miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中通过激活NF-κB信号通路加重心肌细胞损伤

目的探究miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中的作用。方法将大鼠原代心肌细胞分为对照组(NC)、LPS组、LPS+miR-199a mimic组、LPS+miR-199a inhibitor组。本实验采取CCK8方法探究miR-199a对于大鼠原代心肌的细胞活力影响。随后运用ELISA法检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的炎症因子如TNF-α及IL-1β的释放情况。通过流式细胞仪检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的凋亡蛋白变化。运用Western blot实验研究miR-199a模拟物或抑制剂的miR-199a表达情况以及研究miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的p-p65、p65和p-iκBa、iκBa及凋亡蛋白表达情况。结果 CCK8法发现与NC组相比,LPS抑制了大鼠原代心肌细胞的活力(P0.01),然而经模拟物处理后,经LPS诱导的大鼠原代心肌活力受抑制更加严重(P0.05)。同时,与模拟物组相比,miR-199a抑制剂组大鼠原代心肌细胞活力受抑制降低(P0.01)。ELISA结果表明,与NC组相比,LPS诱导了TNF-α及IL-1β的释放(P0.05)。与LPS组相比,miR-199a模拟物组加重了TNF-α(P0.01)及IL-1β(P0.05)的释放,而miR-199a抑制剂组TNF-α(P0.01)及IL-1β(P0.05)的释放减少。流式凋亡、Western blot结果表明,50 nmol/L的miR-199a模拟物可通过上调caspase3、bax表达和下调bcl2表达而加剧LPS引起的大鼠原代心肌细胞的凋亡(P0.05)。进一步检测NF-κΒ通路发现LPS可通过p-iκBa与p-p65表达的上调诱激活大鼠原代心肌细胞NF-κΒ通路,但与LPS组相比,在模拟物处理后,p-p65和p-iκBa上调更加明显。与此同时,阻断miR-199a后,与模拟物组相比,p-p65和p-iκBa表达下调。这些发现表明用模拟物处理可以加重体内LPS诱导的心肌炎中NF-κB信号传导途径的激活。进一步使用NF-κB通路抑制剂发现,miR-199a模拟物并不能加剧LPS对于大鼠原代心肌细胞的活力抑制,这进一步提示miR-199a可能通过NF-κB通路加剧心肌细胞的损伤。结论 miR-199a可加重心肌细胞的损伤,这种损伤主要通过NF-κB信号通路来实现的。     

升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB信号的影响

目的?研究升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)TLR4表达及其下游NF-κB信号通路的影响。方法?用不同浓度LPS（0、2、10?μg/mL）诱导NR8383细胞,采用Real-time PCR和Western Blotting分别检测TLR4的mRNA和蛋白表达水平。用带有NF-κB的质粒转染NR8383细胞,双荧光素酶报告基因检测NF-κB活性,Western Blotting检测磷酸化p65表达水平,Real-time PCR检测细胞因子TNF-α、A20、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。将升降散作用于LPS成功诱导NF-κB上调的NR8383细胞,Real-time PCR、Western Blotting、双荧光报告基因检测和ELISA实验检测升降散在NR8383细胞中对LPS诱导NF-κB信号通路的影响。结果?LPS成功诱导NR8383细胞中NF-κB上调,在蛋白表达和mRNA表达水平均证实,LPS能梯度诱导TLR4高表达,且与LPS浓度呈正相关;同时,LPS能够诱导TLR4下游NF-κB的激活,增加下游靶基因编码细胞因子的合成与分泌,且与LPS浓度呈正相关。10?μg/mL升降散作用NR8383细胞后,能抑制LPS诱导TLR4的高表达和下游NF-κB的激活。结论?LPS能梯度诱导NR8383细胞中TLR4的高表达及其下游NF-κB的激活,升降散能够显著抑制该诱导作用。      

FGD5-AS1/miR-519d-3p轴调控高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2炎症因子表达和细胞凋亡

目的：探讨FGD5-AS1对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达、细胞凋亡的影响及其机制。方法：25 mmol/L葡萄糖诱导HK-2细胞24 h后,RT-qPCR检测细胞中FGD5-AS1和miR-519d-3p表达量。分别转染FGD5-AS1过表达载体(pcDNA-FGD5-AS1)、miR-519d-3p抑制剂或共转染pcDNA-FGD5-AS1与miR-519d-3p模拟物至HK-2细胞,用25 mmol/L葡萄糖诱导转染后的细胞24 h, ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6水平,流式细胞术、Western blotting分别检测细胞凋亡率及凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9的表达。双荧光素酶报告基因实验验证FGD5-AS1和miR-519d-3p的调控关系。结果：与对照组比较,HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中FGD5-AS1表达量明显降低(P<0.01),miR-519d-3p表达水平明显升高(P<0.01)。上调FGD5-AS1或下调miR-5...     

蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、 迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)的增殖、迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响和机制研究。方法 CCK-8检测蒲公英甾醇的毒性;ELISA法检测MH7A细胞中炎性介质的分泌水平;EDU检测MH7A细胞的增殖能力;Transwell法检测MH7A细胞的迁移能力;细胞流式术检测MH7A细胞的凋亡能力;Western blot法检测MH7A细胞中TLR4、p-NF-κB p65和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果 蒲公英甾醇的最佳作用浓度为5、10、15μg/ml;经LPS诱导后,蒲公英甾醇对MH7A细胞炎性因子的分泌量有抑制作用(P<0.05);与LPS组比较,不同浓度的蒲公英甾醇使MH7A细胞的增殖能力和迁移能力下降,凋亡率提高(P均<0.05);Western blot法检测结果显示,与LPS组比较,不同浓度蒲公甾醇使TLR4蛋白表达降低,NF-κB p65的磷酸化程度降低(P均<0.05)。结论 蒲公英甾醇能降低MH7A细胞的增殖能力、迁移能力并诱导其凋亡,可能与其降低TLR4和NF-κB p65的磷酸化程度有关。     

阿托伐他汀对脂多糖诱导小鼠胰岛β细胞NF-κB、TLR4表达与胰岛素分泌的影响

目的:研究阿托伐他汀对脂多糖诱导小鼠胰岛 β 细胞活力,核转录因子(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)表达与胰岛素分泌影响的机制.方法:MTT测定细胞活性,ELISA检测胰岛素浓度,Western blotting检测NF-κB、TLR4蛋白水平.结果:与对照组相比,LPS干预24h后,MIN6细胞活力、胰岛素分泌功能下降,TLR4、NF-κB蛋白水平上调.与LPS组相比,LPS+阿托伐他汀各浓度组干预24h后细胞活力呈浓度依赖性增加.LPS+阿托伐他汀高浓度组较LPS组胰岛素分泌水平增加.LPS+阿托伐他汀中、高浓度组TLR4、NF-κB蛋白水平较LPS组呈浓度依赖性下调.结论:阿托伐他汀可逆转LPS诱导MIN6损伤并与TLR4/NF-κB通路的激活有关.     

槲皮素对LPS刺激肺上皮细胞核转录因子NF-κB表达的影响

目的研究槲皮素对肺上皮细胞株(A549细胞)不同时段表达核转录因子(NF-κB)的影响。方法用LPS建立体外A549细胞损伤模型,用免疫印迹法(Western Blot)观察不同时间A549细胞核转录因子NF-κB的表达。结果A549细胞在LPS刺激下,NF-κB表达水平逐渐升高,呈现出一定的时间依赖性,而槲皮素能显著抑制其表达。结论NF-κB是炎症反应中重要的核转录蛋白,参与一系列炎症介质的表达。因此,槲皮素抑制LPS诱导A549细胞产生NF-κB,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。     

三氧化二砷逆转A549细胞对TRAIL耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)逆转人非小细胞肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药的机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(仅加入DMEM)及实验组,实验组又分为As2O3组(1μmol/LAs2O3处理)、TRAIL组(100μg/L TRAIL处理)及联合组(1μmol/L As2O3、100μg/L TRAIL联合处理)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549细胞核因子kappa B(NF-κB)、caspase-3、survivin mRNA的表达。结果作用24、48、72h后,联合组A549细胞的增殖抑制明显增强(P<0.05),且呈时间依赖性。As2O3、TRAIL联合作用48h可明显下调NF-κB、survivin mRNA,上调caspase-3mRNA的表达。结论 As2O3通过NF-κB通路下调survivin,上调caspase-3,从而增强TRAIL诱导A549细胞的凋亡。     

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。     

罗格列酮与顺铂联合应用诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用机制

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人肺癌细胞株A549体外生长的影响,探讨其可能机制.方法 体外培养A549细胞;通过Western blot检测药物处理前后细胞内PPARγ,NF-κB,Bax,Bcl-2蛋白表达的变化.结果 RSG能够显著上调A549细胞中PPARγ蛋白的表达,增强CDDP诱导A549细胞的凋亡作用.RSG(1.25 μmol/L)分别与不同浓度的CDDP合用后,A549细胞的PPARγ蛋白核内表达上调,抑制NF-κB表达,下调Bcl-2并且上调Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比值,(P＜0.01);加入PPARγ特异拮抗剂GW9662(2.0 μmol/L)后,能够阻断PPARγ对NF-κB的抑制效应以及上调Bax和下调Bcl-2的作用(P＜0.05).结论 罗格列酮与顺铂合用能诱导肺癌A549细胞调亡,呈明显的时间及剂量依赖性.RSG可通过激活PPARγ受体使其表达上调,进而抑制NF-κB、Bcl-2蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值,从而降低A549细胞的凋亡抗性,增强CDDP对A549细胞的诱导凋亡作用.     

三氧化二砷通过抑制NF-κB增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用研究

【摘要】 目的 研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对核转录因子-kappaB(NF-κB)表达的影响。方法 采用As2O3、TRAIL单用和联合作用于体外培养的A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝比色法测细胞增殖抑制率和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)检测NF-κB的活性。结果 As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强(P<0.05);联合用药组诱导凋亡作用强于单药组(P<0.05);联合用药组明显抑制NF-κB表达,并抑制其活性(P<0.05)。NF-κB mRNA、蛋白及其活性与细胞凋亡率呈负相关（P均<0.05）。结论 As2O3可能通过NF-κB通路,增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用。     

下调paralemmin-3表达对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞核转录因子-κB活性的影响

目的 研究下调paralemmin-3(PALM3)表达对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮A549细胞核转录因子-κB (NF-κB)活性的影响.方法 将针对PALM3的小干扰核糖核苷酸(siRNA)转染A549细胞后(PALM3siRNA转染组),用RT-PCR法检测PALM3 mRNA表达水平,同时设立control siRNA转染组及正常细胞组作为对照.转染48 h后,对3组细胞同时给予LPS刺激12 h后,收集细胞核蛋白和培养上清液,用ELISA的方法检测各组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-6和IL-1β水平,用凝胶电泳迁移率实验的方法检测各组细胞NF-κB活性.结果 特异性siRNA转染后成功下调PALM3在A549细胞中的表达;给予LPS刺激后,与正常细胞组及control siRNA转染组相比,PALM3 siRNA转染组细胞释放炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β减少,同时PALM3 siRNA转染组细胞中NF-κB活性受抑.结论 下调PALM3的表达可减轻A549细胞对LPS诱导的炎症反应,调控PALM3的表达有望成为治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征等炎症失控性疾病的新靶点.     

NF-κB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以肿瘤坏死因子α（TNF-α,10 ng/mL）刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子κB（NF-κB）p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）浓度,MTT法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高（P〈0.05）。结论 NF-κB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-κB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤。     

TLR4在脂多糖诱导肾小管上皮细胞MAPK信号通路中的作用及其机制

目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用及其可能的分子机制。方法:雄性SD大鼠8只,随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),各4只。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒血症动物模型,Sham组除不行盲肠结扎穿孔外,其余处理同脓毒血症组,造模后24h处死大鼠取肾组织。体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),以1μg/ml LPS刺激不同时间(5,15,30,60min),采用免疫荧光、Western blot法检测大鼠肾组织及肾小管上皮细胞TLR4的表达及分布,Western blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(包含p38、JNK两条主要通路)及Iκ-B磷酸化情况。TLR4抑制剂TAK-242(5mol/L)及MAPK通路抑制剂SB202190(10μmol/L)、SP600125(25μmol/L)预处理NRK-52E后,分别检测TLR4蛋白表达、MAPK信号蛋白及I-κB磷酸化水平。结果:1免疫荧光结果显示TLR4主要表达在大鼠肾小管上皮细胞;正常肾小管上皮细胞TLR4主要分布于细胞质。2Western blot结果显示随LPS刺激时间的增加,肾小管上皮细胞TLR4表达显著升高(P<0.05)。3NRK-52E细胞在受到LPS刺激后其p38、JNK MAPK蛋白及I-κB蛋白磷酸化水平增加(P<0.05)。4TLR4抑制剂预处理NRK-52E细胞,可显著降低LPS诱导的p38、JNK MAPK信号通路活化及I-κB磷酸化水平(P<0.05)。5SB202190、SP600125分别预处理NRK-52E细胞,均可显著降低LPS诱导的I-κB磷酸化(P<0.05)。结论:TLR4通过p38、JNK MAPK信号通路介导LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应。     

脂多糖对B细胞的活化作用及机制的初步研究

目的观察TLR4配体脂多糖(LPS)对B细胞功能影响及相关的信号转导通路。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,体外用LPS刺激后,CBA(cytometric bead array)法检测B细胞分泌的Ig(immunoglobulin)亚型;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表型;CBA法检测培养上清中细胞因子IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF浓度。利用ERK、JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞内细胞因子分泌的信号转导通路。结果 LPS可以诱导B细胞产生IgG1-κ和IgM-κ抗体,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHCⅡ类分子的表达,促进IL-6、IL-10和TNF的高分泌。JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导通路调控B细胞IL-6、IL-10和TNF的分泌。结论 LPS可以通过诱导抗体产生、上调共刺激分子表达和促进细胞因子分泌等多方面调节B细胞功能。     

紫堇灵的分离制备及抗炎活性

旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵,从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制。以80%乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵,UPLC、MS、¹H NMR、¹³C NMR等方法进行纯度及结构鉴定;利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性;采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,用紫堇灵进行干预,以Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TLR2、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平;进而通过实时荧光定量PCR、Western blot技术分别检测p65 mRNA及细胞核p65表达情况。实验发现,在LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型中,5~40 μmol/L紫堇灵呈正相关下调RAW264.7细胞中TLR4、TLR2蛋白的表达水平,抑制IκBα磷酸化并从基因水平和蛋白水平抑制p65转位入核。结果表明,紫堇灵可能是通过TLRs/NF-κB信号通路发挥对LPS致RAW264.7细胞炎症的抑制作用。     

miR-519d-3p调控TLR4抑制脂多糖所致THP-1源性巨噬细胞炎症的机制研究

目的 探究miR-519d-3p在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症中的作用和分子机制.方法 用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应作为后续实验的细胞模型,应用荧光定量PCR检测miR-519d-3p表达;利用antago-miR-519d-3p及antago-NC或者miR-519d-3...     

葛根素上调miR-155-3p降低内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的 研究葛根素对内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症因子及miR-155-3p表达的影响;方法 采用visfatin干预HUVEC建立细胞损伤模型,不同浓度（0.5,1.0,2.0 g/L葛根素分别干预细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA法检测细胞内CRP和NF-κB的水平,RT-PCR法检测细胞内miR-155-3p水平,western blotting测髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, MyD88)蛋白水平;结果 visfatin能显著抑制HUVEC增殖,并且诱导其凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,葛根素中、高浓度组可明显抑制visfatin对HUVEC细胞损伤作用;此外,葛根素中、高浓度组能显著降低细胞上清CRP 和NF-κB水平,增加细胞内miR-155-3p基因表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）。增加miR-155-3p水平可显著降低下游MyD88蛋白表达,抑制HUVEC分泌CRP 与NF-κB,与模型组相比差异显著（P<0.05）。 结论 葛根素能显著减轻visfatin诱导HUVEC炎症损伤效应,其机制可能与葛根素上调miR-155-3p水平抑制靶基因MyD88蛋白表达,从而降低细胞内CRP与NF-κB水平有关。     

呼吸道合胞病毒诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:通过呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺Ⅱ型腺上皮癌细胞(A549)及人肺成纤维细胞(IMR-90)后核转录因子(NF-κB)变化,探讨RSV诱导肿瘤细胞凋亡机制,为临床肿瘤治疗提供新方向。方法:RSV以感染复数(MOI)3感染A549及IMR-90细胞,观察感染后24,48,72h细胞形态变化、细胞存活率及细胞内病毒滴度,Western-blot方法检测Caspase-3,8,9蛋白表达变化,并在RSV感染A549细胞后2,4,8,24,36h,采用Western-blot方法检测NF-κB蛋白表达变化。结果:RSV感染A549及IMR-90细胞后,A549细胞存活率较IMR-90低,细胞内病毒滴度较IMR-90高,差异有统计学意义(P<0.05),细胞呈现明显凋亡改变。Caspase-3,8,9呈时间依赖性增强,以Caspase-3,9表达为主。A549细胞内NF-κB表达8h内先增高并达高峰,24h开始下降,36h表达明显下调,与未感染RSV细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:RSV可通过内源性及外源性途径引起A549细胞凋亡,以NF-κB介导的内源性途径为主。     

溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p、肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法将肺癌A549细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579组。CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率。qRT-PCR检测circ_0091579和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0091579和miR-515-5p相互作用。 结果溪黄草显著降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调及circ_0091579下调,且呈质量浓度依赖性。下调circ_0091579可降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调。上调circ_0091579可逆转溪黄草对A549细胞的增殖抑制和凋亡促进功能。circ_0091579和miR-515-5p直接特异性结合。 结论溪黄草可抑制肺癌细胞A549增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关。     

呼吸道合胞病毒诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:通过呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺Ⅱ型腺上皮癌细胞(A549)及人肺成纤维细胞(IMR-90)后核转录因子(NF-κB)变化,探讨RSV诱导肿瘤细胞凋亡机制,为临床肿瘤治疗提供新方向。方法:RSV以感染复数(MOI)3感染A549及IMR-90细胞,观察感染后24,48,72h细胞形态变化、细胞存活率及细胞内病毒滴度,Western-blot方法检测Caspase-3,8,9蛋白表达变化,并在RSV感染A549细胞后2,4,8,24,36h,采用Western-blot方法检测NF-κB蛋白表达变化。结果:RSV感染A549及IMR-90细胞后,A549细胞存活率较IMR-90低,细胞内病毒滴度较IMR-90高,差异有统计学意义(P<0.05),细胞呈现明显凋亡改变。Caspase-3,8,9呈时间依赖性增强,以Caspase-3,9表达为主。A549细胞内NF-κB表达8h内先增高并达高峰,24h开始下降,36h表达明显下调,与未感染RSV细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:RSV可通过内源性及外源性途径引起A549细胞凋亡,以NF-κB介导的内源性途径为主。