BMP-7过表达抑制大鼠肝星状细胞上皮-间叶转化

目的观察慢病毒介导的BMP-7高表达是否能抑制大鼠HSC-T6细胞发生上皮-间叶转化（epithelial to mesenchymal tran-sition,EMT）,并能拮抗TGF-β1的促EMT作用。方法构建大鼠BMP-7慢病毒表达载体,体外感染HSC-T6细胞株,将成功感染BMP-7重组慢病毒的细胞给予TGF-β1（5 ng/mL）或溶酶体处理。Real-time PCR检测α-SMA、S100A4、E-cadherin mRNA转录水平。Western blotting检测α-SMA、S100A4、E-cadherin、Ⅰ型胶原蛋白表达水平。结果 BMP-7慢病毒感染HSC-T6后,无论TGF-β1存在与否,real-time PCR检测到α-SMA、S100A4 mRNA转录下调,E-cadherin转录上调。Western blotting显示α-SMA、S100A4及Ⅰ型胶原蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调。实验组与空病毒对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,空病毒对照组与空白组比较,差异无统计学意义。结论 BMP-7能有效拮抗TGF-β1对HSC-T6的促EMT作用,可能成为肝纤维化治疗的新途径。     

肝星状细胞活化与细胞周期调控

肝星状细胞活化是肝纤维化形成的中心环节，目前尚未能完全阐明其复杂机制，近年研究发现该过程与细胞周期调控紊乱有密切关系。现对近年来HSC活化和肝纤维化时HSC细胞周期调控研究作一综述。     

肝星状细胞活化与细胞周期调控

肝星状细胞活化是肝纤维化形成的中心环节,目前尚未能完全阐明其复杂机制,近年研究发现该过程与细胞周期调控紊乱有密切关系。现对近年来 HSC活化和肝纤维化时 HSC细胞周期调控研究作一综述。     

肝星状细胞的活化与肝纤维化

肝纤维化是机体对损伤的一种修复作用，即使可以应用基因或其他疗法彻底消除纤维化，但机体对抑制或消除纤维化后将产生何种反应及后果尚难预测。肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）是引起肝纤维化的主要细胞，对HSC与其活化型一肌成纤维细胞（myofibroblast，MF）在肝损伤中作用的研究已颇为深入，而HSC激活在肝纤维化发生、发展中的作用甚为重要。     

肝星状细胞活化的功能改变

肝星状细胞活化是一个形态、功能等改变的复杂过程。肝星状细胞活化的功能改变与肝纤维化形成关系密切。本综述了近年来肝星状细胞活化功能改变的有关研究。     

活化大鼠肝星状细胞的蛋白质表达谱

目的 用在线二维纳升高效液相结合串联质谱(2D nanoLC-MS/MS)技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞(HSC)的蛋白质表达谱. 方法 分离培养大鼠原代HSC,取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质,通过2D nanoLC-MS/MS对酶解所获肽段进行分离和鉴定,并对鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类. 结果从50μg HSC总蛋白质中鉴定出1014种蛋白质,相对分子质量范围为7832～588 364;主要分布于细胞核、细胞骨架、线粒体、内质网,分别占25%,17%、13%、13%.蛋白质功能主要与核酸代谢,细胞器组装、信号传导、能量代谢等生理进程有关,分别占17%、14%,10%、9%;其中细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白,波形蛋白和结蛋白是活化大鼠HSC特异性表达的蛋白质.结论 本研究获得了目前较为全面的活化大鼠原代HSC的蛋白质表达谱,为深入研究HSC的活化机制奠定了基础.     

肝星状细胞与肝纤维化

近年来已获公认,肝星状细胞是肝纤维化时细胞外基质（ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ, ＥＣＭ）过多产生和沉积的主要细胞来源。 １８７６年德国 ｖｏｎ Ｋｕｐｆｆｅｒ首次描述星状细胞（ Ｓｔｅｒｎｚｅｌｌｅｎ）,后来的文献中又称之为 Ｉｔｏ细胞、脂细胞、贮脂细胞、窦周细胞等等。１９９６年Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ发表了９８位著名国际肝病学家的建议,认为仍以肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ, ＨＳＣ）命名为宜,此建议已日益被采纳应用。近年关于星状细胞的研究日多,本文只涉及几个问题：细…     

肝星状细胞活化的细胞学基础

肝纤维化是指各种致病因素所致的肝脏内纤维结缔组织增生,其特点是大量细胞外基质在窦周间隙沉积。而肝星状细胞是肝纤维化细胞外基质的主要细胞［１］,在肝纤维化的形成中起关键作用［２］,肝星状细胞活化已成为肝纤维化基础研究的热点。本文综述了肝星状细胞活化有关的细胞学研究。1 肝星状细胞活化的概念　目前,肝星状细胞活化尚无一个确切的定义。但一些资料描述了它的特征：肝星状细胞活化以粗面内质网增加、维生素A脂滴减少、细胞周胶原增多为特征［３］;肝损伤过程中肝星状细胞进行一个以细胞增殖和纤维生成增加为特征的活化过…     

大鼠肝脏前体细胞通过直接共培养抑制肝星状细胞的活化

目的：观察大鼠肝脏前体细胞系（WB-F344）对肝星状细胞系（HSC-T6）活化及细胞外基质的影响。方法将慢病毒-GFP 空白载体转染的 HSC-T6与 WB-F344按1∶1与1∶2比例直接共培养3 d,使用流式细胞仪对其进行分选,慢病毒-GFP 空白载体转染的 HSC-T6单独培养作为对照,观察 HSC-T6活化指标及细胞外基质相关指标表达的变化。结果经流式细胞仪检验慢病毒-GFP 空白载体转染 HSC-T6的效率可达近90％;与 WB-F344直接共培养3 d 后,HSC-T6的细胞形态与对照组相比无差别;同时利用 GFP 对各组 HSC-T6细胞分选后,经流式细胞仪检验纯度可达94％;对分选后的细胞进行分析发现,直接共培养组 HSC-T6细胞活化标记物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在基因水平（1∶1与1∶2组分别是对照组的0．66与0．61倍,P＜0．05）和蛋白水平（1∶1与1∶2组分别是对照组的0．61倍与0．25倍,P＜0．05）的表达均下降;HSC-T6细胞的细胞外基质标记物 I 型胶原（Col-I）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的表达与对照组比较差异无统计学意义。结论WB-F344细胞可以抑制 HSC-T6细胞的活化,但在一定时间内对其细胞外基质的表达没有影响。     

高血糖对大鼠肝纤维化及肝星状细胞活化的影响

目的探讨高血糖对大鼠肝纤维化及肝星状细胞活化的影响。方法取大鼠66只,随机分为4组,A组和B组均采用STZ(链脲佐菌素)和CCl4(四氯化碳)诱导为肝纤维化并糖尿病模型。A组诱导成功不做处理。B组糖尿病诊断成立后,皮下注射门冬胰岛素,3次/d控制血糖。C组单纯利用CCl4(四氯化碳分析纯)诱导为肝纤维化模型。D组(空白对照组)常规喂养,不做处理。观察各组大鼠一般情况(包括鼠食消耗、毛发变化、活动指数),8周后处死,测量大鼠体质量、肝脏体积及重量,采集血液及肝脏标本,分析对比各组大鼠肝脏系数,HE染色后光镜下肝组织纤维化情况;免疫组化SP法检测肝组织内α-SMA表达。结果实验各组与对照组大鼠相比体质量明显减轻(P<0.05),肝脏系数明显增加(P<0.05),肝组织α-SMA表达均不同程度增强(P<0.05);其中A组的体质量减轻最明显,肝纤维化、肝脏系数增加最显著(P<0.05),肝组织α-SMA表达亦有显著性差异(P<0.05);B组与C组相比体质量无明显减轻(P>0.05),肝脏系数无明显增加(P>0.05),而肝组织α-SMA表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血糖可促进大鼠肝纤维化形成及肝星状细胞的活化。     

氧化应激在肝星状细胞活化中的作用

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复应答反应，其病理中心环节是肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ　ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）由静止状态转变为活化状态，成为肝纤维化形成的细胞学基础。ＨＳＣ的活化具体表现在：（１）细胞体积增大，伸出伪足，含维生素Ａ的脂滴减少，表型向肌成纤维细胞样细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌ）转化。（２）细胞获得增殖能力。（３）纤维化能力增强，大量生成细胞外基质。（４）表达平滑肌细胞骨架蛋白如α－平滑Ｌ动蛋白。许多因素如炎性因子、细胞外基质的改变、生长因子以…     

肝星状细胞活化的分子生物学机制研究进展

肝纤维化的实质是细胞外基质的过度沉积。活化的肝星状细胞是肝内细胞外基质的主要来源。在各种致肝纤维化因素的作用下,肝星状细胞从富含维生素A的静息细胞表型转变为具有增殖性、分泌性的肌成纤维细胞表型。肝星状细胞活化以及活化后如何维持其致纤维化的特征,需要进一步去研究和探讨,以期找到更多的治疗肝纤维化的方法和策略。这里主要将肝星状细胞的活化及其分子生物学机制作一综述。     

瘦素促进大鼠肝星状细胞活化及其细胞外信号调节激酶磷酸化

近年研究发现，瘦素在肝纤维化病理形成中具有重要意义，可促进实验性动物肝脏炎症与纤维化病理发展。但是瘦素是否直接促进肝纤维化形成的关键细胞——肝星状细胞（HSC）活化尚不清楚。本实验采用大鼠HSCT6细胞株，观察不同浓度的瘦素对HSC-T6增殖、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与Ⅰ型胶原蛋白表达的作用．及其对细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化的影响．探讨瘦素对HSC活化的影响与部分作用机制。     

活化肝星状细胞的信号传导

肝纤维化是肝脏对各种急慢性肝损伤的疤痕修复反应的结果,是各种慢性肝病向肝硬化进展的共同环节,其最主要的特征是以胶原为主的细胞外基质(ECM)的生成与降解失衡,在肝脏中的过度沉积.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生时ECM的主要来源.HSC持续激活后增殖、迁移和表型转化,成为肌成纤维样细胞,是肝纤维化发生和发展的核心环节.活化HSC具有如下特点:(1)合成和分泌间质胶原等各种ECM;(2)自分泌产生致纤维化细胞因子如转化生长因子(TGF)β I;(3)释放胶原酶抑制物组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP);(4)分泌趋化因子及其他炎症性细胞因子;(5)具有细胞收缩特性;(6)合成基质金属蛋白酶(MMP),使ECM降解异常;(7)对凋亡刺激的耐受性等.     

罗格列酮抑制肝星状细胞活化的作用机制研究

目的 探讨罗格列酮对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响是否是通过PPARγ起作用.方法 设立10 μmol/L罗格列酮组、GW9662加10 μmol/L罗格列酮组、对照组、GW9662组.采用RT-PCR方法检测PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;电泳迁移分析法(EMSA)检测PPARγ蛋白的结合活性;用免疫细胞化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化.结果 10 μmol/L罗格列酮组PPARγ mRNA及蛋白表达显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ型前胶原mRNA及蛋白表达明显低于其他各组(P<0.01);10 μmol/L罗格列酮组PPARγ蛋白结合活性最强,α-SMA表达明显低于其他组(P<0.05).结论 罗格列酮对大鼠肝星状细胞的影响是通过PPARγ起作用的.     

影响肝星状细胞活化的因素

肝纤维化是指各种致病因素所致的肝脏内纤维结缔组织增生，其特点是大量细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在窦周间隙沉积。而肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)是肝纤维化细胞外基质的丰要来源细胞，在肝纤维化的形成中起关键作用，HSC活化已成为肝纤维化基础研究的热点。     

活化大鼠肝星状细胞新表达甘丙肽2型受体拮抗甘丙肽增殖抑制作用

目的:探讨甘丙肽受体在肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)中表达和对细胞增殖的影响.方法:使用胶原酶原位灌注法分离大鼠原代HSC体外培养,半定量RT-PCR法检测静止期(0 wk)和培养活化(1 wk)HSC中甘丙肽及其3种受体(GalR1、GalR2和GalR3)表达变化.大鼠HSC-T6细胞株体外培养,免疫荧光法检测GalR2蛋白在HSC-T6细胞中表达;给或不给GalR2中和抗体(5μg/mL),MTT法观察不同浓度甘丙肽(0-10000 nmol/L)干预后甘丙肽对HSC增殖和活力的影响.结果:成功分离大鼠原代HSC和体外培养.静止期及活化的HSC均可检测到甘丙肽及GalR3 mRNA表达,但无GalR1 mRNA表达,而GalR2 mRNA在活化HSC中表达.细胞免疫荧光法进一步证实GalR2蛋白在HSC-T6中表达.甘丙肽处理时,HSC-T6增殖水平在1、10、100和1000 nmol/L甘丙肽时分别下降至对照组的86.7%(t=3.976,P=0.028)、83.1%(t=4.45,P=0.012)、78.1%(t=5.75,P=0.006)和73.1%(t=5.38,P=0.008);给予GalR2中和抗体联合干预时,HSC-T6增殖抑制在甘丙肽1和10 nmol/L时即降至相应对照组67.9%(t=5.11,P=0.015)和73.1%(t=6.56,P=0.003),与相应浓度甘丙肽组相比,分别下降21.7%(t=3.35,P=0.028)和12.6%(t=2.78,P=0.049).结论:HSC活化时新表达GalR2拮抗GalR1介导的甘丙肽对HSC增殖抑制作用.     

肝星状细胞与肝纤维化

肝纤维化是各种慢性肝病损伤修复过程的共同结果,由于肝内纤维生成和降解失衡,导致过多的胶原在肝内沉积,常伴有炎症、缺血缺氧,最终可发展为肝硬化。目前认为,细胞外基质（ECM）过多产生和沉积是肝纤维化的核心表现,活化的肝星状细胞（HSC）仍是细胞外基质的主要细胞来源。因此,肝星状细胞的活化是肝纤维化发生的中心环节。     

肝星状细胞活化的启动、维持和调控

肝纤维化的形成是一个多因素、多细胞参与的复杂过程，肝星状细胞（HSC）的活化是其中的中心环节。PDGF、TGFβ、RA、PPAR及ROS等均参与了HSC活化过程的调节。