慢病毒介导长链非编码RNA BACE2-IT1过表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 观察长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA) BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中的表达,分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞增殖和侵袭影响的作用机制。方法 实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测26例胃癌组织和5种胃癌细胞株中BACE2-IT1的表达。以BACE2-IT1表达最低的胃癌细胞株感染载有BACE2-IT1的慢病毒(实验组)和空载慢病毒(对照组)。通过CCK-8实验和Transwell侵袭实验分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞株增殖能力和侵袭能力的影响。qPCR和蛋白质印迹法(Western blot法)检测过表达BACE2-IT1后HECT家族E3泛素连接酶1(HACE1)的表达水平及Wnt/β-catenin信号通路的活化程度。结果 与癌旁组织比较,BACE2-IT1 在胃癌组织中呈低表达(P<0.01)。与永生化胃黏膜上皮细胞比较,BACE2-IT1在5种胃癌细胞株中呈低表达(P<0.05),在BGC-823细胞中的表达量最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组过表达BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的增殖能力(P<0.05)。对照组和实验组侵袭细胞数分别为87.82 ± 9.57和36.65 ± 5.78,BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的侵袭能力(P<0.01)。与对照组比较,BACE2-IT1过表达导致BGC-823细胞中HACE1 在mRNA和蛋白水平的表达上调(P<0.01)。Wnt/β-catenin信号通路的活化被抑制。结论 BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中均呈低表达,BACE2-IT1过表达能抑制胃癌BGC-823细胞的增殖能力和侵袭能力,其分子机制可能是促进HACE1蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

miR-200b靶向VEGF抑制肺癌细胞侵袭

目的 探讨miR-200b是否通过靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭,以揭示miR-200b的抑瘤机制。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在非小细胞肺癌和癌旁正常肺组织中的表达;将非小细胞肺癌A549细胞分为miR-200b mimics组、miR-200b inhibitors组、scramble组、VEGF-siRNA组和control-siRNA组,分别将miR-200b mimics、miR-200b inhibitors、scramble、VEGF-siRNA、control-siRNA转染于A549细胞;采用Western blot检测A549细胞中VEGF蛋白表达,采用Transwell侵袭实验分别检测A549细胞侵袭能力。结果qRT-PCR检测结果显示,miR-200b在A549、16HBE细胞的表达分别为0.704±0.053、1.582±0.071,两者比较,差异有显著性(P<0.01);Western blot结果显示,外源过表达miR-200b或沉默VEGF能明显下调A549细胞中VEGF蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验显示,转染miR-200b mimics或沉默VEGF 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(127±6)和(136±8),与对照组(189±14)比较能明显抑制A549细胞的穿膜能力(P<0.05),而转染miR-200b inhibitors可拮抗VEGF-siRNA对A549细胞的侵袭抑制作用。结论miR-200b通过靶向调控VEGF抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭。     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

SFRP1/FZD6抑制Wnt/β-catenin信号通路对A549肺癌细胞生物学行为的影响

目的研究分泌型frizzled相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)影响A549肺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对细胞增殖、克隆形成和迁移侵袭能力的影响。方法 q RT-PCR和western blot检测SFRP1在肺腺癌及癌旁组织中的表达。在A549细胞中通过质粒过表达SFRP1和用si RNA敲低FZD6的表达,采用q RT-PCR、western blot检测Wnt信号通路相关基因的表达水平变化。通过CCK-8、平板克隆形成、划痕实验以及transwell实验分别检测SFRP1/FZD6对A549细胞增殖、克隆形成、细胞迁移侵袭能力的影响。结果 SFRP1在肺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织(P0.05);过表达SFRP1显著抑制了A549肺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路,干扰受体FZD6的表达能够显著减弱SFRP1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效应。过表达SFRP1显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力等恶性表型,并且能够通过干扰FZD6被逆转。结论 SFRP1通过受体FZD6抑制A549肺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路活化,进而抑制细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。SFRP1/FZD6可能在肺癌进展中发挥重要作用,靶向SFRP1/FZD6有望成为研发治疗肺癌的重要靶点。     

MiR-4262经Kaiso-β-catenin途径抑制宫颈癌Hela细胞的增殖

分析miR-4262抑制宫颈癌细胞增殖的Kaiso-β-catenin机制。将miR-4262表达载体pGL3-miR-4262表达载体瞬时转染Hela宫颈癌细胞株作为miR-4262组,以未转染Hela细胞和转染pGL3空载体细胞分别作为空白组和阴性组,分析各组细胞的增殖情况,免疫印迹法分析各组细胞中细胞凋亡蛋白、Kaiso、β-catenin及Axin蛋白的表达。结果显示:与空白组和阴性组相比,miR-4262组细胞的抑制率明显升高(P<0.05),Bax和Caspase3表达明显升高而Bcl2表达明显降低(P<0.05),且Kaiso、β-catenin表达明显升高而Axin表达明显降低(P<0.05)。因此,miR-4262能明显抑制宫颈癌细胞的增殖,且其作用可能与调节Kaiso-β-catenin信号通路蛋白表达有关。     

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P＜0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.     

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨 miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果 卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染 miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。     

microRNA-224通过调节Bim影响人非小细胞肺癌的增殖与凋亡

目的:研究microRNA-224(miR-224)在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及对NSCLC细胞增殖能力和凋亡的影响?方法:采用荧光实时定量PCR(qPCR)检测20对NSCLC组织与癌旁组织中miR-224的表达量,以及miR-224在NSCLC细胞A549与正常肺支气管上皮细胞中的表达量,并计算差值;转染anti-miR-224至A549细胞,qPCR检测anti-miR-224的转染效率;四甲基偶氮唑盐(MTT)实验及克隆形成实验检测miR-224对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期及凋亡;荧光素酶报告实验证实miR-224与靶基因Bim的结合;qPCR及Western blot检测转染anti-miR-224后A549细胞中Bim的表达量?结果:与癌旁正常组织相比,miR-224在NSCLC组织及细胞中均显著高表达(P < 0.05);抑制miR-224能够显著抑制A549细胞的增殖能力并促进凋亡,并促进了Bim的表达?结论:miR-224在NSCLC中呈高表达,miR-224能够通过调控Bim抑制A549细胞的增殖能力并诱导凋亡?     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的 探讨微小RNA-28 (miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法 通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b (RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果 与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1...     

真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15在肺癌细胞中表达上调且通过miR-153-3p激活Wnt/β-catenin 通路调控A549细胞增殖、侵袭及化疗敏感性实验研究

目的:探讨真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15(lncRNA CASC15)调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的作用机制。方法:实时荧光定量PCR实验分析lncRNA CASC15、miR-153-3p在65例肺癌组织、50例癌旁组织、肺癌A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞中的差异表达。选取A549细胞进行培养,并将siRNA CASC15转染A549细胞,分析下调CASC15对A549细胞增殖和侵袭的影响,用不同浓度顺铂(0、2、4、8、16μg/ml)处理A549细胞后,检测细胞活力和凋亡率。miRcode预测lncRNA CASC15的潜在结合靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步分析与miR-153-3p之间的相关性。下调miR-153-3p或同时上调lncRNA CASC15和miR-153-3p表达,分析A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性情况。过表达或下调miR-153-3p,检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。XAV939作用细胞后进一步检测miR-153-3p对A549细胞的增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果:与癌旁正常组织或B...     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对粘附侵袭能力的影响

目的:研究热休克蛋白(HeatShockProtein,HSP)90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对该细胞粘附侵袭能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:体外培养ZR-75-30乳腺癌细胞株,以HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)作用处理;免疫印迹技术(Western-blot)检测GA处理前后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达情况;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对ZR-75-30细胞的增殖抑制作用;噻唑兰比色(MTT)法检测细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力变化;TranswellCham-ber法观察癌细胞侵袭、迁移能力的改变。结果:HSP90抑制剂GA对ZR-75-30细胞具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA作用后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中表达明显下降;HSP90抑制剂GA处理的乳腺癌细胞ZR-75-30的粘附率较未加GA的对照组下降明显(P<0.01);在GA未处理对照组侵袭、迁移实验穿膜细胞数分别为95.4±5.2,103±15.4与GA处理实验组穿膜细胞数46.2±4.9,52.4±8.4相比具有显著性差异(P<0.01)。结论:通过抑制HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达,GA能明显减弱乳腺癌细胞株ZR-75-30增殖粘附侵袭能力,HSP90与乳腺癌细胞增殖侵袭转移能力相关。     

MiR-203抑制食管鳞癌Eca109细胞的增殖及侵袭

目的探讨microRNA分子miR-203对食管鳞癌Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。方法根据人源miR-203序列,设计并合成其双链模拟物。通过脂质体转染将miR-203模拟物分子导入食管鳞癌Eca109细胞中,转染无关microRNA模拟物作为对照。测定2组细胞的细胞倍增时间、细胞凋亡率以及侵袭细胞率,观察miR-203对Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。结果Eca109细胞转染miR-203后其细胞倍增时间为(26.1±0.5) h,较对照组(24.2±0.6) h明显延长(P<0.01);其凋亡细胞比例较对照组增加\[(4.5±0.4)% vs (3.7±0.4)%,P<0.05\];Transwell小室侵袭实验显示转染miR-203模拟物后,该组的侵袭细胞率明显低于对照组\[(39.2±5.8)% vs (49.5±6.8)%,P<0.05\]。结论miR-203能抑制Eca109细胞的增殖和侵袭能力,提示miR-203可能是食管鳞癌生物治疗的潜在靶点。     

上调lncRNA CTA-246H3.12通过调节miR-515-5p 抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,研究上调CTA-246H3.12影响鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法 qPCR分别检测CTA-246H3.12在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取CTA-246H3.12表达量最低的细胞系,分别转染阴性质粒或表达CTA-246H3.12的质粒,定义为阴性对照组和CTA-246H3.12组。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测上调CTA-246H3.12对细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学方法预测CTA-246H3.12的靶基因。qPCR和Western blot法分别检测上调CTA-246H3.12对靶基因表达的影响。结果 与慢性鼻咽炎组织比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌组织表达下调(P<0.01)。与人永生化鼻咽上皮细胞比较,CTA-246H3.12在鼻咽癌细胞系表达下调(P<0.05),CTA-246H3.12在C666-1细胞中的表达量最低(P<0.01)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。CTA-246H3.12的靶基因可能是miR-515-5p,miR-515-5p的靶基因可能是尾侧型同源盒转录因子1(CDX1)。与阴性对照组比较,CTA-246H3.12组C666-1细胞中miR-515-5p表达显著降低(P<0.01),CDX1在mRNA和蛋白水平的表达显著增加。结论 CTA-246H3.12在鼻咽癌组织及细胞系中表达下调,上调CTA-246H3.12可明显抑制鼻咽癌C666-1细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是通过抑制miR-515-5p的表达,间接促进CDX1基因的表达。     

miR-3074通过靶向EPS8基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-3074在宫颈癌细胞系(SiHa、HCC94、C33A、HeLa)和正常宫颈上皮细胞H8中的表达。选取miR-3074表达最低的细胞系,分别转染对照模拟物(对照组)和miR-3074模拟物(miR-3074组)。CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活力和侵袭能力。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-3074的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3074与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3074对靶基因表达的影响。结果 miR-3074表达水平较高的宫颈癌患者总生存期长于miR-3074表达水平较低的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。与H8细胞比较,宫颈癌细胞系中miR-3074表达降低(P<0.05),miR-3074表达最低的细胞系是HCC94(P<0.01)。对照组和miR-3074组miR-3074表达分别为1.03±0.17和13.49±2.66,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组HCC94细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01)。miR-3074能作用于EPS8mRNA的3′非翻译区(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组EPS8基因表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-3074在宫颈癌细胞系中表达下调,miR-3074能够抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向抑制EPS8表达有关。     

miR-214-3P在卵巢癌中的表达及临床意义

目的 研究miR-214-3P在卵巢癌组织中的表达水平及其对卵巢癌细胞株A2780细胞的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 卵巢癌、良性卵巢肿瘤、正常卵巢组织样本取自徐州医科大学附属医院2018年10月~2020年6月行手术切除的患者。实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同卵巢组织样本miR-214-3P 的表达,分析miR-214-3P的相对表达量与临床病理之间的关系。随机将A2780细胞分为正常组(空白对照组)、阴性对照组(转染miR-214-3P-NC组)和抑制组(转染miR-214-3P-inhibitor组),qPCR检测各组细胞miR-214-3P的表达水平,采用CCK-8检测A2780细胞增殖情况,Transwell小室检测A2780细胞迁移和侵袭情况。结果 卵巢癌组织、良性卵巢肿瘤组织、正常卵巢组织中miR-214-3P相对表达量分别为5.18±1.91、2.03±0.48、1.41±0.24,卵巢癌组织中miR-214-3P相对表达水平较良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),而良性肿瘤组织与正常组织的miR-214-3P表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。卵巢癌组织miR-214-3P的表达水平与患者临床分期、病理分级以及是否发生淋巴结转移相关(P＜0.05),与年龄和病理类型无关(P＞0.05)。下调miR-214-3P表达可抑制卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论 miR-214-3P的高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关,抑制miR-214-3P表达可抑制卵巢癌的细胞的增殖、迁移和侵袭。故miR-214-3P的高表达应该引起相应的重视,以促进早期干预,为生物治疗提供新靶点,进而阻止病情的进一步发展。     

MiR-101通过靶向RAP1B调节上皮间质转化并抑制乳腺癌的侵袭和转移

【目的】 探讨微小RNA miR-101在乳腺癌细胞转移与侵袭中的功能及靶点。 【方法】 首先通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231、BT549和MDA-MB-4355细胞系中瞬时过表达miR-101模拟物,进而通过划痕实验、transwell迁移和侵袭实验来反映细胞运动能力的改变;然后应用荧光素酶报告基因分析技术和蛋白质印迹技术寻找并验证miR-101的靶基因。 【结果】 在功能学上miR-101的过表达可显著抑制MDA-MB-231、BT549和MDA-MB-4355细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);在线软件预测RAP1B和RAB5A是miR-101的潜在靶基因;荧光素酶报告基因分析初步证明RAP1B是miR-101的靶基因;蛋白质印迹从蛋白质水平进一步验证RAP1B是miR-101的靶基因。 【结论】 在乳腺癌中,miR-101可以通过靶向RAP1B抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-101作为一种特殊的基因调节因子,在乳腺癌的发生发展中起的重要作用之一。     

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01）,双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01）,向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。