丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

新两步法和一步法检测乙肝表面抗原的比较

目的 比较国家食品药品监督管理局新规定的乙肝表面抗原(HBsAg)新两步法和一步法的检测效果.方法 采用新两步法和一步法,连续20d每天对20份血清样本进行平行对照检测.对2种方法检测结果不一致的血清进行中和试验和稀释试验.结果 400份血清中有7份一步法检测样本s/co＜1,而新两步法检测s/co＞1,经中和试验7份血清中有3份为HBsAg阳性,4份为假阳性.其中1份因钩状效应(HOOK)使一步法漏检的血清,经稀释试验证明新两步法未能有效克服HOOK效应.结论 新两步法检测HBsAg的灵敏度较一步法有所提高,但假阳性率也增大,且不能有效克服HOOK效应.     

混合血清校准品的制备及其在肝、肾功能检验结果互认中的意义

目的探讨利用混合血清制备校准品的可能性,观察实验室间检测结果校准的效果。方法分别检测单份血清和由这些单份血清制备的混合血清的生化指标,检测项目包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、总胆红素(TBil)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)。比较单份血清各项目检测值的均数与混合血清检测值的接近程度。将100份正常人血清(40岁以下成人,男女各半)等量混合为自制校准血清与1例患者血清同时送11家临床实验室检测,检测项目同前。依照同一实验室检测的自制校准血清检测值和《全国临床检验操作规程》(第3版)给定的各项目的参考值对患者血清检测值进行校准,观察校准效果。结果混合血清各项目检测值与单份血清测定值的均数十分接近。患者血清送11家临床实验室检测,ALT、AST、ALP、GGT、Alb、TP、TBil、Urea、Cr检测结果的变异系数(CV)分别为11.65%、3.76%、12.86%、4.71%、3.00%、2.75%、15.35%、5.92%、10.33%,校准后分别为7.47%、5.84%、8.87%、5.0...     

因检验结果互认而进行的补体检测结果校正研究

目的 探讨利用混合血清制备质控参考品对不同实验室间补体C3,C4检测结果 进行校准的可能性.方法 分别检测单份血清和由这些单份血清制备的混合血清的C3,C4,比较单份血清检测值的均数与混合血清检测值的接近程度;将100份正常人血清(40岁以下成人,男女各半)等量混合为参比血清与1名患者血清同时送6家临床实验室检测,依照同一实验室检测的参比血清检测值和<全国临床检验操作规程(第3版)>给定的各项目的 参考值对患者血清检测值进行校准,观察校准效果.结果 混合血清检测值与单份血清测定值的均数十分接近;患者血清迟6家临床实验室C3,C4检测结果 的CV值分别为10.32%和16.14%,校准后为4.99%和6.53%.结论 依照参比血清检测值和约定真值对待栓血清C3,C4检测值进行校准效果明显.     

Trustline结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的临床应用评价

目的 评价Trustline结核抗体IgG/IgM检测试剂盒临床应用效果。 方法 选用3家医院的1009份血清标本,其中628份为结核病患者血清(308例菌阳病例,320例菌阴病例);对照组381份非结核病血清。采用Trustline试剂盒及一种已上市的试剂盒(对照试剂盒)分别检测1009份血清,计算多项检测指标,从而评价试剂盒的检测效果。 结果 通过检测1009份临床血清标本, Trustline试剂盒检测血清抗体(IgG+IgM)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、 Youden 指数分别为61.3%、79.8%、 83.3%、 55.6% 和0.411,对照试剂盒检测血清抗体(IgG) 的结果分别为53.7%、89.0%、88.9%、 53.8%和0.426。经统计分析表明Trustline试剂盒的灵敏度显著优于对照试剂盒(P0.01),特异度低于对照试剂盒(P0.01),但阳性诊断效率和阴性诊断效率方面差异无统计学意义,Youden指数相接近。 进一步分析显示Trustline试剂盒对菌阳样本及菌阴样本的检出率分别77.6%和44.7%,对照试剂盒则为67.9%和40.0%,对菌阳样本检出率的差异有统计学意义。检测1009份标本,Trustline试剂盒共得IgM阳性35例,其中结核组阳性30例(4.8%),非结核组阳性5例(1.3%)。 结论 Trustline试剂盒检测结核抗体的灵敏度显著优于对照结核抗体试剂盒,并可同时用于检测IgG/IgM抗体,可以应用于结核病的快速诊断。     

SARS康复者及医护人员冠状病毒的初步调查

目的　采用荧光聚合酶链反应 (F PCR)和基因芯片技术检测严重急性呼吸综合征 (SARS)冠状病毒 ,并探讨其临床应用价值。方法　应用 SARS Co V F PCR诊断试剂盒及基因芯片技术检测了 6 0份确诊 SARS患者血清、发热门诊医护人员血清 2 0份和漱口液样本 2 0份以及 1份 SARS疑似患者血清的 c DNA。结果　中山大学达安基因股份有限公司及上海复星实业股份有限公司的两种 F PCR检测试剂盒及晶宇芯片反应 3种检测方法所测 80份血清和 2 0份痰液样本均为阴性 ;但 1例 SARS疑似患者血清的 c DNA可经荧光定量 PCR反应扩增出病毒特异 RNA片段。结论　 SARS康复者及密切接触医护人员血液和漱口水中均未检测到 SARS病毒特异 RNA片段。     

电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的评价

目的 评价Roche电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的检测性能.方法 收集包括健康献血员、人类免疫缺陷病毒( HIV)感染者、丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性和高危人群在内的血清样本1 327例.购买美国BBI公司的7套HIV血清转换盘共计51份血清样本.采用Roche cobas e411(架式系统)电化学全自动...     

HBsAg检测结果弱反应的分析与处置

目的通过对某国产定性试剂检测HBsAg弱反应结果的分析,探讨HBsAg检测的影响因素及"灰区"的设定。方法用某国产ELISA试剂对140 709份血清样本进行HBVM定性检测,对HBsAg弱反应结果样本再用Abbott公司试剂定量检测HBVM。对定性和定量结果不相符的样本用另一种定性试剂验证。对部分弱反应定性结果样本进行HBV DNA检测,同时采用定性和定量两种试剂测定一系列HBsAg定值参比血清,比较其灵敏度。结果140 709份样本中HBsAg可疑者174份(0.124%),弱阳性者126份(0.089%)。对其中49份可疑样本和41份弱阳性样本进行定量检测,结果阳性者分别为39份和32份,符合率分别为79.59%和78.05%。17份HBsAg定性弱反应性而定量阴性的样本经另一种定性试剂验证,结果2份为弱反应性,其中1份样本为HBV DNA阳性。对85份弱反应性样本进行HBV DNA检测,其中阳性3份。某国产ELISA试剂检测HBsAg灵敏度为0.5ng/ml,Abbott试剂为0.05 ng/ml。结论我国的HBV感染人群中,有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在,并且部分感染者存在病毒复制。国产HBsAg ELISA定性试剂灵敏度较Abbott定量试剂低,因此必须重视弱反应性结果,尤其是位于阳性判断值以下者,灰区设置非常必要。     

HCV单片段抗原EIA与常规EIA检测丙型肝炎病毒抗体的比较

目的比较国产重组HCV单片段抗原酶免疫(EIA)检测试剂与国产第三代HCV常规抗体(EIA)检测试剂的敏感性和特异性。方法利用基因工程技术重组表达的HCV单片段(HCV-C、NS、NS4、NS)EIA检测试剂和常规EIA试剂检测国家第三代抗-HCV血清考核盘(40份阳性和40份阴性血清样品)及20份不符血样，对检测结果进行统计分析。结果HCV单片段EIA检测试剂总符合率100％，常规试剂为96．2％。结论HCV抗体单片段试剂可作为对HCV常规EIA试剂检测不符血样的确认试剂。     

不同浓度血液保存液对速率法检测ALT结果的影响

目的观察血站留取血样被复方枸橼酸钠注射液(血液CPD保存液)稀释后对丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测结果的影响,以评价采用血袋导管样本复检的可靠性。方法随机抽取献血者血清样本与相应血袋导管样本各50份,每份样本检测20次;随机抽取3份ALT异常血样,用CPD血液保存液对血样进行梯度稀释,每个浓度检测20次,对结果进行统计学分析。结果献血者血清样本与相应血袋导管样本对比试验均有统计学意义;3个不同ALT浓度的血样检测结果变化曲线相似。混入CPD保存液1.5%(1∶64)时检测结果变化有统计学意义(P0.01),1∶128时,检测结果无统计学意义(P0.05)。结论血液保存液混入血样,对ALT速率法检测结果存在显著影响,血袋导管样本结果不能完全真实地反映献血者的ALT水平。     

HCV胶体金试剂在急诊患者手术输血前的快速检测

目的应用HCV胶体金试剂对急诊手术患者输血前进行检测,并与抗-HCV ELISA法进行比较。方法对本医院2008年1～10月的3216例急诊手术患者,先应用HCV胶体金试剂检测抗体,再分别用试剂①、②两种抗-HCV试剂进行ELISA法检测。对HCV胶体金试剂、试剂①、②检测为阳性的标本,再进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果3216份标本中HCV胶体金试剂检测阳性25份,抗-HCV试剂①ELISA法检测阳性33份,试剂②检测阳性34份（两种试剂均阳性26份,仅试剂①、②阳性的分别为7和8份）。HCV RNA RT—PCR荧光定量检测阳性28份。结论HCV胶体金法与抗-HCV ELISA法结果符合率为92．59％,与HCV RNA RT—PCR荧光定量法结果符合率89．29％,HCV胶体金试纸法假阳性率低,操作简便、快速,适合急诊患者手术前输血的筛选。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒的临床应用评价

目的采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测丙型肝炎病毒核心抗原（HCVcAg）。方法对苏州市吴中人民医院2011年2月至2012年2月的2 523份输血、手术前住院患者血清标本进行抗-HCV初、复检检测。将初、复检均阳性的其中10份、仅初检阳性的15份和仅复检阳性的17份血清标本分别采用ELISA检测HCVcAg和采用RT聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCV。结果 ELISA检测HCVcAg阳性结果为4份（40%）。32份仅初检或复检抗-HCV阳性标本采用ELISA检测HCVcAg阳性6份,阳性率为18.75%。采用RT-PCR荧光定量检测HCV 10份初、复检抗-HCV均阳性的血清标本结果均为阳性,32份仅初检或复检抗-HCV阳性标本采用RT-PCR荧光定量检测HCV阳性5份,阳性率为15.63%。结论 HCVcAg的敏感性与RT-PCR荧光定量检测HCV类似,能对HCV的感染作出早期诊断。     

抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA水平与ALT活性的关系

目的 分析抗-HCV阳性献血者血清HCV RNA含量与ALT活性的关系。方法 采用ELISA法检测抗-HCV，阳性标本用荧光PCR试剂盒测定HCV RNA，分析标本ALT活性与HCV RNA水平的关系。结果 60份抗-HCV阳性标本经PCR检测后有27份标本含有HCV RNA，HCV RNA拷贝量与ALT活性呈正相关，且标本的HCV RNA含量越多，ALT活性也越高(P＜0．01)。结论 献血者中筛查ALT并结合PCR技术，能减少HCV经血传播的危险。     

Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV

BACKGROUND: Detection of early hepatitis C infection of blood donors is still a major problem for blood transfusion. Common anti-HCV screening assays show differences in sensitivity and specificity. The often mild symptoms of acute hepatitis C also cause difficulties in the identification of early HCV infection. The feasibility and efficacy of routine screening of blood donations for HCV RNA were investigated. STUDY DESIGN AND METHODS: Blood donations (n = 251,737) were screened for HCV RNA over 4 years. RNA extraction, amplification, and detection were done by two commercial HCV PCR kits (HCV Cobas Amplicor and HCV Cobas Amplicor 2.0, Roche Diagnostics). Screening was done by pool testing with a maximum pool size of 40 serum samples. RESULTS: Three donations out of 251,737 were HCV RNA positive and anti-HCV negative. ALT levels of these donations were 271, 32, and 10 U per L. The HCV infection of a fourth HCV RNA-positive donor could not be identified by routine, second-generation HCV EIA (Abbott Diagnostika). In this case, two previous donations were also HCV RNA positive, and three second-generation test systems (Abbott) could not detect anti-HCV, whereas third-generation anti-HCV screening assays detected antibody with different sensitivity. The first HCV RNA-positive donation was identified only by the HCV ELISA 3.0 (Ortho Diagnostic Systems). The results of confirmatory assays like RIBA HCV 3.0 (Ortho) and Matrix (Abbott) indicate a restricted immune response to NS3 only. CONCLUSION: HCV RNA detection by PCR can be carried out routinely in blood donor screening without significant delay of release of the components. The residual risk of transmission can be reduced by identification of early infection, which can lead to an improved safety of blood components. RNA screening can also be advantageous in cases of incomplete or lack of antibody response to HCV.     

金免疫层析试验检测丙型肝炎抗体应用评价

目的评价金免疫层析试验（GICA）检测丙型肝炎抗体（抗-HCV）临床应用价值。方法对1611例样本（其中输血前常规检查样本1420例;抗-HCV阳性样本82例;HBsAg阳性样本18例;抗-HAVIgM阳性样本5例;类风湿患者样本15例;脂血样本12例;溶血样本14例;健康体检样本45例）。同时用酶联免疫吸咐试验（ELISA）和GICA检测抗-HCV。结果1611例样本,ELISA检测抗-HCV阳性168例;GICA检测抗-HCV阳性166例,且HBsAg阳性样本、抗-HAVIgM阳性样本、脂血样本、溶血样本和健康体检样本检测结果皆阴性,两种实验方法阳性检出率基本一致,差异无统计学意义（＞0.05）。结论利用GICA检测抗-HCV简便、快速,干扰因素少,可信度高,适用于常规检测抗-HCV。     

HCV抗体检测临界值附近样本传播HCV风险的研究

目的用尽可能低的消耗，达到HCV感染早期诊断，尽量缩短ELISA HCV抗体检测的“窗口期”，防止和减少经输血传播丙型肝炎的风险。方法采集初次检测抗-HCV（S／CO）样本测定值／临界值0．40～0．99的样本310份，采用“HCV抗体分片段酶联免疫确认试剂盒”进行补充旁证检测，对检测阳性及可疑阳性样本再进行HCV—PCR和RIBA及HCV—cAg检测。结果310份样本共检出单片段阳性样本25份，2个片段以上阳性样本3份，共计28份。HCV—PCR阳性3份，HCV—cAg阳性4份，RIBA检测3个条带阳性2份，1个条带阳性22份。28份样本中，抗-HCV分片段、PCR、HCV—cAg以及RIBA共同阳性1份，HCV—cAg与PCR共同阳性2份，HCV—cAg和RIBA共同1份。结论加强对抗-HCV检测阴性高值样本的重视，尽量缩短ELISA—HCV抗体检测“窗口期”。     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.     

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂（试剂①、②）检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂①、②均阳性的血清标本28份、仅试剂①阳性的15份和仅试剂②阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果试剂①、②抗-HCV均阳性28份标本的RT—PCR结果均阳性,仅试剂①抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂②抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂①或②抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT—PCR检测阳性率为15．63％。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。     

HCV胶体金法与ELISA法在输血前检测丙型肝炎抗体中的效果比较

目的：HCV胶体金法与ELISA法用于输血前检查丙型肝炎抗体检测的应用效果比较。方法：分别采用ELISA法和胶体金法对我院576名受血者的血清样本进行HCV-抗体检测,对两种检测方法的检测效果及检测用时及成本预算进行综合比较。结果：ELISA法阳性检测率高于胶体金法,但比较差异无统计学意义（P〉0．05）;经胶体金法和ELISA检测为阳性的血清样本再使用RT—PCP．荧光定量法检测,胶体金法的检测符合率达到100％,显著高于ELISA法（P〈0．05）;胶体金检测法所需检测时间短且检测所需成本更低。结论：与ELISA法比较,胶体金法用于检测丙型肝炎病毒的假阳性率更低,操作更方便,成本花费低,值得临床推广应用。     

在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索

本研究探讨用丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原酶联免疫吸附技术（HCV-cAg ELISA）筛查献血员感染HCV的可行性.对我医院2003年1月-2005年12月间的8 677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检.将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR检测.结果表明：经HCV-cAg ELISA检测,29份仅初检（15份）和仅复检（14份）抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%.经HCV RT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%.结论：HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查.