宫颈上皮肉瘤样病变杂合性丢失和微卫星不稳定性研究进展

宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)是一组与浸润癌密切相关的癌前期病变，包括宫颈癌前期病变和原位癌，反映了宫颈癌(CC)连续发展的过程，即由宫颈不典型增生(轻→中→重)→原位癌→早期浸润癌→浸润癌的一系列病理变化。近年来随着分子生物学技术的飞速发展，已认识到癌基因及抑癌基因的异     

FHIT基因杂合性丢失及微卫星不稳定性与宫颈癌发生发展的关系

目的探讨FHIT基因杂合性丢失(LOH)及微卫星不稳定性(MI)在宫颈癌发生发展中的作用。方法选择FHIT基因的两个微卫星多态标记对60例浸润性宫颈癌及35例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织进行LOH和MI检测。结果在D3S1234和D3S1300座位上,浸润性宫颈癌的LOH发生率分别为45.0%(27/60)、38.3%(23/60),MI频率分别为18.3%(11/60)、11.7%(7/60)。CIN的LOH频率分别为42.9%(15/35)、37.1%(13/35)。MI频率分别为11.4%(4/35)、8.6%(3/35)。宫颈癌及CIN在两个位点的LOH和MI无统计学差异(P>0.05);两位点的LOH阳性率在宫颈癌组织高中分化与低分化之间有统计学差异(P<0.05);双座位的LOH及MI在宫颈癌有无淋巴结转移间有统计学差异(P<0.05);高级别CIN(CIN及原位癌)患者的LOH和MI的发生率高于低级别CIN(CIN、)。结论FHIT基因的改变是CIN发生过程中的较晚期事件;FHIT基因的LOH对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。     

宫颈上皮内瘤样病变3p14杂合性丢失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域D3S1300、D3S1600LOH及MSI与宫颈上皮内瘤样病变病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点，显微分离提取42例宫颈上皮内瘤样病变石蜡切片中的正常组织和病变组织。经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色，进行LOH及MSI研究。结果42例样本中有21例至少存在一个位点的LOH，D3S1300位点LOH的频率为29％，D3S1600位点LOH的频率为26％，MSI发生频率相对较低，D3S1300的MSI频率为5．3％，D3S1600的MSI频率为7．7％。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与病理分级呈正相关（CMNX2=7．773，P〈0．05）。而MSI与之无相关性（CMNX2=1．432，P〉0.05）．结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH，提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈上皮内瘤样病变发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域LOH与病理分级成正相关，提示检测该区域的LOH可作为病变进展及预后的重要参考指标。     

胃癌患者6号染色体长臂遗传不稳定性

目的研究中国人胃癌6号染色体长臂微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）状况及与临床病理特征之间的联系。方法采用PCR-SSLP-银染方法对27例胃癌组织及其相应正常组织6号染色体长臂（6q）不同位置的4个位点进行MSI和LOH检测。结果27例信息个体中16例检测到一个或多个位点MSI,平均MSI频率59．2％;11例不具MSI的信息个体中7例存在1个或更多位点LOH,平均频率63．6％。MSI和LOH频发位点均为D6S434（6q16．3-q21）和D6S404（6q16．3-q23）。MSI和LOH在高分化胃癌和低分化胃癌各个时期均有发生．但高分化胃癌中高水平MSI（MSI-H）发生有增高趋势。结论MSI和LOH发生率与年龄、性别、组织分化程度、病理分期及发病部位等临床指标虽然无明显相关,但6q等位基因缺失关键区域与其它国家、地区相似,进一步证实6q上该区可能存在与胃癌相关的肿瘤抑制基因。     

应用微卫星多态标记进行大肠癌中5q21—q22杂合性丢失的初…

应用ＡＰＣ基因下游４０Ｋｂ处的微卫星多态标记Ｄ５Ｓ３４６，检测３０例大肠癌组织ＤＮＡ，在可提供信息的１５例杂合子中检出５例５ｑ２１－ｑ２２的杂合性丢失，占３３％。提示ＡＰＣ基因缺失也是中国人大肠癌的遗传改变之一     

胃癌FHIT基因杂合性缺失及微卫星不稳定性的研究

目的：检测胃癌FHIT基因的杂舍性缺失（LOH）和微卫星不稳定性（MSI），探讨其与胃癌临床病理特征的关系。方法：从染色体3p14：2选取4个微卫星标记，PCR方法检测50例胃癌和远端正常胃黏膜组织FHIT基因的LOH和MSI。结果：胃癌组织中FHIT基因LOH和MSI发生的平均频率分别为32．4％和26．4％。LOH和MSI与胃癌的Bormann分型、组织学类型、Laurcn分型均无显著相关。LOH阳性率胃癌穿透浆膜组显著高于未穿透浆膜组（P〈0．05）。MSI阳性率无淋巴结转移组显著高于有淋巴结转移组（P〈0.05）。结论：FHIT基因的MSI参与胃癌发生的早期阶段，LOH对胃癌的发展演变起重要作用。     

肺增生病变FHIT基因微卫星不稳定和杂合性丢失的研究

OBJECTIVE: To ascertain weather there is any difference in the hyperplastic lesions in the bronchial endothelia between patients with lung cancer and those with pneumonia, so as to find reliable molecular marker for early diagnosis of "genuine" preneoplastic lesions. METHODS: With PCR-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis and silver-staining, 82 specimens of bronchial hyperplastic lesions obtained from patients with squamous cell carcinoma (SCC) and 57 matched epithelial lesion specimens obtained from patients with pneumonia were examined for loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MI) of fragile histidine triad (FHIT) gene. RESULTS: Allelic losses of FHIT were common in hyperplastic lesions from patients with SCC, and the frequencies of LOH and MI of the 4 microsatellite sites, D3S1234, D3S1300, D3S1481, and D3S1313 were significant higher in hyperplastic lesions from SCC patients than in those from pneumonia patients (P<0.01). The frequencies of LOH and MI of FHIT gene in cancerous and noncancerous squamous metaplasia were 54%(7/13) and 12%(2/16) respectively, and were 70%(7/10) and 18%(2/8) respectively in cancerous and noncancerous mild to moderate dysplastic lesions. No significant difference was observed between the frequencies of D3S1234, D3S1300, D3S1481, and D3S1313 in cancerous hyperplastic lesions, which were 41%(34/82), 37%(30/82), 38%(31/82), 34(28/82), respectively (P>0.05). CONCLUSION: Hyperplastic lesions showed higher frequency of LOH at the 4 microsatellite sites than MI (P<0.01). The fact that LOH of FHIT is prevalent in hyperplastic lesions in SCC patients but rare in pneumonic patients indicates the significant difference between cancerous and noncancerous hyperplastic lesions. LOH of FHIT may be an early event in the development of squamous cell carcinoma in the lungs and is crucial in the early stage of carcinogenesis, validating the use of FHIT as a molecular marker to identify "genuine" preneoplastic lesions.     

国人9号和17号染色体膀胱移行细胞癌相关微卫星位点的杂合性丢失

目的 探讨国人9号和17号染色体微卫星位点的杂合性丢失(LOH)与膀胱移行细胞癌(TCC)发生、发展的关系。方法 选取微卫星位点D9S156、D9S157、D17S786和TP53，对24例TCC组织和外周静脉血提取的DNA用特异引物进行PCR扩增，扩增产物进行6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染，并进行LOH分析。结果 至少有1个位点出现LOH的TCC组织为58．3％(14／24)，同一组织2个位点同时出现LOH的肿瘤为12．5％(3／24)。X^2检验和Fisher精确概率检验(P＞O．05)，4个位点LOH的发生在浅表性和浸润性TCC之间无显著性差异。结论 国人9号染色体上肿瘤抑制基因(TSG)的失活与TCC的发生有关，与TCC的浸润性生长无关。17号染色体上TSG的失活可能与TCC的浸润性生长有关。     

胃癌中转化生长因子-βRⅡ、胰岛素样生长因子-ⅡR、Bax基因突变与微卫星不稳定性相关性研究

目的：检测胃癌组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(IGV-ⅡR)和Bax基因突变与微卫星不稳定性(MSI)发生情况，探讨其相关性以及MSI在胃癌发生发展中可能的作用机制。方法：胃镜下取36例胃癌标本，酚与氯仿法抽提基因组DNA，银染PCR-SSCP方法同时检测目的位点。结果：胃癌组织中TGF-βRⅡ、IGF-HR和Bax基因发生突变分别有7例、6例和6例，MSI发生率达58．3％，3种基因突变均见于MSI阳性的胃癌，尤其是MSI-H型胃癌。结论：MSI可通过引起靶基因突变，特别是部分抑癌基因突变，促进了部分胃癌的发生发展；     

肺增生病变FHIT基因微卫星不稳定和杂合性丢失的研究

目的检测FHIT基因在肺癌支气管上皮增生病变和肺炎支气管上皮增生病变是否存在差异,试图确定发生“真正癌变”的癌前病变,为肺癌前病变的风险性预测提供实验依据。方法采用聚合酶链反应银染技术结合二核苷酸(CA)n重复序列出现多态性,评价杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定(MI)。分析82例肺癌增生病变和57例肺炎增生病变的FHIT基因微卫星位点的LOH和MI现象。结果联合检测微卫星位点D3S1234、D3S1300、D3S1481、D3S1313的FHIT基因阳性率(LOH和MI总发生率),在肺癌组的各级增生病变均明显大于肺炎组的相应各级增生病变,有显著性差异(P<0.01)。肺癌组基底细胞增生、鳞状上皮化生、轻-中度不典型增生FHIT阳性率分别为33%(4/12) 、54%(7/13)、70%(7/10);肺炎组相应增生病变分别为7%(1/14)、12%(2/16)、18%(2/11)。在肺癌组,4个位点的FHIT阳性率比较,分别为41%(34/82)、37%(30/82)、38%(31/82)、34(28/82),无显著性差异(P>0.05)。4个微卫星位点在肺癌增生组的LOH发生率均明显大于MI发生率(P<0.01)。结论FHIT基因的LOH现象普遍存在于癌旁支气管上皮各级增生病变中,明显高于肺炎支气管上皮增生病变,表明肺癌前病变确实存在差异。此结果为FHIT基因作为判断“真正癌前病变”的检测指标提供了实验依据。     

中国人喉鳞癌染色体9p21.3-23区域LOH分析

目的：分析染色体9p21.3-23区域等位基因杂合性缺失（loss of heterozygosity,OLH)情况，确定其在中国人喉鳞癌中发生频率和最小缺失区域，为定位克隆喉鳞癌相关抑癌基因提供线索。方法：应用9个微卫星多态性标记对24例喉鳞癌组织及其对应的正常远端肺组织进行了同位素标记的聚合酶链反应和变性凝胶电泳，并探讨各位点LOH与病理分级和病理分期的关系。结果：24例喉鳞癌组织中，共有23例（95.83%)存在至少一个位点的LOH，丢失频率最高的位点位于9p22-23的D9S1782（100%）其次是位于9p22-23的D9S162（85.71%)。结论：在9p21.3-23区域可能存在两个或两个以上的与喉鳞癌发生相关的候选抑癌基因，分别位于9p22-23的D9S1782和D9S162附近。     

食管鳞状细胞癌染色体13q11-12杂合性丢失

目的分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)在13号染色体长臂11-12区(13q11-12)上的等位基因杂合性丢失(LOH),以期寻找13q11-12区上可能存在的与食管鳞状细胞癌有关肿瘤抑制基因的缺失区域。方法用9个位于13q11-12区的微卫星标志物,对56例ESCC患者组织切片激光显微切割后,进行PCR-LOH分析;56例ESCC患者包括34例有上消化道癌家族史,22例无上消化道癌家族史。结果56例ESCC患者中,49例(87.5%)显示一个或更多位点LOH;并发现一个LOH高频率区,位于位点D13S787和D13S221之间,物理距离仅有1.83 Mb;在位点D13S1236有上消化道癌家族史组LOH为89%,明显高于无上消化道癌家族史组53%(P=0.031<0.05),差异有显著性意义。结论研究提示染色体13q11-12的LOH可能在食管癌发生、发展中起重要作用;在染色体13q11-12区上,可能存在一个或多个与ESCC发生发展有关的肿瘤抑制基因(TSG)。     

散发性结直肠癌3号染色体等位基因杂合缺失

目的 了解散发性结直肠癌（SCRC）3号染色体等位基因杂合缺失（LOH）发生情况。探讨其与临床病理特征间的关系,并对3号染色体上可能的SCRC相关基因进行初步定位。方法 用覆盖3号染色体的13个微卫星标记对83例散发性结直肠癌进行LOH扫描分析。结果 3号染色体至少有两个位点发生LOH者占39%（29/74）,3p所选4个位点中至少有一个发生LOH者占37%（27/74）,3q所选9个位点中至少有一个发生LOH者占53%（39/74）。整条染色体上以D3S1300（3q14.2)位点LOH率最高,达54%（23/43）。3qLOH在远端结直肠癌较近端高发,3q及D3S1300LOH阳性肿瘤多表现为浸润型生长和局部侵犯,并多发于大于50岁的老年患者。结论 3号染色体存在散在分布及区域性高频等位基因LOH,并与SCRC临床病理资料相关,提示其上SCRC相关基因的存在。高频LOH位点D3S1300的发现,提示3p14.2附近区域的FHIT基因可能作为肿瘤抑制基因在结直肠癌的发生发展中发挥作用。     

乳腺癌3p染色体微卫星杂合性缺失与血管生成

目的探讨乳腺癌染色体3p区域微卫星杂合性缺失(LOH)与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及临床病理特征之间的关系。方法选取乳腺浸润性导管癌病例石蜡组织切块40例。运用激光显微切割技术留取组织中导管癌及正常乳腺细胞,应用毛细管电泳测序技术进行4个微卫星位点的LOH检测。应用免疫组织化学技术SP法检测CD34、VEGF和Her2的表达,分析LOH与乳腺癌临床病理参数的关系。结果 40例乳腺癌患者中D3S1038的LOH发生率为20%(8/40),D3S1295的LOH发生率为37.5%(15/40),D3S1581的LOH发生率为17.5%(7/40),D3S3118的LOH发生率为5%(2/40)。LOH与VEGF的表达呈正相关(r=0.658 0,P<0.01),LOH和MVD也呈正相关(r=0.804 9,P<0.01)。LOH发生率与Her2表达(r=0.539 4)、组织学分级(r=0.497 2)、淋巴结转移(r=0.506 4)、TNM分期(r=0.596 0)均有相关性(均P<0.01)。结论乳腺癌染色体3p微卫星位点LOH与血管生成具有相关性,抑癌基因失活并通过对血管生成的影响可能为肿瘤生长与转移提供了条件;同时检测染色体3p微卫星位点LOH与血管生成情况,可能有助于更全面地了解乳腺癌的生物学特性。     

肾细胞癌中染色体3p、9p、14q微卫星不稳定及杂合性缺失分析

目的:探讨肾细胞癌患者的微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH)的发生频率,并同时研究染色体微卫星变异与肾细胞癌临床病理特征之间的关系.方法:选取位于染色体3p、9p、14q上的共计12个微卫星多态性标记,采用PCR-中性聚丙烯酰胺凝胶电泳-EB染色和测序的方法对31例肾细胞癌患者的原发病灶和配对的转移病灶进行MSI和LOH分析.结果:MSI发生频率可达61.3%,LOH频率可达54.8%,其中以D9S168的MSI发生率最高为32.3%,LOH发生率最高的为D3S1289,达21.4%.经统计学检验结果显示,MSI的发生频率与肾细胞癌的TNM分期具有相关性(P<0.05),但MSI和LOH与肾细胞癌患者的性别、年龄和病理类型以及转移均无关(P>0.05).结论:除D3S1566外的11个微卫星标记的MSI和LOH可能是一个增加肾癌易感性的危险因素,D9S168、D3S1289是肾细胞癌中敏感的检测位点,在D9S168和D3S1289附近可能存在与肾细胞癌有关的癌基因/抑癌基因,从而影响肾癌的发生和发展.     

食管癌3p24等位基因LOH及其扩增产物克隆的研究

目的；研究3p24EAβMD位点与食管癌的关系。为寻找该位点附近可能存在的抑癌基因奠定基础。方法：采用PCR—RFLP法检测45例食管癌患者3p24位点杂合缺失情况。并对该片段进行克隆。结果：在22例食管癌信息个体中共检出9例杂合缺失。并通过序列分析可知变化为点突变。结论：3p24EAβMD较高的杂合缺失率显示该位点附近可能存在潜在的抑癌基因。     

胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失的精细定位

目的 精细定位胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失及其常见缺失区域,并初步探讨1q21等位基因杂合性缺失在胃癌发生发展中的作用.方法 采用1q21区域7个高密度微卫星多态性标志结合PCR技术.精细分析了30例配对新鲜胃癌手术标本中胃癌染色体等位基因杂合性缺失的情况,利用X2检验和四格表确切概率法初步探讨了1q21等位基因杂合性缺失与胃癌临床特征的关系.结果 30例胃癌标本中,有18例存在等位基因杂合性缺失,占60%(18/30),7个微卫星位点D1S514、D1S2696、D1S498、D1S305、D1S2624、D1S2635和D1S2707的杂合性缺失频率分别为13.3%、10%、20%、23.3%、33.3%、40%和23.3%.常见高频率杂合性缺失区域位于D1S2624-D1S2707之间,即共同缺失区在D1S2635附近;胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与病人的年龄、性别、胃癌原发灶的部位、癌细胞分化程度及临床分期比较差异没有湿著性意义(P>0.05);但是,胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与胃癌有无淋巴结转移比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 胃癌细胞染色体1q21存在较高频率的等位基因杂合性缺失,D1S2635附近可能存在与胃癌发生密切相关的肿瘤抑制基因.     

尿脱落细胞6号染色体长臂的微卫星改变诊断膀胱肿瘤

目的：探讨尿脱落细胞6q的微卫星改变(MA)在膀胱肿瘤早期诊断中的应用价值，并研究6q的杂合性缺失(LOH)与膀胱肿瘤的关系．方法：应用6q21区域附近D6S404，D6S434微卫星标志，以PCR—SSLP—银染法对31例膀胱肿瘤的尿脱落细胞与肿瘤组织进行微卫星分析．结果：64．5％的肿瘤组织和58．1％的尿脱落细胞发生MA;10例非膀胱肿瘤对照未出现MA；检出率与肿瘤分期，分级无相关性；肿瘤组织D6S404 LOH发生率35．5％，D6S434 LOH发生率22．6％．结论：尿脱落细胞微卫星分析有早期诊断意义；6q21区域附近可能存在与膀胱肿瘤相关的肿瘤抑制基因．     

B细胞淋巴瘤微卫星不稳定性及杂合性缺失的研究

目的:探讨微卫星不稳定性及杂合性缺失在B细胞淋巴瘤发生学上的意义。方法:选取6号染色体上7对多态微卫星标记,结合PCR及银染技术,采用凝胶成像图像分析系统进行分析,分别检测53例B细胞淋巴瘤染色体微卫星不稳定性及杂合性缺失。结果:在位点D6S275MSI的发生率为7.5%(4/53),其中包括2例DLBCL,FL和B-CLL/SLL各1例,LOH总的发生率达66%(35/53),其中包括DLBCL19例(19/21,90.5%),FL8例(8/13,61.5%),B-CLL/SLL8例(8/19,42.1%),DLBCL的LOH率同B-CLL/SLL、FL相比,差异具有统计学意义。结论:位点D6S275可能存在一个抑癌基因,该基因的缺失对B细胞淋巴瘤的发生是否有重要意义有待进一步研究。     

Loss of heterozygosity of chromosome 20 in sporadic colorectal cancer

Objective To analyze the loss of heterozygosity (LOH) of chromosome 20 in patients with sporadic colorectal cancer to identify additional loci involved in colorectal tumorigenesis. Methods Polymorphic microsatellite markers were analyzed in 83 colorectal cancer patients’ tumor and normal DNA by PCR. PCR products were electrophoresed on an 377 DNA sequencer. Genescan 2. 1 and Genotype 2. 1 software were used in the LOH scanning and analysis. Comparisons between LOH frequency and clinicopathological data were performed by Χ(2) test.P&lt;0. 05 was considered statistically significant. Results The average LOH frequency in the long arm, short arm and whole chromosome 20 was 21. 1%, 26. 7% and 22. 8%, respectively. Chromosome 20 exhibited relatively high LOH frequency, particularly in the regions of 20p and 20q11. 1-q13. 1.Conclusion There is notable genetic instability on chromosome 20 in sporadic colorectal carcinoma patients; that is, mutation on chromosome 20 is closely associated with sporadic colorectal carcinogenesis. Also, there may be tumor suppressor genes related to sporadic colorectal carcinoma near the region 20q11. 1-q13. 1.