联合应用骨保护素和阿伦膦酸钠对破骨前体细胞分化的影响

目的:探讨联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠对破骨细胞前体细胞(RAW264.7)分化的抑制效果,并探讨二者是否具有抑制破骨细胞前体细胞(RAW264.7)分化的协同作用。方法:实验于2004-06/12在解放军总医院骨科研究所完成。酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞,与破骨细胞前体细胞(RAW264.7)按照4:1比例混合,培养于96孔板中和6孔板骨磨片体系中。分别使用1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断、10mol/L阿伦膦酸钠、1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断+10mol/L阿伦膦酸钠作用于96孔板和6孔板混合细胞体系,并设空白对照。9d后,观察破骨细胞数目和形态,计算单位面积内重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数,并行骨磨片吸收陷窝计数。统计学分析评价其抑制破骨细胞分化效果。结果:①破骨细胞常规形态及重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞计数:小鼠成骨细胞与RAW264.7混合培养并加入药物后9d,空白对照组出现大量多核成熟破骨细胞,重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色证实为成熟破骨细胞。②骨磨片吸收陷窝形态及计数:与空白对照组相比,其余各组破骨细胞重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数均明显减少,以1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断+10mol/L阿伦膦酸钠组减少最为显著。③重组人骨保护素活性片断组与阿伦膦酸钠组析因设计的方差分析:加药后9d重组人骨保护素活性片断与阿伦膦酸钠存在交互作用(F=19.878,623.57;P<0.05)。结论:联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠可以发挥交互协同作用,更有效地抑制RAW264.7向成熟破骨细胞的分化。     

香豆雌酚对体外破骨细胞分化和骨吸收活性的影响

目的：观察植物雌激素香豆雌酚对破骨细胞的影响，分析其抗骨质疏松的作用方式。 方法：实验于2005-07／2006-03在东南大学医学院临床实验中心和分子影像实验室、南京师范大学物理实验中心完成。以1，25（OH）2D3诱导大鼠骨髓细胞形成破骨样细胞，通过相差显微镜下的形态观察，抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨片上骨吸收陷窝的形成来鉴定破骨细胞。分别加入0，10^-9，10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L香豆雌酚，以10^-9mol／L 17 β-雌二醇为阳性对照，于培养3,6和9d分别计数抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞个数，磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性，于培养12d利用图像分析系统对骨吸收陷窝的面积进行测量分析，原子吸收光谱法测定破骨细胞和骨片联合培养的上清中钙的浓度。 结果：①利用1，25（OH）2D3成功诱导出破骨样细胞。②香豆雌酚抑制破骨细胞的形成和分化：随香豆雌酚浓度增加，每孔抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的破骨细胞数量呈剂量依赖性减少（香豆雌酚10^-9,10^-8，10^-7，10^-6,10^-5 mol／L组分别为357&;#177;8，347&;#177;11，303&;#177;17，275&;#177;18，268&;#177;6，空白对照组为360&;#177;15，17 β-雌二醇组为200&;#177;12，P＜0．05）。③破骨细胞噬骨活性：骨吸收陷窝面积香豆雌酚各浓度组与空白对照组相比均有显著下降，香豆雌酚10^-9与10^-8，10^-7，10^-6,10^-5 mol／L组之间，香豆雌酚10^-8，10^-7mol／L组与10^-6，10^-5mol／L组之间差异均有显著性。④破骨细胞和骨片联合培养的上清中钙的浓度;应用香豆雌酚10^-8～10^-5mol/L处理后共培养体系中的钙浓度与空白对照组相比分别下降了24．7％，36.2％，36．9％，39．1％。 结论：香豆雌酚可通过抑制破骨细胞的形成、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性和骨吸收作用，抑制破骨细胞分化和骨吸收活性，从而具有抗骨质疏松作用。     

双膦酸盐对破骨细胞分化及抗酒石酸酸性磷酸酶的影响

背景：抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞分化及骨吸收功能的特异性标志酶,是破骨细胞分化成熟的标志。目的：观察双膦酸盐对破骨细胞分化及骨吸收功能相关因子抗酒石酸酸性磷酸酶的影响。方法：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组：对照组开始时加入质量浓度100μg/L核因子kB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,免疫荧光检测两组抗酒石酸酸性磷酸酶表达的差异,Western blot检测抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白表达情况。结果与结论：各组细胞均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组（P〈0.01）。免疫荧光检测显示,对照组抗酒石酸酸性磷酸酶表达均强于双膦酸盐组（P〈0.01）。Western blot检测显示,双膦酸盐组抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达低于对照组（P〈0.01）。说明双膦酸盐通过抑制抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达,阻碍破骨细胞分化生成及骨吸收功能。     

降钙素对破骨细胞增殖和凋亡的调节作用

目的：降钙素对破骨细胞作用的研究以往主要集中在对破骨细胞骨吸收功能的调节上，实验通过观察不同浓度的降钙素对体外培养破骨细胞增殖及凋亡率的影响，进一步探讨降钙素对破骨细胞的作用机制。 方法：实验于2006—08／2007—06在郑州大学医学院药理实验室完成。应用1d SD大鼠乳鼠，采用骨髓诱导法体外培养破骨细胞，并接种于盖玻片和骨磨片上。培养液中分别加入0，10^-12，10^-10，10^-9．10^-8 mol／L的降钙素作用于大鼠破骨细胞，0 mol／L为对照组。以抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法证实培养的破骨细胞，并于培养48h后观察破骨细胞数目、形态的变化：应用流式细胞仪检测不同浓度的降钙素对破骨细胞凋亡率的影响。 结果：①破骨细胞的一般形态：破骨细胞较其他细胞大，形态不规则者，呈油前蛋形、长条形、腊肠形或漏斗形等，细胞内可见几个至几十个核不等。抗酒石酸酸性磷酸酶活性部分为酒红色，颗粒状。②抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数：不同浓度降钙素培养液作用48h后，对盖玻片上的阳性细胞计数发现，破骨细胞数目随着降钙索浓度增加而减少（P〈0．05），并且降钙素对破骨细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖效应。③破骨细胞凋亡率：不同浓度的降钙索均有增加破骨细胞凋亡率的作用，且呈剂量依赖效应，10^-10 mol／L以上浓度的降钙素明显促进破骨细胞的凋亡效率（P〈0．05）。 结论：降钙素抑制破骨细胞的增殖，促进破骨细胞骨凋亡，从而抑制破骨细胞的骨吸收功能，并呈剂量相关性。     

双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能的影响

背景：有研究表明双膦酸盐可抑制破骨细胞的骨吸收功能,但对其骨吸收功能关键细胞因子组织蛋白酶K是否产生作用,至今少有报道。目的：观察双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能影响。方法：用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组：对照组加入质量浓度100μg/L核因子κB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,培养72 h免疫荧光检测两组组织蛋白酶K表达差异,Western blot检测组织蛋白酶K蛋白表达情况。结果与结论：两组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组（P〈0.01）。免疫荧光检测组织蛋白酶K表达对照组强于双膦酸盐组（P〈0.01）;Western blot检测组织蛋白酶K表达双膦酸盐组低于对照组（P〈0.01）。结果证实,双膦酸盐通过抑制组织蛋白酶K因子的表达,阻碍破骨细胞的骨吸收功能。     

不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响

背景：骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用,但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。
　　目的：验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。
　　方法：用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞;将诱导生成的破骨细胞分成6个组,空白对照组不加任何试剂;阴性对照组培养液中加入培养液;骨保护素组分为4组分别加入10,25,50,75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒,利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率;荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA 的表达量变化;一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度;内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力;骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂;荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶 mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。
　　结果与结论：①骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。②骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关,与破骨细胞凋亡率呈正相关。③骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高;骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。④Raw264.7细胞在体外培养条件下,骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用,推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。     

不同质量浓度阿仑膦酸钠干预牙槽骨吸收模型兔牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达

背景：有研究表明阿仑膦酸钠能够防治骨质疏松症,但其应用到口腔牙周组织干预牙槽骨吸收较为罕见。目的：建立兔牙槽骨吸收模型,观察不同质量浓度阿仑膦酸钠干预下炎症牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达。方法：将大耳白兔建立牙槽骨吸收模型,建模成功后随机分成5组,胶原＋0.5g/L阿仑膦酸钠组、胶原＋1g/L阿仑膦酸钠组、胶原＋2g/L阿仑膦酸钠组、胶原组、对照组。各组分别于用药后2和4周用免疫组织化学方法检测破骨细胞分化因子和骨保护素表达情况,并进行药效评价。结果与结论：破骨细胞分化因子和骨保护素阳性细胞在5组成骨细胞、破骨细胞、成纤维细胞中均有表达,胞浆呈棕色或棕褐色颗粒状着色。对照组和胶原组牙槽嵴吸收区破骨细胞分化因子和骨保护素比率明显大于其他3组（P〈0.05）,胶原＋1g/L阿仑膦酸钠组在用药后2和4周均高于胶原＋0.5g/L阿仑膦酸钠组（P〈0.05）。结果证实,阿仑膦酸钠能够降低牙槽骨破骨细胞分化因子和骨保护素的比率,应用含1g/L阿仑膦酸钠胶原海绵载体更适合抑制牙槽骨吸收。     

番茄红素对活性氧族介导破骨细胞骨吸收功能的影响

背景：研究表明，番茄红素能够促进成骨细胞的增殖和生长，增加其矿化能力。目的：实验拟验证抗氧化剂番茄红素影响活性氧族介导破骨细胞骨吸收功能的作用途径。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，实验于2005-01／2006-12在山东省骨科研究所完成。材料：24h内出生的清洁级Wistar大鼠幼鼠30只，用于破骨细胞的培养；番茄红素由Sigma公司提供。方法：将24孔细胞培养板内细胞分为5组。空白对照组：所用培养液不含番茄红素：10^-7mol／L番茄红素组、10^-6mol／L番茄红素组、10^-5mol／L番茄红素组和10^-5mol／L维生素C组培养孔内预先置入盖玻片或薄骨片，对种植其上的破骨细胞分别用含有不同浓度番茄红素或维生素c的d．MEM培养基进行培养。主要观察指标：在分离培养的细胞玻璃爬片或骨片进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、四唑氮蓝染色，最后对骨片进行扫描电镜照像并用image-proplus5．0图像分析软件分析骨吸收陷窝的数目和面积。结果：①抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性多核细胞镜下胞浆酸性磷酸酶活性部位呈紫红色，细胞核染色阴性或淡染，伪足清晰。②四唑氮蓝染色结果提示，10^-5mol／L的番茄红素明显抑制了破骨细胞产生活性氧族的能力。⑨扫描电镜结果显示，破骨细胞在骨片上形成形态不一的骨陷凹，10^-7mol／L的番茄红素部分抑制了骨吸收陷凹面积的增加，而10^-5mol／L的刮茄红素则几乎完全抑制了骨吸收陷凹的形成。结论：番茄红素在体外可以通过抑制破骨细胞产生活性氧族来抑制其骨吸收功能。     

不同频率振动应力对RAW264.7细胞体外分化的影响

摘要 目的：观察不同频率振动应力对RAW264.7细胞诱导分化及活性的影响。 方法：应用复合振动仪将不同频段3—10Hz、15—35Hz、35—45Hz、50—70Hz和70—90Hz振动应变分别作用于体外诱导分化的RAW264.7细胞,振动应变加载6d时,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及鬼笔环肽染色检查破骨细胞形成情况,通过骨吸收陷窝分析比较各组破骨细胞活性的差异。 结果：不同振动频率组形成TRAP染色阳性多核细胞数量均低于对照组,骨吸收陷窝计数亦较对照组少,差异均有显著性意义（P<0.01）。 结论：不同频率振动应力均抑制RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化,且随着振动频率的增加抑制能力逐渐增强。     

不同质量浓度阿仑膦酸钠干预牙槽骨吸收模型兔牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达

背景:有研究表明阿仑膦酸钠能够防治骨质疏松症,但其应用到口腔牙周组织干预牙槽骨吸收较为罕见。目的:建立兔牙槽骨吸收模型,观察不同质量浓度阿仑膦酸钠干预下炎症牙周组织破骨细胞分化因子和骨保护素的表达。方法:将大耳白兔建立牙槽骨吸收模型,建模成功后随机分成5组,胶原+0.5g/L阿仑膦酸钠组、胶原+1g/L阿仑膦酸钠组、胶原+2g/L阿仑膦酸钠组、胶原组、对照组。各组分别于用药后2和4周用免疫组织化学方法检测破骨细胞分化因子和骨保护素表达情况,并进行药效评价。结果与结论:破骨细胞分化因子和骨保护素阳性细胞在5组成骨细胞、破骨细胞、成纤维细胞中均有表达,胞浆呈棕色或棕褐色颗粒状着色。对照组和胶原组牙槽嵴吸收区破骨细胞分化因子和骨保护素比率明显大于其他3组(P<0.05),胶原+1g/L阿仑膦酸钠组在用药后2和4周均高于胶原+0.5g/L阿仑膦酸钠组(P<0.05)。结果证实,阿仑膦酸钠能够降低牙槽骨破骨细胞分化因子和骨保护素的比率,应用含1g/L阿仑膦酸钠胶原海绵载体更适合抑制牙槽骨吸收。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

心力衰竭病人延续性护理现状调查

[目的]了解心力衰竭病人延续性护理实施现状,探讨心力衰竭病人延续性护理方法及发展方向。[方法]用自行设计的调查问卷对114例心力衰竭病人的一般资料、自我护理状况及生活质量进行调查。[结果]不同文化程度、性别、职业、婚姻状态的病人生活质量得分不同,差异有统计学意义(P0.01),病人出院后的延续性护理以家人照顾为主,自我护理状况不理想。[结论]延续性护理模式在我国尚属初步实施阶段,临床医护工作者应积极倡导实施,鼓励家属参与及进行社区护理干预提高病人自我护理能力,提高生活质量。     

Evaluation of the aesthetics of physical methods of euthanasia of anesthetized rats

Dissection of living brain tissue for in vitro experiments requires the use of a rapid euthanasia method. However, the method must not subject animals to unnecessary pain and must be aesthetically acceptable to experimenters. The purposes of the current study were to assess the aesthetics of 6 euthanasia methods, measure the procedure duration, and evaluate brain for pathology after each procedure. We digitally recorded euthanasia of isoflurane-anesthetized rats by 6 physical methods: anesthetic overdose, cardiac exsanguination, decapitation, closed intrathoracic transection of the great vessels and heart, thoracic percussion, and thoracotomy with rupture of great vessels. Volunteer researchers and animal caretakers watched the video and completed an associated questionnaire. Anesthetic overdose and cardiac exsanguinations were rated most aesthetically pleasing, although these procedures took the longest to complete. In contrast, decapitation and thoracic percussion were the least aesthetically pleasing, but these methods were the quickest. No demographic factor was identified that could predict whether a given euthanasia procedure would be favored for aesthetic reasons, and participants provided a wide variety of rationales for the aesthetic ratings they assigned. Although all of these euthanasia methods meet the criteria of approved methods of euthanasia of anesthetized rats as defined by the AVMA, aesthetic features and the scientific need for rapid euthanasia are both considerations in selecting a method.     

乳腺癌病人生命质量的影响因素调查

[目的]分析影响乳腺癌病人生命质量的因素,为改进乳腺癌病人的心理护理措施提供依据.[方法]对201例原发性乳腺癌术后化疗病人采用自设人口统计学和临床特征调查表、乳腺癌病人生命质量测定量表、医学应对问卷、中文版艾森克人格问卷简版进行调查.[结果]将病人生命质量总分作为应变量,社会人口学、临床特征、人格变量的4个维度和应对变量的3个维度作为自变量进行多元线性回归分析,结果表明,只有神经质维度和屈服应对维度进入方程,决定系数为0.542,即2个变量能联合预测生命质量54.2%的变异量.[结论]护理人员应关注乳腺癌病人的人格特征和应对方式特点,采取积极有效的心理护理措施,提高病人的生命质量.