基因重组药物

概述了目前已上市的基因重组药物，包括重组人胰岛素、重组人生长激素、重组人干扰素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞、巨噬细胞庥落刺激因子、重组人白细胞介素－２、重组组织型纤溶原活化剂、重组人乙型肝炎疫苗、重组血液固第八因子等的特征和临床用途，较系统地简介几个性药物在提高质量水平和工艺技术进步的发展历程。     

T4溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及抑菌活性测定

目的利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性。方法T4溶菌酶（T4lysozyme）基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoR I-Not I位点内,得到分泌型重组表达载体 pPIC9K-T4L。该载体首先经限制性内切酶Sal I酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中。经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子。随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中。结果表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响。结论T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性。     

重组人血请白蛋白的药学应用研究进展

综述了重组人血清白蛋白的性质、结构和功能，及常用表达系统。重点介绍了重组人血清白蛋白在药学上的应用。人血清白蛋白是人血浆中最丰富的蛋白质，具有许多重要的生理特性，用途广泛。     

重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子初分离工艺的研究

目的:探讨重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)初分离工艺。方法:GM-CSF基因工程菌,通过改变溶菌酶浓度,TritonX-100浓度和尿素浓度,得到不同纯化程度的包涵体。结果:包涵体最终纯度可达到75％。结论:初分离后得到的包涵体纯度较高,且方法简单,有一定应用价值。     

抗感染新药重组人溶菌酶的临床前评价

重组人溶菌酶是经生物技术改构后产生的一类对G+和G-菌都有抗菌效应的一类新药。临床前数据表明它对1 040株致病菌具有抗菌活性,最低抑菌浓度(MIC)范围为0．125～>4000μg·mL-1;此外,它还有抑制冠状病毒、抗炎和镇痛作用。现综述其药效学、毒理学和药动学的研究情况。新型重组人溶菌酶在体内外均安全和有效,有望开发成为新型抗感染药物。     

增设能用生长激素吗？

生长激素是脑垂体前叶分泌的一种蛋白质，是人出生后促进生长的最主要激素。它的生理作用涉及糖、脂肪、蛋白质代谢等多方面，其中一个很重要的作用是通过肝脏分泌类胰岛素样生长因子，刺激软骨细胞分化、增殖，使线性生长加速，促使儿童身高增长。自上世纪80年代基因重组人生长激素应用于临床以来，生长激素的应用范围日渐扩大，使用方案也不断成熟。     

依地福新诱导重组Fas基因酵母的凋亡

目的将人Fas基因转染至野生型粟酒裂殖酵母细胞中,并观察依地福新对重组酵母的促凋亡作用。方法抽提Jurkat细胞的RNA;RT-PCR制备Jurkat细胞的cDNA;PCR扩增人Fas基因;将人Fas基因克隆到pREP3X-HA质粒中构建pREP3X-HA-Fas穿梭载体,电转化穿梭载体到野生型粟酒裂殖酵母细胞中;应用Western blotting鉴定蛋白表达产物;应用依地福新诱导重组酵母产生凋亡应答。结果在33个酵母转化单菌落中,筛选到一个有表达活性的pREP3X-HA-Fas重组子,且依地福新能诱导此重组子的凋亡。结论成功构建pREP3X-HA-Fas穿梭载体并转入到相应的野生型粟酒裂殖酵母细胞中,且转化子具有表达活性。依地福新可能通过Fas诱导酵母细胞凋亡。     

抑肽酶基因的克隆和表达

抑肽酶作为天然非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，用途广泛。目前抑肽酶制品主要从牛肺中提取。用基因重组技术，将抑肽酶结构基因导入表达载体pGrxA，并在抑肽酶基因上游引入FXa识别位点。将重组质粒转化至Origami^TM中，用异丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白，产物以可溶性形式存在于胞内。将菌体超声破壁和离心，融合蛋白经分子筛层析和离子交换层析纯化后，用FXa切割该融合蛋白可得到N端不含多余氨基酸残基且与天然构像一致的活性抑肽酶。     

Pharming公司购买PPL公司的专利资产

获得PPL Therapeutics公司剩余资产的私营投资商Innovation Development公司，8月份已经把这份资产的大部分卖给了荷兰的Pharming公司。这些资产涉及与生产和提纯重组人纤维蛋白原和重组组织密封成份相关的大量专利和技术，并涉及符合GMP标准的重组人纤维蛋白原大规模提纯的专利和技术。     

红细胞补体受体I型密度基因的克隆

为研究中国人红细胞补体受体Ｉ型密度基因多态性变化，构建红细胞补体受体Ｉ型密度基因重组体。采用ｐＧＥＭ Ｔ载体系统直接克隆红细胞ＣＲ１密度基因ＰＣＲ扩增产物。经过对重组体电泳、ＰＣＲ扩增及ＨｉｎｄⅢ酶切分析，结果与理论预计值大小一致。本文构建的红细胞补体受体Ｉ型密度基因重组体可以作为研究红细胞补体受体Ｉ型基因多态性的标准对照     

Survivin-siRNA重组质粒对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的作用

目的探讨Survivin-si RNA重组质粒对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的作用。方法应用RNA干扰(RNAi)技术,以p GCsi/U6质粒为载体构建Survivin-si RNA重组质粒,体外转染SH-SY5Y细胞,采用MTT法测定细胞生长情况。结果重组质粒Survivin-si RNA转染SH-SY5Y细胞后生长明显受抑制。结论利用RNAi技术沉默Survivin基因可明显降低人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中Survivin基因的表达,抑制细胞生长,促进凋亡,表明Survivin基因在人神经母细胞瘤的发生、发展中起重要作用,参与了信号转导,有望成为基因治疗的新靶点。     

重组降压肽的设计与发酵生产

本发明应用DNA重组技术，通过基因工程菌发酵法来制备。具体涉及重组降压肽相关基因设计与合成，构建重组降压肽表达载体，用所述表达载体转化宿主构建基因工程菌，利用所述基因工程菌发酵生产重组降压肽。先设计出一条前体肽，该肽可以是一种降压肽的重复体也可是多种降压肽的混合体。例如本发明采用混合肽，LRP，LYPVK，AVNPIR，GHKIATFQER，QVPYPQR。[第一段]     

人碱性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的表达

用ＮｃｏＩ、ＢａｍＨＩ酶切，获得人碱性成纤维细胞生长因子基因，将该基因插入原核高效表达载体ＰＢＶ２２０的ＰＬＰＲ启动子下游，获得重组质粒ＰＢＶ－ＦＧＦ，转化大肠杆菌ＤＨ５α，４２℃诱导使重组子表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ、ＭＴＴ活性检测结果表明，该重组菌能够表达具有生物活性的ｈｂＦＧＦ。     

重组人白介素-18对辐射损伤小鼠细胞周期素基因及凋亡相关基因表达的调节作用

为探讨重组人白介素-18（IL-18）对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因（cyclinD1）及凋亡相关基因（bel-2和bax）mRNA表达的作用，对32只小鼠分4组进行辐射损伤，第14天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclinD1、bel-2和bax mRNA的表达。结果表明，与对照组相比，重组人IL-18组骨髓细胞促凋亡基因bax mRNA表达显著减少（P〈0．01），而cyclinD1和bcl-2 mRNA的表达显著增强（P〈0．01）。结论：重组人IL-18抗辐射损伤可能是通过上调细胞周期素基因cychnD1和bcl-2的表达及降低bax mRNA的表达，促进造血细胞的增生和提高机体免疫力，从而达到保护机体的目的。     

基因工程抗体在临床上的应用

用基因工程技术生产抗体，并赋予其许多新的特性，极大地拓展了抗体的功能及其在临床上的应用范围。ＰＣＲ技术为获得抗体基因提供了有效、快捷的实验手段，噬菌体表面表达技术简化了高异质性抗体基因的获得，ＤＮＡ重组技术使体外生产抗体成为可能。低成本、人源化及双特异等诸多特点使基因工程抗体在治疗和诊断上的应用更加广泛。根据最近文献对基因工程抗体及其应用前景进行了综述。     

信息

2006-176一种重组抗肿瘤侵袭转移的融合蛋白2006-177利用枯草芽孢杆菌生产的纳豆激酶及其生产方法和用途2006-178一种制备干扰素方法2006-179水稻黄单胞hrf3基因、重组载体及用于植物转基因育种方法2006-180水稻黄单胞hrf1基因重组载体及转基因植物育种方法2006-181中草药新制防治艾滋病药物和制备方法2006-182生产商陆皂甙药用活性成分的方法2006-183免疫鸡蛋的生产方法2006-184一种异基因嵌合体,其制备方法和应用2006-185一种用蚕表达人白细胞介素11生产药物的方法·信息·2006-186一种用蚕生产抗肿瘤治疗药物的方法2006-187小麦细胞周期…     

药物和质粒导入途径对提高人胰岛素基因在糖尿病大鼠体内表达效能的研究

目的通过探索药物和质粒导入途径对胰岛素基因表达效能的影响，以期提高以逆转录病毒为载体进行糖尿病基因治疗的效能，为该方法治疗糖尿病的临床实施缩短距离。方法建立链脲佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠模型，通过是否给予HGF、T3和注入重组质粒部位的不同对含有目的基因的重组质粒的转染和整合效率进行干预，观察血糖的控制情况和胰岛素的表达水平，最后提取人鼠的肝脏作RT-PCR，判断目的基因有无表达。结果通过腹腔注入含有目的基因的重组质粒同时给予HGF、T3组的效果最佳，通过尾静脉注入含有目的基因的重组质粒同时给予HGF、瓦组效果较佳，仅注入重组质粒组有轻度改善，仅注入HGF、T3组和糖尿病组无任何改善。RT-PCR检测目的基因有表达。结论在动物实验中，应用HGF、T3和通过腹腔注入可明显提高含有目的基因的重组质粒的转染和整合效率，通过胰岛素、血糖的水平和体重的变化来体现。本研究为下一步的临床实验奠定了基础。     

我国基因工程药物质量标准研究(上)

基因工程药物,又称为重组药物,是利用基因工程技术,将目的基因(如人干扰素基因)经重组技术导入微生物(如大肠杆菌、酵母等)或动、植物细胞,通过发酵或细胞繁殖来生产出足够量多肽或蛋白质(重组人干扰素)制成的药物.     

质粒DNA同源重组法构建腺病毒载体hosm

目的 构建含hosm基因的重组腺病毒载体,观察其对肿瘤细胞生长的影响。方法 用脂质体介导的粒DNA同源重组方法构建含人osm基因的重组缺陷型腺病毒载体,用PCR法鉴定所构建的ad—hosm载体。结果 成功构建了含hosm基因的重组腺病毒载体。结论 脂质体介导的质粒DNA同源重组法能有效构建重组腺病毒栽体;PCR法简化了阳性重组腺病毒的鉴定程序,为进一步研究重组腺病毒介导人osm基因对肿瘤细胞的生物学活性的影响提供了条件。     

人黑色素瘤细胞系MTS1／p16 CDK4基因的突变

为了探讨p16基因在人肿瘤细胞系中的突变，采用PCR-SSCP分析和基因序列测定技术，对人黑色素瘤细胞系(Bowes)中p16基因的突变进行检测。结果显示,Bowes细胞的p16基因第二外显子扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶中电泳异常，表明其基因序列存在点突变。核酸序列测定证实第341号核苷酸发生T→C的颠挠。应用DNA重组技术构建的突变型p16基因重组质粒可作为基因探针用于检测p16基园的缺失。