Notch信号通路介导的自噬改变在多囊卵巢综合征中的作用及机制研究

目的 研究Notch信号通路在大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)发生过程中对自噬发生的调控机制.方法 通过来曲唑200μg/d灌胃的方式建立PCOS大鼠模型;实验分为对照组、来曲唑干预组(200μg/d)、Jagged1处理组、来曲唑+Jagged1处理组,21 d建模成功后观察各组血清中雌二醇(E2)、促卵泡生长激素(FSH)水平的改变;HE染色检测实验各组卵巢形态学变化;运用Western blot检测各组卵巢组织中自噬相关蛋白LC3和Beclin1及mTOR信号通路、Notch信号通路相关分子的表达改变.结果 与对照组相比,PCOS模型组血清中E2、FSH水平显著降低,卵巢组织形态学变化明显:模型组呈现病理性的改变,黄体结构较少,卵泡大量扩张,颗粒细胞层排列稀疏,无放射冠及卵母细胞存在,卵巢间质细胞出现增生;Western blot检测发现PCOS模型组自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白表达水平升高;Notch信号通路也处于抑制状态,Notch1和Hes1蛋白在模型组均低表达.运用Notch信号通路的激活剂Jagged1处理后能够改善PCOS的病理改变,降低卵巢组织的自噬发生.结论 Notch信号通路介导的自噬改变参与了来曲唑诱导SD大鼠PCOS的病理进程.     

黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究

目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增殖的影响。10~(-5)mol/L丙酸睾丸酮、10μmol/L C2-神经酰胺作用大鼠卵巢颗粒细胞24 h诱导PCOS大鼠颗粒细胞自噬模型,CCK8检测细胞增殖情况;透射电镜观察自噬体情况;免疫印迹法检测细胞中Sirt1、Fox O1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示,FSHR蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的平均阳性表达量93.18%90%,可进行接下来实验。0、100、200、400μg/mL APS处理正常卵巢颗粒细胞,在贴壁0、24 h比较,细胞OD_(450)差异均无统计学意义(P0.05)。与正常组相比,模型组细胞核附近出现大量自噬小体,双层、单层膜包裹胞质形成封闭、圆形结构,部分自噬小体内膜溶解,自噬小体周围可见单层膜结构包裹着一些被降解的胞浆、类似自噬小体结构;100μg/mL APS组与模型组细胞结构类似,随着APS剂量的升高,自噬小体数量减少,在400μg/m L APS组时细胞正常。正常组、模型组、100、200、400μg/mL APS组在细胞贴壁0 h时,细胞OD_(450)差异无统计学意义(P0.05)。细胞贴壁24 h,与正常组相比,模型组细胞OD_(450)降低(P0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,100、200、400μg/mL APS组细胞OD_(450)升高(P0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平降低(P0.05)。结论 APS可以抑制PCOS大鼠颗粒细胞自噬,可能是通过抑制自噬通路Sirt1/FoxO1实现的。     

多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬率的相关研究

目的了解多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠及正常大鼠颗粒细胞自噬的差异,从而探索PCOS发生的相关机制。方法 20只SD大鼠随机分为2组,10只建立来曲唑诱导PCOS大鼠动物模型(模型组),10只作为对照组,21d后抽取腹主动脉血,进行血清学指标测定,提取模型组与对照组大鼠卵巢颗粒细胞,MDC荧光染色及流式细胞术测定大鼠颗粒细胞自噬率,并比较其差异。结果模型组大鼠体质量高于对照组,血清睾酮、卵泡刺激素水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),模型组大鼠卵巢颗粒细胞自噬率(18.6%)明显高于对照组(3.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的减少与颗粒细胞的自噬相关。     

多囊卵巢综合征患者LH/FSH比值与临床及生化水平的相关性

目的 促黄体激素(LH)/促卵泡激素(FSH)比值升高为多囊卵巢综合征(PCOS)常见的内分泌特征,探讨LH/FSH比值不同的PCOS患者临床特征及生化水平的特点。方法 将360例诊断为PCOS的患者依据LH/FSH比值分为3组,比较各组之间临床特征、性激素和糖脂代谢水平的差异,并分析其相关性。结果 根据LH/FSH比值分为LH/FSH＜1组、1≤LH/FSH＜2组和LH/FSH≥2组3组,构成比分别为20.28%、37.78%、41.94%;1≤LH/FSH＜2组的体重指数(BMI)高于其余两组,腰臀比(WHR)在1≤LH/FSH＜2组高于LH/FSH≥2组,LH/FSH≥2组多毛评分高于其余两组(P＜0.05);促黄体生成素(LH)、雌二醇(E₂)、睾酮(T)在3组中比较,差异有统计学意义,且与LH/FSH比值呈正相关;雄烯二酮(AND)水平在LH/FSH＜1组低于另外两组(P＜0.05),亦与LH/FSH比值呈正相关;甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)在1≤LH/FSH＜2组高于另外两组。结论 不同LH/FSH比值表现出不同的临床及生化特点,因此即使LH/FSH比值正常的PCOS患者临床治疗中也应给予重视。     

左归丸对磷酰胺氮芥体外诱导损伤颗粒细胞自噬与凋亡的影响

目的探讨磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导卵巢颗粒细胞损伤的机制及左归丸含药血清对受损颗粒细胞自噬与凋亡的影响。方法制备左归丸含药血清,体外培养原代大鼠卵巢颗粒细胞,待细胞生长至底壁的75%-80%时随机分为4组:①对照组(Control);②模型组(M);③左归丸含药血清组(10%ZGW);④模型+左归丸含药血清组(M+10%ZGW)、以PM处理②④组24 h建立化疗源性颗粒细胞损伤模型后,①②组中加入10%正常大鼠血清,③④组中加入10%左归丸含药血清,37℃,5%CO2条件下培养24 h。流式细胞术检测各组颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3B)、自噬受体蛋白P62、凋亡蛋白Bax、Caspase3的表达。结果与对照组相比:模型组细胞凋亡率明显上升,Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白表达量增高,P62蛋白表达量下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。10%左归丸含药血清可显著降低模型组颗粒细胞凋亡率,下调受损颗粒细胞中Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白的表达,上调受损颗粒细胞中P62蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 PM诱导了卵巢颗粒细胞损伤,促进了颗粒细胞凋亡,激活了颗粒细胞自噬/溶酶体降解途径;10%左归丸含药血清可降低化疗损伤性颗粒细胞凋亡率,与自噬相关蛋白的表达相关。     

IGF-Ⅰ和TGF-β1 在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制中的作用.方法 40只雌性Wistar大鼠随机分为PCOS组和对照组,每组各20只.PCOS组应用来曲唑{1-[双-(4-氰基苯基)甲基]-1,2,4-三氮唑}灌胃制备PCOS大鼠模型,对照组不作任何处理.阴道涂片观察大鼠动情周期变化;运用放免法测定大鼠血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)水平;光镜观察卵巢、卵泡发育情况;免疫组化法观察卵巢组织中IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达.结果 PCOS组大鼠失去规律性动情周期变化.血清T、LH浓度高于对照组(P<0.05),血清E2、FSH、P浓度低于对照组(P<0.05).IGF-Ⅰ在PCOS组颗粒细胞的表达明显强于对照组(P<0.05),TGF-β1在PCOS组卵泡膜细胞和间质细胞的表达明显强于对照组(P<0.05).结论 来曲唑诱导的大鼠动物模型是较好的PCOS模型.IGF-Ⅰ和TGF-β1与PCOS的发病密切相关.     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E₂)含量。[结果]各用药血清组E₂含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E₂分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E₂的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

急性白血病肺部感染病原菌分布情况及药敏研究

目的 探讨维生素D（vitamin D，VD）对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells，GCs）凋亡的影响。方法 选取3周龄SD雌性大鼠21只，采用随机数字表法分为对照组（n=6）和造模组（n=15），建立PCOS大鼠模型。造模组采用来曲唑[1mg/（kg·d），溶于0.5%羧甲纤维素钠溶液]灌胃联合高脂饲料喂养，对照组采用等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，给予普通饲料喂养，将12只造模成功的大鼠（3只造模失败），采用随机数字表法分为PCOS组（n=6）和PCOS+VD组（n=6），两组灌胃同等剂量玉米油，普通饲料喂养，连续21d。比较对照组、PCOS组和PCOS+VD组大鼠的动情周期、卵巢形态学变化，以及血清25羟维生素D[25 hydroxyvitam D，25-（OH）D]、睾酮（testosterone，T）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平。造模结束后，分离GCs进行体外培养，根据培养方式分为GCs对照组（n=6）、GCs-PCOS组（n=6）、GCs-（PCOS+VD）组（n=6）、GCs-（PCOS+ VD+LY294002）组（n=6）。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电镜观察细胞凋亡小体，蛋白免疫印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果 与对照组比较，PCOS组大鼠血清中T、LH水平升高，FSH、25-（OH）D水平降低，动情周期紊乱，卵巢呈多囊样改变，差异均有统计学意义（P<0.05）；与PCOS组比较，PCOS+VD组大鼠血清T、LH降低，FSH及25-（OH）D水平升高，动情周期恢复正常，囊状卵泡数量减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。与GCs对照组比较，GCs-PCOS组GCs凋亡率及Bax蛋白表达增加，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-PCOS组比较，GCs-（PCOS+VD）组的GCs凋亡率及Bax蛋白表达降低，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-（PCOS+VD）组比较，GCs-（PCOS+VD+LY294002）组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 VD可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制GCs凋亡。     

维生素D对PCOS大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的 探讨维生素D（vitamin D，VD）对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells，GCs）凋亡的影响。方法 选取3周龄SD雌性大鼠21只，采用随机数字表法分为对照组（n=6）和造模组（n=15），建立PCOS大鼠模型。造模组采用来曲唑[1mg/（kg·d），溶于0.5%羧甲纤维素钠溶液]灌胃联合高脂饲料喂养，对照组采用等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，给予普通饲料喂养，将12只造模成功的大鼠（3只造模失败），采用随机数字表法分为PCOS组（n=6）和PCOS+VD组（n=6），两组灌胃同等剂量玉米油，普通饲料喂养，连续21d。比较对照组、PCOS组和PCOS+VD组大鼠的动情周期、卵巢形态学变化，以及血清25羟维生素D[25 hydroxyvitam D，25-（OH）D]、睾酮（testosterone，T）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平。造模结束后，分离GCs进行体外培养，根据培养方式分为GCs对照组（n=6）、GCs-PCOS组（n=6）、GCs-（PCOS+VD）组（n=6）、GCs-（PCOS+ VD+LY294002）组（n=6）。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电镜观察细胞凋亡小体，蛋白免疫印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果 与对照组比较，PCOS组大鼠血清中T、LH水平升高，FSH、25-（OH）D水平降低，动情周期紊乱，卵巢呈多囊样改变，差异均有统计学意义（P<0.05）；与PCOS组比较，PCOS+VD组大鼠血清T、LH降低，FSH及25-（OH）D水平升高，动情周期恢复正常，囊状卵泡数量减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。与GCs对照组比较，GCs-PCOS组GCs凋亡率及Bax蛋白表达增加，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-PCOS组比较，GCs-（PCOS+VD）组的GCs凋亡率及Bax蛋白表达降低，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-（PCOS+VD）组比较，GCs-（PCOS+VD+LY294002）组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 VD可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制GCs凋亡。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

抗纤益心方通过AMPK/mTOR通路改善扩张型心肌病大鼠心功能的作用机制

目的探讨抗纤益心方通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌细胞自噬、心功能的影响及其机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,抗纤益心方高、低剂量组和卡托普利组,每组各12只。模型组、抗纤益心方组和卡托普利组经呋喃唑酮水溶液诱导扩张型心肌病模型,药物治疗8周。超声心动仪检测各组大鼠心脏左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、缩短分数(FS)、左室射血分数(LVEF)的变化;HE染色观察心肌细胞排列及形态;透射电镜观察线粒体超微结构及自噬;Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1、p62与AMPK、mTOR表达及其磷酸化水平。结果与正常组比较,模型组LVESD和LVEDD增加,FS和EF降低;与模型组比较,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组LVESD和LVEDD降低,FS和EF增加;模型组心肌细胞线粒体排列紊乱,局部肌丝断裂,线粒体肿胀伴空泡样变化,边界模糊不清,抗纤益心方高剂量治疗后线粒体超微结构的损伤改善;与正常组比较,模型组心肌LC3-II/LC3-I、Beclin1蛋白表达降低、p62表达升高;与模型组比较,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组LC3-II/LC3-I、Beclin1蛋白表达增加,p62表达降低;与正常组比较,模型组p-AMPK/AMPK降低,p-mTOR/mTOR升高;与模型组相比,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组p-AMPK/AMPK升高,p-mTOR/mTOR降低。结论抗纤益心方通过促进扩张型心肌病大鼠心肌细胞自噬,改善心脏功能,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路有关。     

基于p53/mTOR信号通路探究电针干预缺血性脑卒中大鼠血管新生的机制

目的探讨电针干预对缺血性脑卒中大鼠血管新生的影响及其相关机制。方法实验设置假手术组(仅切颈、分离血管)、缺血性脑卒中组(造模)和电针组(造模+电针治疗,每日治疗1次,治疗7 d结束),每组20只。测定大鼠电针治疗前、治疗结束后24 h内神经行为学评分;HE染色观察脑组织病变;测定微血管密度;Western blot法检测脑组织中p-p53/p53、p-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/mTOR、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ型和Ⅰ型的比值(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果与治疗前相比,治疗结束后电针组大鼠神经行为学评分显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。治疗结束后,与假手术组相比,缺血性脑卒中组、电针组大鼠神经行为学评分、脑组织微血管密度及脑组织中p-p53/p53、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、VEGF蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05),p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05),脑组织出现明显病变;与缺血性脑卒中组相比,电针组大鼠神经行为学评分及脑组织中p-p53/p53、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05),脑组织微血管密度及p-mTOR/mTOR、VEGF蛋白表达水平显著升高(P0.05),脑组织病变减轻。结论电针干预能抑制p53激活,使mTOR磷酸化水平升高,导致自噬水平降低,促进血管新生,减轻脑组织损伤,改善缺血性脑卒中大鼠病情。     

西洋参茎叶总皂苷对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠的作用效应及机制研究

目的 研究西洋参茎叶总皂苷(PQS)对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠的作用效应及机制。方法建立PCOS-IR大鼠模型,分为正常组、模型组、PQS低剂量组(30mg/kg)和PQS高剂量组(60mg/kg),每组10只。给药4周后,ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察卵巢组织形态学变化;免疫组化检测卵巢组织Bcl-2和Bax表达;Western blot法检测PI₃K、p-PI₃K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现典型多囊样改变,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数均显著升高,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著减少,Bax表达显著升高;与模型组比较,PQS组大鼠卵巢组织多囊样改变显著改善,血清T、LH水平及LH/FSH比值、FINS及HOMA-IR指数显著降低,卵巢组织中Bcl-2、p-PI₃K、p-Akt表达显著升高,Bax表达显著降低。结论 PQS对PCOS-IR大鼠具有显著治疗效应,机制可能与激活卵巢组织PI_3k/Akt信号通路,调控Bcl-2与Bax分子的表达相关。     

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450表达的影响

目的观察补肾化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响。方法运用补肾化瘀方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达。结果模型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);补肾化瘀方中、高、低剂量组及妈富隆组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);其中补肾化瘀方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果最佳。结论补肾化瘀方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高雄血症,逆转卵泡的发育异常,使排卵成功。     

基于AMPK介导的线粒体自噬分析温阳益气方改善大鼠梗死后心衰的药理机制

目的观察温阳、益气方药对梗死后心力衰竭大鼠模型腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介导的线粒体自噬的影响,完善其药理机制提供数据支撑。方法将100只健康SPF级大鼠随机分为5组,各组20只。除对照组和假手术组以外,均采用冠状动脉结扎法制备梗死后心力衰竭大鼠模型。模型制备成功后,中药干预组采用温阳益气方灌胃,AMPK激动组在温阳益气方灌胃的基础上肌肉注射AMPK激动剂EX229。干预4周,测定左室射血分数(LEVF)与心脏/体重比;采用线粒体呼吸机测定线粒体呼吸控制比(RCR),采用WB实验测定磷酸化AMPK/非磷酸化AMPK(p-AMPK/AMPK)及自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、PINK1、Parkin的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组和AMPK激动组心脏/体重比明显升高,state3呼吸速率与RCR明显降低;与模型组比较,中药组心脏/体重比降低,state3呼吸速率与RCR升高;差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,模型组、中药组和AMPK激动组心肌组织p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白表达水平升高;与模型组相比,中药组p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白表达水平降低;组间差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳、益气方药能够改善梗死后心衰大鼠的心肌功能,其作用机制可能与抑制AMPK介导的线粒体自噬有关。     

补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响

目的 通过观察补肾化瘀方对大鼠卵巢颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白的表达,探讨中药对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢局部的影响及作用机制.方法 应用补肾化瘀方作用于以丙酸睾酮联合HCG诱导PCOS大鼠模型,采用免疫组化法,检测PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠卵巢体质量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,补肾化瘀方组卵巢形态接近正常组.补肾化瘀方能明显提高PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,补肾化瘀方各剂量组与模型组和妈富隆阳性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01),而中剂量组与正常对照组比较,差异均无统计学意义.结论 补肾化瘀方能提高PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,可能与补肾化瘀方具有促进卵泡发育和排出的作用机制有关.     

白藜芦醇调节Akt/mTOR通路对大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响机制研究

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制.方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10).将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(poly-cystic ovarian syndrome,PCOS)颗粒细胞进行体外培养.用不同浓...     

miR-215-5p调控YY1通过TGF-β1/Smad信号通路对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的 探究MicroRNA-215-5p(miR-215-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)凋亡的影响,并分析潜在机制。方法 采用脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS大鼠模型,分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组(control组)、sh-NC组、sh-YY1组、sh-YY1+LY2109761组、miR-NC组、miR-215-5p mimic组、miR-215-5p mimic+pc-NC组、miR-215-5p mimic+pc-YY1组。TUNEL法检测PCOS大鼠卵巢组织GC凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢组织/GC中miR-215-5p、阴阳-1(YY1)mRNA表达;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测PCOS大鼠卵巢组织/GC中YY1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4蛋白表达。结果 miR-215-5p在PCOS大鼠卵巢组织中低表达,YY1 mRNA和蛋白水平在PCOS大鼠卵巢组织中显著升高(P<0.05);敲低YY1或上...     

IGF-I和TGF-β1在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）和转化生长因子β1（TGF—β1）在多囊卵巢综合征（PCOS）发病机制中的作用。方法40只雌性Wistar大鼠随机分为PCOS组和对照组,每组各20只。PCOS组应用来曲唑{1-[双-（4-氰基苯基）甲基]-1,2,4-三氮唑}灌胃制备PCOS大鼠模型,对照组不作任何处理。阴道涂片观察大鼠动情周期变化;运用放免法测定大鼠血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）和睾酮（T）水平;光镜观察卵巢、卵泡发育情况;免疫组化法观察卵巢组织中IGF—Ⅰ和TGF—β1的表达。结果PCOS组大鼠失去规律性动情周期变化。血清T、LH浓度高于对照组（P〈0．05）,血清E2、FSH、P浓度低于对照组（P〈0．05）。IGF-Ⅰ在PCOS组颗粒细胞的表达明显强于对照组（P〈0．05）,TGF—β1在PCOS组卵泡膜细胞和间质细胞的表达明显强于对照组（P〈0．05）。结论来曲唑诱导的大鼠动物模型是较好的PCOS模型。IGF—Ⅰ和TGF—β1与PCOS的发病密切关。     

淫羊藿总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平的影响

目的：探讨淫羊藿总黄酮对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）大鼠性激素水平的影响。方法：55只SD大鼠连续灌胃1 mg/kg来曲唑21 d,建立PCOS大鼠模型;选取造模成功的50只大鼠随机分为PCOS模型组,达英-35组,淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组（50、100、200 mg/kg）,另设正常对照组（n=10）。连续治疗21 d后,测量大鼠体质量、卵巢重量,计算卵巢指数;采用放射免疫法测定各组大鼠血清睾酮（testosterone,T）、促卵泡生成素（follicle stimulating hormone,FSH）、雌二醇（estradiol,E2）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH） 水平。结果：与正常对照组相比,PCOS组大鼠卵巢重量和卵巢指数均显著升高（P<0.05）,血清T、LH水平显著升高（P<0.001）,E2水平明显下降（P<0.01）,LH/FSH比值明显高于正常组（P<0.01）;经21 d治疗后,与PCOS模型组相比,200 mg/kg淫羊藿总黄酮组大鼠卵巢重量和卵巢指数均显著下降（P<0.05）,血清T、LH水平显著降低（P<0.01）,E2显著升高（P<0.01）,LH/FSH比值亦明显下降（P<0.01）。100 mg/kg和50 mg/kg淫羊藿总黄酮作用较弱。结论：淫羊藿总黄酮可改善PCOS大鼠高雄激素血症,调节LH/FSH异常,升高E2,改善卵巢功能。