Na~+/Ca~(2+)交换体重构与心力衰竭

心力衰竭 (简称心衰 )时存在着明确的Na+ /Ca2 + 交换体重构 ,主要表现为Na+ /Ca2 + 交换体的表达及功能上调 ,INa+ /Ca2 + 增强 ,并被认为是改善舒张功能的代偿性改变 ,但同时却与收缩功能的损害及心衰时室性心律失常的发生密切相关 ,预防或逆转Na+ /Ca2 + 交换体重构应成为心衰的治疗目标之一。     

Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的抑制作用

目的 在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807- 844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.方法 利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807- 844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.结果 经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α- 2(840-877)抗血清效价达1∶243000,纯化后抗α-2(840- 877)抗体浓度为7.21 mg/mL.纯化后的抗体在SDS - PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25 kD和50 kD左右.在1 nmol/L～104 nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+变换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响.此外,104 nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用.通过氨基酸序列比对发现,α- 2(807 - 844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7％,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因.结论 在1 nmol/L～103 nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+变换体α-2(807- 844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+变换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响.     

Na~+/H~+交换器与肺动脉平滑肌细胞增殖

Na~+/H~+交换器(Na~+/H~+ exchanger,NHE)参与调节细胞内 pH(pHi),在维持细胞正常功能中起着重要作用。NHE活性增高与肺动脉平滑肌细胞增殖有着密切的关系,从而为慢性缺氧性肺动脉高压等疾病的研究及治疗提供了新的思路。     

脂多糖对肺动脉内皮细胞Ⅰ型Na+/H+交换器表达的影响

目的 :探讨脂多糖 （ LPS）对培养的牛肺动脉内皮细胞 （ PAEC） 型 Na+ /H+交换器 （ NHE-1）表达的影响及其与内皮细胞死亡的关系。方法 :体外培养牛 PAEC,MTT比色检测细胞存活率 ,并提取总 RNA,应用反转录聚合酶链式反应 （ RT-PCR）及 DNA电泳技术 ,以 NHE-1与β-actin电泳条带光密度值之比 （ e/c）作数据分析 ,以其比值反映 NHE-1m RNA的表达程度。应用 Fluo3 /Amy荧光探针标记 ,激光共聚焦观察细胞内钙离子的浓度。结果 :在L PS（ 0 .0 1～ 1.0 μg/ml）作用 48h后 ,MTT比色吸光度值分别为 0 .3 5± 0 .0 7,0 .3 1± 0 .0 7,0 .2 6± 0 .0 4,低于对照组 0 .44± 0 .0 6（ P<0 .0 1）。e/c分别为 0 .43± 0 .11,0 .83± 0 .14 ,1.2 2± 0 .19,高于对照组 0 .2 8± 0 .0 8（ P<0 .0 1,n=4）。激光共聚焦结果显示 L PS引起细胞内钙离子增多 ,呈剂量依赖型。结论 :LPS可以引起肺动脉内皮细胞NHE-1表达增加 ,抑制细胞增殖 ,导致细胞死亡 ,钙离子可能参与 NHE-1的激活及表达。     

Na~+/H~+交换、Na~+/K~+/2Cl~-转运体抑制剂对缺血大鼠心脏保护作用的研究

目的　研究 Na+ /H+ 交换抑制剂阿米洛利 (Am iloride)、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂呋塞米 (Furosemide)对长时间低温保存下离体大鼠心脏的保护作用。方法　建立 L angendorff及工作心脏灌注模型。实验组用 St.Thomas- 2 (STH- 2 )液 +阿米洛利 +呋塞米停搏并保存其中 ,对照组只用 STH - 2停搏、保存。置 7℃环境 5 h后恢复灌流。观察血流动力学、心肌酶学及超微结构的变化。结果　实验组冠状动脉流量 (CAF)、左心室收缩压 (L VSP)、左心室压力变化速率 (± dp/dt)的恢复率均优于对照组 (P<0 .0 1) ;肌酸磷酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出量明显少于对照组 (P<0 .0 5 ) ;心肌组织中 Na+ - K+ - ATP酶、Ca2 + - ATP酶和 Ca2 + - Mg2 + - ATP酶活力均显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;实验组的心肌细胞超微结构得到较好的保护。结论　 Na+ /H+ 交换、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂对缺血大鼠心肌具有明显保护作用     

血管损伤影响离体平滑肌细胞增殖与钙稳态有关

本实验采用球囊剥脱术在体损伤血管，于术后３天和１０天取出血管做平滑肌细胞培养。结果发现，血管损伤后血管平滑肌细胞增殖活性显著增加，ＤＮＡ和蛋白质合成加速，细胞数目增多。在血管平滑肌细胞增殖过程中，钙内流增加，胞内钙含量升高。应用１０μｍｏｌ·Ｌ￣（－１）异搏定不但对钙稳态变化有一定的抑制作用，而且还对血管损伤诱导的平滑肌细胞增殖有抑制作用。这些结果提示血管损伤可致血管平滑肌细胞增殖；钙稳态失衡可能是血管损伤诱导血管平滑肌细胞增殖的细胞学机制之一。     

Na~+/H~+交换泵抑制剂EIPA对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨Na+/H+交换泵抑制剂EIPA对SD大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法 30只成年SD大鼠随机分成空白组,缺血再灌注组,EIPA预处理组,每组10只。用Pringle's法建立肝缺血模型。比较各组之间的ALT、AST、肝组织湿/干比、肝组织匀浆内髓过氧化物酶(MPO)活性、肝组织Ca2+浓度、肝组织形态学变化及EIPA对上述指标的影响。结果肝缺血再灌注损伤时,血清转氨酶、肝组织Ca2+浓度、湿/干比、MPO活性均明显升高(P<0.05),肝脏呈现不同程度的病理改变;使用EIPA预处理后,上述指标的异常变化均明显减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EIPA可能通过降低细胞内Ca2+超载减轻肝组织水肿,抑制中性粒细胞活性,从而改善缺血肝组织的能量代谢和肝脏组织微循环,对SD大鼠肝脏缺血再灌注损伤产生保护作用。     

肥厚心肌细胞Na+/Ca2+交换活性对β-肾上腺素能药物的反应性降低

目的探讨肥厚心肌细胞Na+/Ca2+交换对β-类肾上腺素能药物刺激的反应及发生这种改变的可能机制.方法采用胶原酶消化的高血压大鼠单个心室肌细胞及全细胞膜片钳技术,记录Na+/Ca2+交换电流并观察药物对它的影响.结果 (1)异丙肾上腺素可浓度依赖性地增加正常及肥厚大鼠心室肌细胞的Na+/Ca2+交换电流,但其对肥厚心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的增强作用要弱于正常心室肌细胞(P<0.05).(2)cAMP可浓度依赖性地增加正常及肥厚大鼠心室肌细胞的Na+/Ca2+交换电流,其对正常及肥厚大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的增强作用无差别(P>0.05).结论高血压大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换对β-类肾上腺素能药物的反应性降低,可能与肥厚心肌细胞的β-受体数目及功能、G蛋白及腺苷酸环化酶的活性改变等环节有关,此种反应可能是肥厚心肌收缩及舒张功能障碍的机制之一.     

血管成形术后平滑肌细胞增殖的机制

本文介绍冠脉成形术后血管平滑肌细胞增生的细胞生物学机制和影响其增殖程度的相关因素。     

p27蛋白与血管平滑肌细胞增殖

ｐ２７蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂,通过抑制ｃｙｃｌｉｎＣＤＫ复合物活性使细胞停滞于Ｇ１期。ｐ２７蛋白能显著抑制血管平滑肌细胞增殖,有望成为治疗动脉粥样硬化以及ＰＴＣＡ后血管再狭窄的新手段。     

一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖和凋亡

一氧化氮是重要的血管活性物质、第二信使和神经递质。近年发现一氧化氮还具有调节血管平滑肌细胞增殖和凋亡等作用，其生成多少的变化在血管重建性疾病，如肺动脉高压、高血压等的发生和发展中起着重要作用。外源性给予一氧化氮或基因治疗在这些疾病的防治中有着广泛的应用前景。     

Na+-H+交换体1反义基因磁性纳米微粒体内靶向治疗胃癌的实验研究

目的 探讨Na+-H+交换体1(NHE1)反义基因磁性纳米微粒体内靶向治疗胃癌的可行性.方法 构建NHE1反义基因真核表达载体和NHE1反义基因磁性纳米微粒,以氧化铁磁性纳米颗粒为基因转染载体,将NHE1反义基因导入SGC-7901胃癌细胞中,获得稳定表达NHE1反义基因的7901-AS细胞.研究转染细胞形态学变化及体外生长情况.建立裸鼠胃癌移植瘤模型后,进行体内靶向定位实验,观察抑瘤率.结果 7901-AS细胞在光镜、电镜下的肿瘤细胞形态恶性程度降低.出现显著生长抑制现象,细胞增殖指数降低,凋亡指数明显增高(P相似文献   

血脂康对家兔血管平滑肌细胞增殖迁移的抑制作用

血脂康的主要成分系羟甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧＣｏＡ）还原酶抑制剂，并含有多种必需氨基酸和不饱和脂肪酸。本研究旨在观察血脂康对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖迁移的影响。一、材料与方法１动物试验：健康纯种新西兰白兔３０只，体重２５７±０１７ｋｇ，...     

一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖和凋亡

一氧化氮是重要的血管活性物质、第二信使和神经递质。近年发现一氧化氮还具有调节血管平滑肌细胞增殖和凋亡等作用,其生成多少的变化在血管重建性疾病,如肺动脉高压、高血压等的发生和发展中起着重要作用。外源性给予一氧化氮或基因治疗在这些疾病的防治中有着广泛的应用前景。     

血管紧张素II促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压ＷＫＹ大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为对照，探讨血管紧张素ＩＩ（ＡｎｇＩＩ）对培养的ＳＨＲ ＡＳＭＣ促增殖的机制。结果表明：ＡｎｇＩＩ（１０＾－９￣１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）对ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠的ＡＳＭＣ均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强，但对ＳＨＲ ＡＳＭＣ的促增殖效应明显高于ＷＫＹ大鼠。应用碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）单克隆抗体（Ａ－ｂＦＧＦ）和反义ｂＦＧＦｍＲ－Ｎ     

肾性高血压大鼠离体胸主动脉环Na+-Ca2+交换活性研究

目的建立肾性高血压大鼠模型,观察其胸主动脉环在离体条件下对去甲肾上腺素(NE)及降低细胞外Na+浓度的反应性.探讨Na+-Ca2+交换变化在该模型高血压形成中的作用.方法(1)设对照组(WKY Rat)与肾性高血压组(RH Rat),每组10只大鼠;(2)制作两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠(RH)模型健康雄性Wister大鼠,体重140～160 g,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,行腹正中切口,暴露左肾,并钝性分离出左肾动脉,用直径0.2 mm的银夹套在左肾动脉上造成肾动脉部分狭窄,右肾不夹,复制出两肾一夹型高血压模型(2K1C RH),对照组只分离左肾动脉不套银夹,大鼠饲养20-25天后尾动脉法测量血压,收缩压≥20 kPa(1kPa=7.5 mm Hg)以上者定为高血压形成,进入实验组;(3)动脉环制备猛击大鼠头部,迅速开胸摘取胸主动脉置于4℃的PSS液中,取长约4～5 mm左右的血管环,悬吊于盛有10ml,37℃PSS液的离体血管恒温浴槽中,并持续通入100%O2,静息负荷为2 g,平衡2小时后开始实验,平衡期间每15～20min换一次液体.血管环收缩力通过张力换能器记录于MS-2000多媒体化生物信号记录分析系统.(4)采用离体血管环张力实验法,观察改变细胞内外Na+浓度后,比较RH及WKY大鼠离体胸主动脉环张力对NE和降低细胞外Na+浓度的反应.结果离体胸主动脉环灌流表明1.NE引起RH组大鼠胸主动脉环的最大收缩力(887±123)mg,mg-1·ww-1)明显高于对照组(478±101)mg·mg-1·ww-1;2.当减少Na+浓度梯度时即减少胞外Na+浓度,无论WKY组还是RH组,去甲肾上腺素引起大鼠离体胸主动脉环的收缩幅度均增高,但RH组增高幅度(8.3%)较WKY组增高幅度(18.1%)显著降低,且这种差异有统计学意义;加入Ouabain(Na+-K+ATP酶抑制剂)以增加细胞内Na+浓度,两组离体胸主动脉的收缩幅度均增高,但RH组增高幅度(6.9%)较WKY组增高幅度(17.1%)显著降低,且这种差异亦有统计学意义.结论(1)肾血管性高血压大鼠胸主动脉环对缩血管物质(NE)反应性增高;(2)减少Na+浓度梯度以此增加细胞内Ca2+浓度,可以使胸主动脉环对NE引起的收缩幅度增加;(3)减少Na+浓度梯度,肾血管性高血压大鼠的胸主动脉环收缩增加幅度较对照组显著降低,可能是由于高血压大鼠血管平滑肌细胞内已有大量Ca2+,减少细胞外Na+后通过Na+-Ca2+交换机制细胞内Ca2+增加不明显,由于Na+-Ca2+交换机制可以调节细胞内Ca2+浓度,进而改变血管环的收缩力,所以该交换可能参与肾血管性高血压的发生,发展.     

香烟尘粒对血管平滑肌细胞增殖的作用

为探讨香烟尘粒对血管平滑肌细胞是否有促增殖作用及其作用机制 ,以兔主动脉平滑肌细胞为实验对象 ,选用细胞存活率 >90 %的小剂量 (1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0 )香烟尘粒 ,分别加入培养基中 ,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、流式细胞仪分析、细胞蛋白测定和放射免疫法观察香烟尘粒对血管平滑肌细胞增殖及内皮素 1分泌的影响。结果发现 ,与对照组 (不加香烟尘粒组 )相比 ,1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0香烟尘粒组细胞蛋白吸光度值无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;1∶10 0 0和 2∶10 0 0香烟尘粒组血管平滑肌细胞增殖明显 (P <0 .0 1) ;流式细胞仪分析结果显示 ,2∶10 0 0香烟尘粒组G1 期细胞数明显减少 (P <0 .0 5 ) ,S期细胞数显著增多 (P <0 .0 1)。 1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0香烟尘粒组培养基中内皮素 1含量均显著增高 ,尤以 2∶10 0 0组增高最明显 (P <0 .0 1)。结果表明 ,1∶10 0 0和 2∶10 0 0香烟尘粒有促进血管平滑肌细胞增殖的作用 ,其促增殖作用可能与内皮素 1合成释放增多有关     

去甲肾上腺素与哌唑嗪对高血压大鼠动脉平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性及mRNA表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素(NE)及其α1肾上腺素能受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术,观察不同浓度的NE和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与SHR组比较,NE(10-7 mol/L)能减弱Na -K -ATPase活性(3.98±0.14 vs 7.92±0.19,P＜0.01)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA的表达(0.863±0.057 vs 1.307±0.051,P＜0.01),单用哌唑嗪对Na -K -ATPase活性及mRNA的表达均无影响(P＞0.05).哌唑嗪(10-7,10-6,10-5 mol/L)呈剂量依赖性减弱和阻断NE(10-7mol/L)对Na -K -ATPase活性(4.31±0.24,6.15±0.30,7.52±0.31)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达(0.857±0.041,1.096±0.055,1.183±0.059)的影响(P＜0.01,P＜0.05).结论 NE抑制SHR Na -K -ATPase活性和下调Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达,可能是通过α1-AR途径介导基因转录的下调.肾上腺素能1型受体拮抗剂哌唑嗪可通过阻断α1-AR途径抑制NE对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达的影响.     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及表达c-myc基因的影响

为观察川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖的影响,在建立凝血酶诱导的体外培养的兔主动脉血管平滑肌细胞增殖模型后,应用免疫细胞化学方法观察川芎嗪对血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的影响;并用流式细胞术观察了血管平滑肌细胞增殖周期的变化。结果发现,川芎嗪能够显著抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达增加,使血管平滑肌处于ＧＩ期的细胞数显著增多,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期的细胞数显著减少。结果提示,川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其机制与抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达有关。     

血管平滑肌细胞增殖相关因素的研究进展

本文从相关基因、生长因子、细胞凋亡，一氧化氮合酶及血管活性物质5个方面，对近年来血管平滑肌细胞增殖相关因素研究的新进展作一综述。进一步认识和评价经波冠状动脉腔内成形术后再狭窄的发生机制。为再狭窄的防治提供新的思路和途径。