尿液结合性胆红素的纯化

OBJECTIVES: To develop a simple, practical method with fine yield and purity for separating conjugated bilirubin(Bc) from a sustainable and facile material in order that it could serve as a calibrator for total and direct bilirubin determination. METHODS: Isolating Bc from urine of patients with obstructive jaundice by CHCl3: CH3CH2OH(1:1, V/V) followed by CNBr activated Sepharose 4B-HAS affinity chromatography, we analyzed the products by the use of Doumas J-G diazo method and HPLC, respectively. RESULTS: Determined by J-G diazo method, the crude product extracted by CHCl3: CH3CH2OH(1:1, V/V) yields 90.2 +/- 5.4%(n = 3) of urine Bc, the ratio of Bc to total dry weight being 67.9 +/- 6.4%(n = 3). The final product purified by affinity chromatography with the ratio of separation of 1.5, 1.737 and analyzed by HPLC has the yield of 46.9% and purity of 94.7%(BDG of 76.2%, BMG of 18.5%). CONCLUSION: The above data demonstrate that urine conjugated bilirubin can be successfully purified by CHCl3: CH3CH2OH extraction followed by Sephrose-HSA affinity chromatography with sufficient purity and output.     

尿液结合性胆红素的纯化

目的　探索一种来源方便 ,具有延续性 ,利于胆红素测定校准物或质控物制备 ,且方法简便、实用、产率和纯度可靠的结合性胆红素 (Bc)纯化方法。方法　应用 CHCl3 ∶ CH3 CH2 OH(1∶ 1,V/V)萃取与 CNBractivated Sepharose4B- HSA亲和层析相结合的方法对胆道梗阻性高胆红素尿液进行分离纯化 ,并以 Doum as J- G法和 HPL C分析产品。结果　由 CHCl3 ∶ CH3 CH2 OH(1∶ 1,V/V)萃取所得的粗纯品经 J- G法检测产率为 90 .2±5 .4% (n=3) ,胆红素含量占总干重的 6 7.9± 6 .4% (n=3)。亲和层析的洗脱峰间的分离度为 1.5、1.737。层析后再萃取所得精纯品经 HPL C分析 ,产率为 46 .9% ,纯度 94.7% ,其中 BDG76 .2 % ,BMG18.5 %。结论　采用有机物萃取和 CNBr activated Sepharose4B- HSA亲和层析相结合的方法纯化结合性胆红素 (BMG& BDG)具有很好的可靠性和可行性     

钒酸盐氧化法测定总胆红素及直接胆红素的实验评价

为了解钒酸盐氧化法测定血清胆红素的可行性,进行方法学评价。结果：总胆红素测定平均回收率为１００－６ ％ ,线性达６２０μｍｏｌ／Ｌ,批内ＣＶ％ 为２－１％ ,批间ＣＶ为３－９ ％ ,与咖啡因法比较,Ｙ＝０－９９１ｘ＋ ２．０１,ｔ＝ ２－１１,Ｐ＞ ０－２ ,ｒ＝ ０．９９８。直接胆红素线性达３４０μｍｏｌ／Ｌ,批内ＣＶ２－３％ ,批间ＣＶ４－１ ％ 与改良Ｄｏｕｍａｓ 法比较,ｒ＝ ０．９９３ｘ＋ ０．９９,ｔ＝ １．４７ ,Ｐ＞ ０ ．２,ｒ＝０ ．９９７。轻度乳糜血,Ｈｂ４ｇ／Ｌ以下对测定无干扰,试剂至少稳定两个月。结果表明钒酸盐氧化法测定血清胆红素具有灵敏、准确、重复性好等特点,可作为常规法使用。     

过氧乙酸氧化胆红素比色法的实验研究

0　引　　言　　从数十种氧化剂和氧化环境中优选了过氧乙酸等试剂 ,它能在很短的时间内将胆红素氧化成无色的化合物 ,而血清中存在的其他色素 (如维生素 B2 、黄连素、参麦注射液、刺五加注射液、茵栀黄、胡萝卜素等 )不发生改变。该试剂比色液长时间稳定 ,不产生浊度。用吸光度降低法求标本中胆红质浓度。该法简单、稳定、快速及干扰因素少 ,与改良 J- G法有很好的相关性。1　材料与方法1 .1　试剂　 1试剂 R1 :取 0 .2 0 g Brij- 35(进口Pure)和冰醋酸 ( AR) 2 0 ml加蒸馏水至 1 L;2试剂R2 :过氧乙酸 ( AR:2 0 % ) ;3Beckman质控血…     

对氨基苯磺酸胆红素的合成,纯化及鉴定

本文参考Ｊｉｒｓａ、冯仁丰等报道的方法，加以改进，合成了对氨基苯磺酸胆红素（ｂｉｌｉｒｕ－ｂｉｎｓｕｌｆａｎｉｌａｔｅｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，下称ＢＳＣ），并用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）制备柱进行纯化。用红外光谱（ＩＲ）、质谱（ＭＳ）、ＨＰＬＣ、薄层色谱（ＴＬＣ）、元素分析、可见吸收光谱、重氮反应法等手段对产物进行了结构鉴定和纯度分析。结果表明：合成粗制品中含单、双对氨基苯磺酸胆红素，纯度为４５－５５％。纯化的单、双对氨基苯磺酸胆红素可望成为结合胆红素测定的参考标准代用品。     

高铁氰化钾法快速消除胆红素干扰血清肌酐测定的实验研究

目的　探讨一种快速消除胆红素干扰测定血清肌酐的方法。方法　利用高铁氰化钾的强氧化性 ,将胆红素氧化成为胆绿素 ,以Jaffe氏反应测定血清肌酐。结果　本法具有较高的抗干扰能力 ,在胆红浓度 30～ 60 μmol/L范围内 ,其干扰值仅为 1～ 7μmol/L ,该法批内变异系数为 1 .6 % ,批间为 3 .8% ,平均回收率为 95 .7% ,与碱性苦味酸法比较 ,直线回归方程为^y =1 .0 3x - 1 .33 ,r=0 .998,结果在 0～ 30 0 0 μmol/L范围内线性良好。结论　高铁氰化钾法能快速消除胆红素对血清肌酐测定的负向干扰     

胆红素IXα及其异构体的HPLC快速测定方法

目的：建立一种快速测定胆红素ＩＸα及其异构体的相对含量的方法．方法：采用高效液相色谱法，以ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）为分析柱，以乙腈∶甲醇∶醋酸铵－醋酸ｐＨ＝４．７（１∶７∶２Ｖ／Ｖ／Ｖ）为流动相，检测波长λ：４５０ｎｍ；流速：２．０ｍｌ／ｍｉｎ，可直接分离测定３个胆红素异构体．结果：对４批胆红素样品中３个异构体的相对含量用归一法处理进行了测定，胆红素ＩＸαｔＲ＝１３．１８ｍｉｎ，胆红素ＸⅢαｔＲ＝９．６５ｍｉｎ，胆红素ⅢαｔＲ＝１７．３５ｍｉｎ，胆红素异构体的分离度（Ｒ）分别为Ｒ１＝１．８０，Ｒ２＝２．０４．结论：本法快速、准确、灵敏、重现性好，可适用于胆红素对照品、胆红素的制备纯度鉴定及中药中胆红素的质量控制，对血清及胆汁中胆红素的测定也具有实际应用价值．     

胆红素水溶液测定方法研究

使胆红素生成钠盐后,加入适当的抗氧剂和金属离子络合剂,使胆红素钠盐稳定,用分光光度法进行含量测定。本法克服了重氮化法和摩尔吸收系数法操作烦琐、有机镕剂昂贵和污染等弊端,获得操作简便、准确、快速的满意结果。     

卵磷脂双层膜上胆红素的吸附行为

目的:研究胆红素的吸附行为,探索最佳分析条件。方法:利用石英晶体微天平研究磷酸盐缓冲溶液(PBS)中胆红素在卵磷脂双层膜的吸附行为,石英晶体震荡频率下降越多,表示吸附量越多。考察了溶液pH值、离子强度和温度的影响,并与巯基苯胺膜和巯基苯胺/卵磷脂修饰膜进行了比较。结果:溶液pH为8.0时,频率变化-780Hz;溶液中离子强度增加一倍,频率变化-76Hz;10℃、28℃时,频率变化分别为-709Hz和-374Hz。结论:卵磷脂双层膜在碱性条件下有最大吸附;离子强度也会增加胆红素在膜上的吸附,但是影响没有其它因素大;温度会显著的影响胆红素的吸附,低温时吸附量明显增加;不同膜上胆红素的吸附量不同,其中硫醇/卵磷脂修饰膜上最大。     

胆红素与核因子kB

胆红素不只是体内的代谢产物,它还具有抗氧化、抗脂质过氧化、抗炎、抑制细胞凋亡等作用。核因子kB（NF—kB）作为一种普遍存在的转录因子,参与多种信号转导途径,可高效诱导多种细胞因子,同时对参与炎性反应放大与延续的多种酶的基因表达也具有重要的调控作用。本文就胆红素与NF-kB关系进行综述。     

西安地区健康人群血清总胆红素和直接胆红素参考值调查

目的:探讨西安地区健康体检人群血清胆红素水平。方法:采用回顾分析的方法,随机抽取1007例在我院例行健康查体人群的血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的测定值,按不同年龄、性别、职业进行分组统计分析,并与北京、四川崇州、山东威海、广东茂名地区人群进行比较,观察胆红素参考值的变化。结果:西安地区健康体检人群血清TBIL、DBIL水平比原参考值明显上升(P<0.01),成年男性血清TBIL水平(14.38±6.39)μmol/L,75百分位数(P75)和95百分位数(P95)分别为16.40和25.89,DBIL(4.08±2.46)μmol/L,P75和P95分别为6.00和8.90。成年男性血清TBIL(14.08±6.58)μmol/L,DBIL(5.10±2.57)μmol/L,成年女性血清TBIL(12.42±6.00)μmol/L,DBIL(4.74±2.27)μmol/L,男性大于女性,不同性别、年龄、职业人群TBIL差异极有显著性(P<0.01)。TBIL现参考值超限检出率(5.3%)明显低于原参考值(10.5%),DBIL现参考值(8.7%)低于原参考值(15.7%),超限检出率降低44%以上。西安地区健康体检人群TBIL、DBIL水平与北京、四川崇州、山东威海、广东茂名地区人群有差异(P<0.05或P<0.01)。结论:西安地区健康体检人群TBIL、DBIL水平与原参考值发生了改变,原参考值已不能较好的适用临床和健康体检的需要,应科学、合理的建立地区性的胆红素参考值。     

胆红素诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的研究

目的从细胞与分子水平探讨胆红素神经毒性的机制。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒和大脑皮质神经元,观察胆红素对其毒性的影响。并用ＤＮＡ染色及琼脂糖凝胶电泳法确定胆红素诱导神经元死亡时的形态学及生物化学改变的特征。结果胆红素在０～１７μｍｏｌ／Ｌ的浓度下,选择性地、剂量与时间依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡,呈现凋亡的特征为：核染色质浓缩与ＤＮＡ双链断裂成小片段;在凝胶电泳图上呈“梯形”样改变;用ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂预处理神经元,可阻断其死亡。说明胆红素诱导小脑神经元死亡的过程需要蛋白质的合成。而此浓度的胆红素对大脑皮质神经元的毒性明显低于小脑神经元。结论胆红素可以选择性地诱导小脑颗粒神经元凋亡。     

外源性胆红素在缺血性急性肾衰竭中的作用

目的观察外源性胆红素对缺血性急性肾衰竭(IARF)时血清中肝细胞生长因子表达、肾功能及其肾组织病理学改变的影响,探索外源性胆红素对急性肾衰竭保护作用。方法选取健康雄性大鼠30只,随机分为3组(观察组、假手术组、对照组),每组10只,建立肾缺血急性肾衰竭模型,观察组术前3 d连续给予胆红素5μmol,1次/d,其他各组同期给予等容积生理盐水,于IARF后4 h、12 h测量各组血清中尿素氮、肌酐及其肝细胞生长因子表达情况及其肾组织病理学改变。结果 IARF 4 h后观察组血清HGF水平较对照组、假手术组明显升高(P<0.01),对照组与假手术组之间无显著差异(P>0.05);IARF 12 h后血清HGF对照组表达水平高于观察组、假手术组(P<0.05),在对照组中HGF在IARF 12 h的表达水平高于IARF4 h的表达(P<0.01);观察组血清BUN、Cr水平均较对照组显著降低(P<0.05),观察组与对照组血清BUN、Cr水平均高于假手术组(P<0.01),肾组织损害程度对照组低于观察组。结论外源性胆红素能够减轻肾损伤,改善肾功能,而外源性胆红素使肝细胞生长因子表达上调,可能是其减轻肾损伤机制之一。     

新生儿经皮胆红素测定的应用探讨

目的：评估足月新生儿及早产儿经皮胆红素（ＴｃＢ）测定的临床应用价值。方法：测定３９例足月儿、１３例早产儿的血清总胆红素值及额部、胸骨处的ＴｃＢ读数,并对两者作直线相关分析。结果：足月儿的ＴｃＢ读数与血清总胆红素值显著相关（ｒ＝０．８８６,Ｐ＜０．００１）,而早产儿两者之间无显著相关（ｒ＝０．２２１,Ｐ＞０．２５）;足月儿额部、胸骨中部ＴｃＢ测定的重复性相近。结论：足月儿可依额部或胸骨中部ＴｃＢ读数推算出血清总胆红素值,但该值与ＴｃＢ测定仪提供的数值差别较大。各实验室应建立自己的ＴｃＢ读数与血清总胆红素值之间的对应关系。ＴｃＢ测定应用于监测早产儿高胆红素血症时应慎重。     

黄疸乳糜对血液细胞分析结果的影响

目的：探讨黄疸、乳糜对血液细胞分析结果的影响。方法：制备含一定浓度梯度胆红素、甘油三酯的全血标本,在血细胞分析仪上进行测定,同时对临床乳糜标本加以检测。结果：黄疸标本分析结果中血小板计数降低,与胆红素浓度呈负相关,相关系数为-0．9925;当胆红素≥547．2μmol／L时,血红蛋白测定受干扰。而乳糜标本的分析结果中,血红蛋白浓度假性增高,相关系数为0．9991;其他参数基本不受影响。结论：黄疸、乳糜均对血细胞分析的部分参数产生影响。     

十二指肠胃反流症状与胃内胆红素含量的相关性探讨

目的 探讨十二指肠胃反流（DGR）的症状与胃内胆红素含量的相关性。方法 采用胃内胆红素检测仪Bilitee2000，监测18例伴有烧心，上腹痛，恶心，呕吐4项症状中的一项或一项以上的功能性消化不良患者胃内24h胆红素，观察患者症状与胃内胆红素之间的关系。结果 DGR症状出现的时间与Bilitee2000监测到的胃内胆红素高峰时间十分吻合，且症状的程度与反流的程度具有良好的相关性。结论 用Bilitee 2000诊断DGR，检测时间可不必长达24h，为获得DGR的客观证据，可在患者自述症状较重时检测数小时。此检测时间的改进有利于在临床试验中提高患者依从性。     

纳豆激酶粗提液对家兔实验性高脂血症的作用研究

目的:研究纳豆激酶粗提液对家兔实验性高脂血症的调节作用。方法:用猪油和胆固醇喂饲家兔造成高脂血症模型,造模同时分A、B组分别添加120mL/d和120mL/d纳豆激酶粗提液,8周后采静脉血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),计算动脉粥样硬化指数AI。结果:实验中高脂饮食可成功诱导高脂血症(P0.01)。纳豆激酶粗提液高剂量组(B组)TC、TG、LDL-C值均显著低于模型组(P0.05),HDL-C值极显著高于模型组(P0.01),与纳豆激酶粗提液低剂量组(120Ml/d)相比,高剂量组(240mL/d)降低TC、TG值效果显著(P0.05)。结论:纳豆激酶粗提液对脂质代谢失调有明显的改善和调节作用。