AAV6-hNGFβ转染对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用与PI3K/Akt信号通路的关系

目的 观察转染AAV6-hNGFβ对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury)的保护作用与PI₃K/Akt信号通路之间的关系。方法 健康雄性SD大鼠72只,体质量250~300g,随机分为4组(n=18),即假手术组、模型组、hNGFβ组(模型组+AAV6-hNGFβ-EGFP)和阴性对照组(模型组+AAV6-EGFP)。hNGFβ组、阴性对照组和模型组均采用脑缺血再灌注模模型,并于造模后分别在股静脉注射AAV6-hNGFβ-EGFP 、AAV6-EGFP和等量0.9%氯化钠注射液,测定不同病程(1、2、4周)大鼠神经功能评分和脑梗死体积,TUNEL法检测神经细胞凋亡,以及脑内皮质NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著升高,NGF表达显著下降,PI₃K/Akt通路受到抑制,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阴性对照组神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数无明显变化,NGF、Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax表达水平接近;与模型组和阴性对照组比较,hNGFβ组大鼠神经功能评分,脑梗死体积和凋亡细胞数均显著降低,NGF表达显著升高,PI₃K/Akt通路得到激活,Bcl-2蛋白表达也显著升高,Bax蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染AAV6-hNGFβ-EGFP可提高NGF表达,激活大鼠PI₃K/Akt通路,提高Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白增加,对大鼠脑缺血再灌注损伤起到保护作用。结论 转染AAV6-hNGFβ可激活大鼠PI₃K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白同时抑制Bax蛋白表达,从而保护大鼠脑缺血再灌注损伤。     

藏红花素通过调控PI3K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松

目的 探究藏红花素通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡引起的骨质疏松。方法 建立去卵巢骨质疏松小鼠模型,再每天给予雌激素(25μg/kg)和藏红花素(20mg/kg)灌胃治疗,另设假手术组,每天给予等量蒸馏水灌胃。术后4周开始连续灌胃12周,称量动物体质量,双能X线测量骨密度,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨组织病理形态,全自动生化分析仪检测小鼠血清钙(S-Ca)、血清磷(S-P)、尿钙(U-Ca)、尿磷(U-P)、尿肌酐(Cr)含量,ELISA检测小鼠血清骨钙素(osteocalcin,OC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平。体外原代培养小鼠成骨细胞,利用ALP染色鉴定成骨细胞。加入藏红花素和LY249002,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)及其磷酸化水平的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 与假手术组比较,模型组小鼠体质量迅速增加,骨密度降低,骨小梁分布稀疏,尿液中U-Ca、U-P、Cr含量升高,血清中OC、ALP水平也升高,骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达下调;与模型组比较,雌激素组和藏红花素组小鼠体质量增加缓慢,骨密度增加,改善骨小梁分布和排列,降低尿液中U-Ca、U-P、Cr含量和血清中OC、ALP水平,上调了骨组织中p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达。在成骨细胞中,与假手术组比较,模型组成骨细胞凋亡增多,下调p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与模型组比较,藏红花素组抑制了成骨细胞凋亡,上调了p-PI₃K、PI₃K、p-Akt、Akt蛋白表达;与藏红花素组比较,藏红花素+LY249002组抵消了藏红花素对成骨细胞凋亡的抑制作用。结论 藏红花素抑制了骨质疏松症发生和进展,可能是通过调控PI₃K/Akt信号通路抑制成骨细胞凋亡来介导的。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨白藜芦醇改善大鼠化疗性卵巢损伤的机制

目的 基于PI₃K/Akt/mTOR信号通路探讨白藜芦醇改善大鼠的化疗性卵巢损伤的分子机制。方法 30只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、化疗组(顺铂组)、化疗给药组(白藜芦醇+顺铂组),实验时间共21天。化疗给药组大鼠给予白藜芦醇25mg/(kg·d)灌胃,化疗组给予0.9%NaCl溶液。在实验的第15天,除对照组,其余两组均给予单剂量5mg/kg的顺铂腹腔注射。1周后取大鼠卵巢制作石蜡切片,采用苏木精-伊红染色(HE)观察卵巢形态及卵泡发育情况。原位缺口末端标记法(TUNEL)检测分析卵巢组织的调亡情况。蛋白免疫印迹实验(Western blot)法分析比较卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI₃K)、蛋白激酶(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化水平的蛋白表达差异。结果 与对照组比较,化疗组卵巢萎缩,黄体退化,各级生长卵泡数明显减少;卵巢细胞的凋亡数目增多,凋亡指数升高(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均下降(P＜0.01)。化疗给药组与化疗组比较,可见卵巢结构较化疗组有明显改善,间质纤维化程度有所减轻,且可见一定数量的黄体,各级生长卵泡数增多;卵巢细胞凋亡数目减少,凋亡指数降低(P＜0.01);p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均上升(P＜0.01)。结论 白藜芦醇能改善顺铂化疗导致的大鼠卵巢损伤,其机制可能与激活PI₃K/Akt/mTOR信号通路有关。     

性激素结合球蛋白在多囊卵巢综合征患者中的变化及与其他指标的关系

目的: 探讨性激素结合球蛋白（SHBG）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清中的变化及与其他内分泌指标的关系。方法: 选择58例PCOS患者分为PCOS-IR组30例、PCOS-NIR组28例,30例健康育龄期妇女为对照组。比较PCOS-IR组、PCOS-NIR组患者SHBG、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、泌乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平以及HOMA-IR、LH/FSH、FTI的值与对照组的差异,并用Spearman相关分析法分别分析SHBG与其他指标的相关性。结果:PCOS-IR组及PCOS-NIR组患者的SHBG、FINS、HOMA-IR、 LH、T、LH/FSH及FTI与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）;PCOS-IR组及PCOS-NIR组患者的FPG与对照组比较无统计学意义（P>0.05）。PCOS-IR组与PCOS-NIR组患者相比SHBG、FINS、HOMA-IR及FTI差异有统计学意义（P<0.01）,PCOS-IR组与PCOS-NIR组患者相比各项性激素指标比较无统计学意义（P>0.05）。SHBG与FINS、T、FTI、HOMA-IR呈负相关(r值分别为: -0.519、-0.513、-0.592、-0.588,均P<0.01),而SHBG与FPG、LH/FSH(r=-0.292,P>0.05)、LH/FSH(r=-0.124,P>0.05)并无相关性。结论: PCOS患者与对照组相比SHBG降低,FINS、T、FTI、HOMA-IR、LH、LH/FSH升高;且SHBG与FINS、T、FTI、HOMA-IR呈负相关,提示低水平SHBG是预防和治疗PCOS的重要实验指标。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

TMAO通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响心脏原代成纤维细胞的增殖

目的 探讨研究氧化三甲胺(trimethylamine-N-oxide,TMAO)通过PI₃K/AKT/mTOR信号通路影响心脏原代成纤维细胞的增殖的机制。方法 分别用0、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0μmol/L 的TMAO培养心脏原代成纤维细胞48h,作为浓度梯度组;用TMAO分别处理心脏原代成纤维细胞0、15、30、60min,作为时间梯度组;在用TMAO处理细胞前,加入PI₃K抑制剂LY294002 预处理细胞30min,作为抑制剂组。裂解细胞收集蛋白,用Western blot法检测蛋白表达量。 结果 TMAO增加了PI₃K/AKT/mTOR细胞增殖信号通路中p-PI₃K、p-AKT、p-mTOR的表达量,p-PI₃K 在TMAO为10μmol/L、处理30min的时候表达量最高,p-AKT和p-mTOR在 TMAO为25μmol/L 处理60min的时候表达量最高。在抑制剂组中,与单纯用TMAO处理的细胞比较,同时用PI₃K抑制剂处理组,其p-PI₃K、p-AKT、p-mTOR的表达量明显减少。结果较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TMAO可能促进心脏原代成纤维细胞的增殖,且是通过激活PI₃K/AKT/mTOR信号通路起作用。     

来曲唑联合高脂饲料建立PCOS-IR大鼠模型实验研究

目的采用两种不同喂养时间的来曲唑联合高脂饲料方法,建立多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(polycystic ovary syndrome with insulin resistance,PCOS-IR)大鼠模型,分析两种模型各自的内分泌和代谢特征。方法将18只6周龄SD雌性大鼠采用数字表法随机分为3组:对照组、来曲唑A组和来曲唑B组,每组各6只。对照组予普通饲料喂养,每日灌胃0.5%(质量分数)羧甲纤维素钠溶液;来曲唑A组连续21 d灌胃来曲唑溶液,同时给予高脂饲料喂养;来曲唑B组连续30 d灌胃来曲唑溶液,并给予与来曲唑A组相同的高脂饲料喂养。观察3组大鼠的体质量和卵巢组织学变化,测定血清卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、三酰甘油(triglyceride,TG)和空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)等浓度,计算LH/FSH比值和胰岛素抵抗指数(homeostasis model of assessment for insulin resistence index,HOMAIR)。结果与对照组比较,来曲唑A组大鼠体质量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),性激素及代谢等指标较对照组有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。来曲唑B组大鼠的体质量亦有明显增加(P<0.05),卵巢呈多囊样改变,血清T、LH/FSH显著升高(P<0.01),同时,三酰甘油、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素和HOMA-IR值均显著升高(P<0.01)。结论来曲唑联合高脂饲料喂养30 d可成功诱导出多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠模型;与同法喂养21 d的模型相比,其内分泌与代谢指标改变更符合人PCOS-IR的临床病理特征。     

lncRNA AK126393通过PI3K/Akt通路调节结直肠癌细胞的增值与凋亡

目的 探索长链非编码 RNA (long non-coding RNA,lncRNA)AK126393在人结直肠癌细胞中的作用机制。方法荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常结肠组织细胞系与结直肠癌细胞系中lncRNA AK126393表达,选取最低表达细胞系进行转染lncRNA AK126393过表达质粒和阴性对照(NC),采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Western blot法检测Bcl2、Bax、PI₃K、P-PI₃K、Akt、P-Akt和LC3蛋白表达。结果 lncRNA AK126393在结直肠癌细胞系中呈现低表达,其中SW480细胞表达最低;过表达质粒转染SW480细胞后lncRNA AK126393相对表达水平显著升高;细胞增值能力显著降低,细胞凋亡水平增加;Western blot法检测结果显示Bcl2、LC3-Ⅱ、P-PI₃K、P-Akt蛋白表达明显升高,Bax和LC3-Ⅰ蛋白表达明显降低,PI₃K和Akt蛋白表达无明显变化。结论 lncRNA AK126393可以通过抑制PI₃K/Akt信号通路激活实现抑制结直肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡以及引起细胞自噬的作用。     

CT-707对缺氧微环境下肝癌细胞能量代谢和细胞周期的影响及作用机制

目的 研究CT-707对缺氧微环境下肝癌细胞能量代谢和细胞周期的影响及作用机制。方法 HepG2细胞分为对照组和CT-707高(6μmol/L)、中(3μmol/L)、低(1.5μmol/L)剂量组,缺氧(2%O₂)条件下培养,采用CCK8法测定细胞活力,HK及LDH试剂盒检测细胞中HK酶活力及LDH含量,Western blot法检测cyclinD1、cyclin E、p-FAK/FAK、p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达。构建HepG2细胞裸鼠皮下成瘤模型,分为模型组和CT-707高(100 mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)剂量组,每组8只,观察并测量肿瘤质量及体积,采用HE染色进行瘤组织病理学观察,免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA的表达。结果 与对照组比较,CT-707各剂量组均可显著降低HepG2细胞活力、HK活性及LDH含量,显著下调cyclin D1、cyclin E、p-FAK/FAK、p-PI₃K/PI₃K、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组(P<0.05),中、高剂量组间结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,CT-707各剂量组均可显著减小瘤质量和瘤体积,降低PCNA的蛋白表达水平(P<0.05),中、高剂量组的效应明显优于低剂量组(P<0.05),中、高剂量组间结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT-707可抑制缺氧环境下肝癌细胞能量代谢,进而诱导细胞周期阻滞,抑制肿瘤生长,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/GSK-3β信号通路激活相关。     

疏肝健脾方药对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及胰岛素抵抗作用研究

目的:观察疏肝健脾方药对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及胰岛素抵抗作用。方法:随机将60只健康雌性SD大鼠分为正常组、模型组、中药低剂量组[22.05g/(kg·d)~(-1)]、中药中剂量组[44.1g/(kg·d)~(-1)]和中药高剂量组[88.2 g/(kg·d)~(-1)],采用脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射进行PCOS模型复制。造模成功后,连续给药21 d后,分离血清,检测大鼠血清T、E2、LH、FSH、FBG,FINS水平并计算HOMA-IR水平,分离大鼠卵巢组织,RT-PCR法检测GSK3β、AKT2、GLUT4、IRS-1 m RNA水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清T、LH、FSH、FBG、FINS及HOMA-IR水平显著升高(P0.01),E2、P水平显著下降(P0.01),卵巢组织中GSK3β、AKT2、GLUT4、IRS-1 m RNA水平显著降低(P0.01);经过治疗后,与模型组比较,低剂量组大鼠血清E2、P显著升高(P0.05,P0.01),LH、FBG、FINS水平降低(P0.05),HOMA-IR水平显著降低(P0.01),卵巢组织中GSK3β、IRS-1m RNA水平显著升高(P0.05);中剂量组和高剂量组大鼠血清T、LH、FSH、FBG、FINS及HOMA-IR水平均显著降低(P0.01,P0.05),E2、P水平显著升高(P0.01),卵巢组织中GSK3β、AKT2、GLUT4、IRS-1 m RNA水平均显著升高(P0.01)。结论:疏肝健脾方药能够有效改善PCOS大鼠血清激素水平及胰岛素抵抗情况,其机制可能与调控PCOS大鼠卵巢组织中GSK3β、AKT2、GLUT4、IRS-1 m RNA水平有关。     

来曲唑联合高糖高脂饮食构建多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠模型研究

目的 探讨应用来曲唑联合高糖高脂饮食的方法构建多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(polycystic ovarian syndrome-insulin resistance,PCOS-IR)大鼠模型。方法 6周龄雌性SD大鼠20只,普通饲料适应性喂养1周后,随机数字表法选取10只作为对照组,其余10只作为模型组。对照组给予普通饲料,模型组给予高糖高脂饲料喂养28 d。于喂养第8天,模型组大鼠开始每日用0.4 mL溶于1%(质量分数)羧甲基纤维素溶液(carboxymethyl cellulose solution,CMC)的来曲唑液(1 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,对照组灌服等体积CMC溶液,连续灌胃21 d。自灌胃第7天起,每日晨行阴道涂片,观察阴道脱落细胞的周期变化,判断动情周期,直至实验结束。灌胃结束后,测量体质量,尾静脉采血测定大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),ELISA法测定血清促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、促卵泡生成素(follicle stimulating hormone,FSH)、血清睾酮(testosterone,T)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)浓度,并计算LH/FSH比值、胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)和胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)。留取卵巢组织,应用HE染色观察卵巢组织形态。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量、FBG、FINS、T、LH浓度、HOMA-IR指数、LH/FSH比值均明显升高,FSH及ISI浓度显著降低,差异均有统计学意义(P ＜ 0.01);阴道涂片显示,模型组大鼠动情周期均消失;对照组卵巢局部组织形态正常,模型组呈典型多囊样改变。结论 应用高糖高脂联合来曲唑灌胃的方法,可以成功构建PCOS-IR大鼠模型,模型大鼠出现明显的胰岛素抵抗、特征性的多囊卵巢组织及性激素改变。     

百里醌对大鼠蛛网膜下腔出血后脑细胞凋亡的影响

目的 研究百里醌对大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后脑细胞凋亡的作用及其机制。方法 采用血管内穿刺法建立SAH模型,将48只成年雄性SD大鼠采用数字表法随机分为假手术组（Sham组）、SAH组、媒介组和百里醌组,SAH造模24h后检测神经功能损伤、脑组织含水率和脑组织内依文蓝（EB）含量;Tunel法检测脑细胞凋亡;ELISA法检测脑组织中IL-13的表达;Western blot法检测脑组织中IL-13Rα2、p-PI₃K、p-AKT和mTOR的表达。结果 SAH组大鼠Garcia神经功能评分、脑组织含水率和EB含量较Sham组均明显升高,脑组织中IL-13的表达上调;SAH组大鼠脑出血后细胞凋亡率显著上升,IL-13Rα2、p-PI₃K、p-AKT和mTOR的表达升高;与媒介组相比较,百里醌组大鼠Garcia神经功能评分、脑组织含水率和EB含量均明显降低,IL-13在脑组织中的表达下调,细胞凋亡率显著下降,IL-13Rα2、p-PI₃K、p-AKT和mTOR的表达下调。结论 百里醌可减轻大鼠SAH后脑损伤和脑细胞凋亡,其机制可能通过IL-13Rα2/PI₃K/AKT/mTOR通路实现。     

内质网应激与PI3K/Akt和ERK1/2通路在大鼠宫腔粘连治疗中的作用

目的 探讨内质网应激与PI₃K/Akt和ERK1/2信号通路在宫腔粘连治疗中的作用机制。方法 将18只SD雌鼠随机分为对照组(不做任何处理)、模型组(机械损伤法构建大鼠宫腔粘连模型)及治疗组(造模后当天开始皮下注射17β-雌二醇10μg,连续7天)。通过HE及Masson染色观察大鼠子宫病理形态,免疫组化法检测CD31的表达。采用Western blot法测定子宫内质网应激凋亡相关蛋白及Akt/p-Akt和ERK/p-ERK蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜腺体数量减少,纤维化面积明显增加,CD31的表达明显降低(P＜0.01);模型组大鼠子宫组织中GRP78和CHOP蛋白表达显著升高,而Akt、p-Akt和ERK、p-ERK蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P均＜0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠子宫内膜腺体数量增加,纤维化面积降低,CD31的表达明显增加(P＜0.05);治疗组大鼠子宫组织中GRP78和CHOP蛋白含量显著减少(P＜0.05),Akt、p-Akt和ERK、p-ERK蛋白表达有所增加(P＜0.05)。结论 17β-雌二醇可改善子宫内膜的纤维化,促进子宫内膜血管增生,其作用机制可能与内质网应激及PI₃K/Akt和ERK1/2信号通路相关。     

复方降脂颗粒对2型糖尿病大鼠的降血糖作用及其作用机制的研究

目的 研究复方降脂颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠的降血糖作用及其可能的作用机制。方法 高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM模型。造模成功的20只大鼠随机分成两组,分别是模型组和复方降脂颗粒组。复方降脂颗粒组灌胃600mg/kg复方降脂颗粒溶液,正常组和模型组分别给予等量0.9%NaCl注射液。连续给药8周后,用试剂盒检测各组大鼠血清空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI),并对各组大鼠胰腺组织进行苏木精-伊红(HE)染色以观察病理形态的改变。qRT-PCR和Western blot法检测大鼠胰腺组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI₃K)、磷酸肌醇依赖性激酶-1(PDK-1)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT) mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 复方降脂颗粒干预可显著降低T2DM大鼠血清中FBG、FINS的水平,同时上调ISI值(P＜0.05)。复方降脂颗粒组的大鼠胰腺组织损伤程度明显减轻,胰岛数目增多的同时伴随水肿变形程度减轻。复方降脂颗粒干预后,大鼠胰腺组中的PI₃K、PDK-1、pAKT mRNA和蛋白的表达均上调,显著高于模型组。结论 复方降脂颗粒能明显降低2型糖尿病大鼠血糖水平,改善胰岛素抵抗和胰腺损伤的情况,其机制可能与PI₃K/AKT通路的激活有关。     

来曲唑联合高脂膳食诱导PCOS-IR大鼠模型复制时间及其内分泌、代谢改变的实验研究*

目的 研究多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）大鼠理想模型复制时间及其内分泌、代谢等病理 改变。方法 对照组大鼠予普通饲料,每日灌胃羧甲基纤维素钠溶液;模型组大鼠予高脂饲料,每日灌胃来曲唑加羧甲基纤维素钠溶液。根据喂养时间,每组在第21、24、27及30天处死6只。观察两组大鼠的体重、卵巢体积和组织学变化、内分泌与代谢指标。检测大鼠空腹血糖（FBG）,ELISA法检测大鼠性激素水平、甘油三酯（TG）及空腹胰岛素（FINS）;计算卵巢指数、促卵泡激素（FSH）/黄体生成素（LH）比值及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）等。结果 模型组各时间点大鼠体重均高于对照组（P?<0.05）,其中第27和30天大鼠体重及Lee''s指数均高于第21天（P?<0.05）。肉眼可见模型组大鼠卵巢体积增大（P?<0.05）,卵巢表面可见较多密集的透明囊状扩张卵泡,镜下卵巢呈多囊样改变;模型组第30天大鼠的卵巢体积大于第21天（P?<0.05）。模型组各时间点大鼠血清TG、FSH/LH比值、T水平较对照组升高（P?<0.05）;模型组第27和30天大鼠血清FINS及HOMA-IR较同时间点对照组升高（P?<0.05）。结论 来曲唑联合高脂膳食连续喂养27 d可成功复制符合PCOS-IR病理特征及内分泌、代谢紊乱的大鼠模型。     

“痰瘀同治”方对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素抵抗的作用

目的研究"痰瘀同治"方对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素抵抗的作用。方法采用硫酸普拉睾酮钠注射联合高脂饲料喂养诱导的造模方法制备伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠模型,通过光镜计算卵巢排卵情况,测量空腹胰岛素(FINS)和血糖(FBG),并计算胰岛素敏感指数(ISI),采用放射免疫法测定性激素[血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)]的水平来评估"痰瘀同治"方对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素抵抗的影响。结果与对照组比较,模型组平均排卵数、排卵率及ISI、FSH均显著降低(P0.01),血清T,E2和LH含量均显著升高(P0.01),FBG,FINS显著升高,囊性扩张卵泡率显著增加(P0.05);与模型组比较,治疗组平均排卵数及排卵率显著增加,ISI显著升高,FINS显著降低(P0.01),血清T和E2含量均显著降低,FSH含量显著升高(P0.05)。结论 "痰瘀同治"方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征模型大鼠具有改善卵巢排卵障碍、增加胰岛素敏感性和降低性激素水平的作用。     

黄连素干预多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗的临床观察

【目的】探讨黄连素单药使用对多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗(IR)的临床疗效。【方法】将60例PCOS-IR患者随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组脱落4例,对照组脱落1例,最终治疗组26例、对照组29例完成试验。治疗组给予黄连素口服治疗,对照组给予二甲双胍口服治疗,2组疗程均为3个月。观察2组患者治疗前后体质量指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹血糖(FPG)及胰岛素(FINS)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的餐后2 h血糖(OGTT2h PG)及胰岛素(OGTT2h INS)、血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、性激素[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)及LH/FSH比值]等指标的变化情况。【结果】治疗后,2组均能降低PCOS-IR患者BMI、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平(P0.05或P0.01),但组间比较差异无统计学意义(P0.05);治疗组还能使PCOS-IR患者血中T及LH水平以及LH/FSH比值较治疗前及对照组显著下降,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。【结论】黄连素能改善PCOS-IR患者的HOMA-IR,降低血中性激素水平,调节血脂代谢,其疗效与二甲双胍相当。     

补肾益冲抗衰汤对卵巢储备功能下降大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响

[目的]观察补肾益冲抗衰汤对卵巢储备功能下降模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。[方法]以70只8周龄雌性SD大鼠为研究对象,采用雷公藤多苷片制作卵巢储备功能下降大鼠模型。观察大鼠一般情况、卵巢指数、卵巢组织病理形态、血清E2、FSH、FSH/LH水平及卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。[结果]补肾益冲抗衰汤能使卵巢储备功能下降大鼠动情周期缩短、子宫、卵巢重量增加,大鼠血清FSH水平、FSH/LH降低,血清E2水平增高（P〈0.05或P〈0.01）,使卵巢颗粒细胞抑制细胞凋亡因子Bcl-2蛋白表达增加,促进细胞凋亡因子Bax、Caspase-3蛋白表达减少（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]雷公藤多甙片致DOR大鼠模型与人类卵巢储备功能下降的临床表现基本一致。细胞凋亡调节因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与卵巢储备功能密切相关,补肾益冲抗衰汤有抑制卵巢颗粒细胞凋亡、减少卵泡闭锁从而改善卵巢储备功能的作用。     

基于P53/AMPK通路车前子醇提物对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用研究

目的 研究车前子醇提物对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用,并探讨其可能作用机制。方法 选取动情周期规律SD大鼠125只,取24只灌胃羧甲基纤维素钠(CMC-Na)设为对照组,其余101只灌胃来曲唑混悬液构建PCOS大鼠模型。建模成功的96只大鼠分为模型组(n=24)、3MA组(n=24)、低剂量组(n=24)和高剂量组(n=24)。对照组、模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,低、高剂量组按10、20mg/(kg·d)灌胃车前子醇提物,3MA组按10mg/(kg·d)灌胃自噬阻断剂3MA,连续14天。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E₂)水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察卵巢组织病变形态;流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞自噬率;蛋白质印迹法(Western blot法)检测微管结合蛋白轻链3(LC3)、抑癌基因p53、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清LH、T和FSH水平均升高,E₂水平下降;卵巢组织病变最明显;颗粒细胞自噬率升高;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK蛋白表达增加,p53和p-mTOR蛋白表达降低(P＜0.05)。与模型组比较,3MA组、低剂量组、高剂量组LH、T和FSH水平降低,E₂水平升高,卵巢组织病变减轻,颗粒细胞自噬率降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-AMPK蛋白表达降低,p53和p-mTOR蛋白表达升高(P＜0.05)。各组与模型组比较的指标变化中,3MA组的指标变化高于低剂量组,低于高剂量组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 车前子醇提物可调节PCOS大鼠内分泌代谢,可能与调控p53/AMPK信号通路,抑制颗粒细胞自噬有关。     

BDNF对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡的影响及作用机制。方法 45只大鼠留取10只为假手术组,35只建立非心源性缺血性脑卒中模型,建模成功31只,随机分为模型组10只、空载组10只、BDNF组11只。空载组、BDNF组分别向蛛网膜下腔注入含有pGenesiI-1-NC、pGenesiI-1-BDNF脂质体质粒复合物,模型组和假手术组注入0.9%氯化钠溶液。5 天后观察大鼠学习和记忆能力、海马组织病理形态变化及海马神经元细胞凋亡情况;检测海马组织中BDNF、酪氨酸受体激酶B(TrkB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI₃K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)mRNA及蛋白表达、p-AKT/AKT表达变化。结果 HE染色显示模型组、空载组神经元排列紊乱,出现变性神经元;BDNF组神经元损伤轻微。与假手术组比较,模型组、空载组、BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间均缩短,穿越平台次数均减少,海马神经元凋亡率均升高,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量,p-AKT/AKT均降低(P＜0.05);与模型组、空载组比较,BDNF组水迷宫实验逃避潜伏期、目标象限停留时间延长,穿越平台次数增加,海马神经元凋亡率降低,海马组织中BDNF、TrkB、PI₃K mRNA及蛋白相对表达量、p-AKT/AKT升高(P＜0.05)。结论 上调BDNF表达可减少非心源性缺血性脑卒中大鼠海马神经元细胞凋亡,其机制可能是通过激活PI₃K/AKT信号通路发挥保护作用。