(JAK2)和STAT3的mRNA表达水平;采用ELISA法检测大鼠血清IL-6含量;采用Western Blot法检测大鼠肝脏组织gp130、JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平.结果 通过网络药理学分析获得64个活性成分和146个潜在靶点,这些分子参与的信号通路主要与IL-6/STAT3有关,且STAT3是其中潜在的核心靶点.动物实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠IL-6和STAT3 mRNA和蛋白质水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,健脾益气方中、高剂量组,及STAT3抑制组和gp130抑制组大鼠血清IL-6含量,肝脏组织IL-6、gp130和STAT3 mRNA表达水平,gp130和STAT3蛋白水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平均降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 健脾益气方可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗肝细胞癌的作用,而下调IL-6/STAT3炎症信号可能是健脾益气方治疗HCC的重要途径之一.     

熊果酸对Hep-2细胞增殖的影响及机制研究

目的 探讨熊果酸对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及其机制.方法 熊果酸处理人喉癌Hep-2细胞后,检测细胞的增殖活性和细胞周期及周期相关基因p-STAT3和CyclinD1蛋白表达的变化.结果 熊果酸对人喉癌Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用(P＜0.01).以熊果酸处理Hep-2细胞后,G0/G1期细胞比例呈浓度依赖性上升(P ＜0.01);p-STAT3和CyclinD1蛋白表达呈浓度依赖性下调(P＜0.01).结论 熊果酸对人喉癌Hep-2细胞具有明显的增殖抑制和周期阻滞的作用,其作用机制与下调p-STAT3和CyclinD1蛋白表达有关.     

大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠回肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

【目的】基于Janus激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨大承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道的保护作用。【方法】采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管内注射制备SAP大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、JAK2抑制剂组(术前2 h给予鲁索替尼灌胃)、STAT3抑制剂组(术前2 h给予Stattic腹腔注射)、大承气汤组(术前2 h给予大承气汤灌胃),另设假手术组(逆行胆胰管内注射生理盐水);再将各组大鼠分为造模后3、6、12、18 h亚组。采用苏木素—伊红染色观察末端回肠组织的病理改变,逆转录—定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测回肠组织JAK2 mRNA、STAT3mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测回肠组织p-JAK2蛋白、p-STAT3蛋白表达。【结果】SAP大鼠肠组织病理损害严重,JAK2 mRNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达;大承气汤、JAK2抑制剂和STAT3抑制剂可明显保护肠道结构,抑制JAK2 m RNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达。【结论】活化的JAK2/STAT3通路在SAP肠损害中起重要作用。大承气汤可能通过抑制活化的JAK2/STAT3通路保护SAP大鼠肠道。     

miR-924靶向TGM2抑制胃癌MGC803细胞增殖

探讨miR-924影响胃癌MGC803细胞增殖的分子机制。首先预测靶向结合组织型转谷氨酰胺酶(TGM2)的miRNAs,分析miR-924调控TGM2基因3′-UTR结合位点及两者的靶向结合。然后将miR-924导入MGC803细胞,检测其对TGM2表达及MGC803细胞增殖的影响,以及JAK3、STAT3及其磷酸化蛋白表达情况。发现miR-924与TGM2基因3′UTR的864-871位核苷酸靶向结合,并抑制MGC803细胞中TGM2 mRNA及蛋白质表达(P＜0.05)。miR-924高表达后MGC803细胞的生长速度减慢,克隆形成能力降低;JAK3与STAT3蛋白磷酸化水平下调(P＜0.05)。由此得出,miR-924通过靶向抑制TGM2表达,下调JAK3/STAT3通路活化,降低MGC803细胞增殖。     

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

下调METTL3-LYN m6A-IGF2BP2通路抑制内皮细胞迁移

目的 研究甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase like 3,METTL3)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移能力的影响,并初步探究其作用机制.方法 通过在线设计靶向METTL3第1个外显子的sgRNA,构建到lentiCRISPR v2载体;Western blot和免疫荧光染色实验检测METTL3蛋白表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;m6A甲基化RNA免疫沉淀实验检测细胞迁移相关基因酪氨酸激酶LYN mRNA上m6A甲基化修饰情况;荧光定量PCR(qPCR)检测LYN的表达情况;利用shRNA敲低m6A识别蛋白IGF2BP1和IGF2BP2,siRNA敲低m6A识别蛋白YTHDF2,qPCR检测识别蛋白敲低水平及LYN的mRNA表达情况;RNA免疫沉淀实验进一步检测IGF2BP2与LYN mRNA的结合情况;放线菌素D抑制转录后,qPCR检测LYN mRNA半衰期.结果 利用CRISPR-Cas9技术成功构建METLL3基因敲低的HUVECs细胞系.METTL3基因敲低后,内皮细胞的迁移能力下降(P＜0.05),细胞迁移相关基因LYN mRNA上m6A甲基化修饰水平显著降低(P＜0.01),且LYN mRNA的表达明显下调(P＜0.05).敲低m6A识别蛋白YTHDF2和IGF2BP1,对LYN mRNA的表达量无显著影响(P＞0.05),而敲低IGF2BP2,LYN的mRNA表达量显著下调(P＜0.01),RNA免疫沉淀实验结果显示IGF2BP2与LYN mRNA结合.mRNA半衰期实验结果表明敲低IGF2BP2降低LYN mRNA稳定性.结论 敲低METTL3抑制内皮细胞迁移,其机制可能通过IGF2BP2识别并结合LYN mRNA上m6A修饰位点,调控其mRNA稳定性来发挥作用.     

Role of JAK2-STAT3 signaling pathway in smooth muscle cell proliferation and migration induced by medication of IL-1β through arterial adventitia in mice

目的 研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用.方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Westernblot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测.结果 白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337 ±0.216),8h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P＜0.05).加用抑制剂后,8h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P＜0.05),平滑肌细胞变化程度下降.结论 炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系.     

灵芝乙醇提取物对宫颈癌细胞生物学行为和JAK1/STAT3信号通路的影响

目的：探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)对宫颈癌细胞生物学行为和Janus激酶1 (JAK1)/信号传导和转录激活因子3 (STAT3)信号通路的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将人宫颈癌HeLa细胞随机分为对照组(给予完全培养液)和低、中及高剂量GLEE组(给予25、50、100 mg·L^-1GLEE)。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,平板克隆实验检测各组克隆形成率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中JAK1、磷酸化JAK1 (p-JAK1)、STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3 (SOCS3)和活化STAT蛋白抑制因子1 (PIAS1)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,低、中和高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低(P<0.05),细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降...     

没食子酸诱导非小细胞肺癌A549 细胞凋亡的机制研究

目的 探讨没食子酸（GA）对非小细胞肺癌A549 细胞凋亡的影响及其机制。方法 将A549 细 胞随机分为对照组和不同浓度GA 组,分别给予正常培养基及不同浓度GA 培养6 ～ 48 h。噻唑蓝比色法（MTT） 检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定细胞中酪氨酸激酶1 （JAK1）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、B 淋巴细胞瘤2 基因（Bcl -2）及Bcl-2 相关X 蛋白（Bax） mRNA 表达;Western blot 检测细胞中Bcl-2、Bax、JAK1、STAT3、磷酸化酪氨酸激酶1（p-JAK1）、磷酸化信 号转导及转录激活因子3（p-STAT3）的蛋白表达。结果 12 ～ 28μg/ml GA 作用A549 细胞不同时间后,与 对照组相比,GA 组细胞生存率降低（P <0.05）,细胞凋亡率增加（P <0.05）,并且随GA 浓度增加,干预时间 延长,其对细胞的生长抑制及凋亡诱导作用逐渐增强。同时,与对照组比较,GA 组细胞中Bax mRNA 及蛋白 表达逐渐增高（P <0.05）,p-JAK1、p-STAT3、Bcl-2 的蛋白表达及Bcl-2 mRNA 表达逐渐降低（P <0.05）; 并且随GA 浓度增加,其对细胞中Bax、Bcl-2、p-JAK1、p-STAT3 蛋白表达的调节作用逐渐增强,但对细 胞中JAK1、STAT3 mRNA 及蛋白表达水平无影响（P >0.05）。结论 GA 呈浓度、时间依赖性诱导A549 细 胞凋亡,抑制其生长,作用机制可能与抑制细胞中JAK1、STAT3 的磷酸化激活,进而调节Bax、Bcl-2 的表 达有关。