丹参对TGF-β1刺激的NIH/3T3细胞c-fos mRNA表达和AP1蛋白结合活性的影响

目的:研究丹参对TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响.方法:将正常大鼠进行丹参灌胃,分离含药血清,温育TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞.RT-PCR法检测c-fos基因表达,Gel mobility shift assay法检测AP1蛋白的结合活性.结果:经TGFβ1刺激后,细胞c-fos mRNA表达及AP1蛋白结合活性明显增强,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ1引起的细胞c-fos mRNA表达及AP1蛋白结合活性的增强.结论:丹参可以抑制TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞中的c-fos基因表达及AP1蛋白结合活性.     

丹参对转化生长因子β1刺激的NIH/3T3细胞表达I型胶原和c-fos mRNA的影响

目的:观察丹参对TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响.方法:将丹参灌胃给正常大鼠,分离含药血清,温育TGFβ1刺激的成纤维细胞.RT-PCR法检测I型胶原和c-fos的基因表达.结果:经TGFβ1刺激后,细胞I型胶原和c-fas的mRNA表达明显增加,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ1引起的细胞I型胶原和c-fos的mR-NA表达的增加,结论:丹参可能通过抑制c-fos的基因表达进而抑制I型胶原的基因表达.     

丹参对转化生长因子β_1刺激的NIH/3T3细胞表达Ⅰ型胶原和c-fos mRNA的影响

目的:观察丹参对TGFβ_1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响。方法:将丹参灌胃给正常大鼠,分离含药血清,温育TGFβ_1刺激的成纤维细胞。RT-PCR法检测Ⅰ型胶原和c-fos的基因表达。结果:经TGFβ_1刺激后,细胞Ⅰ型胶原和c-fos的mRNA表达明显增加,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ_1引起的细胞Ⅰ型胶原和c-fos的mRNA表达的增加,结论:丹参可能通过抑制c-fos的基因表达进而抑制Ⅰ型胶原的基因表达。     

丹参对转化生长因子β1刺激的NIH／3T3细胞表达Ⅰ型胶原和c—fos mRNA的影响

目的观察丹参对TGFβ1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响.方法将丹参灌胃给正常大鼠,分离含药血清,温育TGFβ1刺激的成纤维细胞.RT-PCR法检测I型胶原和c-fos的基因表达.结果经TGFβ1刺激后,细胞I型胶原和c-fas的mRNA表达明显增加,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ1引起的细胞I型胶原和c-fos的mR-NA表达的增加,结论丹参可能通过抑制c-fos的基因表达进而抑制I型胶原的基因表达.     

肾上腺素和葡萄糖对3T3-L1脂肪细胞水孔蛋白mRNA表达的影响

目的：通过细胞培养研究肾上腺素、葡萄糖对成熟脂肪细胞水孔蛋白（aquaporin adipose,AQPap）基因表达的影响。了解AQPap基因表达的影响因素，探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用。方法：用不同浓度（10^-6mol/L、10^－7mol/L、10^-8mol/L、10^-9mol/L）的肾上腺素刺激诱导分化第9天的3T3－L1细胞6h，另以不同浓度的葡萄糖（5．6mmol/L、11．2mmol/L、16．8mmol/L、33．6mmol/L）刺激细胞48h。提取细胞RNA。运用半定量RT－PCR技术检测AQPap mRNA表达量的变化。结果：与对照组相比，给予不同浓度的肾上腺素刺激分化成熟的3T3－L1细胞，其AQPap mRNA的表达量变化，差异无显著性意义（P＞0．05）。 葡萄糖浓度的升高使培养细胞AQPap mRNA的表达量显著增强（P＜0．05，16．8mmol/L葡萄糖刺激培养细胞48h,AQPap mRNA表达量约是对照组（葡萄糖浓度为5．6mmol/L）的3倍。结论：肾上腺素是一种脂解激素，它对脂肪细胞AQPap mRNA的表达无影响；高糖状态下AQPap mRNA表达明显增强。     

胃癌组织TGF-beta1和TGF-beta R1及其前体mRNA的表达意义

目的: 探讨TGF-beta1和TGF-beta R1蛋白及其前体mRNA的表达与胃癌发生发展的关系. 方法: 采用免疫组化和实时PCR(real-time PCR)方法, 对胃癌50例、萎缩性胃炎19例和正常胃黏膜18例的TGF-beta1和TGF-beta R1蛋白及其前体mRNA的表达进行检测. 结果: 胃癌组织中TGF-beta1和TGF-beta R1蛋白表达明显增强, 其阳性率(80.0%和75.0%)明显高于正常胃黏膜组(33.3%和27.8%)及萎缩性胃炎组(36.8%和36.8%), 差异有显著性(P <0.01). 胃癌组织的分化程度越低, TGF-beta1、TGF-beta R1蛋白表达的阳性率越高(r = 35.58, P <0.01). 同样, 胃癌组织中TGF-beta1和TGF-beta R1前体mRNA的表达明显高于萎缩性胃炎组(TGF-beta1: 4.20±0.51 vs 9.15±2.12, 8.22±1.81; TGF-beta R1: 1.28±0.48 vs 5.55±1.48, 4.19±0.95). 结论: TGF-beta1和TGF-beta R1的高表达与胃癌的发生发展、生物学行为和预后可能有关.     

miR-29b过表达对NIH/3T3细胞直接靶向作用及细胞功能的影响

目的:研究miR-29b过表达对NIH/3T3细胞直接靶向作用及其细胞功能变化的影响。方法:将活化的NIH/3T3细胞,分为空白对照(Control)组、miR-29b mimics组、miR-Negative Control(miR-NC)组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-29b mimics组、TGF-β1+miR-NC组。采用免疫荧光技术、RT-PCR及Western Blot检测miR-29b、COL1α1、COL3α1、TIMP-1、MMP-9、HSP47、α-SMA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖。结果:miR-29bmimics组与miR-NC组和Control组比较,miR-29b表达上调,COL1α1及COL3α1mRNA及蛋白表达下调(P0.05)。TGF-β1+miR-29b mimics组与TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组比较,miR-29b表达明显上调(P0.01),COL1α1、COL3α1、TIMP-1、HSP47、α-SMA mRNA及蛋白均明显下降,MMP-9 mRNA及蛋白均明显升高(P0.05)。TGF-β1+miR-29b mimics组与TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组比较早期凋亡明显增多,而细胞活力明显下降,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:COL1α1及COL3α1是miR-29b的直接靶向调控分子,体外上调miR-29b表达可抑制TGF-β1致纤维化相关因子表达及细胞活力,并可促进细胞凋亡,为进一步研究体内肝纤维化奠定了基础。     

刺激外周神经对幼鼠脊髓、海马c-fos蛋白表达的影响

目的 探讨电刺激坐骨神经后不同时间幼鼠脊髓、海马神经元c-fos蛋白的表达及意义.方法 将30只SD雄性幼鼠随机分成3组:空白对照组,单个电刺激组,强直电刺激组.强直电刺激组包括:强直刺激后1h组、2h组和3h组.首先对单个电刺激组施加单个电刺激,对强直刺激组施加强直电刺激,而后再对强直电刺激组施加同样参数的单个电刺激.实验完毕后取各组动物脊髓和海马神经元做免疫组织化学染色,观察各组动物脊髓和海马神经元内c-fos表达的变化.结果 单个电刺激组、强直电刺激组海马、脊髓神经元内c-fos蛋白强表达,与空白对照组的弱表达比较差异均有统计学意义(P＜0.05);强直刺激后,海马、脊髓不同时间神经元内的c-fos表达不同,以强直刺激后2h为表达量最高.结论 电刺激坐骨神经可使幼鼠海马、脊髓神经元内c-fos蛋白表达增加,推测电刺激后海马、脊髓神经元内c-fos表达量的增加与学习记忆联系密切.     

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-1对肝星状细胞转化生长因子β3的mRNA表达及启动子活性的影响

目的 探讨大鼠肝星状细胞(HSC)中,环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白-1(CREB-1)对转化生长因子β3 (TGFβ3)的mRNA表达及启动子活性的影响. 方法 将HSC分为CREB-1表达质粒转染组(C质粒组)、siRNA-CREB-1转染组(S质粒组)、阴性对照质粒组(N质粒组)、Forskolin处理组(FSK组)、H-89处理组(H-89组)及空白对照组,并根据加或不加入外源性TGFβ3重组蛋白将以上各组再分为(TGFβ3+)组和(TGFβ3-)组,实时荧光定量PCR法检测TGFβ3 mRNA的表达.上述各组共转染PGL3-basic-TGFβ3P (W质粒)或PGL3-basic-TGFβ3P-mCRE(M质粒),以pRL-SV40为空白对照,荧光素酶报告基因分析法检测各组TGFβ3启动子活性.双侧t检验进行组间数据比较. 结果 TGFβ3 mRNA表达结果显示,与N质粒(TGFβ3-)组比较,S质粒(TGFβ3-)组mRNA相对表达量降低至0.69±0.15(t=3.702,P＜0.05);与空白对照(TGFβ3-)组比较,H-89 (TGFβ3-)组降低至0.57±0.08(t=9.490,P＜0.05);N质粒(TGF β 3+)组与N质粒(TGFβ3-)组、S质粒(TGFβ3+)组与S质粒(TGFβ3-)组、空白对照(TGFβ3+)组与空白对照(TGFβ3-)组、H-89 (TGFβ3+)组与H-89 (TGFβ3-)组分别比较,差异均有统计学意义(t值分别为-7.404、-3.480、-2.831和7.875,P值均＜0.05).荧光素酶报告基因分析结果显示,S+W质粒组、N+W质粒组、C+W质粒组的TGFβ3启动子活性分别为0.062±0.013、0.122±0.011、0.165±0.016,C+W质粒组TGFβ3活性较N+W质粒组组明显升高(t=-3.823,P＜ 0.05),S+W质粒组较N+W质粒组明显降低(t=5.853,P＜0.01);H-89+W质粒组、空白对照+W质粒组、FSK+W质粒组TGFβ3启动子活性分别为0.154±0.010、0.188±0.016、0.276±0.031,FSK+W质粒组的TGFβ3启动子活性较空白对照+W质粒组明显升高(t=-4.419,P＜0.05),H-89+W质粒组的TGFβ3启动子活性较空白对照+W质粒组明显降低(t=-3.115,P＜0.05). 结论 增加HSC内CREB-1表达或提高CREB-1磷酸化水平可上调TGFβ3 mRNA表达及其启动子活性;CRE位点是TGFβ3启动子的关键位点,封闭该位点后,TGFβ3启动子活性明显降低.外源性TGFβ3可上调HSC中内源性TGFβ3 mRNA的表达.     

葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中内脏脂肪素（Visfatin）mRNA表达的影响。方法通过real—time RT-PCR方法检测不同浓度葡萄糖和胰岛素培养下3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达。结果葡萄糖增加了3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达;胰岛素降低其表达。结论葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中Visfatin mRNA的表达有凋控作用。     

猪血小板衍生生长因子对NIH3T3细胞DNA合成的影响

目的 :检测猪血小板衍生生长因子 （p PDGF）的致丝裂活性。方法 :以 NIH3T3细胞作为靶细胞 ,利用 3H- Td R掺入合成 DNA的方法 ,检测 p PDGF的致丝裂活性。结果 :p PDGF可促进处于静止状态的 NIH3T3细胞 DNA合成 ,并呈现出明显的浓度依赖关系 ,在 30 ng/ m l的浓度时 DNA合成达到高峰 ,2 4 h DNA合成最为显著 ,经 2 -巯基乙醇处理的 p PDGF其致丝裂活性基本丧失。结论 :p PDGF具有良好的生物学活性 ,2 -巯基乙醇可使其丧失生物学活性     

人胰岛素基因在NIH3T3细胞中的基因转染和表达的研究

人胰岛素基因（PCMV．INS）经壳聚糖中介，成功地转染到NIH3T3细胞并证明表达有效。这有助于1型糖尿病基因治疗的研究。     

HIF-1α质粒转染NIH3T3细胞的体外实验

目的探讨低氧诱导因子1(HIF-1)在NIH3T3细胞的体外表达.方法首先构建真核表达质粒,以脂质体为介导,体外转染细胞,经RT-PCR,Western blot,ELISA检测基因在mRNA、蛋白质等方面的表达.结果半定量RT-PCR证实在NIH3T3细胞表达外源基因,Western blot检测到外源HIF-1蛋白质表达,ELISA试验证明表达的基因产物具有生物活性.结论PcDNA3-HIF1真核表达质粒能够有效地在体外表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础.     

柔红霉素对HL-60细胞细胞因子信号转导抑制蛋白1、3mRNA表达的影响

目的探讨柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)-mRNA、细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)-mRNA表达的影响。方法取HL-60细胞株,设HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞设为NC组。NC及HL-60组未给予干预,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。提取总RNA进行,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测SOCS1-mRNA、SOCS3-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,HL-60组及HL-60+DNR组SOCS1-mRNA转录水平均显著下调(P0.05),HL-60组下调更明显(P0.05)。与NC组相比,HL-60组SOCS3-mRNA转录水平显著上调(P0.05),而HL-60+DNR组上调不明显(P0.05)。结论 DNR可能通过上调HL-60细胞珠SOCS1及下调其SOCS3的表达,诱导APL细胞的凋亡及促进其成熟,促进急性早幼粒细胞白血病患者病情缓解。     

雷公藤抑制致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达及GATA3活性

通过对致敏小鼠Ｔ细胞ＩＬ 5ｍＲＮＡ表达和ＧＡＴＡ3 活性的观察 ,探讨雷公藤内酯醇 (ＴＰ)对ＩＬ 5基因转录水平的调节机制 ,并与地塞米松 (ＤＭ)的作用比较。材料与方法　 (1)动物模型建立及分组 :ＢＡＬＢ/ｃ小鼠2 4只 ,随机平均分为 4组 :正常对照组 ,以生理盐水代替卵蛋白 (ＯＶＡ)致敏和激发 ;致敏组 ,以ＯＶＡ致敏和激发[1] ;ＴＰ组 ,每次激发前 1ｈ腹腔注射ＴＰ 40 μｇ/ｋｇ体重 ;ＤＭ组 ,每次激发前 1ｈ腹腔注射ＤＭ 10ｍｇ/ｋｇ体重。ＴＰ组与ＤＭ组最后一次激发后 2 4ｈ再给药 1次。 (2 )原位杂交 (ＩＳＨ) :制备脾脏Ｔ细胞涂…     

葡萄糖和胰岛素浓度对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响

大量研究表明，动物和人的脂肪细胞脂联素表达和其血浆浓度与空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗程度呈负相关；与胰岛素敏感性呈正相关。为探讨葡萄糖浓度和胰岛素浓度单独对体外脂肪细胞脂联素表达的影响，我们用不同浓度的葡萄糖和不同浓度的胰岛素分别干预体外培养的3T3-L1脂肪细胞，观察其脂联素mRNA表达的改变，进一步阐明脂联素表达的调控机制。     

TNF-α和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞adiponutrin mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和吡格列酮（PIO）对3T3-L1脂肪细胞中，脂肪滋养蛋白（adiponutrinADPN） mRNA表达的影响及时间效应。方法用100Fmol／L的PIO和100ng／ml的TNE-α处理不同阶段的3T3-L1脂肪细胞，RT-PCR检测ADPN的表达水平。结果在分化过程中和分化成熟的3T3-L1细胞中，TNF-α均增加ADPN的表达，PIO则可明显抑制其mRNA的表达。结论PIO和TNF-α可影响3T3-L1脂肪细胞的ADPN的表达。     

TNFα对NIH／3T3细胞,肝贮脂细胞增殖及前胶原表达的影响

ＴＮＦα系单核－巨噬细胞产生的细胞因子，具有明确促进纤维母细胞增殖的作用，但对胶原产生的影响文献报道不尽相同。本文研究并比较了重组ＴＮＦα对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞及大鼠肝贮脂细胞增殖，Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响，结果发现ＴＮＦα具有促进上述两种细胞增殖作用，且具剂量依赖性。原位杂交显示，在单个细胞水平，ＴＮＦα可抑制或降低Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ水平的表达。本研究提示肝贮脂细胞与纤维母细胞类似，接受ＴＮＦα调控，ＴＮＦα在肝纤维化始动激活及调控中具重要作用。     

人垂体瘤转化基因1对NIH3T3细胞无直接肿瘤转化作用

目的 克隆人垂体瘤转化基因1（hpTTG1)cDNA并确定其在不同细胞内的分布和其在体外是否具有直接的肿瘤转化作用。方法 （1）用快速扩增（RACE）克隆hPTTG1 cDNA；（2）用Northern印迹检测hPTTG1 mRNA在肿瘤细胞的表达水平；（3）构建pCMX-GFP-hPTTG1表达质粒并转染HeLa等6种细胞，用荧光共聚焦显微镜观察GFP－hPTTG1的细胞内分布；（4）构建pIRESneo-hPTTG1表达质粒并转染NIH3T3细胞，经G418选择后检测hPTTG1是否有直接的致肿瘤作用。结果 （1）hPTTG1与大鼠PTTG的同源性为79％。开放可读框架由609bp组成，编码202个氨基酸；（2）hPTTG1在血液系统肿瘤细胞表达水平较其它肿瘤细胞为高，其表达水平由强到弱依次为THP－1，Raji,CEM,AR230,DLD-1,H1299,HeLa,HepG2和A549肿瘤细胞；（3）hPTTG1的细胞内分布在HeLa、Cos-7和DU145细胞主要位于细胞核，在A549、DLD－1和NIH3T3细胞则呈胞浆和胞核的弥漫性分布；（4）hPTTG1明显抑制NIH3T3细胞的生长，降低[^3H]胸腺嘧啶脱氧核苷的掺入率。hPTTG1单独不具有细胞肿瘤转化作用。结论 （1）hPTTG1在血液系统肿瘤细胞表达水平较其它肿瘤细胞为高；（2）hPTTG1的细胞内分布与细胞类型有关；（3）hPTTG1单独不具有细胞肿瘤转化作用。     

平滑肌细胞源性生长因子对NIH 3T3纤维母细胞DNA合成的影响

动脉中膜平滑肌细胞(SMCs)迁移进入内膜和增生是动脉粥样硬化发生的关键环节,并受包括PDGF、IGF、FGF、EGF在内的多种因素的影响。众所周知,SMCs自身亦可合成及分泌生长因子。未研究以平滑肌细胞条件培养基及平滑肌细胞粉碎物作为生长因子的来源,观察其对~3H—TdR掺入NIH3T3细胞DNA的影响,结果提示两者均促进NIH 3T3细胞DNA的合成,说明平滑肌细胞合成的生长因子部分被分泌到细胞外并可与其自身细胞膜上的生长因子受体结合,部分保留在细胞内促进其自身的增生。