MicroRNA-21(miR-21)在大肠癌细胞中的表达及其靶基因

目的探讨微RNA(miRNA)-2l在大肠癌(CRC)细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对大肠癌细胞中磷酸醋酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、mTOR表达的影响及其可能调控的靶基因。方法通过反义寡核苷酸(ASO)技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR(FQ-PCR)技术及Western印迹法检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因系统检测PTEN活性。结果 miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论抑制miR-21的表达可促进HCT116细胞PTEN表达升高,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调,PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控过程。miRNA-21在CRC中表达失控,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。     

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显...     

下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌H322细胞侵袭迁移并诱导凋亡

目的探讨miR-20a对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响和机制。方法 Realtime PCR方法分别检测miR-20a在正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中的表达变化。在肺癌H322细胞中转染miR-20a inhibitor,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western印迹检测ZNF259、C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、C-Caspase-9、MMP-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测ZNF259可能为miR-20a的靶基因,利用双荧光素酶活性系统鉴定靶向关系。在肺癌细胞中共转染miR-20a inhibitor、ZNF259 siRNA,同样使用上述方法测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化,评估ZNF259 siRNA对下调miR-20a调控肺癌细胞的影响。结果肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中miR-20a的表达水平明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B,且H322细胞中miR-20a的表达水平最高。miR-20a inhibitor能够下调肺癌细胞中miR-20a的表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,促进细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达,减少细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶活性鉴定结果显示,ZNF259为miR-20a的靶基因,且下调miR-20a提高肺癌细胞中ZNF259蛋白表达水平。ZNF259 siRNA可以逆转下调miR-20a后的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化。结论下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

lncRNA LINC02418通过调控miR-940表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景lnc RNALINC02418在非小细胞肺癌、肺腺癌和结直肠癌等肿瘤中表达上调,促进肿瘤的发展进程.但是, LINC02418对肝癌发生发展的影响和机制还未知.LncBase Predictedv.2靶基因预测显示,LINC02418可能靶向结合miR-940.本研究假设LINC02418可靶向调控miR-940影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡,进而影响肝癌发展进程.目的探讨lncRNA LINC02418对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制.方法RT-qPCR检测肝癌组织和对应癌旁组织中LINC02418和miR-940表达水平.分别转染LINC02418小干扰R N A、miR-940模拟物至肝癌细胞HCCL M3,RTq PCR检测转染效果,CCK-8、Transwell、流式细胞术和蛋白印迹法分别检测下调LINC02418表达或上调miR-940表达对HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭、凋亡及Cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-940与LINC02418调控关系.结果与癌旁组织比较,肝癌组织中LINC02418表达水平升高(P0.05), miR-940表达水平降低(P0.05).下调LINC02418或上调miR-940表达降低了HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭数及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达(P 0.05),而提高了细胞凋亡率、p21和Bax的蛋白表达(P0.05). LINC02418靶向负调控miR-940表达.下调miR-940表达逆转了下调LINC02418表达对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.结论LINC02418在肝癌组织中表达升高,下调其表达可能通过靶向上调miR-940抑制肝癌细胞的恶性生物学行为,可作为肝癌治疗的分子靶点.     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

RNAi下调MAGE-A9表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的探讨RNAi技术沉默MAGE-A9表达对非小细胞肺癌细胞转移潜能的影响。方法采用Western blot法检测非小细胞肺癌细胞系中MAGE-A9蛋白表达。在H1299细胞中沉默MAGE-A9表达,Western blot和Transwell实验分别检测H1299细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和核转录因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及细胞迁移和侵袭数变化。结果与HBE人正常支气管上皮细胞相比,人非小细胞肺癌细胞系H1299、H460、95-D中MAGE-A9蛋白表达上调(P0.05),其中H1299细胞中MAGE-A9蛋白表达水平最高,选取H1299细胞用于后续实验。Western blot和Transwell实验结果显示,将pSUPER-shRNA MAGE-A9重组质粒转染至H1299细胞后,细胞中MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白表达下调(P0.05),细胞迁移和侵袭数减少(P0.05)。结论 MAGE-A9在人非小细胞肺癌细胞中呈高表达,沉默MAGE-A9可抑制H1299细胞迁移和侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9及NF-κB信号通路有关。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

背景姜黄素对包括肝癌在内的多种肿瘤的发生发展表现出较好的抑制作用,但其抗肝癌的作用机制尚不完全清晰.有研究发现,姜黄素可通过调控miR-133a表达抑制胃癌细胞增殖和转移; miR-133a在肝癌中低表达的结果已有数据证实,但姜黄素是否介导miR-133a表达发挥抗肝癌的作用并不清楚.目的探讨姜黄素调节miR-133a表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响.方法以姜黄素(0、10、20μmol/L)处理肝癌SMMC-7721细胞48 h后, MTT法检测细胞活力, Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭; RT-PCR检测细胞中miR-133a表达.采用RT-PCR检测正常肝LO2细胞和肝癌SMMC-7721细胞中miR-133a表达;将miR-133a模拟物转染至SMMC-7721细胞后, Transwell小室检测miR-133a对姜黄素作用前后细胞迁移和侵袭的影响.结果姜黄素能够有效抑制SMMC-7721细胞活力(10μmol/L姜黄素存活率:0.71±0.07 vs 1.02±0.09; 20μmol/L姜黄素存活率:0.45±0.05 vs 1.02±0.09)、迁移(52.32±5.48 vs121.43±12.35)和侵袭(46.33±5.38 vs109.25±10.75),上调miR-133a表达(10μmol/L姜黄素:1.62±0.11 vs 1.00±0.09; 20μmol/L姜黄素:2.96±0.25vs1.00±0.09);与LO2细胞相比,SMCC-7721细胞中miR-133a的表达水平明显降低(0.32±0.03 vs1.03±0.08);上调miR-133a表达后,SMCC-7721细胞的迁移(32.84±3.95 vs 96.35±9.08)和侵袭(42.75±5.06vs119.32±11.71)能力均明显减弱,同时姜黄素对SMCC-7721细胞迁移(29.6±3.32 vs134.62±13.41)和侵袭(31.86±4.05 vs 129.73±12.74)的抑制作用增强.结论姜黄素可通过上调miR-133a表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭.     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。     

下调miR-10a表达对人胰腺癌细胞AsPC-1迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-10a表达对人胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭力的影响及其作用机制.方法 构建针对miR-10a的小干扰RNA（miR-10a-siRNA）,转染处理人胰腺癌AsPC-1细胞,同时设阴性对照siRNA（NC-siRNA）组和空白对照组.采用荧光实时定量PCR法检测3组细胞中miR-10a的表达水平,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭能力,ELISA法检测各组癌细胞培养上清液中基质金属蛋白质酶13（MMP-13）含量.结果 对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞miR-10a表达水平分别为1.05±0.08、1.03 ±0.06、0.02±0.01,穿膜细胞数分别为（150±2.6）、（145±2.2）、（62±1.8）个,培养上清中MMP-13表达量分别为（108.5±2.8）、（107.8±2.5）、（35.8±1.5） pg/ml,miR-10a-siRNA组均显著低于对照组和NC-siRNA组,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞的迁移后间距分别为（385 ±15）、（395±13）、（736±18）μm,miR-10a-siRNA组显著大于对照组和NC-siRNA组,差异有统计学意义（P值均＜0.01）.结论 下调miR-10a表达可抑制胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP-13表达下调有关.     

miR-34a在结肠癌细胞增殖和迁移中的作用及其分子机制

目的探讨miR-34a在结肠癌细胞增殖和迁移中的作用,并验证其靶点蛋白。方法传代培养人结肠癌细胞株HCT-116,分别采用空病毒载体(pRI-CMV-GFP)转染(阴性对照组)、慢病毒载体(pRI-CMV-GFP-miRNA-34a)转染(慢病毒组),另选未经任何处理的HCT-116细胞作为空白对照组。采用Real-time PCR法检测miR-34a的相对表达量,采用MTT实验、Transwell小室法检测HCT-116细胞增殖和迁移能力,采用细胞免疫荧光试验和Western blotting法验证其靶点蛋白。结果以空白对照组miR-34a表达为1,阴性对照组为1.03±0.09,慢病毒组为6.41±1.56,慢病毒组高于阴性对照组及空白对照组(P均<0.01),证实慢病毒转染成功。与空白对照组、阴性对照组比较,慢病毒组细胞增殖和迁移能力显著下降(P均<0.01)。细胞免疫荧光试验显示,慢病毒组细胞c-Met的荧光强度显著降低,而空白对照组与阴性对照组无明显变化。Western blotting结果显示,慢病毒组c-Met及磷酸化c-Met表达均低于阴性对照组、空白对照组(P均<0.01)。结论过表达miR-34a可抑制结肠癌细胞增殖及迁移,并下调靶点蛋白c-Met及磷酸化c-Met表达,提示miR-34a可作为结肠癌治疗的分子靶点。     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

麦冬皂苷D通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的实验研究

背景麦冬皂苷D(ophiopogonin D, OPD)是中药麦冬提取物中重要的单体成分且具有抗癌作用,但是否具有抗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)作用还未知.本研究假设OPD能够通过上调miR-519d-3p表达进而下调真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF4E)表达发挥抗HCC作用.目的探讨OPD对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制.方法培养HCC细胞Hep G2和MHCC97,不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)的OPD作用48h后,四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium, MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-q PCR)检测细胞中miR-519d-3p和EIF4E m RNA表达, Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、MMP-9和EIF4E蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p和EIF4E之间关系.转染miR-519d-3p mimics、si-EIF4E构建miR-519d-3p过表达或EIF4E表达抑制的Hep G2和MHCC97细胞, RT-q PCR检测细胞中miR-519d-3p表达或Western blot检测EIF4E蛋白表达验证转染效率. MTT、Transwell、Western b l o t分别检测过表达m i R-519d-3p或抑制E I F4E表达对Hep G2和MHCC97细胞增殖、迁移和侵袭,及Cyclin D1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果与对照组比,OPD组Hep G2细胞抑制率显著升高(P 0.05),迁移和侵袭数显著降低(P 0.05),Hep G2细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达显著降低(P 0.05),p21蛋白表达显著升高(P 0.05),miR-519d-3p表达显著升高(P 0.05),EIF4Em RNA和蛋白表达显著降低(P0.05),且呈浓度依赖性. miR-519d-3p在Hep G2细胞中靶向负调控EIF4E表达.miR-519d-3p过表达或抑制EIF4E表达均可抑制Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭.抑制miR-519d-3p表达部分逆转了OPD对Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论OPD可能通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-301a促进人结肠癌细胞株HT29细胞侵袭与转移的机制

目的探讨miR-301a对结肠癌侵袭转移的影响及分子机制。方法实时荧光定量PCR检测40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平,探究结肠癌和miR-301a表达的关系。同时在人结肠癌细胞株HT29细胞过表达和干扰miR-301a,MTT法检测miR-301a对HT29细胞增殖的影响。蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR在分子水平上检测miR-301a表达对HT29细胞中侵袭相关分子的表达水平,探究miR-301a调控下的转化生长因子(TGF)-β/Smad4/基质金属蛋白酶(MMP)-9信号通路对结肠癌侵袭转移的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平明显升高,且随着肿瘤分期分级的升高,其水平明显升高。MTT法检测发现过表达miR-301a的HT29细胞数量明显增加,而干扰miR-301a则细胞数目减少,表明miR-301a可促进结肠癌细胞的增殖。在分子水平上蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR检测结果显示miR-301a通过下调TGF-β和Smad-4的表达,促进MMP-9的表达,最终促进癌细胞的侵袭转移。结论 miR-301a通过下调TGF-β/Smad4信号通路,促进MMP-9的表达,最终促进结肠癌的侵袭转移。     

健脾通络方对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及机制研究

目的 探究健脾通络方对结直肠癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法 构建敲减MALAT1基因的HCT116细胞模型。采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用蛋白质印迹法检测经健脾通络方干预后的MALAT1正常/敲减表达的HCT116细胞中Wnt3a、β-catenin蛋白水平。采用实时荧光定量PCR法检测MALAT1的表达水平。构建裸鼠肺转移模型,采用小动物活体成像技术监测肿瘤转移情况,并检测转移灶中Wnt3a、β-catenin和MALAT1的表达水平。结果 经健脾通络方干预后,HCT116细胞中MALAT1、Wnt3a和β-catenin的表达水平均降低,HCT116细胞迁移能力下降。在裸鼠肺转移模型中,经健脾通络方干预后裸鼠的转移灶减少,转移灶中Wnt3a、β-catenin和MALAT1的表达水平均降低。结论 健脾通络方通过下调HCT116细胞中MALAT1的表达,使Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低,从而抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-34a调控PI3K/AKT通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 探究微小RNAa(miR)-34a调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制。方法 选择口腔癌细胞系Tca8113、OEC-M1、OC3及人口腔角质形成细胞HOK,并对其中miR-34a相对表达量进行检测。将Tca8113细胞分为miR-34a组(转染miR-34a模拟物)、miR-34a NC组(转染miR-34a模拟物对照物)和不做处理的NC组,观察转染24、48、72 h时各组细胞增殖率,并比较各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数及PI3K/AKT通路相关因子表达。结果 miR-34a在Tca8113、OEC-M1、OC3细胞中的表达较HOK细胞明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞增殖率较NC组明显减少,凋亡率较NC组明显增加(P<0.05)。miR-34a组细胞迁移及侵袭细胞数均较NC组明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKt蛋白表达均较NC组明显减少(P<0.05)。结论 miR-34a在口腔癌细胞中呈低表达,上调其表达可抑制口...