抗淋巴细胞血清联合脾细胞促进异基因骨髓细胞形成嵌合体诱导免疫耐受

目的:探讨抗淋巴细胞血清(ALS)联合异基因脾细胞(SC)在促进异基因骨髓细胞移植诱导小鼠皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:第-5～-3天,C57BL/6(H-2b)受体小鼠每天腹腔注入0.5 ml抗淋巴细胞血清(ALS),共3天。第0天,C57BL/6受体小鼠通过尾静脉输注均源自BALB/c(H-2d)的1×108脾细胞(SC)及2×107骨髓细胞(BMC)。第二天,受体鼠腹腔注入200 mg/kg的环磷酰胺(CP)。第六天进行从BALB/c到C57BL/6的尾-尾皮肤移植。每天观察移植皮片存活情况,共观察100天。并于骨髓细胞移植后30天、50天及70天对受体小鼠外周血进行嵌合体检查。结果:抗淋巴细胞血清和(或)异基因脾细胞的输注能促进异基因BMC的植入,并能延长移植皮片的存活时间。在30、50天及70天,SC BMC CP、ALS BMC CP及ALS SC BMC CP移植组受体小鼠体内能检测到供体骨髓源性细胞,ALS SC BMC CP移植组的嵌合率较高,随着时间推移,嵌合率下降,而且移植皮片存活时间与嵌合率具一定相关性。结论:抗淋巴细胞血清(ALS)联合异基因脾细胞能协助异基因BMC植入,形成嵌合体,促进免疫耐受的诱导,使移植皮片存活时间延长。     

异种移植中的耐受诱导

异种器官移植中的耐受诱导，倍受国内外学者的关注，动物实验显示，移植前给血可以提高肾移植的成活率；胰脾联合移植能延长移植胰的成活时间，骨髓移植诱导的造血嵌合体可以阻断移植后所引起的急慢性排斥反应，T淋巴细胞疫苗可延长移植心脏的存活时间；抗CD4单体克隆抗体使小鼠接受胰岛异种移植而不需要其他免疫抑制剂。     

86例成人急性髓性白血病免疫表型分析

常规使用10种单抗，用流式细胞仪（FACS）或荧光显微镜（FM）间接免疫荧光标记法检测了86树成人急性髓性白血病（AML）患者骨髓细胞的免疫标志。结果显示，髓系标志中CD33、CD13诊断价值较高，而CD15、CD14阳性率低。31．4％AML有淋系抗原表达，无单抗标记AML占16．3％，47．6％的患者表达CD34.FACS检测较FM更敏感、特异。     

移植早期宿主成熟T细胞的灭活在诱导特异性免疫耐受中的作用

目的探讨参与早期急性排斥反应并导致非清髓性治疗诱导特异性免疫耐受失败的主要免疫细胞。方法通过动态观察受者三种不同预处理方案的骨髓移植后早期各阶段在外周血、脾脏、胸腺中的嵌合状态，再用T细胞敲除小鼠作为受者，以验证宿主成熟T细胞在急性排斥反应与诱导特并性免疫耐受中的重要作用。结果亚致死量全身放射治疗TBI（450cGy）4-BMT骨髓移植治疗组的BALB／C受者移植心脏均出现排斥反应，存活时间〈38d，骨髓移植后第7天在受者的外周血、脾脏中仍存活一定数量的宿主成熟T细胞（分别为0．23％与0．48％）。T细胞基因敲除c57BL／6小鼠作为受者，给予单次TBI（450cGy）＋BMT治疗，其移植心脏获长期存活，并获得完全嵌合状态。结论移植早期彻底清除或灭活宿主成熟T细胞是预防早期排斥反应的关键，也有利于供者骨髓T细胞植活，这对临床制定诱导特异性免疫耐受冶疗方案有着重要意义。     

骨髓移植在大鼠肾移植诱导免疫耐受研究

目的研究在大鼠肾移植中骨髓干细胞移植对免疫耐受的诱导作用及机制。方法40只Wistar大鼠(雌雄各半)随机分为实验组和对照组,进行肾移植手术,术前经门静脉分别注射骨髓细胞及生理盐水,30天后观察肉眼和光镜下排斥反应及检测嵌合体的形成。结果实验组肉眼和光镜下排斥反应均较轻微,嵌合体检测为阳性。结论应用他克莫司并注射供体骨髓细胞,可诱导一定的免疫耐受。移植前输注供体骨髓细胞而形成的嵌合体与免疫耐受有关。     

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:B6CCR5KO组,受者接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;B6WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞;B6CCR5KOBMC组,受者只接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓细胞;B6WTBMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果较之B6WT组,B6CCR5KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD;其受者体内的CD8+T细胞更大量的增殖;其T细胞恢复后产生更多的IFN-γ和TNF-α,并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平从而进一步促进T细胞增殖,提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8+T细胞的增殖。组织学评价提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重,提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

雷公藤总甙对细胞免疫应答的抑制作用及抗移植排斥作用

研究雷公藤总甙对细胞免疫应答的抑制作用及抗移植排斥作用。结果表明：雷公藤总甙可明显抑制异型小鼠脾细胞诱导的迟发型超敏反应，抑制混合淋巴细胞反应及抑制杀伤性Ｔ淋巴细胞杀伤靶细胞活性，进一步研究表明．雷公藤明显抑制Ｔ细胞对丝裂原ＣｏｎＡ的增殖反应，说明雷公藤抑制细胞介导的免疫应答，应用小鼠异基因骨髓移植模型研究发现，雷公藤具有明显的抗移植物抗宿主病作用。     

异基因骨髓移植和非清髓性干细胞移植嵌合形成过程的比较

目的 研究异基因骨髓移植（allo-BMT）和非清髓性干细胞移植（NST）两种移植方式在供体细胞嵌合状态的形成及转归上的差异,探讨早期供体细胞植入的关键因素。方法 对20例接受allo-BMT和18例NST的患者进行回顾性比较,研究两组患者疾病类型、干细胞来源、预处理方案和移植物抗宿主病预防方案。用复合扩增荧光标记STR-PCR结合毛细管电泳方法对移植后＋7、＋14、＋21d,＋1、＋3、＋6、＋9、＋12个月的嵌合体进行动态检测。结果 （1）NST组在受体年龄、单个核细胞（MNC）、CD34^＋及T细胞数量上均明显高于BMT组,造血重建方面,中性粒细胞绝对值恢复时间与BMT组无差别,但血小板恢复明显早于BMT组。（2）NST组患者供体细胞完全嵌合状态（FDC）的建立比BMT组早（1个月vs 3个月）,移植后早期（＋1个月）FDC比例亦明显高于BMT组（38．9％vs 20%）,而混合嵌合状态（MC）的发生率明显低于BMT组（61．2％ vs 80％）,移植1个月后各时间段两组在嵌合体形成上均无显著性差别。（3）氟达拉滨为基础的NST预处理方案与标准预处理方案相比并未延迟供体细胞的植入。（4）NST组慢性移植物抗宿主病的发生率明显高于BMT组（80％vs 50%,P〈0．01）,与NST组输入高剂量的CD34^＋细胞相关。结论 在供体细胞早期植入和嵌合体形成的过程中,移植物中造血干细胞和T细胞数量至关重要,并可能起决定性作用。     

抗PD-L1单抗促免疫细胞活化参与动脉粥样硬化北大核心CSCD

目的研究抗PD-L1单抗对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的影响。方法将32只ApoE^(-/-)小鼠随机分为正常组、高脂组、正常+抗PD-L1单抗组和高脂+抗PD-L1单抗组,通过高胆固醇饲料喂养建立AS模型。实验动物饲养10周后,分离各组实验动物血管(主动脉根部至胸主动脉),进行油红O染色。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)和炎症因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13、IL-1β)水平。流式细胞计数检测淋巴细胞(CD3^(+)T、CD4^(+)T和CD8^(+)T)、NK和NKT细胞比例。结果与高脂组相比,给予抗PD-L1单抗后促血管壁脂质累计并上调血清CHO、TG和HDL-c含量,但是对LDL-c无影响。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促CD3+、CD4+和CD8+T细胞活化。除此之外,高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗还具有活化NK和NKT细胞的作用。ELISA检测发现,高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗上调血清中炎症因子含量(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-13、IL-1β)。结论高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促AS发生发展的机制与免疫活化有关。     

阻断CD40/CD40L相互作用延长移植物抗宿主病小鼠存活时间

目的：克隆表达人CD40-Ig融合蛋白，并在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型中研究利用其阻断CD40/CD40L相互作用的保护性效果。方法：利用RT-PCR技术自人Daudi细胞系中克隆CD40基因胞外区，并插入含有人IgG1Fc段基因的pIG1载体中，构建携带CD40-Fc融合基因的瞬时表达载体转染COS-7细胞，间接夹心ELISA法检测CD40-Ig融合蛋白的表达，再将CD4-Fc融合基因连接入pcDNA3.1的相应位点构建稳定表达载体转染CHO细胞，筛选分泌CD40-Ig融合蛋白的阳性重组CHO细胞并进行无血清大规模培养，收获培养上清利用ProteinA亲和层析法纯化融合蛋白。SDS-PAGE，Western blot和配基结合实验鉴定CD40-Ig的性质，将C57BL6/J（H-2^b)小鼠的脾细胞经尾静脉注射入亚致死剂量照射的BALB/c(H-2^d)小鼠体内建立急性GVHD模型。通过体内注射CD40-Ig融合蛋白评价其对急性GVHD小鼠的保护效果。结果：按上述方法分别构建了哺乳动物表达载体pIG/40Ig和p3.1/40Ig。ELISA和Western blot确定在COS-7和CHO细胞中表达了CO40-Ig融合蛋白，SDS-PAGE结果显示该蛋白具有通过二硫键结合的二聚体结构并以同源二聚体的形式存在，纯化的CD40-Ig可与CD40L结合，体内应用CD40-Ig融合蛋白治疗可延缓小鼠GVHD病情发展并显著延长小鼠的平均存活时间。结论：CD40/CD40L相互作用在GVHD的病理过程中可能扮演了十分重要的角色，提示人CD40-Ig融合蛋白在临床预防和治疗GVHD方面的巨大应用潜力。     

Induction of tolerance in organ recipients by hematopoietic stem cell transplantation

The use of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) for the establishment of mixed chimerism represents a viable and attractive approach for generating tolerance in transplantation biology, as it generally leads to durable immune tolerance, enabling the subsequent engraftment of organ transplants without the need for a deleterious continuous immunosuppressive therapy. However, in order to apply HSCT to patients in a manner that enables long term survival, transplant-related mortality must be minimized by eliminating the risk for graft-versus-host-disease (GVHD) and by reducing the toxicity of the conditioning protocol. T-cell depleted bone marrow transplants (TDBMT) have been shown to adequately eliminate GVHD. However, even in leukemia patients undergoing supralethal conditioning, mismatched TDBMT are vigorously rejected. This barrier can be overcome through the modulatory activity of CD34 cells, which are endowed with veto activity, by the use of megadose stem cell transplants. In mice, megadoses of Sca+lin-hematopoietic stem cells can induce mixed chimerism following sub-lethal conditioning. Nevertheless, the number of human CD34 cells that can be harvested is not likely to be sufficient to overcome rejection under reduced intensity conditioning (RIC), which might be acceptable in recipients of organ transplantation. To address this challenge, we investigated a novel source of veto cells, namely anti 3rd-party cytotoxic T cells (CTLs) which are depleted of GVH reactivity, combined with megadoses of purified stem cells and a RIC protocol. This approach might provide a safer modality for the induction of durable chimerism.     

骨髓移植联合肾移植、亲属肾移植、尸体肾移植疗效的探讨

目的评价骨髓移植联合肾移植、亲属活体肾移植、尸体肾移植的疗效。方法对比三类肾移植各48例术后三个月内排斥反应的发生率。结果尸体肾移植联合骨髓移植较之单一尸体肾移植的急性排斥反应发生率显著降低,与亲属供肾肾移植相比急性排斥反应发生率已无明显差别。结论肾移植联合骨髓移植能通过增加混合嵌舍体形成,从而诱导受体免疫耐受,可以减少排斥反应的发生,延长移植肾存活时间。     

同种移植排斥反应中T细胞间接识别途径作用的研究

目的　CD+ 4T细胞通过间接识别途径识别MHC Ⅰ类移植抗原而活化已在离体实验中得到证实 ,但体内实验尚未见报道。方法　bml小鼠 (H 2Kbm1∶Kbm1,Db,Ⅰ Ab)的皮肤片分别移植到①B6小鼠 (H 2 b∶Kb,Db,Ⅰ Ab,n =8) ;②B6CD / 8小鼠 (H 2 b∶Kb,Db,Ⅰ Ab,CD / 8,n =8) ;③用抗CD4 抗体处理的B6CD / 8小鼠体上 (n =8)。观察移植皮肤的生长时间 ;用流式细胞仪 (FACScan)观察各组小鼠内T细胞亚群的变化。各组数据用分组或配对t检验进行数据统计。结果　尽管CD / 8小鼠体内未发现CD+ 8T细胞存在 ,但很快排斥了bm1皮肤移植片 (2 1 9d± 1 9d) ;而用抗CD4 抗体处理的B6CD / 8小鼠却长时间接受bm1皮肤移植片 (>47 5d± 3 8d) ;用流式细胞仪发现CD+ 4T细胞明显增殖活化并被抗CD4 抗体抑制。结论　CD+ 4T细胞通过间接识别途径活化并导致同种相异MHC Ⅰ类移植物的排斥。     

Xenotransplantation: application of disease resistance

1. Organ transplantation is now clinically routine for patients with end-stage organ failure. One major limitation in transplantation is chronic rejection involving the loss of the graft despite the use of immunosuppressive agents. Haematopoietic stem cell (HSC) chimerism, achieved through bone marrow transplantation (BMT), induces donor-specific tolerance to transplanted organs and prevents chronic rejection. 2. A second major limitation to organ transplantation is the donor shortage. Xenotransplantation, the transplantation of organs between different species, would have the ability to increase the availability of donor organs. 3. Current immunosuppressive therapies do not prevent the rejection of xenografts. Therefore, the only reliable method for achieving donor-specific tolerance to xenografts may require HSC chimerism. 4. In order to justify the use of BMT to induce transplantation tolerance in patients with non-life-threatening diseases, the morbidity and mortality associated with current conditioning regimens must be addressed. 5. The use of partial conditioning regimens to promote engraftment of xenogeneic HSC and the development of donor-specific tolerance may eventually make xenotransplantation in humans a clinical reality. 6. Additional advantages of xenotransplantation are the ability to genetically engineer the donor xenograft and resistance of some xenografts to infection by human viruses because of the species specificity of most viruses. 7. The clinical application of disease resistance for HIV and hepatitis B virus is the focus of the present review.     

Differential induction of glucocorticoid-dependent apoptosis in murine lymphoid subpopulations in vivo following coexposure to lipopolysaccharide and vomitoxin (deoxynivalenol)

Lipopolysaccharide (LPS) and vomitoxin (VT) synergistically induce glucocorticoid- mediated apoptotic cell death in lymphoid tissues of the mouse. Based on the known effects of glucocorticoids, it was hypothesized that the combined exposure to LPS and VT targets immature lymphocyte populations. To test this hypothesis, we quantified the effects of VT and LPS on apoptosis induction in T lymphocyte subsets in thymus and B lymphocyte subsets in Peyer's patches and bone marrow. Flow cytometry revealed that a single dose of LPS (0.1 mg/kg body wt ip) together with VT (12.5 mg/kg body wt po) promoted apoptosis of immature (CD4(-)CD8(-), CD4(+)CD8(+)) and mature (CD4(-)CD8(+)) thymocytes at 12 h with a subsequent reduction of these populations being detectable at 24 h. RU 486, a glucocorticoid receptor antagonist, significantly abrogated apoptosis in CD4(-)CD8(-), CD4(+)CD8(+), and CD4(-)CD8(+) subsets and also prevented loss in cell numbers. In Peyer's patches, mature-B lymphocytes (B220(+)IgM(-)IgD(+)) underwent apoptosis and, in bone marrow, pro/pre-B lymphocytes (B220(+)IgM(-)IgD(-)) and mature-B lymphocytes (B220(+)IgM(-)IgD(+)) underwent apoptosis at 12 h after toxin co- exposure. RU 486 blocked LPS + VT-induced apoptosis of the aforementioned subsets in Peyer patches and bone marrow at 12 h. Taken together, these data suggest that LPS can interact with VT in mice to induce the glucocorticoid-driven apoptotic loss of immature thymocytes and cytotoxic T lymphocytes in thymus, mature-B lymphocytes in Peyer's patch, and pro/pre-B lymphocytes and mature-B lymphocytes in bone marrow in mice.     

骨髓移植术后巨细胞病毒肺炎患者体内CD11b的表达及临床意义

目的探讨骨髓移植术后巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,CMV)肺炎患者体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b的表达及诊断价值。方法收集我院2000年11月至2016年10月收治的骨髓移植术后患者60例,依据CMV-pp65抗原检测结果分组,同时选择我院门诊体检健康者33例为对照组。采用流式细胞仪分别检测上述各组的CD11b表达情况,并计算CD11b在诊断骨髓移植术后CMV肺炎过程中的受试者工作曲线(ROC曲线)。结果本研究高活动性CMV感染组17例(28.33%),CMV活动性感染组29例(48.33%),阴性对照组(未感染CMV)14例(23.34%)。高活动性CMV感染组CD11b表达率为39.11%±4.98%,与CMV活动性感染组、阴性对照组和健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CD11b在诊断骨髓移植术后高活动性CMV感染的最佳临界值表达率为43.47%,敏感度为100%,特异度为59.47%,ROC曲线下面积为0.631;CD11b诊断骨髓移植术后CMV肺炎活动性感染者的最佳临界值表达率为69.34%,敏感度为86.92%,特异度为98.81%,ROC曲线下面积为0.987。结论骨髓移植术后CMV肺炎患者体内CD11b表达下调,可作为鉴别诊断骨髓移植术后CMV肺炎活动性感染的实验室依据。     

参麦注射液联合TP方案同步放疗治疗中晚期宫颈癌的临床观察

目的:观察参麦注射液联合多西紫杉醇+顺铂(TP)方案同步三维适形放疗治疗中晚期宫颈癌的临床疗效。方法:将65例中晚期宫颈癌患者随机分为治疗组和对照组,治疗组33例,接受三维适形放疗同步TP方案化疗,治疗过程中同时给予参麦注射液治疗;对照组32例,仅接受三维适形放疗同步TP方案化疗。观察2组患者的T细胞亚群变化、生存质量、近期疗效及毒副反应。结果:治疗组CD3+、CD4+、CD16+CD56+和CD4+/CD8+比值等与对照组比较显著上升,CD8+效应细胞比例下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组有60.6%的患者生存质量改善,明显高于对照组的31.3%(P<0.05)。治疗组的有效率为72.7%,明显高于对照组的43.8%(P<0.05)。治疗组的1年生存率为66.7%,明显高于对照组的37.5%(P<0.05)。治疗组白细胞下降、贫血、血小板下降的发生率均低于对照组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:参麦注射液联合TP方案同步放疗治疗中晚期宫颈癌安全、有效,对提高机体免疫力、改善生存质量、提高近期疗效及保护骨髓功能具有重要作用。